【精选】GB18466-2005《医疗机构水污染物排放标准》.pdf

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1、本电子版内容如与中国环境出版社出版的标准文本有出入，以 中国环境出版社出版的文本为准。 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB 18466-2005 医疗机构水污染物排放标准 Discharge standard of water pollutants for medical organization 200507 27 发布20060101 实施 环 境保护总局 国 家 发布 目录 前言 .II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 技术内容.1 4.1 污水排放要求1 4.2 废气排放要求4 4.3 污泥控制与处置4 5 处理工艺与消毒要求.4 6 取样与

2、监测.5 6.1 污水取样与监测5 6.2 大气取样与监测7 6.3 污泥取样与监测7 7 标准的实施与监督.7 附录A .8 附录B .15 附录C .19 附录D .21 附录E23 附录F25 I 前言 为贯彻中华人民共和国环境保护法、中华人民共和国水污染防治法、中华人民共和 国 海洋环境保护法、中华人民共和国大气污染防治法、中华人民共和国传染病防治法，加强 对医疗机构污水、污水处理站废气、污泥排放的控制和管理，预防和控制传染病的发生和流行， 保障人体健康，维护良好的生态环境，制定本标准。 本标准规定了医疗机构污水及污水处理站产生的废气和污泥的污染物控制项目及其排放限 值、处理工艺与消毒

3、要求、取样与监测和标准的实施与监督等。 本标准自实施之日起，代替GB8978-1996污水综合排放标准中有关医疗机构水污染物 排 放标准部分，并取代GB18466-2001医疗机构污水排放要求。新、扩、改医疗机构自本标准实 施之日起按本标准实施管理，现有医疗机构在2007 年 12 月 31 日前达到本标准要求。 本标准的附录A、附录B、附录C、附录D、附录E 和附录F 为规范性附录。 本标准为首次发布。 本标准由国家环境保护总局科技标准司提出并归口。 本标准委托北京市环境保护科学研究院和中国疾病预防控制中心起草。 本标准由国家环境保护总局2005 年 07 月 27 日批准。 本标准由国家环

4、境保护总局负责解释。 II 1 范围 医疗机构水污染物排放标准 本标准规定了医疗机构污水、污水处理站产生的废气、污泥的污染物控制项目及其排 放和控制限值、处理工艺和消毒要求、取样与监测和标准的实施与监督。 本标准适用于医疗机构污水、污水处理站产生污泥及废气排放的控制，医疗机构建设 项目的环境影响评价、环境保护设施设计、竣工验收及验收后的排放管理。当医疗机构的办 公区、非医疗生活区等污水与病区污水合流收集时，其综合污水排放均执行本标准。建有分 流污水收集系统的医疗机构，其非病区生活区污水排放执行GB8978 的相关规定。 2 规范性引用文件 下列标准和本标准表5、表6 所列分析方法标准及规范所含

5、条文在本标准中被引用即构 成为本标准的条文，与本标准同效。当上述标准和规范被修订时，应使用其最新版本。 GB8978 污水综合排放标准 GB3838 地表水环境质量标准 GB3097 海水水质标准 GB16297 大气污染物综合排放标准 HJ/T55 大气污染物无组织排放监测技术导则 HJ/T91 地表水和污水检测技术规范 3 术语和定义 本标准采用下列定义。 3.1 医疗机构medical organization 指从事疾病诊断、治疗活动的医院、卫生院、疗养院、门诊部、诊所、卫生急救站等。 3.2 医疗机构污水medical organization wastewater 指医疗机构门诊、

6、病房、手术室、各类检验室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平间 等处排出的诊疗、生活及粪便污水。当医疗机构其他污水与上述污水混合排出时一律视为医 疗机构污水。 3.3 污泥 sludge 指医疗机构污水处理过程中产生的栅渣、沉淀污泥和化粪池污泥。 3.4 废气 waste gas 指医疗机构污水处理过程中产生的有害气体。 4 技术内容 4.1 污水排放要求 4.1.1 传染病和结核病医疗机构污水排放执行表1 的规定。 4.1.2 县级及县级以上或20 张床位及以上的综合医疗机构和其他医疗机构污水排放执行表2 1 的规定。直接或间接排入地表水体和海域的污水执行排放标准，排入终端已建有正常运行城 镇

7、二级污水处理厂的下水道的污水，执行预处理标准。 4.1.3 县级以下或20 张床位以下的综合医疗机构和其他所有医疗机构污水经消毒处理后方可 排放。 4.1.4 禁止向GB3838I 、II 类水域和III 类水域的饮用水保护区和游泳区，GB3097 一、二类 海域直接排放医疗机构污水。 4.1.5 带传染病房的综合医疗机构，应将传染病房污水与非传染病房污水分开。传染病房的 污水、粪便经过消毒后方可与其他污水合并处理。 4.1.6 采用含氯消毒剂进行消毒的医疗机构污水，若直接排入地表水体和海域，应进行脱氯 处理，使总余氯小于0.5mg/L。 表 1 传染病、结核病医疗机构水污染物排放限值（日均值

