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1、第34讲克隆技术考试标准加试考试标准加试1.植物的克隆b2.动物的克隆a考点一植物的克隆1植物细胞全能性(1)全能性：植物体的每个生活细胞都具有遗传上的全能性，因而都具有发育成完整植株的潜能。(2)全能性表达的条件离体：已经分化的植物体细胞，只有在离体条件下才能表现出全能性。无菌：培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不仅会与培养物争夺营养，而且会产生大量对培养物有害的物质。一定的营养物质：如水、无机盐、蔗糖、维生素等。植物生长调节剂：为促进脱分化和再分化，培养基中需要加入一定的植物生长调节剂，如生长素、细胞分裂素等。(3)全能性表达的难易程度分化程度低的细胞分化程度高的细胞。受精卵配子体细胞。
2、植物细胞动物细胞。2植物组织培养程序配制培养基：配制含有适当营养物质和植物生长调节剂的半固体培养基切取消毒的组织块获得愈伤组织：由相对没有分化的活的薄壁细胞团组成的新生组织诱导新植株3植物细胞培养和器官培养的措施通过平衡的植物激素配比进行调控。(1)适量的激动素和细胞分裂素配比，可诱导芽的分化。(2)适量的吲哚乙酸及适当减除其他某些激素，可诱导生根。4原生质体培养与植物细胞工程(1)原生质体培养植物细胞原生质体新植株。(2)植物细胞工程的操作过程5植物克隆技术的应用(1)转基因植株培育。(2)细胞次生代谢产物的生产。(3)单倍体育种。(4)诱发、筛选突变体。思考讨论1进行植物组织培养时，既用到
3、消毒技术，也用到灭菌技术，它们分别针对哪些对象？为何需进行“无菌操作”。提示对培养材料及操作者衣着、手臂应进行消毒，对培养基应进行灭菌。由于杂菌不仅争夺营养，还会产生毒素，故应进行无菌操作。2若培养物取自植物的幼茎、叶片等含有叶绿体的部位，愈伤组织中是否会含有叶绿体？提示培养物经过诱导后，失去其特有的结构和功能而转变成相对没有分化的细胞，因此，愈伤组织中不含叶绿体。3将无根的非洲菊幼苗转入无植物激素的培养基中，在适宜的温度和光照等条件下培养一段时间后，应出现的现象是下列中的哪一种？提示细胞分裂素促进细胞分裂，诱导芽的分化；生长素可以促进不定根、侧根的形成；此题中虽然培养基中没有植物激素，但由于
4、外植体为“菊幼苗”而非离体的组织或细胞，故仍可自行产生激素，从而产生如图所示的生长现象。4生长素和细胞分裂素在植物组织培养中的相互作用及其应用(1)细胞分裂素与生长素比例合适愈伤组织会分化出根和芽。(2)细胞分裂素多，生长素少只长茎叶不长根。(3)生长素多，细胞分裂素少只长根，不长茎叶。(4)生长素少，细胞分裂素也少愈伤组织继续生长，不发生分化。题型一植物细胞的全能性和组织培养方法1下图为玉米植物(2n20)组织培养的简略表示，下列有关说法不正确的是()A的培养基中需要加入一定配比的生长素和细胞分裂素，还要加入琼脂和蔗糖等B的分化程度比低，全能性比高C若是花药，则是单倍体植株，将的种子用一定浓
5、度的秋水仙素处理可获得纯合子D若将在摇床上进行液体悬浮培养可以获得细胞质丰富、液泡小而细胞核大的胚性细胞答案C解析玉米为二倍体，其单倍体植株高度不育，不能产生“种子”。2青蒿素是从植物黄花蒿的叶片中所提取的一种代谢产物，而茎及其他部位中的青蒿素含量及其微小，下列关于利用植物组织培养生产青蒿素的叙述中，正确的是()A在黄花蒿组织培养过程中无需光照B加入大量生长素可提高青蒿素的产量C可通过大量培养愈伤组织以直接获得青蒿素D可大规模栽培组织培养苗以获取药用成分答案D解析植物组织培养包括脱分化和再分化两个过程，其中脱分化过程不需要光照，而再分化过程需要光照，A项错误；生长素对脱分化和再分化过程具有调节
6、作用，但不能直接提高青蒿素的产量，B项错误；青蒿素是从植物黄花蒿的叶片中所提取的一种代谢产物，而茎及其他部位中的青蒿素含量及其微小，因此通过大量培养愈伤组织不能直接获得青蒿素，C项错误；可大规模栽培组织培养苗以获取药用成分，D项正确。植物组织培养过程的两个易错点(1)脱分化形成愈伤组织的过程不需要光，再分化过程需要光，因为愈伤组织利用有机营养成分，而试管苗需要进行光合作用以自养。(2)种子是植物的幼体，包含胚根、胚轴和胚芽，而不是高度分化的体细胞，故由种子萌发形成植株是植物的生长现象，并未体现植物细胞的全能性。题型二影响植物组织培养的因素3植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再
