2012版输血科血库实验室标准操作规程.pdf

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1、医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号：XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 1 页共 1 页 实验 SOP 文件目录 编号 程序文件名称页码 XK-SOP-01 ABO 血型正定型1-3 XK-SOP-02ABO 血型反定型4-6 XK-SOP-03RH D 血型鉴定7-9 XK-SOP-04RH 血型定型10-11 XK-SOP-05聚凝胺试验12-14 XK-SOP-06盐水配血试验15-16 XK-SOP-07抗体筛查试验（聚凝胺17-19 XK-SOP-08ABO 血型定型试剂质量控制（标准血清）19-20 XK-SOP-09ABO

2、血型反定型用红细胞质量控制（国产试剂）21-22 XK-SOP-10配血、血型试验标记规定23-26 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 1 页共 3 页 ABO 血型正定型 1、 实验目的 用盐水介质法进行ABO血型系统正定型的鉴定。 2、 实验原理 红细胞作为一种颗粒性抗原，在液体介质中和电解质的参与下，可直接与相应抗体结合， 出现肉眼可见的凝集现象，用已知IgM 类特异性标准抗血清与被检红细胞在盐水介质中反应， 若出现凝集现象，表明被检红细胞膜上有与血型抗体所对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的

3、ABO血型。 3、 标本采集 3.1 、采血管：应采用EDTA抗凝的采血管采集血标本，标本中不可有血凝块。 3.2 、标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所 采用血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。 3.3 、标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放1-10 范围 的标本冰箱保存3 天。 4、试剂及被检细胞 4.1、抗 A、抗 B标准血清。 4.2、35%-45% 被检红细胞。 4.3、2%-4% 被检红细胞。 5、设备 5.1、血型血清学试验离心机：久保田公司、Diana 公司产品。 5.2、eppendo

4、rf 多功能离心机。 5.3、振荡器。 6、实验操作 6.1、玻片法 6.1.1 、取一张破片，分区标注-A、-B 及被检者编号、血型。 6.1.2 、载玻片上 -A、-B 区域分别加入1 滴（ -50 微升）相应 -A 、-B 标准血清及1 滴（ -50 微升） 35%-45% 被检红细胞。 6.1.3 、摇动玻片放置约2 分钟。 6.1.4 、观察并记录结果。 6.2 、试管法 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 2 页共 3 页 6.2.1 、取 2 只试管，分区标注-A、-B 及被检者编号、血

5、型。 6.2.2 、在 -A、-B 试管内分别加入1 滴（ -50 微升）相应 -A、-B 标准血清及1 滴（ -50 微 升） 2%-4% 被检红细胞。 6.2.3 、离心， 1000rcf/15s。 6.2.4 、肉眼观察并记录结果。 6.3 、微板法 6.3.1、取一准备完毕的微板，取合适的两孔分别标注-A、-B 及被检者编号、血型。 6.3.2 、在 -A 、-B 区域分别加入1 滴（ -50 微升）相应 -A、-B 标准血清及1 滴（ -50 微升） 2%-4% 被检红细胞。 6.3.3、轻摇微孔板，混匀孔中液体。 6.3.4、400g 离心 30s。 6.3.5、用震荡仪震荡微量板

6、，震动能使阳性反应出现凝集细胞扣，而若是阴性反应细胞扣 则很快消除。 6.3.6、判读并记录结果。 7、结果判定 正定型反定型 血型 抗 A 抗 B A1 细胞B 细胞O 细胞 + + A + + B + + O + + AB -A 侧凝集， -B 侧不凝集，为A型。 -A 侧不凝集、 -B 侧凝集，为B型。 -A 、-B 侧均凝集，为AB型。 -A 、-B 侧均不凝集，为O型。 8、临床意义 8.1 、用于临床输血：严重贫血，各种急慢性失血的患者，以及手术前需要备的病人，都必须 提前检查血型和交叉配血。因血型不符的输血会造成严重的溶血性输血反应，所以必须 要坚持同型输血。 8.2 、新生儿溶

7、血症：当母亲与胎儿血型不合时，可能会引起胎儿或新生儿的免疫溶血性疾病， 多发生于O型母亲孕育A型或 B型胎儿时。 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 3 页共 3 页 8.3 、用于器官移植：受者和供者的ABO血型必须相符，否则极易引起排斥反应造成移植失败。 8.4 、在法医学上还可用于亲子鉴定等。 9、注意事项 9.1、试验应在室温（18-25）内进行。 9.2、玻片法边缘易干涸，易造成假阳性结果，所以应在2 分钟内判读结果。 9.3、自身抗体可干扰正常结果判读，造成假阳性，应充分洗涤细胞，减少干扰

