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1、第18讲传统发酵技术与植物组织培养考纲要求1.果酒及果醋的制作。2.泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定。3.植物的组织培养。1比较果酒、果醋和泡菜的制作比较项目果酒的制作果醋的制作泡菜的制作菌种酵母菌(真菌)醋化醋杆菌(细菌)假丝酵母和乳酸菌原理酵母菌在无氧的条件下将葡萄糖氧化成乙醇，而且当培养液中乙醇浓度为16%时，酵母菌死亡醋化醋杆菌在有氧条件下将乙醇氧化为醋酸乳酸菌和假丝酵母在无氧条件下，将糖和其他营养物转化为有机酸和醇类物质等注意事项果酒制作过程中，紫葡萄在用高锰酸钾溶液浸泡后，一定要用清水将高锰酸钾溶液冲洗干净；将葡萄浆放入发酵瓶中，装量不能超过2/3果醋发酵时，通气孔需塞上脱脂棉球，以过滤
2、空气；醋化醋杆菌培养物与酒水混合物混匀后需将pH调至7.0制作泡菜时，用水密封坛口，以保证坛内无氧环境，利于乳酸菌发酵提醒关于果酒、果醋和泡菜制作中的易错点(1)误以为先对葡萄去梗以方便对其进行清洗和消毒。去梗会破坏葡萄皮，先冲洗后去梗可防止杂菌污染。(2)误以为果酒制作中发酵开始时，微生物的需氧呼吸会因产热而使发酵瓶内压强增大。发酵开始时，多种微生物的需氧呼吸会消耗O2产生等量CO2，但CO2溶解在水中，造成气体总体积减少，使发酵瓶内出现负压。(3)误以为泡菜腌制过程中起作用的主要是酵母菌和乳酸菌。泡菜腌制过程中起作用的主要是假丝酵母和乳酸菌。(4)误以为亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸发生重氮化反
3、应，形成紫红色产物，可用光电比色法定量。亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，这一产物再与N1萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物，可用光电比色法定量。(5)误以为在有氧条件下，微生物利用菜中的糖和其他营养物进行发酵，发酵产物有有机酸和醇类物质等。在无氧条件下，微生物利用菜中的糖和其他营养物进行发酵，产物为有机酸和醇类物质等。2果酒、果醋制作装置的比较项目果酒的制作果醋的制作发酵装置说明装水的弯曲的玻璃管可防止氧气进入，用水封闭具有防止被空气中杂菌污染的作用；厌氧发酵过程中产生的CO2气体可以从装有水的玻璃管中出去，减小瓶中压力；在发酵瓶(罐)中留有一定的空间(大约1/3)，可以给酵母菌提供氧气，
4、使其进行需氧呼吸，为酵母菌的生长、增殖提供能量。酵母菌迅速增殖，缩短发酵时间；在产生酒精的阶段要求严格的无氧环境，此阶段如果有氧气，则会抑制酒精发酵果醋制作过程中要求始终通氧气，因为醋化醋杆菌是好氧细菌，缺氧时醋化醋杆菌的生长、增殖都会受到影响，另外醋酸的生成也会受到影响提醒关于果酒、果醋制作装置的易错点(1)误以为发酵装置瓶内培养液应装满瓶。装置瓶内培养液体积不应超过2/3，需留1/3空间，以防止发酵液从排气口溢出。(2)误以为在果酒与果醋制作时，充气口均需充气。果酒制作时需关闭充气口，使装置内液体处于“无氧状态”以利于酵母菌厌氧呼吸产生酒精；果醋制作时需连接通气泵，自始至终通氧。3泡菜制作