8、） 序号 1 2 3 4 5 PH 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 控制项目 粪大肠菌群数（MPN/L） 肠道致病菌 肠道病毒 结核杆菌 化学需氧量（COD） 浓度 （mg/L ） 最高允许排放负荷（g/床位） 生化需氧量（ BOD） 浓度 （mg/L ） 最高允许排放负荷（g/床位） 悬浮物（ SS） 浓度 （mg/L ） 最高允许排放负荷（g/床位） 氨氮（ mg/L）15 动植物油（ mg/L ）5 石油类（ mg/L）5 阴离子表面活性剂（mg/L） 色度（稀释倍数）30 挥发酚（ mg/L）0.5 总氰化物（ mg/L ） 总汞（ m

9、g/L）0.05 总镉（ mg/L）0.1 总铬（ mg/L）1.5 六价铬（ mg/L）0.5 总砷（ mg/L）0.5 标准值 不得检出 不得检出 不得检出 6-9 60 60 20 20 20 20 0.5 2 100 5 21 22 23 24 25 总铅（ mg/L）1.0 总银（ mg/L）0.5 总(Bq/L) 1 总(Bq/L) 10 总余氯 1 ）2（mg/L） （直接排入水体的要求） 0.5 注： 1）采用含氯消毒剂消毒的工艺控制要求为：消毒接触池的接触时间 1.5h， 接触池出口总余氯6.5-10 mg/L。 2）采用其他消毒剂对总余氯不作要求。 表 2 综合医疗机构和其

10、他医疗机构水污染物排放限值（日均值） 序号 1 2 3 4 pH 5 6 7 8 9 10 11 控制项目 粪大肠菌群数（MPN/L） 肠道致病菌 肠道病毒 化学需氧量（ COD） 浓度 （mg/L ） 最高允许排放负荷（g/床位） 生化需氧量（ BOD） 浓度 （mg/L ） 最高允许排放负荷（g/床位） 悬浮物（ SS） 浓度 （mg/L ） 最高允许排放负荷（g/床位） 氨氮（ mg/L ） 动植物油（ mg/L） 石油类（ mg/L） 阴离子表面活性剂（mg/L ） 排放标准 不得检出 不得检出 6-9 60 60 20 20 20 20 预处理标 准 500 6-9 250 250

11、100 100 60 60 - 20 20 5 15 5 - - 5 10 12 色度（稀释倍数） - 30 13 挥发酚（ mg/L） 1.0 0.5 14 总氰化物（ mg/L） 0.5 0.5 15 16 17 18 总汞（ mg/L ） 总镉（ mg/L ） 总铬（ mg/L ） 六价铬（ mg/L） 0.05 0.1 1.5 0.5 0.05 0.1 1.5 0.5 3 19 20 21 22 23 24 总砷（ mg/L ） 总铅（ mg/L ） 总银（ mg/L ） 总(Bq/L) 1 总(Bq/L) 10 总余氯 1 ）2）（mg/L ） 0.5 1.0 0.5 1 10 -

12、0.5 0.5 1.0 0.5 注：1）采用含氯消毒剂消毒的工艺控制要求为： 一级标准：消毒接触池接触时间 1h，接触池出口总余氯3-10 mg/L。 二级标准：消毒接触池接触时间 1h，接触池出口总余氯2-8 mg/L 。 2）采用其他消毒剂对总余氯不作要求。 4.2 废气排放要求 4.2.1 污水处理站排出的废气应进行除臭除味处理，保证污水处理站周边空气中污染物达到 表 3 要求。 4.2.2 传染病和结核病医疗机构应对污水处理站排出的废气进行消毒处理。 表 3 污水处理站周边大气污染物最高允许浓度 序号 1 2 3 4 5 控制项目 氨（ mg/m 3）1.0 硫化氢（ mg/m 3）0

13、.03 臭气浓度（无量纲）10 氯气（ mg/m 3）0.1 甲烷（指处理站内最高体积百分数%） 标准值 1% 4.3 污泥控制与处置 4.3.1 栅渣、化粪池和污水处理站污泥属危险废物，应按危险废物进行处理和处置。 4.3.2 污泥清淘前应进行监测，达到表4 要求。 表 4 医疗机构污泥控制标准 医疗机构类别 粪大肠菌群数 (MPN/g) 肠道致病菌肠道病毒结核杆菌 蛔虫卵死亡率 （%） 传染病医疗机构 结核病医疗机构 综 合 医 疗 机 构 和 其它医疗机构 5 处理工艺与消毒要求 100 100 100 不得检出 - - 不得检出 - - - 不得检出 - 95 95 95 5.1 医疗