7、分化的关键性因素。按照不同顺序使用这两类激素，会得到不同的实验结果。若先使用生长素，后使用细胞分裂素，实验结果是()A有利于细胞分裂，但细胞不分化B细胞既分裂也分化C细胞分化频率提高D有利于细胞分化，但细胞不分裂答案A解析植物组织培养过程中，细胞分裂素和生长素的使用顺序不同，培养的结果不同。先使用生长素，后使用细胞分裂素，有利于细胞分裂，但细胞不分化；先使用细胞分裂素，后使用生长素，细胞既分裂也分化；两者同时使用，细胞分化频率提高。4如图表示植物组织培养过程。据图分析下列叙述正确的是()A植株根尖细胞的全能性比植株根尖细胞的强B试管的培养基中含有植物生长调节剂，不含有机物C试管中的细胞具有细胞
8、质丰富、细胞核和液泡都大的特性D调节培养基中植物生长调节剂的比例可诱导产生不同的植物器官答案D解析由于是由上的组织经培养形成的个体，故二者的全能性应该相同，A项错误；由到的过程中植物细胞不能进行光合作用，因而试管中含有有机物如蔗糖等，故B项错误；试管中细胞为愈伤组织细胞，液泡小，故C项错误。题型三植物细胞工程的应用5(2017台州月考)某科研团队利用植物细胞工程技术，把基因序列已知的抗除草剂(Bar)基因导入原生质体获得抗除草剂大豆。请回答下列相关问题：(1)对于已获得的Bar基因可以用_技术进行扩增。图中的a过程通常使用相同的_酶和DNA连接酶，使目的基因与载体连接形成重组DNA分子。(2)
9、在b过程中，获得原生质体除了需要纤维素酶和果胶酶，还需要用到的试剂是_。(3)成功导入重组DNA的原生质体经脱分化形成I_，进而生长发育成植株。下列不属于I细胞应具有的特征是_。A薄壁细胞B细胞质丰富C液泡小D细胞核小(4)若要判断转基因抗除草剂大豆是否培育成功，比较简便的检测方法是_。答案(1)PCR限制性核酸内切(2)(较高浓度的)甘露醇(3)愈伤组织D(4)用一定浓度的除草剂喷洒，观察转基因大豆的生长情况解析(1)PCR技术可在体外大量扩增目的基因；图中a为形成重组DNA分子的过程，该过程首先需要用限制性核酸内切酶切割外源DNA和载体，其次需要用DNA连接酶将目的基因与载体连接形成重组D
10、NA分子。(2)用酶混合液处理植物细胞时，酶混合液中含有适宜浓度的甘露醇，其作用是调节细胞内外的渗透压，防止细胞吸水胀破。(3)成功导入重组DNA的原生质体经脱分化形成I愈伤组织，进而生长发育成植株。愈伤组织细胞细胞质丰富、液泡小而细胞核大。(4)若要判断转基因抗除草剂大豆是否培育成功，比较简便的检测方法是用一定浓度的除草剂喷洒，观察转基因大豆的生长情况。6某研究小组欲将已知抗盐基因导入原生质体培育抗盐菊科植物。请回答：(1)为获得大量抗盐基因，可通过_技术进行扩增，也可将其连接到_上，通过大肠杆菌培养扩增。(2)制备叶片原生质体的酶混合液中，一般含较高浓度的甘露醇，其目的是避免制备的原生质体
11、_。酶混合液需通过_灭菌，才能用于无菌原生质体的制备，整个无菌操作过程需在_中进行。(3)可通过_方法，直接将抗盐基因导入原生质体的细胞核。此外，还可用聚乙二醇融合、电击等方法导入。导入后的原生质体需再生出_，经持续分裂获得愈伤组织，进一步分化获得再生植株并扩大繁殖。(4)利用带有标记的抗盐基因特殊片段与从转基因植株提取的RNA进行_，验证抗盐基因是否被整合到受体细胞中并转录。通过将扩大繁殖的再生植株转接到含有_的培养基，根据生长状况初步筛选出抗盐植株。(5)为了获得大量该转基因植株，可将带腋芽的茎段转入适宜培养基中，获得大量_，然后转入生根培养基中诱导生根，形成再生植株。再生植株需进行_(不