5、(1)原理：在无氧条件下，微生物(主要是假丝酵母和乳酸菌)将蔬菜中的糖和其他营养物质发酵成有机酸和醇类物质等。(2)制作流程4亚硝酸盐的定量测定(1)鉴定原理：亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，这一产物再与N1萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物，可用光电比色法定量。(2)实验步骤5植物组织培养(1)原理与流程分析(2)激素的使用比例比例结果细胞分裂素和生长素的比例高诱导芽的生成细胞分裂素和生长素的比例大致相等愈伤组织继续生长而不分化细胞分裂素和生长素的比例低会趋于长根(3)MS培养基、发芽培养基与生根培养基的比较MS培养基由大量元素、微量元素和有机成分组成，也可将各成分配成浓度为配方的510
6、倍的母液，用时稀释发芽培养基3 000 mL MS培养基含1.5 mg BA的溶液含0.02 mg NAA的溶液30 g蔗糖40 g琼脂。注意：培养基中BA相对较多，NAA相对较少，促进丛状苗长出生根培养基1 000 mL MS培养基含0.38 mg NAA的溶液30 g蔗糖20 g琼脂。注意：培养基中无BA，促进生根1传统发酵技术的正误判断(1)醋化醋杆菌在无氧条件下利用乙醇产生醋酸()提示醋化醋杆菌是好氧菌，在有氧条件下将乙醇氧化为醋酸。(2)在制作果酒、果醋时，适当加大接种量可以提高发酵速率，抑制杂菌生长繁殖()(3)在果酒发酵后期拧开瓶盖的间隔时间可延长()(4)亚硝酸盐含量测定时通常
7、采用光程为1 cm的比色杯在550 nm处测定光密度值()(5)常用光电比色法测定泡菜中亚硝酸盐含量()(6)泡菜腌制时，间隔一段时间应将坛盖打开，放出CO2()提示坛盖始终密闭。(7)现将200 mL酒水混合物调pH至7.0，然后与醋曲悬液混匀，均匀撒在锯末上()提示醋化醋杆菌培养物或醋曲悬液需与酒水混合物混匀后将pH调至7.0。(8)醋酸发酵时，发酵瓶内装八分满锯末，便于醋化醋杆菌的吸附()(9)醋化醋杆菌所产生的醋酸可使培养液中醋酸含量高达16%()提示13%。(10)制备果酒时，乙醇的浓度超过15%，酵母菌会死亡()2植物组织培养的正误判断(1)植物组织培养最常用的培养基是LB培养基
8、()提示植物组织培养最常用的培养基是MS培养基。(2)萘乙酸和苄基腺嘌呤分别是生长素和细胞分裂素类似物 ()(3)脱分化过程不需要植物激素，植物激素只有在再分化过程中发挥作用()提示首先在发芽培养基上培养，细胞分裂素相对较多和生长素相对较少。(4)菊花切段进行组织培养时，每个切段上必需保留一个顶芽 ()(5)发芽培养基中生长素的摩尔浓度大于细胞分裂素的摩尔浓度()提示细胞分裂素摩尔浓度大于生长素摩尔浓度的培养基是发芽培养基。(6)调节培养基中细胞分裂素和生长素等激素的种类和摩尔浓度可以诱导器官进行不同的分化()(7)菊花组织培养的最适温度是18 25 ，每天的光照不少于14.5 h()(8)生
9、根的丛状苗需要移到草炭土或蛭石上进行湿度锻炼，直至降至自然湿度()(9)以菊花为材料进行组织培养，首先在生根培养基上进行培养，然后在发芽培养基上获得丛状苗()提示先对植物组织进行生芽培养再进行生根培养。(10)使用自然茎段进行组织培养，一般先在70%乙醇中浸泡10 min，再放入5%次氯酸钠溶液中浸泡5 min，然后用另一5%次氯酸钠溶液浸泡5 min，最后用无菌水清洗后，将其培养在生芽培养基中()考向一考查传统发酵技术1(2018海南，30)葡萄酒是葡萄汁经酵母菌发酵而成的，酿制葡萄酒的两个简易装置如图所示。回答下列问题：(1)试管中的X溶液有助于维持甲装置的瓶中气压相对稳定，与乙装置相比，