14、机构病区和非病区的污水，传染病区和非传染病区的污水应分流，不得将固体传染 性废物、各种化学废液弃置和倾倒排入下水道。 4 5.2 传染病医疗机构和综合医疗机构的传染病房应设专用化粪池，收集经消毒处理后的粪便 排泄物等传染性废物。 5.3 化粪池应按最高日排水量设计，停留时间为24-36h。清掏周期为180-360d。 5.4 医疗机构的各种特殊排水应单独收集并进行处理后，再排入医院污水处理系统。 5.4.1 低放射性废水应经衰变池处理。 5.4.2 洗相室废液应回收银，并对废液进行处理。 5.4.3 口腔科含汞废水应进行除汞处理。 5.4.4 检验室废水应根据使用化学品的性质单独收集，单独处理

15、。 5.4.5 含油废水应设置隔油池处理。 5.5 传染病医疗机构和结核病医疗机构污水处理宜采用二级处理+消毒工艺或深度处理+消毒 工艺。 5.6 综合医疗机构污水排放执行排放标准时，宜采用二级处理+消毒工艺或深度处理+消毒工 艺；执行预处理标准时宜采用一级处理或一级强化处理+消毒工艺。 5.7 消毒剂应根据技术经济分析选用，通常使用的有：二氧化氯、次氯酸钠、液氯、紫外线 和臭氧等。采用含氯消毒剂时按表1、表 2 要求设计。 5.7.1 采用紫外线消毒，污水悬浮物浓度应小于10 mg/L ，照射剂量30-40mJ/cm 2 ,照射接触时 间应大于10s 或由试验确定。 5.7.2 采用臭氧消毒

16、，污水悬浮物浓度应小于20 mg/L ，臭氧用量应大于10mg/L, 接触时间应 大于 12min 或由试验确定。 6 取样与监测 6.1 污水取样与监测 6.1.1 应按规定设置科室处理设施排出口和单位污水外排口，并设置排放口标志。 6.1.2 表 1 第 16-22 项，表2 第 15-21 项在科室处理设施排出口取样，总 、总 在衰变池出 口取样监测。其它污染物的采样点一律设在排污单位的外排口。 6.1.2 医疗机构污水外排口处应设污水计量装置，并宜设污水比例采样器和在线监测设备。 6.1.3 监测频率 6.1.3.1 粪大肠菌群数每月监测不得少于1 次。采用含氯消毒剂消毒时，接触池出口

17、总余氯每 日监测不得少于2 次（采用间歇式消毒处理的，每次排放前监测）。 6.1.3.2 肠道致病菌主要监测沙门氏菌、志贺氏菌。沙门氏菌的监测，每季度不少于1 次；志 贺氏菌的监测，每年不少于2 次。其他致病菌和肠道病毒按6.1.3.3 规定进行监测。结核病 医疗机构根据需要监测结核杆菌。 6.1.3.3 收治了传染病病人的医院应加强对肠道致病菌和肠道病毒的监测。同时收治的感染上 同一种肠道致病菌或肠道病毒的甲类传染病病人数超过5 人、或乙类传染病病人数超过10 人、或丙类传染病病人数超过20 人时，应及时监测该种传染病病原体。 6.1.3.4 理化指标监测频率：pH 每日监测不少于2 次，C

18、OD 和 SS 每周监测1 次，其他污染物 每季度监测不少于1 次。 5 6.1.3.5 采样频率：每4 小时采样1 次，一日至少采样3 次，测定结果以日均值计。 6.1.4 监督性监测按HJ/T91 执行。 6.1.5 监测分析方法按表5 和附录。 6.1.6 污染物单位排放负荷计算见附录F。 表 5 水污染物监测分析方法 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 控制项目 粪大肠菌群数 沙门氏菌 志贺氏菌 结核杆菌 总余氯 化学需氧量 (COD) 生化需氧量 (BOD) 悬浮物 (SS) 氨氮 测定方法 多管发酵法 N,N-二乙基 -1,4-苯二胺分光光度法 N,N-二乙基 -1,4-苯二

19、胺滴定法 重铬酸盐法 稀释与接种法 重量法 蒸馏和滴定法 测定下限（ mg/L ）方法来源 附录A 附录B 附录C 附录E GB11898 GB11897 GB11914 30 GB7488 2 GB11901 0.2 GB7478 GB7479 10 11 动植物油 石油类 比色法 红外光度法 红外光度法 0.05 GB/T164880.1 GB/T164880.1 12 阴离子表面活性剂亚甲蓝分光光度法GB74940.05 13 色 度稀释倍数法GB11903 14 pH 值 15 总 汞 玻璃电极法 冷吸收分光光度法 双硫腙分光光度法 0.0001 0.002 GB6920 GB7468