12、定项选择：A.无菌处理B锻炼C去除根部残留的培养基D逐步提高湿度处理)后才能移种大田。答案(1)PCR质粒(2)吸水胀破过滤(G6玻璃砂漏斗)超净台(3)显微注射细胞壁(4)分子杂交较高浓度NaCl(盐)(5)丛状苗B、C解析(1)抗盐菊科植物的培育采用了基因工程技术和植物组织培养等技术。在基因工程技术中，抗盐基因为目的基因，可以采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因，也可以通过将连接有目的基因的质粒导入大肠杆菌中使其扩增。(2)原生质体的制备一定要放在高渗溶液中，避免植物细胞去壁后原生质体过度吸水而胀破；酶在高温下易失活，所以酶混合液无法采用高压蒸汽灭菌法灭菌，可用G6玻璃砂漏斗过滤除菌。
13、(3)植物细胞去壁后可采用显微注射法导入目的基因。原生质体培养过程中必须首先再生出细胞壁，然后再经过脱分化形成愈伤组织，最后经过再分化形成植株。(4)若抗盐基因成功整合并转录出RNA，则相应的RNA能够跟抗盐基因的模板链互补配对，所以可用分子杂交的方法进行鉴定，而抗盐基因成功表达的抗盐植株，则应该通过种植利用其可以耐受高浓度食盐的特性进行筛选。(5)在植物组织培养过程中，应该将带芽茎段先放在生芽培养基中得到丛状苗，然后再转入生根培养基中得到再生植株幼苗，幼苗要去除根部残留的培养基，经过逐渐降低湿度的锻炼后才能在大田种植。考点二动物的克隆1动物细胞、组织培养(1)动物克隆的技术基础是动物的细胞和
14、组织培养。(2)动物细胞培养的过程概述：动物细胞培养包括组织块的切取、组织细胞的分散及细胞培养三个阶段。分散组织细胞常用的方法有机械消化法和胰酶消化法。原理：细胞增殖。条件：a.充足的营养供给微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、促生长因子、血清等。b适宜的温度：36.50.5；适宜的pH：7.27.4c气体环境d无菌、无毒环境流程取材：从动物组织切片中切取小片样品机械消化或胰酶消化单个细胞悬浮液转入培养液原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养分瓶传代培养：将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖(3)动物成纤维细胞的培养过程：切取组织小片胰蛋白酶酶解原代培养传代培
15、养。2细胞系和细胞株(1)细胞系的类型：连续细胞系(恶性细胞系：具有异体致瘤性；不死性细胞系：保留接触抑制现象，不致癌)和有限细胞系。(2)细胞株：通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞。可分为连续细胞株和有限细胞株。3克隆培养法(1)概念：把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。(2)基本要求：必须肯定所建成的克隆来源于单个细胞。(3)提高细胞克隆形成率的措施有：选择适宜的培养基；添加血清；以滋养细胞支持生长；激素(胰岛素等)刺激；使用CO2培养箱；调节pH等。4动物的细胞融合技术及其应用(1)细胞融合概念：是指在一定的条件下
16、将两个或多个动物细胞融合成一个细胞的现象。原理：细胞膜的流动性。诱导融合的方法a物理方法和化学方法：电激法、聚乙二醇等。b生物方法：灭活的病毒(如仙台病毒)。(2)细胞杂交概念：基因型不同的细胞间的融合就是细胞杂交。过程应用：由于细胞杂交中染色体容易丢失，利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产物(蛋白质)减少的对应关系可以进行基因定位。(3)杂交瘤技术和单克隆抗体的制备过程根据上图完善下面的过程为什么选择B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合？答案a选择B淋巴细胞：若采取单个的B淋巴细胞进行无性繁殖形成细胞群，这样的细胞群就能产生化学性质单一、特异性强的抗体。b.选择骨髓瘤细胞：在体外培养的条件下
17、，肿瘤细胞(如骨髓瘤细胞)具有无限增殖的特性。5动物的克隆繁殖(1)动物细胞全能性的表现程度受精卵具有全能性。多能细胞只具有分化出多种组织细胞的潜能。单能细胞只能分化为一种细胞。高度分化的细胞不再分化为其他细胞。(2)动物难以克隆的根本原因在动物的个体发育过程中，细胞分化使得细胞发生了基因的差异表达，细胞基因组中基因的活动很不完全。(3)细胞核移植实验和动物的克隆繁殖核移植：利用一个细胞的细胞核来取代另一个细胞中的细胞核，形成一个重建的“合子”。动物的克隆繁殖提醒动物难以克隆的根本原因：分化了的动物细胞的细胞质中的调节蛋白，关闭了细胞核中与个体发育有关的基因。重组卵发育成一个新个体，体现了细胞