10、用甲装置酿制葡萄酒的优点是_(答出两点即可)。(2)葡萄汁装入甲装置时，要留有约1/3的空间，这种做法的目的是_(答出两点即可)。(3)某同学若用乙装置进行发酵，并设置两个不同处理组(乙A和乙B)，乙A装置中保留一定量的氧气，乙B装置中没有氧气。在其他条件相同且适宜的情况下，测得一段时间内乙A和乙B中酒精含量的变化趋势及乙A中氧气含量的变化趋势，如曲线图所示。图中曲线、依次表示_、_、_含量的变化趋势。(4)从细胞呼吸类型看，酵母菌属于_生物；从同化作用的类型看，酵母菌属于_(填“自养”或“异养”)生物。答案(1)不需要开盖放气；避免了因开盖引起的杂菌污染(2)为酵母菌大量繁殖提供适量的氧气；
11、防止发酵旺盛时汁液溢出(3)乙A中的氧气乙B中的酒精乙A中的酒精(4)兼性厌氧异养解析(1)试管中的X溶液有助于维持甲装置的瓶中气压相对稳定，与乙装置相比，用甲装置酿制葡萄酒的优点是不需要开盖放气；避免了因开盖引起的杂菌污染。(2)葡萄汁装入甲装置时，要留有约1/3的空间，这种做法的目的是为酵母菌大量繁殖提供适量的氧气；防止发酵旺盛时汁液溢出。(3)分析题意可知，图中曲线、依次表示乙A中的氧气、乙B中的酒精、乙A中的酒精含量的变化趋势。(4)从细胞呼吸类型看，酵母菌属于兼性厌氧生物；从同化作用的类型看，酵母菌属于异养生物。2请回答与“泡菜的腌制”实验有关的问题：(1)腌制泡菜的基本过程是将蔬菜
12、、盐水、糖、白酒等放入洗净的菜坛中，混合均匀。坛口加盖后用_封好，如果希望发酵快些，可将蔬菜在_中浸泡1分钟。加入的白酒，既可作为调味剂，增加醇香感，还具有_的作用。(2)腌制泡菜过程中起作用的微生物主要是乳酸菌和_。为了分离某种美味泡菜汁中的乳酸菌作为菌种，可将稀释后的泡菜汁用_法快速接种到平面培养基上，立即将培养皿_(A.正放于无氧培养箱B正放于有氧培养箱C倒置于无氧培养箱D倒置于有氧培养箱)中培养。答案(1)水开水抑制杂菌生长(2)假丝酵母涂布分离C解析参与泡菜制作的微生物主要是乳酸菌和假丝酵母。(1)乳酸菌属于厌氧菌，因此坛口加盖后要用水封好。如果希望发酵快些，可将蔬菜在开水中浸泡1分
13、钟。加入的白酒，既可作为调味剂，增加醇香感，还具有抑制杂菌生长的作用。(2)根据题干中“稀释”一词可知，应该采用涂布分离法将泡菜汁快速接种到平面培养基上。乳酸菌是厌氧菌，因此应该将培养皿倒置于无氧培养箱中培养。考向二考查植物组织培养3(2018浙江新高考联盟二次联考)青蒿素是从黄花蒿茎叶中提取的抗疟疾药物。通过组织培养获得青蒿素的途径如图所示：请回答：(1)图中和分别表示黄花蒿组织培养过程中的_和_过程。(2)配制发芽培养基时生长素与细胞分裂素的比值应较_(填“高”或“低”)，配制培养基时通常加入凝固剂_，配制后还需用_法对培养基进行灭菌。外植体在接种前通常可用体积分数为_的乙醇进行消毒。(3
14、)为了得到高产细胞系，通常要用酶解法获得原生质体，用_和_在0.50.6 mol/L的_溶液中(较高渗透压)去壁。(4)科研人员利用转基因技术用细菌作为工程菌获得青蒿素的前体青蒿酸。先将目的基因与含有抗青霉素基因的质粒连接形成_，再与细菌菌液混合导入目的基因。用玻璃刮刀将稀释后的菌液用_法接种到含_的固体培养基上，经培养形成_，再进一步筛选和培养。若最终能从细菌中提取到_，则说明转基因成功。答案(1)脱分化再分化(2)低琼脂高压蒸汽灭菌70%(3)果胶酶纤维素酶甘露醇(4)重组DNA分子涂布分离青霉素单菌落青蒿酸4(2019浙江嘉兴9月联考)请回答与植物组织培养有关的问题：(1)在配制MS培养