20、 GB7469 16 挥发酚蒸馏后4-氨基安替比林分光光度法 硝酸银滴定法 0.002 GB7490 0.25 GB7486 17 18 总氰化物 总 镉 异烟酸 -吡唑啉酮比色法 吡啶 -巴比妥酸比色法 原子吸收分光光度法（螯合萃取法） 双硫腙分光光度法 0.004 0.002 0.001 0.001 GB7486 GB7486 GB7475 GB7471 19 20 21 22 23 24 25 总 铬 六价铬 总 砷 总 铅 总 银 总 总 高锰酸钾氧化二苯碳酰二肼分光光度法 二苯碳酰二肼分光光度法 二乙基二硫代氨基甲酸银分光光度法 原子吸收分光光度法（螯合萃取法） 双硫腙分光光度法 火

21、焰原子吸收分光光度法 镉试剂2B 分光光度法 厚源法 蒸发法 0.004 GB7466 0.004 0.007 GB7485 0.01 GB7475 0.01 GB7470 0.03 GB119079 0.01 GB11908 EJ/T10750.05Bq/L EJ/T900 6 6.2 大气取样与监测 6.2.1 污水处理站大气监测点的布置方法与采样方法按GB16297 中附录C 和 HJ/T55 的有关规 定执行。 6.2.2 采样频率，每2h 采样一次，共采集4 次，取其最大测定值。每季度监测一次。 6.2.3 监测分析方法按表6。 表 6 大气污染物监测分析方法 序号 1 2 3 4

22、5 控制项目 氨 硫化氢 臭气浓度（无量纲） 氯气 甲烷 测定方法 次氯酸钠 -水杨酸分光光度法 气相色谱法 三点比较式臭袋法 甲基橙分光光度法 气相色谱法 方法来源 GB/T14679 GB/T14678 GB/T14675 HJ/T30 CJ/3037 6.3 污泥取样与监测 6.3.1 取样方法，采用多点取样，样品应有代表性，样品重量不小于1kg。清掏前监测。 6.3.2 监测分析方法见附录A、附录B、附录C、附录D 和附录E。 7 标准的实施与监督 7.1 本标准由县级以上人民政府环境保护行政主管部门负责监督实施。 7.2 省、自治区、直辖市人民政府对执行本标准不能达到本地区环境功能要

23、求时，可以根据 总量控制要求和环境影响评价结果制定严于本标准的地方污染物排放标准。 7 A1 仪器和设备 附录A （规范性附录） 医疗机构污水和污泥中粪大肠菌群的检验方法 A1.1 高压蒸汽灭菌器。 A1.2 干燥灭菌箱。 A1.3 培养箱： 37。 A1.4 恒温水浴箱。 A1.5 电炉。 A1.6 天平。 A1.7 灭菌平皿。 A1.8 灭菌刻度吸管。 A1.9 酒精灯 A2 培养基和试剂 A2.1 乳糖胆盐培养液 A2.1.1 成分 蛋白胨20g 猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g 乳糖5g 0.4溴甲酚紫水溶液2.5mL 蒸馏水1000mL A2.1.2 制法 将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于10

24、00mL 蒸馏水中，调整pH 到 7.4，加入指示剂，充分 混匀，分装于内有倒管的试管中。115下灭菌20min。贮存于冷暗处备用。 A2.2 三倍浓度乳糖胆盐培养液 A2.2.1 成分 蛋白胨60g 猪胆盐（或牛、羊胆盐）15g 乳糖15g 0.4溴甲酚紫水溶液7.5mL 蒸馏水1000mL A2.2.2 制法 制法同附录A2.1.2。 A2.3 伊红美兰培养基（EMB 培养基） A2.3.1 成分 蛋白胨10g 乳糖10g 磷酸氢二钾2g 琼脂20g 2伊红水溶液20mL 0.5美蓝水溶液13mL 8 蒸馏水1000mL A2.3.2 制法 将琼脂加到900mL 蒸馏水中，加热溶解，然后加

25、入磷酸氢二钾和蛋白胨，混匀使溶解， 再加入蒸馏水补足至1000mL，调整pH 至 7.27.4。趁热用脱脂棉和砂布过滤，再加入乳糖， 混匀，定量分装于烧瓶内，115灭菌20min。作为储备培养基贮存于冷暗处备用。 临用时，加热融化储备培养基，待冷至60左右，根据烧瓶内培养基的容量，加入一 定量的已灭菌的2伊红水溶液和0.5美蓝水溶液，充分摇匀（防止产生气泡）。倾注平皿 备用。 A2.4 乳糖蛋白胨培养液 A2.4.1 成分 蛋白胨10g 牛肉膏3g 乳糖5g 氯化钠5g 1.6溴甲酚紫乙醇溶液1mL 蒸馏水1000mL A2.4.2 制法 将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于1000mL