18、核的全能性而非动物细胞的全能性。重建合子的细胞质必须来自卵细胞的原因：卵细胞的细胞质中没有与关闭个体发育有关基因的调节蛋白。动物克隆属于无性繁殖，产生新个体的性别、绝大多数性状与供核亲本一致。思考讨论1区分原代培养和传代培养(1)原代培养细胞悬浮液第一次在瓶中培养，没有分瓶培养之前的细胞培养。有时把最初的若干次传代归入原代培养范围。(2)传代培养细胞悬浮液培养一段时间后，分瓶再进行的细胞培养。将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶，就称为传代培养。2比较细胞系和细胞株种类来源特点细胞系有限细胞系通常由二倍体细胞传代培养建成有接触抑制；不能连续培养连续细胞系由传代细胞连续培养建成发生了转化，
19、多数具有异倍体核型；有些具有异体致瘤性；有些具有不死性，但不致癌细胞株有限细胞株通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞传代次数有限一般具有恒定的染色体组型、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性等连续细胞株可连续多次传代3.动物细胞培养过程中，也需要将动物细胞分散开来，这与观察植物细胞的有丝分裂中的解离作用类似。两种处理方法的结果最大的区别是什么？提示动物细胞培养过程中的处理，动物细胞还保持活性；但在植物细胞的解离过程中，细胞被解离液杀死，已经失去活性。4单克隆抗体的制备分析(1)细胞融合完成的标志是什么？提示细胞核融合成一个核。(2)杂交瘤细胞的特性是什么？提示既
20、能无限增殖，又能产生大量特异抗体。(3)获取单克隆抗体的两个场所在哪里？提示若在培养基中进行杂交瘤细胞培养，则从培养液中提取；若在小鼠或其他动物腹腔中培养，则从腹水中提取。(4)在单克隆抗体制备过程中，一般认为有两次筛选过程，请说明。提示第一次是筛选出杂交瘤细胞(用选择培养基)，第二次是进一步筛选出能产生人们所需抗体的杂交瘤细胞。(5)用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞(“BB”细胞、“瘤瘤”细胞)都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞(“B瘤”细胞)才能生长。(6)单克隆抗体有哪些优点？提示特异性强、灵敏度高，可大量制备。5通过动物体细胞核移植技术获得的克隆动物，其遗传物
21、质是否和供核细胞的遗传物质完全一样？提示不完全一样。细胞核遗传物质一样，但细胞质遗传物质和提供去核卵细胞的个体几乎完全一样(分析遗传物质来源时，一定要注意细胞核遗传物质和细胞质遗传物质的区别)。题型一动物细胞培养与克隆繁殖1下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是()A连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型B某些癌细胞在合适条件下能逆转为正常细胞C由多个祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆D未经克隆化培养的细胞系细胞具有相同的性状答案B解析连续细胞系的细胞大多数具有异倍体核型；癌细胞仍能逆转为正常细胞，如小鼠畸胎癌细胞能分化为各种正常体细胞；由一个共同的祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆；未经克隆化培养的细