15、基时，通常先将各种药品配制成一定倍数的_，这样配制的最主要优点是_(A.便于低温保存B延长使用时间C降低称量误差D减少杂菌污染)。(2)从自然界中获取的菊花茎段，需先用酒精等进行消毒，最后用_进行洗涤。将茎段插入培养基的过程必须在_中的酒精灯火焰旁进行，保证无菌环境。(3)从带芽的茎段上长出丛状苗_(选“需要”或“不需要”)经历脱分化，长出的丛状苗需_后，再转入_培养基中继续培养。答案(1)母液C(2)无菌水超净台(3)不需要分株生根解析(1)在配制MS培养基时，为了降低称量误差，通常先将各种药品配制成一定倍数的母液。(2)从自然界中获取的菊花茎段，先用酒精和次氯酸钠消毒，最后用无菌水冲洗。将
16、茎段插入培养基过程须在超净台的酒精灯火焰旁进行，以保证无菌环境。(3)带芽的茎段长出丛状苗不需要经历脱分化，丛状苗分株后，再转入生根培养基中继续培养生根。1(2019浙江五校联考)如图是探究果酒与果醋发酵的装置示意图。请回答下列相关问题：(1)下列关于该装置的相关叙述，正确的是_。A若利用果酒进行果醋发酵，需将气体出口开放以排出发酵产生的CO2B若果酒发酵结束后进行果醋发酵，需降低发酵温度C改变通入气体种类，可以研究呼吸作用类型对发酵的影响D若进行果醋发酵，则在装置中加入的培养液为蛋白胨、酵母提取物、甘露醇(2)果酒发酵的菌种可以通过添加_的豆芽汁(称为豆芽汁培养基)来培养。首先要配制培养基，
17、配好后应在121 (_压力)下灭菌15 min。灭菌时间不宜太长，否则_。(3)若需测定果酒发酵液中酵母菌的活菌数，可用血细胞计数板在显微镜下计数，或用_进行计数。(4)果酒酿造过程中如果果汁灭菌不合格，含有醋化醋杆菌，在酒精发酵旺盛时，醋化醋杆菌_(填“能”或“不能”)将果汁中的糖发酵为醋酸。(5)请绘制果酒和果醋发酵过程中乙醇的浓度变化曲线。答案(1)C(2)蔗糖1 kg/cm2会造成培养基营养物质被分解破坏(3)涂布分离法(4)不能(5)解析(1)利用果酒进行果醋发酵是需氧发酵，需将气体入口开放以通入发酵所需的O2，发酵过程中不产生CO2，A项错误；若果酒发酵结束后进行果醋发酵，则发酵温
18、度需由2530 升高至3035 ，B项错误；改变通入气体种类(氧气或氮气)，可以研究呼吸作用类型对发酵的影响，C项正确；若进行果醋发酵，则在装置中应加入酒水混合物和醋化醋杆菌，D项错误。(2)果酒发酵的菌种是酵母菌，需提供蔗糖作为碳源和能源，故可以通过添加蔗糖的豆芽汁(称为豆芽汁培养基)来培养；首先要配制培养基，配好后要进行高压蒸汽灭菌，应在121 (1 kg/cm2压力)下灭菌15 min；灭菌时间不宜太长，否则培养基营养物质会被分解破坏。(3)若需测定酵母菌的活菌数，因为酵母菌是单细胞生物，所以可用血细胞计数板在显微镜下计数，或用涂布分离法进行计数。(4)酒精发酵进行的是厌氧呼吸，需要严格
19、密封创造无氧环境，而醋酸发酵进行的是需氧呼吸，所以果酒酿造过程中，如果果汁灭菌不合格，含有醋化醋杆菌，在酒精发酵旺盛时，醋化醋杆菌不能将果汁中的糖发酵为醋酸。(5)果酒和果醋发酵过程中乙醇的浓度变化曲线见答案。2回答泡菜腌制与微生物分离有关的问题：(1)泡菜是利用微生物发酵制成的，为减少泡菜腌制时间，可加入一些陈泡菜汁，这相当于接种已经_的发酵菌，发酵产物含有机酸和_物质等，其中有亚硝酸。若用光电比色法测定泡菜中亚硝酸盐的含量，需将制备的待测液与_发生重氮化反应，产物再与N1萘基乙二胺偶联而显色。(2)现取5 mL上述陈泡菜汁用于测定其中的乳酸菌含量，可采取_法进行操作：取0.5 mL泡菜汁逐