26、蒸馏水中，调整pH 到 7.27.4， 加入1.6溴甲酚紫乙醇溶液1mL ，充分混匀，分装于内有倒管的试管中。115下灭菌20min 。 贮存于冷暗处备用。 A2.5 革兰氏染色液 A2.5.1 结晶紫染色液 结晶紫1g 95乙醇溶液20mL 1草酸铵水溶液1000mL 将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵水溶液混合。 A2.5.2 革兰氏碘液 碘1g 碘化钾2g 蒸馏水300mL 将碘与碘化钾混合，加入蒸馏水少许，充分摇匀，待完全溶解，再加入蒸馏水至300mL。 A2.5.3 脱色液 95乙醇。 A2.5.4 沙黄复染液 沙黄1g 95乙醇2g 蒸馏水90mL 将沙黄溶于95乙醇中，然后用蒸馏水

27、稀释。 A2.6 染色法 染色的基本步骤为：1）涂片：在载玻片上滴加一滴生理盐水，用灭菌的接种环取菌落 少许，与生理盐水混匀，涂布成薄膜；2）干燥：在室温中使自然干燥；3）固定：将涂片迅 速通过火焰23 次，以载玻片反面接触皮肤，热而不烫为度；4）染色：滴加结晶紫染色液， 染色 1min，水洗； 5）媒染：滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗； 6）脱色：滴加95乙醇 脱色，约30s，水洗； 7）复染：滴加复染液，复染1min，水洗。 9 革兰氏阳性菌染色后呈紫色，革兰氏阴性菌染色后呈红色。 注：亦可用1：10 稀释的石炭酸复红染色液作复染剂，复染时间为10s。 A3 检验程序 检验程序见图A.

28、 样品处理：确定样品接种量 发酵试验：将样品接种于乳糖胆盐培养液 44、培养 24h 平板分离：将产酸发酵管液接种于EMB 37、培养 1824h 鉴定：挑取可疑菌落革兰氏染色、镜检 鉴定：挑取革兰氏阴性无芽孢杆菌接种于乳糖蛋白胨培养液 44、培养 24h 计数：根据产酸产气的阳性管数查MPN表 检验结果报告 图 A 污水、污泥中粪大肠菌群检验程序 A4 操作步骤 A4.1 样品准备 A4.1.1 污水 污水样品应至少取200mL，使用前应充分混匀。 根据预计的污水样品中粪大肠菌群数确定污水样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少 的接种量一般为10mL 、1mL、0.1mL 。粪大肠菌群数较多时接

29、种量为1mL 、0.1mL 、0.01mL 或 0.1mL、0.01mL、0.001mL 等。 接种量少于1mL 时，水样应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量为0.1mL 、0.01mL 时，取稀释比分别为1:10、1:100。其它接种量的稀释比依此类推。 1:10 稀释样品的制作方法为：吸取1mL 水样，注入到盛有9mL 灭菌水的试管中，混匀， 制成 1:10 稀释样品。因此，取1mL1:10 稀释样品，等于取0.1mL 污水样品。其它稀释比的 稀释样品同法制作。 注 1：若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用5硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。 A4.1.2 污泥 污泥样品应至少取200g

30、，使用前应充分混匀。 10 根据预计的污泥样品中粪大肠菌群数量确定污泥样品接种量。粪大肠菌群数量相对较 少的污泥样品接种量一般为0.1g、0.01g、0.001g。粪大肠菌群数量较多时接种量为0.01g、 0.001g、0.0001g 或 0.001g、0.0001g、0.00001g 等。 污泥样品应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量0.1g、0.01g、0.001g 的 稀释样 品制作方法如下：取20g 污泥样品，加入到三角烧瓶中，加灭菌水使成200mL，混匀，制成 1:10 稀释样品。吸取1:10 稀释样品1mL，注入到盛有9mL 灭菌水的试管中，混匀，制成1:100 稀释样品。按同法

31、制成1:1000 稀释样品。接种1mL1:10、1:100、1:1000 稀释样品等于接种 0.1g、0.01g、0.001g 污泥样品。 注 1：若样品为经过氯消毒的污泥，应在采样后立即用5硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。 A4.2 发酵试验 将样品接种于装有乳糖胆盐培养液的试管（内有小倒管）中，44培养24h。样品接种 体积以及管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积根据以下条件确定： 样品为污水时，取三个接种量、每个接种量的样品分别接种于5 个试管内，共需15 个 试管。试管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积应根据接种量确定。若接种量为10mL，吸取10mL 样品接种于装有5mL 三倍浓度乳糖胆盐培养液的试