22、胞系具有异质性。2(2015安徽，31)科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图。请回答下列问题：(1)由过程获得的A为_。(2)在核移植之前，必须先去掉受体卵细胞的核，目的是_。受体应选用_期卵母细胞。(3)进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生_，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。(4)采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论上可获得无限个转基因绵羊，这是因为_。答案(1)含目的基因的重组DNA分子(2)保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞M中(3)免疫排斥反应(4)整合有目的基因的
23、成纤维细胞可进行传代培养解析(1)根据题意可知，要将人凝血因子IX基因导入绵羊胎儿成纤维细胞，必须构建基因表达载体，所以由过程获得的A为含目的基因的重组DNA分子。(2)在核移植之前，为了保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞，必须先去掉受体卵细胞的核。受体应选用减数第二次分裂中期(M中期)的卵母细胞。(3)进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。(4)采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论上可获得无限个转基因绵羊，这是因为整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养。比较动物细胞培养、核移植与动物细胞融合比较动物细
24、胞培养核移植动物细胞融合原理细胞增殖动物细胞核的全能性细胞膜的流动性过程细胞A、B融合杂交细胞有丝分裂多个相同杂交细胞结果相同分化程度的细胞群与供体基本相同的个体杂交细胞关键环节细胞增殖(分裂)、细胞癌变核融合、细胞分化人工诱导细胞膜融合应用生产生物制品；基因工程；检测有毒物质加速良种繁育；保护濒危物种；生产医用蛋白；提供克隆器官、组织等获得杂种细胞，制备细胞产物，如单克隆抗体题型二单克隆抗体的制备3关于下面制备单克隆抗体过程示意图的叙述，不正确的是()A表示已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞均是从小鼠的脾脏中提取的B促进细胞融合的方法可以利用聚乙二醇作介导C中的筛选是通过抗原抗体反应进行的D可以
25、无限增殖答案A解析已免疫的B淋巴细胞可以从小鼠的脾脏中提取，也可以从血浆中提取，骨髓瘤细胞是从小鼠的骨髓中提取的。单克隆抗体是利用已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞得到的，融合方法可以用化学方法聚乙二醇，生物方法灭活的病毒等。如果要筛选能产生特定抗体的细胞群，可以通过检测抗原抗体反应，如果有反应说明产生了抗体。融合细胞具有双亲的特点，既能无限增殖又能产生单一抗体。4(2017嘉兴期末)如图是制备抗体的两个途径的模式图，下列叙述正确的是()A图中获得的抗体1和抗体2结构完全相同B抗体1和抗体2的制备过程均涉及细胞筛选CY细胞的增殖过程需要提供适量的O2，不需要提供CO2D和过程的
26、原理分别是细胞增殖和碱基互补配对原则答案B解析抗体1和抗体2的氨基酸排列顺序相同，但空间结构不一定相同，抗体1由杂交瘤细胞产生，其形成经过内质网和高尔基体的加工，抗体2是在大肠杆菌中产生，其内没有内质网和高尔基体，A项错误；处需要通过选择培养基的筛选，得到既能无限增殖又能产生特异性抗体的Y细胞；重组DNA分子的构建和导入过程的成功率较低，所以也需要筛选，B项正确；动物细胞培养需要气体环境，培养液中需要提供氧气和二氧化碳。所需的气体CO2的作用是维持培养液的pH，C项错误；过程表示动物细胞融合，其结构基础是细胞膜的流动性，D项错误。模拟演练1下列各项中属于克隆技术的是()A把鲤鱼胚胎细胞的细胞核