20、级稀释至105，取105稀释液0.1 mL，分别接种到固体培养基，置于特定环境培养48 h后，观察菌落数。若培养结果如图所示，则5 mL陈泡菜汁中乳酸菌约为_个。(3)除了上述方法之外，还有_等方法可用于陈泡菜汁中乳酸菌的计数。答案(1)扩增(或扩大培养)醇类对氨基苯磺酸(2)(稀释)涂布分离7107(3)血细胞(计数板)计数法、比浊法、光电比色法、用比浊计测、测浑浊度(任两个均可)解析(1)陈泡菜汁中含有乳酸菌，制作泡菜时，加入一些陈泡菜汁，这相当于接种已经扩大培养的发酵菌；发酵产物含有机酸、醇类物质和亚硝酸等；若以光电比色法测定泡菜中亚硝酸盐的含量，需将制备的待测样液与对氨基苯磺酸发生重氮
21、化反应，产物再与N1萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。(2)测定泡菜汁中乳酸菌含量可采取涂布分离法进行接种；由题意可知，5 mL陈泡菜汁中乳酸菌约为(141315)31050.157107(个)。(3)对陈泡菜汁中乳酸菌计数还可采用血细胞(计数板)计数法、比浊法、光电比色法、用比浊计测、测浑浊度等方法。3兰溪小萝卜是深受市场欢迎的腌制食品，下图是其生产流程，据图回答下列有关问题：(1)腌制过程加入的盐水量不能太多，否则会出现溢坛现象，其原因是_。(2)腌制过程主要利用了_(A.假丝酵母和醋化醋杆菌B醋化醋杆菌和黑曲霉C乳酸菌和假丝酵母D黑曲霉和乳酸菌)对萝卜中有机物的分解作用，产生有机酸和醇类物
22、质，使萝卜更可口美味。(3)在生产过程中通过_、_和密封等措施控制其他杂菌的繁殖，以保证产品的质量。若密封不当，将会促使_菌繁殖而导致产品的酸量过大。(4)与所有腌制食品一样，在生产过程中，微生物会将原料中的_等分解转化为亚硝酸，在特定的条件下，进一步转变成致癌物质亚硝胺。因此在上述生产流程中的_和成品阶段需要通过_方法定量测定亚硝酸盐的含量，以保证产品的质量符合安全标准。答案(1)萝卜会在盐水中发生渗透失水(2)C(3)加盐加白酒(其他答案合理也可)醋化醋杆(4)含氮有机物发酵光电比色4(2018湖州3月联考)请回答黄花蒿植物组织培养的有关问题：(1)黄花蒿的植物组织培养研究在我国已有数年历
23、史。选取黄花蒿的茎段后，通常用体积分数为70%的乙醇等药品对茎段进行_，然后再放入_溶液中浸泡，最后用无菌水沖洗。若外植体不慎被细菌感染，采用划线分离法纯化细菌，在4个区域内划线需要将接种环灼烧灭菌_次。(2)植物组织培养的培养基可采用_灭菌。形成愈伤组织的过程中，除需无菌、营养和激素外，_等外界条件也很重要。(3)23周后将生长健壮的丛状苗在_(A.LB培养基适宜浓度BABLB培养基适宜浓度NAACMS培养基适宜浓度BADMS培养基适宜浓度NAA)上继续生根，形成完整植株。定植前，还需逐渐_进行炼苗。答案(1)消毒5%次氯酸钠5(2)高压蒸汽灭菌法光照、温度(3)D降低湿度解析(1)选取黄花
24、蒿的茎段进行组织培养时，通常用体积分数为70%的乙醇等药品对茎段进行消毒，然后再放入5%次氯酸钠溶液中浸泡，最后用无菌水冲洗。若外植体不慎被细菌感染，采用划线分离法纯化细菌，因在操作的第一步、每下一次的划线之前和划线操作结束时都需要将接种环灼烧灭菌，所以在4个区域内划线需要将接种环灼烧灭菌5次。(2)通常采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。形成愈伤组织的过程中，除需无菌、营养和激素外，光照、温度等外界条件也很重要。(3)23周后将生长健壮的丛状苗在MS培养基适宜浓度NAA的培养基上继续生根，形成完整植株。定植前，还需逐渐降低湿度进行炼苗。5图甲是植物组织培养过程的示意图，图乙是植物激素对愈伤组
