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1、 DNA 重组技术的基本工具 DNA 重组技术的基本工具 课前预习学案课前预习学案 一、预习目标 简述 DNA 重组技术所需的三种基本工具。 二、预习内容 1、基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过_和_等技 术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由 于基因工程是在_水平上进行设计和施工的，因此又叫做_。 2、培育转基因抗虫棉的操作过程至少需要三种工具，即_的“手术刀” 、 _的 “缝合针” 、 将体外重组好的 DNA 导入受体细胞的 “_” 。 3、切割 DNA 的工具是_，又称_。这类酶主要是从_中分离纯 化而来的。 它们能够_， 并且使
2、每一条链中特定 部位的_的_断开。DNA 分子经过限制酶切割产生的 DNA 片段 末端通常有两种形式_和_。 4、将切割下来的 DNA 片段拼接成新的 DNA 分子，是靠_来完成的。根据酶的来 源不同， 可以将这些酶分为两类 ： 一类是从_中分离得到的， 称为EcoliDNA 连接酶 ； 另一类是从 T4噬菌体中分离出来的，称为_。这两类酶都可以恢复被限制酶切 开了的_。 5、质粒是一种裸露的、_、独立于细菌染色体（即拟核 DNA）之外，并具有 _的_分子。它有一个至多个_，供外源 DNA 片段插入其中。携带外源 DNA 的质粒进入受体细胞后，停留在细胞中进行_，或者整 合到染色体 DNA 上
3、， 随染色体 DNA_。 它还有特殊的_， 如抗四环素、 氨苄青霉素等标记基因， 供重组 DNA 的_。 在基因工程中所使用的运载体除质粒外， 还有_、_等。 三、提出疑惑 同学们，通过你的自主学习，你还有哪些疑惑，请把它填在下面的表格中 疑惑点疑惑内容 课内探究学案课内探究学案 一、学习目标及重难点 1、简述 DNA 重组技术所需的三种基本工具。 2、认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。 学习重点：DNA 重组技术所需的三种基本工具的作用。 学习难点：基因工程载体需要具备的条件。 二、学习过程 1、基因工程的概念 回答：什么是基因工程？ 2、科技探索之路（基因工程是如何发展起来
4、的？阅读课本 P23 页） 思考并回答： （1）基因工程是在哪些学科的基础上发展起来的？ （2）哪些基础理论的突破催生了基因工程？ （3）哪些技术发明促进了基因工程的实施？ （4）你觉得，基因工程的诞生和发展能否离不开理论研究和技术创新？ 3、限制性核酸内切酶“分子手术刀” 思考并回答： （1）从噬菌体侵染细菌的实验来看，细菌等单细胞原核生物容易受到自然界外源 DNA 的入侵，那么这类原核生物之所以长期进化而不绝灭，有什么保护机制？由此可知，限制酶 可以从哪些生物中分离出来？ （2）限制酶是如何切割 DNA 分子的？ （3）参考课本 P4 图 12，指出限制酶能破坏那个磷酸二酯键。 （4）以
5、EcoRI 为例，画出限制酶切割后形成的末端。 4、DNA 连接酶“分子缝合针” 思考并回答： （1）DNA 连接酶是怎么分类的？ （2）DNA 连接酶与 DNA 聚合酶是一回事儿吗？有哪些区别？ （3）EcoliDNA 连接酶和 T4DNA 连接酶作用效果一样大吗？为什么？ 5、基因进入受体细胞的载体“分子运输车” 思考并回答： （1）载体的作用是什么？为什么需要载体？把单独的 DNA 片段导入受体细胞不行 吗？ （2）我们选用从霍乱弧菌中分离出来的质粒做载体，可以吗？为什么？ （3）我们能不能用肉眼直接观察到载体进入受体细胞？那如何鉴定呢？ （4）如果载体上没有限制酶切割位点，能否把目的基
6、因运输进入受体细胞？ 6、活动：模拟操作重组 DNA 分子 （分组进行；完成后小组之间进行交流） 三、反思总结 工具名 称 种类作用 限制酶 DNA 连接酶 载体 四、当堂检测 1、下图是基因工程主要技术环节的一个基本步骤，这一步需用到的工具是 （ ） ADNA 连接酶和解旋酶 BDNA 聚合酶和限制性核酸内切酶 C限制性核酸内切酶和 DNA 连接酶 DDNA 聚合酶和 RNA 聚合酶 2、依右图有关基因工程的工具酶功能的叙述，不正确的是 （ ） A.切断 a 处的酶为限制性核酸内切酶 B.连接 a 处的酶为 DNA 连接酶 C.切断 b 处的酶为解旋酶 D.切断 b 处的酶为限制性核酸内切酶
