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1、单元过关检测(十)单元过关检测(十) (建议用时：45 分钟) 1(2019安徽合肥九中测试)由腊梅凝集素基因控制合成的某种蛋白质能与蚜虫肠道 黏膜上的受体结合， 从而抑制蚜虫吸收营养物质。 通过基因工程将腊梅凝集素基因转入烟草， 可增强其抗蚜虫的能力。请回答下列问题： (1)在逆转录酶的作用下， 能以腊梅凝集素基因产生的 mRNA 作为模板按照_原则 获得 cDNA 片段， 以获取腊梅凝集素基因片段。 为使腊梅凝集素基因在烟草细胞中高效表达， 需要把目的基因片段插入表达载体的_和_之间。 (2)将表达载体导入烟草细胞常用的方法是_，在该过程中需添加酚类物质， 目的是_。 将腊梅凝集素基因转入
2、烟草细胞内并成功实现表达的过程， 在基 因工程中称为_。 (3)将转基因烟草幼苗与非转基因烟草幼苗隔区种植，并接种等量的蚜虫，一定时间后 用_法统计蚜虫的种群密度， 若_， 则说明转基 因烟草具有抗蚜虫能力。 解析 ： (1)在逆转录酶的作用下，以腊梅凝集素基因产生的 mRNA 作为模板，按照碱基互 补配对原则获得 cDNA 片段，进而获取腊梅凝集素基因片段。为使腊梅凝集素基因在烟草细 胞中高效表达，需要把目的基因片段插入表达载体的启动子和终止子之间。(2)将表达载体 导入烟草细胞常用的方法是农杆菌转化法， 在该过程中需添加酚类物质， 目的是吸引农杆菌 感染烟草细胞(因为酚类化合物能够吸引农杆
3、菌向其移动)。 将腊梅凝集素基因转入烟草细胞 内并成功实现表达的过程，在基因工程中称为转化。(3)蚜虫的活动能力极弱，可采用样方 法调查其种群密度。将转基因烟草幼苗与非转基因烟草幼苗隔区种植，并接种等量的蚜虫， 一定时间后统计蚜虫的种群密度， 若转基因烟草幼苗区内的蚜虫密度低于非转基因烟草幼苗 区，则说明转基因烟草具有抗蚜虫能力。 答案：(1)碱基互补配对 启动子 终止子 (2)农杆菌转化法 吸引农杆菌感染烟草细胞 转化 (3)样方 转基因烟草幼苗区内的蚜虫密度低于非转基因烟草幼苗区 2(2019北京昌平三中期中)为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶 D 基因与 位于叶绿体膜上的转运肽基因
4、相连， 导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。 回答下列问题 ： (1)酶 D 基因和转运肽基因所含的三种限制酶(Cla 、Sac 、Xba )的切点如图甲所 示，现为获得融合基因，研究人员采用 PCR 法扩增酶 D 基因，首先要依据基因的_设 计引物， 同时从拟南芥基因文库中获取转运肽基因， 再用_和_酶处理两个基 因后，即可得到_端与_端(填图中字母)相连的融合基因。 (2)将上述融合基因插入图乙所示 Ti 质粒的 TDNA 中，构建_并导入农杆菌中。 将获得的农杆菌接种在含四环素的培养基上， 其目的是_， 再利用 液体培养基振荡培养，可以得到用于转化的侵染液。 (3)剪 取 油 菜 的 叶
5、 片 放 入 侵 染 液 中 一 段 时 间 ， 此 过 程 的 目 的 是 _， 进 一 步 筛 选 后 获 得 转 基 因 油 菜 细 胞 ， 该 细 胞 通 过 _技术，可培育成转基因油菜植株。 解析：(1)研究人员依据基因的碱基序列设计引物，采用 PCR 法扩增酶 D 基因，从拟南 芥基因文库中获取转运肽基因。 在上述引物设计时， 分别在引物中加入如图甲所示酶的识别 序列， 这样可以用Cla限制酶和 DNA 连接酶处理两个基因后， 得到 A、 D 端相连的融合基因。 (2)将上述融合基因插入图乙所示 Ti 质粒的 TDNA 中， 构建表达载体即重组质粒并导入农杆 菌中。将获得的农杆菌接
6、种在含四环素的固体平板上培养得到含融合基因的农杆菌。(3)剪 取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细 胞；将转基因植物细胞培养成转基因植株需要采用植物组织培养技术。 答案：(1)碱基序列 Cla DNA 连接 A D (2)基因表达载体(或“重组质粒”) 得到含融合基因的农杆菌 (3)利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞 植物组织培养 3(2019山东省实验中学一模)某质粒上有Sal、Hind 、BamH 三种限制酶切割 位点， 同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。 利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过 程如图所示，请回答下列问题： (1)抗盐基因是否在烟
7、草细胞中稳定遗传的关键是_。 (2)在构建重组质粒时， 应选用_和_两种酶对目的基因和质粒进行切割， 以保证重组 DNA 序列的唯一性。 (3)将目的基因导入植物细胞时采用最多的方法是农杆菌转化法。含有目的基因的农杆 菌可根据标记基因进行筛选。 若农杆菌在含有氨苄青霉素和四环素的培养基上都可以生长繁 殖 ， 农 杆 菌 中 是 否 已 含 有 目 的 基 因 ？ _(填 “是 ”或 “否 ”)。 为 什 么 ？ _。 (4)愈伤组织经_形成完整植株，这一过程需要再转接到_培养基上进行 培养，该过程的实质是_ _。 解析：(1)抗盐基因是否在烟草细胞中稳定遗传的关键是抗盐基因(目的基因)是否插入