27、移到去核鲫鱼成熟卵中B体外培养基底层干细胞来培植皮肤用于植皮手术C将小鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞结合成杂交瘤细胞D将人工授精的受精卵体外培养形成胚胎答案B解析把鲤鱼胚胎细胞的细胞核移到去核鲫鱼成熟卵中属于核移植，A项错误；体外培养基底层干细胞来培植皮肤用于植皮手术属于克隆技术，B项正确；将小鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞结合成杂交瘤细胞属于细胞融合技术，C项错误；将人工授精的受精卵体外培养形成胚胎，属于有性生殖，D项错误。2下图表示利用棉花叶肉细胞原生质体培养进行遗传改良的过程，据图分析下列说法错误的是()A过程需在适宜条件下用纤维素酶和果胶酶的混合物处理B过程能定向诱导原生质体产生优良性状的突变C过程中
28、叶肉细胞失去了其特有的结构和功能D过程需用适宜配比的植物激素处理答案B解析植物细胞壁主要是由纤维素和果胶组成的，常选用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得具有活力的原生质体。紫外线照射诱变育种所依据的原理是基因突变，这种突变是不定向的。过程是脱分化，指已经分化的植物器官、组织或细胞，当受到创伤或进行离体(也受到创伤)培养时，已停止分裂的细胞又重新恢复分裂，细胞改变原有的分化状态，失去原有的结构和功能，成为具有未分化特性的细胞。是再分化，需用适宜配比的植物激素诱导。3(2017鄞州中学测试)下列关于动物细胞培养的叙述，错误的是()A在培养基中加入胰岛素可提高动物细胞克隆形成率B细胞克隆可以从普通细胞
29、系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系C连续细胞系可认为是发生了转化的细胞系，大多数具有二倍体核型D无限细胞系比有限细胞系更容易克隆答案C解析胰岛素可促进葡萄糖等物质转运进入组织细胞，A项正确；细胞克隆即克隆培养法，是将单一细胞从细胞群体中分离出来单独培养形成纯系的技术，从普通细胞系中分离出单个突变细胞即可采用这种方法培养成细胞系，B项正确；连续细胞系大多具有异倍体核型，C项错误；无限细胞系增殖能力更强，更易克隆，D项正确。4(2016青岛质检)某实验室做了如图所示的实验研究，下列与实验相关的叙述正确的是()A过程导入的诱导基因使成纤维母细胞发生基因突变B丙细胞既能持续分裂，又能分泌单一的抗体C过
30、程属于动物细胞培养过程中的原代培养D过程所用的培养基中都含有聚乙二醇答案B解析外源基因的导入过程属于基因重组，A项错误；丙细胞能产生单克隆抗体，说明丙细胞具有连续分裂且能分泌单一抗体的能力，B项正确；表示细胞分化过程，C项错误；是诱导细胞融合的过程，所用的培养基含有聚乙二醇或灭活的仙台病毒，而过程不用聚乙二醇，D项错误。5下图是烟草叶片原生质体分离和培养的流程图。请回答：烟草叶片消毒酶解获得原生质体原生质体检测原生质体培养获得愈伤组织(1)酶解时，在纤维素酶和果胶酶的混合液中，还需添加_来提高混合液的渗透压，以便获得完整的原生质体。(2)获得原生质体后，可用_法检测原生质体是否存活。然后将原生
31、质体制成悬浮液，滴加在_上，用显微镜观察并计数。要判定原生质体是否已形成细胞壁，可用_法鉴别。(3)欲通过原生质体培养得到愈伤组织，从培养基的成分(除琼脂外)考虑，配制培养基时需要注意的主要方面是_。答案(1)甘露醇(2)红墨水染色血细胞计数板质壁分离(3)营养物质和植物生长调节剂的适当配比解析(1)为防止原生质体吸水胀破，可加入适宜浓度的甘露醇溶液来提高混合液的渗透压。(2)活细胞的质膜具有选择透性，红墨水非细胞生长所需物质，不会被吸收，而死细胞的质膜变为全透性，红墨水可进入使细胞染色；细胞显微计数的常用装置为血细胞计数板，形成细胞壁的细胞置于较高浓度的溶液中会发生质壁分离现象。(3)植物组
32、织培养过程中需要适当配比的营养物质和植物生长调节剂诱导，才能顺利发生脱分化，形成愈伤组织。课时训练一、选择题1(2017台州中学统考)下列过程不涉及植物组织培养技术的是()A由马铃薯的茎尖培育出无病毒植株B白菜和甘蓝经体细胞杂交过程培育出杂种植株C转入抗卡那霉素基因的烟草细胞培育出转基因植株D二倍体水稻刚萌发的种子经秋水仙素处理后培育出四倍体植株答案D解析植物组织培养属于无性繁殖技术。将离体的植物组织、细胞培养成完整植株，需制备相应的培养基并添加适当配比的营养物质和植物生长调节剂诱导，即必须依赖植物组织培养技术，故A、B、C项均涉及该技术；用秋水仙素处理二倍体水稻刚萌发的种子即可得到四倍体植株