25、织分化影响的示意图。请回答下列问题：(1)植物组织培养的原理是植物细胞具有_。(2)为了保证植物的正常生长，容器内装有的培养基中除小分子有机物和水外，还必须含有植物生长所需的_。(3)在图甲的A过程中，为了有利于嫩枝组织细胞启动细胞分裂形成愈伤组织，常常需要在配制好的培养基中添加_。嫩枝组织细胞接种后25 d，发现其边缘局部污染，其原因可能是_。(4)在图甲B过程中，若愈伤组织没有形成根，但分化出了芽，其原因可能是_；若要获得更多的愈伤组织，培养基中两种激素的含量应该是_。(5)切取若干光照后一段幼苗芽尖处的组织块，经消毒后接种到诱导再分化的培养基中培养，该培养基中两种植物激素的浓度相同。从理
26、论上分析，分化的结果是_，原因是_。答案(1)全能性(2)各种无机盐(3)植物激素嫩枝组织细胞消毒不彻底(4)培养基中生长素较少，细胞分裂素较多细胞分裂素中等量，生长素少(5)生根原培养基中细胞分裂素与生长素的浓度相同，而经光照后的幼苗芽尖处组织块中含较多生长素，因此组织块中的细胞分裂素少，生长素多，故诱导生根解析(1)植物细胞具有全能性，这是植物组织培养的理论基础。(2)为了保证植物的正常生长，容器内装有的培养基中除小分子有机物和水外，还必须含有植物生长所需的无机盐。(3)植物的组织培养过程中，启动细胞分裂和愈伤组织的分化都离不开植物激素。培养的嫩枝组织细胞周围发生局部污染的原因可能是嫩枝组
27、织细胞消毒不彻底。(4)从图乙可知，植物激素的种类及其浓度配比都会影响愈伤组织分化的方向，具体结合图示和题干信息回答即可。6苹果醋是指以苹果汁经发酵而成的苹果原醋、再兑以苹果汁等原料而成的饮品。既有淡淡的醋味，又有果汁的香甜，喝起来非常爽口。下图是苹果醋的制作简图，据图回答：(1)为提高苹果汁的出汁率和澄清度，可在生产苹果汁时加入_，该物质可以从某些微生物如_中提取。(2)过程乙中使用到的微生物是_，该微生物可以从食醋中分离纯化获得，步骤如下：第一步：配制培养基。除含有微生物生长所需要的各种营养成分外，还必须添加_。第二步：培养基灭菌。对培养基用_灭菌法进行灭菌。第三步：接种。分离微生物常用的
28、接种方法有两种，其中用_法，单菌落更容易分开，但操作复杂。第四步：培养。在适宜条件下培养48小时。第五步：挑选符合要求的菌落。(3)下列关于果酒和果醋制作的叙述合理的是_。A用pH试纸可检测并监控果醋发酵的情况，若pH试纸检测流出物明显呈酸性，则可停止实验B果酒发酵时，为了提高果酒的产量，果汁应尽量装满发酵瓶C果醋发酵时，需要连续通入氧气，否则发酵不能正常进行D酒精发酵时，培养液中乙醇浓度不能超过13%，否则酵母菌会死亡(4)严格控制发酵条件是保证发酵正常进行的关键，直接关系到能否得到质量高、产量多的理想产物，通常所指的发酵条件不包括_。A温度控制 B溶氧控制C酸碱度控制 D酶的控制答案(1)