8、 到烟草的染色体 DNA 上。 (2)只用Sal酶切割含有目的基因的 DNA 与质粒，形成相同的黏性末端，容易发生自 身连接和反向接入；BamH 会破坏目的基因；则在构建重组质粒时，应选用Sal 、Hind 两种酶对质粒和含抗盐基因的 DNA 进行切割， 以保证重组 DNA 序列的唯一性。 (3)选用Sal 、Hind 两种酶对质粒进行切割时，形成的重组质粒中含抗氨苄青霉素基因而抗四环素 基因被破坏，故农杆菌中没有含有目的基因，为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养 基中加入氨苄青霉素。(4)愈伤组织经再分化，形成完整植株，这一过程需要再转接到分化 培养基上进行培养，细胞分化的实质是选择性表
9、达。 答案：(1)抗盐基因(目的基因)是否插入到烟草的染色体 DNA 上 (2)Hind Sal (3)否 含有目的基因的质粒抗四环素的基因被破坏 (4)再分化 分化 基因的选择性表达 4(2019江西上饶高三期末)下列是利用生物技术制备抗体的两个途径模式简图。请 据图回答下列问题： (1)过程至所获取的抗体 1 称为_，其中过程是指细胞工程中的_ 技术。 (2)过程需要_酶，过程需要的工具酶为_。 (3)处需要筛选，其培养基称为_(填“选择培养基”或“鉴别培养基”)。结 构甲的组成必须包括启动子_及目的基因等(写两项)。 (4)如果想用棉花产生该种抗体，则过程的受体细胞通常选用_菌，经过筛选
10、 后再侵染棉花体细胞，转化成功后通过_技术获得能产抗体的转基因棉花植株。 解析：(1)过程至所获取的抗体 1 称为单克隆抗体，其中过程是指细胞工程中的 细胞融合(或 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合)技术。 (2)是由 mRNA 形成 DNA 的过程， 表示逆 转录， 需要逆转录酶 ； 过程为基因表达载体的构建， 需要的工具酶为限制酶和 DNA 连接酶。 (3)过程表示杂交瘤细胞的培养，需要筛选，其培养基称为选择培养基。结构甲表示基因 表达载体，其组成必须包括启动子、终止子、标记基因及目的基因等。(4)如果想用棉花生 产该种抗体， 则导入受体细胞过程中所用的受体细胞通常选用土壤农杆菌， 经过筛选后
11、再 侵染棉花体细胞，转化成功后通过植物组织培养技术，即脱分化和再分化过程，获得能产抗 体的转基因棉花植株。 答案：(1)单克隆抗体 细胞融合 (2)逆转录 限制酶和 DNA 连接酶 (3)选择培养基 终止子、标记基因 (4)土壤农杆 植物组织培养 5 (2019河南信阳高三摸底)如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况， 其中供体 1 是良种荷斯坦高产奶牛，供体 2 是黄牛。据图回答下列问题： (1)应用 1 为获得克隆牛的过程，从活体牛的卵巢中吸取的卵母细胞需要在体外培养到 _期，并通过_去除卵母细胞中的细胞核。最终克隆动物的遗传物质来自 _。 (2)应用 2 为获得试管牛的过程，在_前，需要
12、对采集的优良公牛的精子用 _法进行获能处理。 胚胎移植是胚胎工程的最后一道工序， 胚胎能够在受体内存活的 生理基础是_。 (3)应用 3 中的细胞 C 取自牛胎儿的_。应用 4 在获得二分胚和的同时，需 要取囊胚的_细胞做 DNA 分析进行性别鉴定。 解析 ： 应用 1： 供体 1 提供细胞核，供体 2 提供细胞质，经过核移植技术形成重组细胞， 并发育形成早期胚胎，再将胚胎移植到受体子宫发育成小牛，称为克隆牛。应用 2：优良公 牛和供体 1 配种形成受精卵，并发育成早期胚胎，再将胚胎移植到受体子宫发育成小牛，属 有性生殖。应用 3：从早期胚胎和原始性腺中获取胚胎干细胞，并进行体外干细胞培养。应
13、 用 4：采用了胚胎分割技术。(1)从活体牛的卵巢中吸取的卵母细胞需要在体外培养到减数 第二次分裂中期 ； 核移植时，需要采用显微操作去除卵母细胞中的细胞核 ； 由以上分析可知， 应用 1 中获得的小牛为克隆牛，其细胞核遗传物质来源于供体 1，细胞质遗传物质来源于供 体 2，因此其遗传物质来源于供体 1 和供体 2。(2)在受精前，需要对精子进行获能处理，对 于牛、羊等家畜的精子常采用化学诱导法，即将精子放在一定浓度的肝素或钙离子载体 A23187 溶液中，受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应，这是胚胎能够在受体内 存活的生理基础。(3)胚胎干细胞来自早期胚胎或原始性腺，因此应用 3 中的细胞 C 取自胎 儿的原始性腺，取囊胚的滋养层细胞可做 DNA 分析进行性别鉴定。 答案：(1)减数第二次分裂中(M中) 显微操作 供体 1 和供体 2 (2)体外受精 化学诱导 受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应 (3)原始性腺 滋养层