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1、章末复习提升课章末复习提升课(六六) 蛋 白 质 和 DNA 技 术 蛋白质的提 取和分离 常用技术 离心技术 层析技术 电泳技术) 电泳技术原理 血清蛋白的提取与分离) DNA片段的扩增 PCR技术 PCR技术原理 步骤 高温变性 低温复性 中温延伸) PCR技术的实验操作) 聚丙烯酰胺凝胶的优点 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持物的电泳方法，其优点如 下： 1聚丙烯酰胺没有或很少带有离子的侧基，因而其凝胶电泳作用比较小，不 易和样品相互作用。 2可以根据需分离物质的分子大小，选择合适的凝胶成分，使之既有适宜的 空隙度，又有比较好的机械性能。 3在一定浓度范围内聚丙烯酰胺对热稳定
2、。凝胶无色透明，易观察，可用检 测仪直接测定。 PCR 技术的基本原理 类似于DNA的天然复制过程， 其特异性依赖于与靶序列两端互补的引物。 PCR 由高温变性低温复性中温延伸三个基本反应步骤构成： 1高温变性：模板 DNA 经加热至 95 左右，一定时间后，使模板 DNA 双 链或经 PCR 扩增形成的双链 DNA 解旋，使之成为单链，以便它与引物结合，为 下轮循环作准备。 2低温复性：模板 DNA 经加热变性成单链后，温度降至 55 左右，引物与 模板 DNA 单链的互补序列配对结合。 3中温延伸：DNA 模板引物结合物在耐高温的 DNA 聚合酶的作用下，以 四种脱氧核苷酸为原料，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模 板 DNA 链互补的“半保留复制链” ，重复循环高温变性低温复性中温延伸三 个过程，就可获得更多的“半保留复制链” ，而且这种新链又成为下次循环的模板。