33、，无须利用植物组织培养技术，故选D项。2(2017江苏，11)牛雄性胚胎中存在特异性H-Y抗原，可在牛早期胚胎培养液中添加H-Y单克隆抗体，筛选胚胎进行移植，以利用乳腺生物反应器进行生物制药。下列相关叙述正确的是()AH-Y单克隆抗体由骨髓瘤细胞分泌B应选用原肠胚做雌雄鉴别C鉴别后的雄性胚胎可直接做胚胎移植D用H-Y抗原免疫母牛可获得相应抗体答案D解析H-Y单克隆抗体是由已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞形成的杂交瘤细胞分泌的，A项错误；一般选用囊胚期的滋养层细胞做性别鉴定，B项错误；利用乳腺生物反应器进行生物制药，应选择雌性胚胎，C项错误；用H-Y抗原免疫母牛，可使母牛针对该抗原产生相应抗体，D
34、项正确。3科学家将豹蛙的囊胚期细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中，形成重组细胞，然后培养重组细胞形成囊胚，最终发育为成体豹蛙。下列相关叙述错误的是()A“多莉”羊培育方法与题中获得成体豹蛙方法本质相似B囊胚期细胞已发生分化，但细胞核中的基因组完整C重组细胞形成成蛙过程需要进行胚胎移植，但不能用原肠胚期的胚胎进行移植D重组细胞最初分裂时虽然进行了DNA复制，但基因转录并未开始答案C解析豹蛙和“多莉”羊的培育过程都采用了细胞核移植技术，本质相似，A项正确；细胞分化的实质是基因的选择性表达，遗传物质并未改变，基因组的完整性得以保留，B项正确；蛙类属于卵生动物，无须进行胚胎移植，C项错误；重组细胞最初分
35、裂时进行了DNA复制，但基因转录尚未开始，重组细胞开始第三次分裂时核受体细胞的调节蛋白全部被卵细胞质中的蛋白因子替代，核DNA重新编排，胚细胞基因才开始表达，D项正确。4(2017奉贤区二模)如图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述错误的是()A是从已免疫的小鼠脾脏中获得的B淋巴细胞B过程实现的结构基础是细胞膜具有一定的流动性C一定是杂交瘤细胞D是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群答案C解析是从已免疫的小鼠脾脏中获得的具有免疫能力的B淋巴细胞，A项正确；过程为B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的过程，原理是细胞膜具有一定的流动性，B项正确；如果只考虑两两融合，可能有3种融合细胞，即杂交
36、瘤细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞和B淋巴细胞自身融合的细胞，C项错误；过程表示用抗体阳性检测筛选出能无限增殖并能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞群，D项正确。二、非选择题5(2017绍兴柯桥中学期中)如图可表示细胞融合技术的一些过程，请据图回答：(1)若A、B到C过程是体外受精过程，则对已取得的精子必须先进行_处理，若需获取更多的卵细胞一般要对雌性个体注射_，使其_。(2)若该过程是制备单克隆抗体的过程，在A、B到C的过程中，A细胞为骨髓瘤细胞，B细胞为能产生抗体的B淋巴细胞，那么D细胞称为_细胞。从融合细胞中选择出它的方法是在特定的选择培养基中培养，筛选出该类细胞后还需进行_培养和抗体检测，经多次
37、筛选可获得数量足够的能分泌所需抗体的细胞。(3)若A、B细胞为植物细胞，D细胞在植物组织培养时，先配制_培养基，再加入一定比例的植物激素，当生长素相对较少时，愈伤组织可发育形成_。(4)若要培育转基因植物，则可采用_法将目的基因导入受体细胞中。受体细胞应该是_(A.体细胞B卵细胞C受精卵D雄配子)。为了得到农杆菌的单菌落，常采用的分离方法有两种，即_和_。(5)植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是_。A接种环和镊子B三角瓶和广口瓶C发芽培养基和生根培养基D用于培养的幼茎和幼芽答案(1)获能促性腺激素超数排卵(2)杂交瘤克隆化(3)MS丛状苗(4)农杆菌转化A划线