32、管内；若接种量为1mL 时，吸取1mL 样品 接种于装有10mL 普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内；若接种量少于1mL 时，吸取1mL 稀释 样品接种于装有10mL 普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内。 样品为污泥时，取三个接种量、每个接种量的稀释样品分别接种于3 个试管内，共需9 个试管。 9 个试管中，各装有10mL 乳糖胆盐培养液。各个试管接种稀释样品体积均为1mL。 A4.3 平板分离 大肠杆菌分解乳糖产酸时培养液变色、产气时小倒管内出现气泡。经24h 培养后，将产 酸的试管内培养液分别划线接种于EMB 培养基上。置于37培养箱中，培养1824h。 A4.4 鉴定 挑选可疑粪大肠菌群菌落，进

33、行革兰氏染色和镜检。可疑菌落有：1）深紫黑色，具有 金属光泽的菌落；2）紫黑色，不带或略带金屑光泽的菌落；3）淡紫红色，中心色较深的菌 落。 上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取上述典型菌落13 个接种于 盛有 5mL 乳糖蛋白胨培养液倒管和倒管的试管内，置于44培养箱中培养24h。产酸产气试 管为粪大肠菌群阳性管。 A5 计数 根据证实有粪大肠菌群存在的阳性管数，查表A1 或 A2 可得 100mL 污水或1g 污泥中 粪大肠菌群MPN 值。 由于表A1 和表 A2 是按一定的三个10 倍浓度差接种量设计的（污水接种量为10mL、1mL 和 0.1mL，污泥接种量为0.1g、0

34、.01g 和 0.001g），当采用其他三个10 倍浓度差接种量时， 需要修正表内 MPN 值，具体方法如下： 表内所列污水（污泥）最大接种量增加10 倍时表内MPN 值相应降低10 倍；污水（污泥） 最大接种量减少10 倍时表内 MPN 值相应增加 10 倍。如污水接种量改为1mL、0.1mL 和 0.01mL 时， A1 表内MPN 值相应增加10 倍。其它的三个10 倍浓度差接种量的MPN 值相应类推。 由于A1 表内 MPN 值的单位为每100mL 污水样品中 MPN 值，而污水以 1L 为报告单位，因 此需将查A1 表得到的MPN 值乘上10，换算成1L 污水样品中的MPN 值。 1

35、1 接种 表 A1污水中粪大肠菌群最可能数（MPN）检索表 （污水样品接种量为5 份 10mL 水样， 5 份 1mL 水样和5 份 0.1mL 水样） 阳性管数每阳性管数每阳性管数 接种接种100mL 接种接种接种100mL 接种接种接种 每 100mL 100mL 水样 10mL 水样 0.1mL 水样 水样中 MPN 100mL 水样 10mL 水样 0.1mL 水样 水样中 MPN 100mL 水样 10mL 水样 0.1mL 水样 水样中 MPN 0 0 0 0 2 0 0 5 4 0 0 13 0 0 1 2 2 0 1 7 4 0 1 17 0 0 2 4 2 0 2 9 4 0

36、 2 21 0 0 3 5 2 0 3 12 4 0 3 25 0 0 4 7 2 0 4 14 4 0 4 30 0 0 5 9 2 0 5 16 4 0 5 36 0 1 0 2 2 1 0 7 4 1 0 17 0 1 1 4 2 1 1 9 4 1 1 21 0 1 2 6 2 1 2 12 4 1 2 26 0 1 3 7 2 1 3 14 1 1 3 31 0 1 4 9 2 1 4 17 4 1 4 36 0 1 5 11 2 1 5 19 4 1 5 42 0 2 0 4 2 2 0 9 4 2 0 22 0 2 1 6 2 2 1 12 4 2 1 26 0 2 2 7 2

37、2 2 14 4 2 2 32 0 2 3 9 2 2 3 17 4 2 3 38 0 2 4 11 2 2 4 19 4 2 4 44 0 2 5 13 2 2 5 22 4 2 5 50 0 3 0 6 2 3 0 12 4 3 0 27 0 3 1 7 2 3 1 14 4 3 1 33 0 3 2 9 2 3 2 17 4 3 2 39 0 3 3 11 2 3 3 20 4 3 3 45 0 3 4 13 2 3 4 22 4 3 4 52 0 3 5 15 2 3 5 25 4 3 5 59 0 4 0 8 2 4 0 15 4 4 0 34 0 4 1 9 2 4 1 17 4