7、 3、以下说法正确的是 （ ） A所有的限制酶只能识别同一种特定的核苷酸序列 B质粒是基因工程中惟一的载体 C载体必备的条件之一是：具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D基因治疗主要是对有缺陷的细胞进行修复 4、不属于质粒被选为基因运载体的理由是 （ ） A能复制 B有多个限制酶切点 C具有标记基因 D它是环状 DNA 5、科学家选用的细菌质粒往往带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因的主要作用是 （ ） A提高受体细胞在自然环境中的耐热性 B有利于检测目的基因否导入受体细胞 C增加质粒分子的相对分子质量 D便于与外源基因连接 课后练习与提高课后练习与提高 1、限制酶是一种核酸切割酶，可
8、辨识并切割 DNA 分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四 种限制酶BamHI，EcoRI，Hind以及Bgl的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切 割部位， 其中哪两种限制酶所切割出来的 DNA 片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序 列为何？ （ ） A. BamHI 和EcoRI；末端互补序列AATT B. BamHI 和Hind；末端互补序列GATC C. EcoRI 和Hind；末端互补序列AATT D. BamHI 和BglII；末端互补序列GATC 2、 在基因工程中， 把选出的目的基因 （共 1000 个脱氧核苷酸对， 其中腺嘌呤脱氧核苷酸 460 个） ，放入 DNA 扩增
9、仪中扩增 4 代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是 （ ） A540 个 B7560 个 C8100 个 D17280 个 3、基因工程是 DNA 分子水平的操作，下列有关基因工程的叙述中，错误的是 ( ) A、限制酶只用于切割获取目的基因 B、载体与目的基因必须用同一种限制酶处理 C、基因工程所用的工具酶是限制酶，DNA 连接酶 D、带有目的基因的载体是否进入受体细胞需检测 4、下列关于DNA 连接酶的叙述中，正确的是 （ ） A. DNA 连接酶连接的是两条链碱基对之间的氢键 B. DNA 连接酶连接的是黏性末端两条链主链上的磷酸和脱氧核糖 C. DNA 连接酶连接的是黏性末
10、端两条链主链上的磷酸和核糖 D. 同一种 DNA 连接酶可以切出不同的黏性末端 5、 与 “ 限 制 性 内 切 酶 ” 作 用 部 位 完 全 相 同 的 酶 是 ： （ ） A反转录酶 BRNA 聚合酶 CDNA 连接酶 D解旋酶 6、下列有关质粒的叙述，正确的是 （ ） A质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 B质粒是细菌细胞质中能自主复制的小型环状 DNA 分子 C质粒只有在侵入宿主细胞后才能在宿主细胞内复制 D细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行的 7、关于右图DNA 分子片段的说法正确的是 （ ） A限制性内切酶可作用于部位，解旋酶作用于部位 B处的碱基缺失导致染色
11、体结构的变异 C把此 DNA 放在含 15N 的培养液中复 G C A TA T G C A TA T 15N 14N 制 2 代，子代中含 15N 的 DNA 占 3/4 D该 DNA 的特异性表现在碱基种类和（A+T）/（G+C）的比例上 8、下列有关基因工程的叙述，正确的是： （ ） ADNA 连接酶的作用是将两个黏性末端的碱基连接起来 B目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变 C目的基因与运载体结合的过程发生在细胞外 D常使用的运载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等 9、 限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段 ： (1) CTGCA (2) AC (3) GC G TG CG （4）G (5) G (6) GC CTTAA ACGTC CG (7) GT (8)AATTC CA G 请用 DNA 连接酶将它们连接起来: _和_能连接成_; _和_能连接成_; _和_能连接成_; _和_能连接成_。 10、下图是利用基因工程办法生产人白细胞干扰素的基本过程图，据图回答： （1）过程需要_酶的参与。 （2）物质是从大肠杆菌分离出的_。其化学本质是_， 它必须能在宿主细胞中_。 (3)过程表明目的基因_ _。