38、分离法涂布分离法(5)D解析(1)受精之前，对已取得的精子先进行获能处理；若需更多的卵细胞，一般要对雌性个体注射促性腺激素，使其超数排卵。(2)依据题中信息可确定图中D细胞为杂交瘤细胞；对获得的杂交瘤细胞需进行克隆化培养以扩大数量。(3)若要培育转基因植物，则可采用诱导生芽或生根的培养基(MS培养基)培养；当生长素相对较少时，愈伤组织可发育形成丛状苗。(4)若要培育转基因植物，通常采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞中；受体细胞应该是植物体细胞；为了得到农杆菌的单菌落，常采用的分离方法有两种，即划线分离法和涂布分离法。(5)四个选项中不适宜用高压蒸汽灭菌的是用于培养的幼茎和幼芽。6(2017
39、宁波九校期末联考)苦荞富含黄酮类化合物等营养物质，在降血糖、降血脂等方面功效显著。查尔酮合成酶(CHS)是黄酮类化合物合成的关键酶，如图为将CHS基因导入苦荞，培育高产黄酮苦荞品系示意图。据图回答下列问题：(1)基因工程的核心是_。(2)可利用_、_方法获取CHS基因。(3)过程中切开质粒的酶是_。它能在质粒特定的部位切割的原因是_。(4)过程分别是_。苦荞细胞能培养成植株的根本原因是_。(5)为培育转基因苦荞植物，还可将该植物幼叶消毒后，用_酶混合液处理，获得原生质体。酶混合液中含有适宜浓度的甘露醇，其作用是_。将目的基因导入到原生质体，经培养形成愈伤组织，再通过_得到分散的胚性细胞，发育成
40、_，生长发育后获得该转基因植株。(6)愈伤组织继代次数过多会丧失细胞全能性的表达能力，下列原因错误的是_。A愈伤组织发生遗传变异B愈伤组织不能分散成单细胞C愈伤组织中激素平衡发生改变D愈伤组织对外源激素敏感性发生改变答案(1)形成重组DNA分子(2)从基因文库中获取化学方法合成或PCR扩增(3)限制性核酸内切酶能识别特定的核苷酸序列并在特定的位点切割DNA分子(4)脱分化、再分化植物细胞的全能性(或细胞中含有发育成完整个体所必需的全部基因)(5)纤维素酶和果胶(写全才可)维持渗透压液体悬浮培养胚状体(6)B解析(1)基因工程的核心是基因工程的第二步，即形成重组DNA分子。(2)CHS基因为目的
41、基因，其获取方法有从基因文库中获取、化学方法合成或PCR扩增。(3)质粒的化学本质是DNA，切开质粒的酶是限制性核酸内切酶；由于限制性核酸内切酶能识别特定的核苷酸序列并在特定的切点上切割DNA分子，所以它能在质粒特定的部位切割。(4)过程为植物的组织培养过程，分别是脱分化、再分化；由于植物细胞具有全能性，所以苦荞细胞能培养成植株。(5)植物细胞用纤维素酶和果胶酶处理，去除细胞壁，获得原生质体；制备原生质体时，酶混合液中含有适宜浓度的甘露醇，有利于维持渗透压；将目的基因导入到原生质体，经培养形成愈伤组织，再通过液体悬浮培养得到分散的胚性细胞，发育成胚状体，生长发育后获得该转基因植株。(6)愈伤组
42、织继代次数过多会发生遗传变异、激素平衡的改变、对外源激素敏感性的改变，使得愈伤组织丧失细胞全能性的表达能力。7(2017台州模拟)请回答杂交瘤技术和单克隆抗体制备的有关问题：(1)杂交瘤技术制备单克隆抗体时，利用一定的物质，如生物诱导剂_作介导，使经免疫的小鼠B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出融合的细胞再进行细胞的_培养，获得纯系细胞，同时还要进行_检验，以保证获得的是所需的特定杂交瘤细胞。(2)获得杂交瘤细胞后，在体外培养时需要特别加入的天然成分是_。(3)有关杂交瘤细胞体外培养的叙述，正确的是_。A用固体培养基培养B用滋养层细胞支持生长C能进行传代培养D需要对细胞进行研磨破碎获得产物(4)现在欲利用基因工程技术生产单克隆抗体，科研小组将与抗体形成有关的关键基因通过噬菌体导入到受体细胞，该技术的核心步骤是_，噬菌体是这些关键基因的_。答案(1)灭活的(仙台)病毒克隆化抗体(2)动物血清(3)C(4)形成重组DNA分子载体解析(1)杂交瘤技术制备单克隆抗体时，利用一定的物