38、4 1 40 0 4 2 11 2 4 2 20 4 4 2 47 0 4 3 13 2 4 3 23 4 4 3 54 0 4 4 15 2 4 4 25 4 4 4 62 0 4 5 17 2 4 5 28 4 4 5 69 0 5 0 9 2 5 0 17 4 5 0 41 0 5 1 11 2 5 1 20 4 5 1 48 0 5 2 13 2 5 2 23 4 5 2 56 0 5 3 15 2 5 3 26 4 5 3 64 0 5 4 17 2 5 4 29 4 5 4 72 0 5 5 19 2 5 5 32 4 5 5 81 12 接种 100mL 水样 阳性管数 接种 1

39、0mL 水样 接种 0.1mL 水样 每 100mL 水样中 MPN 接种 100mL 水样 阳性管数 接种 10mL 水样 接种 0.1mL 水样 每 100mL 水样中 MPN 接种 100mL 水样 阳性管数 接种 10mL 水样 接种 0.1mL 水样 每 100mL 水样中 MPN 1 0 0 2 3 0 0 8 5 0 0 23 1 0 1 4 3 0 1 11 5 0 1 31 1 0 2 6 3 0 2 13 5 0 2 43 1 0 3 8 3 0 3 16 5 0 3 58 1 0 4 10 3 0 4 20 5 0 4 76 1 0 5 12 3 0 5 23 5 0 5

40、 95 1 1 0 4 3 1 0 11 5 1 0 33 1 1 1 6 3 1 1 14 5 1 1 46 1 1 2 8 3 1 2 17 5 1 2 63 1 1 3 10 3 1 3 20 5 1 3 84 1 1 4 12 3 1 4 23 5 1 4 110 1 1 5 14 3 1 5 27 5 1 5 130 1 2 0 6 3 2 0 14 5 2 0 49 1 2 1 8 3 2 1 17 5 2 1 70 1 2 2 10 3 2 2 20 5 2 2 94 1 2 3 12 3 2 3 24 5 2 3 120 1 2 4 15 3 2 4 27 5 2 4 150

41、1 2 5 17 3 2 5 31 5 2 5 180 1 3 0 8 3 3 0 17 5 3 0 79 1 3 1 10 3 3 1 21 5 3 1 110 1 3 2 12 3 3 2 24 5 3 2 140 1 3 3 15 3 3 3 28 5 3 3 180 1 3 4 17 3 3 4 32 5 3 4 210 1 3 5 19 3 3 5 36 5 3 5 250 1 4 0 11 3 4 0 21 5 4 0 130 1 4 1 13 3 4 1 24 5 4 1 170 1 4 2 15 3 4 2 28 5 4 2 220 1 4 3 17 3 4 3 32 5 4

42、3 280 1 4 4 19 3 4 4 36 5 4 4 350 1 4 5 22 3 4 5 40 5 4 5 430 1 5 0 13 3 5 0 25 5 5 0 240 1 5 1 15 3 5 1 29 5 5 1 350 1 5 2 17 3 5 2 32 5 5 2 540 1 5 3 19 3 5 3 37 5 5 3 920 1 5 4 22 3 5 4 41 5 5 4 1600 1 5 5 24 3 5 5 45 5 5 5 1600 13 表 A2 污泥中粪大肠菌群最可能数（MPN）检索表 （污泥样品接种量为3 份 0.1g 泥样， 3 份 0.01g 泥样和3 份

43、0.001g 泥样） 接种 0.1 g 污样 管 阳性管 数 接种 0.01 g 污样 管 接种 0.001 g 污样 管 每 1g 泥样 中 MPN 接种 0.1 g 污样 管 阳性管 数 接种 0.01 g 污样 管 接种 0.001 g 污样 管 每 1g 泥样 中 MPN 接种 0.1 g 污样 管 阳性管 数 接种 0.01 g 污样 管 接种 0.001 g 污样 管 每 1g 泥样 中 MPN 0 0 0 1100 14 B1 仪器和设备 B1.1 高压蒸汽灭菌器。 B1.2 干燥灭菌箱。 B1.3 培养箱。 B1.4 恒温水浴箱。 B1.5 电炉。 B1.6 天平。 B1.7

44、灭菌平皿。 B1.8 灭菌刻度吸管。 B1.9 酒精灯。 B2 培养基和试剂 附录B (规范性附录 ) 医疗机构污水和污泥中沙门氏菌的检验 B2.1 亚硒酸盐增菌液(SF 增菌液 ) B2.1.1 成分 胰蛋白胨 (或多价胨 ) 10g 磷酸氢二钠 (Na2HPO3) 16g 磷酸二氢钠 (NaH 2PO3) 2.5g 乳糖4g 亚硒酸氢钠4g 蒸馏水1000mL B2.1.2 制法 除亚硒酸氢钠外，将以上各成分放入蒸馏水中，加热溶化。再加入亚硒酸氢钠，待完 全溶解后，调整pH 到 7.07.1，分装于三角烧杯内。121下灭菌15min 备用。 B2.2 二倍浓度亚硒酸盐增菌液(二倍浓度SF