29、果胶酶苹果青霉或黑曲霉(2)醋化醋杆菌琼脂高压蒸汽涂布分离(3)C(4)D解析(1)为提高果汁出汁率，可在生产时加入果胶酶，该物质可以从某些微生物如黑曲霉或苹果青霉中提取。(2)过程乙是果醋的制作过程，菌种是醋化醋杆菌。分离纯化微生物，采用固体培养基，第一步：配制培养基时，除加入微生物生长所需要的各种营养成分外，还需加入琼脂作为凝固剂。第二步：培养基灭菌，对培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法。第三步：接种，接种微生物常用划线分离法或涂布分离法，其中用涂布分离法更容易将菌种分开，但操作复杂。第四步：培养，温度控制在3035 。第五步：挑选符合要求的菌落。(3)pH试纸可以检测并监控果醋发酵的情
30、况，若pH试纸检测流出物明显呈酸性，可以进行下一步操作，A错误；果酒发酵时，果汁不能超过发酵瓶的2/3，以防止发酵液溢出造成污染，B错误；果醋发酵时醋化醋杆菌为需氧呼吸，因此需连续通入氧气，否则发酵不能正常进行，C正确；酒精发酵时，培养液中乙醇浓度不能超过16%，否则酵母菌会死亡，D错误。(4)严格控制发酵条件才能获得产量多的理想产物，适宜的温度、溶氧量、酸碱度等条件有利于发酵，由于发酵过程中利用的是某种菌种，因此一般酶不作为发酵条件。7(2018浙江“七彩阳光”3月联考)蓝莓富含花青素，含有丰富的营养成分，是世界粮农组织推荐的五大健康水果之一，蓝莓的深加工产品也深受人们的喜爱，如图是某实验室
31、利用蓝莓酒制作蓝莓醋的实验装置。请回答以下问题：(1)果醋发酵需要的菌种是_，实验前该菌种需在_上振摇，进行扩大培养。(2)甲中是蓝莓酒和蒸馏水的混合物，其比例是_。A12 B14 C21 D41(3)乙中是经_灭菌过的锯末，采用_法将发酵菌株固定在锯末上制成固定化菌株，可大幅缩短生产周期，降低生产成本和提高生产效率，并增强果醋的风味。(4)若该菌种受到杂菌污染，欲消除污染杂菌，最简单的方法是_。答案(1)醋杆菌(醋化醋杆菌)摇床(2)B(3)高压蒸汽灭菌法吸附(4)划线分离法解析(1)果醋发酵利用的菌种是醋杆菌(醋化醋杆菌)，醋杆菌的新陈代谢类型是异养需氧型，因此实验前需将该菌种在摇床上振摇
32、，进行扩大培养。(2)甲中是蓝莓酒和蒸馏水的混合物，其比例为14。(3)锯末需要采用高压蒸汽灭菌法灭菌，并采用吸附法将发酵菌株固定在锯末上制成固定化菌株，可大幅缩短生产周期，降低生产成本和提高生产效率，并增强果醋的风味。(4)若该菌种受到杂菌污染，欲消除污染杂菌，最简单的方法是划线分离法。8(2019浙江绍兴9月联考)回答高产醋化醋杆菌的分离和应用的相关问题：(1)培养基的配制：将适量酵母膏、葡萄糖、琼脂配制成液体，在_kg/cm2条件下灭菌30分钟，使用前再加入适量_和灭菌的碳酸钙，以利于选择。(2)分离：将样品用_稀释，并用_将适量稀释液涂布到培养基中，培养一段时间出现_，根据_与碳酸钙作
33、用形成的透明圈大小进行选择。(3)在果醋发酵中需要控制在适宜的条件下，下列相关叙述错误的是_。A需要通入无菌空气，提供有氧环境B在使用高产醋化醋杆菌生产果醋时可以直接加入果汁C发酵时往往需要锯末等物质固定醋化醋杆菌D发酵前需将培养液pH调至7.0答案(1)0.5无水乙醇(2)无菌水玻璃刮刀单菌落醋酸(3)B解析(1)因为含有葡萄糖，培养基需在0.5 kg/cm2压力(90 以上)条件下对液体培养基进行灭菌，为了筛选到高产的醋化醋杆菌，可在培养基中加入适量无水乙醇作底物，加入灭菌的碳酸钙用于鉴定生成醋酸的多少。(2)涂布分离中，将样品用无菌水稀释，并用玻璃刮刀涂布到固体培养基上，培养一段时间，出现单菌落，根据醋酸与碳酸钙作用形成的透明圈大小选择出高产的醋化醋杆菌。(3)在使用高产醋化醋杆菌生产果醋时，应加入果酒而不能直接加入果汁。