45、增菌液 ) B2.2.1 成分 除蒸馏水改为500mL 外，其它成分同附录B2.1.1。 B2.2.2 制法 制法同附录B2.1.2。 B2.3 SS 培养基 B2.3.1 基础培养基 B2.3.1.1 成分 牛肉膏5g 示胨5g 三号胆盐3.5g 琼脂17g 蒸馏水1000mL B2.3.1.2 制法 将牛肉膏、示胨和胆盐溶解于400mL 蒸馏水中。将琼脂加到600mL 蒸馏水中，煮沸使 其溶解。再将二者混合，121下灭菌15min，保存备用。 B2.3.2 完成培养基 B2.3.2.1 成分 基础培养基1000mL 15 乳糖10g 柠檬酸钠8.5g 硫代硫酸钠8.5g 10%柠檬酸铁溶液

46、 10mL 1%中性红溶液2.5mL 0.1%煌绿溶液0.33mL B2.3.2.2 制法 加热溶化基础培养基，按比例加入除中性红和煌绿溶液以外的各成分，充分混合均匀， 调整 pH 到 7.0，加入中性红和煌绿溶液，倾注平板。 注：制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱内于18h 内使用。煌绿溶液配好后应在10 天以内使用。 B2.4 亚硫酸铋琼脂培养基（BS 培养基） B2.4.1 基础培养基 B2.4.1.1 成分 蛋白胨10g 牛肉膏5g 氯化钠5g 琼脂20g 蒸馏水1000mL B2.4.1.2 制法 加热溶解各成分，按每份100mL 的量分装于250mL 三角瓶中， 121下灭菌20

47、min 备用。 B2.4.2 亚硫酸铋贮备液 B2.4.2.1 成分 柠檬酸铋铵2g 亚硫酸钠20g 磷酸氯二钠10g 葡萄糖10g 蒸馏水200mL B2.4.2.2 制法 将柠檬酸铋铵溶解于50mL 沸水中，同时将压硫酸钠溶解于100mL 沸水中，混合两液并 煮沸3min，趁热加入磷酸氯二钠搅拌至溶解。冷却后，加入剩余的50mL 葡萄糖水溶液，贮 存于冰箱中。 B2.4.3 柠檬酸铁煌绿贮备液 B2.4.3.1 成分 柠檬酸铁2g 煌绿（ 1水溶液）25mL 蒸馏水200mL B2.4.3.2 制法 将上述成分溶解于水中，盛于已灭菌的玻璃瓶内，贮存于冰箱。 B2.4.4 完成培养基 B2.

48、4.4.1 成分 基础培养基100mL 亚硫酸铋贮备液20mL 柠檬酸铁煌绿贮备液4.5mL B2.4.4.2 制法 16 加热融化基础培养基并冷却至50，同时分别加热亚硫酸铋贮备液和柠檬酸铁煌绿贮 备液至50。在无菌操作下将后者加入到前者去，充分混合，无菌倾入已灭菌的培养皿中。 B2.5 三糖铁琼脂培养基（TSI 培养基） B2.5.1 成分 蛋白胨20g 牛肉膏5g 乳糖10g 蔗糖10g 葡萄糖1g 氯化钠5g 硫酸亚铁铵0.2g 硫代硫酸钠0.2g 琼脂12g 酚红0.025g 蒸馏水1000mL B2.5.2 制法 将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，调pH 到 7.4。加入琼

49、脂，加热煮沸， 再加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121 下灭菌15min。放置高层斜面备用。 B2.6 沙门氏菌诊断血清 B3 检验程序 检验程序见图B。 污水样品处理：过滤污水样品处理：稀释 B4 操作步骤 B4.1 样品处理和增菌 增菌：将样品接种于二倍浓度SF 37、培养 24h 平板分离：将增菌培养液分别接种于SS和BS 37、培养 2448h 平板分离：挑选可疑菌落接种于TSI 37、培养 1824h 鉴定：生化、血清学试验 检验结果报告 图 B 污水、污泥中沙门氏菌检验程序 17 B4.1.1 污水 取200mL 污水，用灭菌滤膜进行抽滤。用100mL 二倍浓度SF 增菌液把滤膜上截留的杂 质洗脱到灭菌三角烧瓶内，充公摇匀，置于37恒温培养箱，增菌培养1224h。 注：若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用5硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。 B4.1.2 污泥 用灭菌匙称取污泥20g，放入灭菌容器内，加入200mL 灭菌水，充分混匀，制成1：10 混悬液。吸取上述1：10 混悬液100mL，加入到装有100mL 二倍浓度SF 增菌液的已灭菌的 三