8、。 9.4、对含有较多自身冷凝集素的受检者，在鉴定血型时往往被误定为AB 型，遇此情况，需要 37生理盐水洗涤受检者红细胞2-3 次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定 血型。 9.5、当用立即试管法不能显示出正常凝集时，对于弱的反应，需室温延长作用时间15 分钟。 9.6、新生儿红细胞和弱的表现型个体，可能会出现假阴性或比正常反应弱的凝集。 9.7、溶血（排除物理溶血）和凝血都是血型抗原抗体反应阳性；首先观察溶血， 然后观察凝血。 9.8、微板法中振荡器震荡的调整要严格遵守一定标准，以便保证细胞沉淀悬浮条件的抑制。 9.9、微板法若用读板机判读结果，重要的是红细胞悬液浓度和加入孔中液

9、体的体积标准化，可 以使用自动加样器。 9.10、新微板使用前每孔加入一滴20%-30%牛血清白蛋白（BSA） ，轻轻摇动微板混匀后室温 放置 10-15 分钟，然后弃去孔中的BSA，用水龙头水洗涤微板至少10 次，再用蒸馏水或 去离子水洗涤微板2 次，用力甩去版中的液体，自然晾干，备用。 9.11、本试剂不能用于检测酶处理过的红细胞。 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 4 页 ABO 血型反定型 1、 实验目的 用盐水介质法进行ABO血型系统反定型的鉴定。 2、 实验原理 红细胞作为一种颗粒性抗原

10、，在液体介质中和电解质的参与下，可直接与相应抗体结合， 出现肉眼可见的凝集现象，用已知标准反定型细胞与被检血清反应，若被检血清与已知型别的 标准红细胞出现凝集，则证明被检血清中存在与该红细胞抗原相对应的抗体。反之， 若被检血 清与已知型别的标准红细胞不出现凝集，则证明被检血清中不存在与该红细胞抗原相对应的抗 体，以此反证被检者红细胞上抗原的型别。 3、 标本采集 3.1 、采血管：应采用EDTA抗凝的采血管采集血标本，标本中不可有血凝块。 3.2 、标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所 采用血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。 3.

11、3 、标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放1-10 范围 的标本冰箱保存3 天。 4、试剂及被检血清 4.1、A1型、 B型、 O型试剂红细胞：北京金豪制药有限公司产品。 4.2、被检血清（供、患者血清） 5、器材 5.1、血型血清学试验离心机：久保田公司、Diana 公司产品。 5.2、eppendorf 多功能离心机。 5.3、振荡器。 5.4、显微镜载玻片，57 透明硬塑试管。 6、试验操作 6.1、玻片法 6.1.1 、取一张破片，分区标注Ac、Bc、Oc及被检者编号、血型。 6.1.2 、载玻片上Ac、 Bc、Oc区域分别加入1 滴（ -50 微升）相应

12、A1型、 B型、 O型试剂 红细胞及同一被检血清2滴（ 100 微升） 。 6.1.3 、摇动玻片放置约2-4 分钟。 6.1.4 、肉眼观察并记录结果。 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 5 页 6.2 、试管法 6.2.1 、取 3 只试管，分区标注Ac、Bc、Oc及被检者编号、血型。 6.2.2 、在 Ac、Bc、Oc试管内分别加入被检血清2 滴（ 100 微升） 。 6.2.3 、分别各加50 微升相应A1型、 B型、 O型试剂红细胞。 6.2.4 、摇动试管，混匀，离心，1000rcf/1

13、5s。 6.2.4 、肉眼观察并记录结果，必要时可借助显微镜观察。 6.3 、微板法 6.3.1、取一准备完毕的微板，取合适的三孔分别标注Ac、Bc、Oc及被检者编号、血型。 6.3.2 、在 Ac、Bc、Oc孔分别加入50 微升被检血清。 6.3.3、在 Ac、Bc、Oc孔分别加入相应的与血清等量的A1型、 B型、 O型试剂红细胞。 6.3.4、轻摇微孔板，混匀孔中液体。 6.3.5、700g 离心 30s。 6.3.6、用震荡仪震荡微量板，震动能使阳性反应出现凝集细胞扣，而若是阴性反应细胞扣 则很快消除。 6.3.7、判读并记录结果。 7、结果判定 正定型反定型 血型 抗 A 抗 B A1

14、 细胞B 细胞O 细胞 + + A + + B + + O + + AB Ac 侧不凝集、 Bc 侧凝集，为A型。 Ac 侧凝集， Bc 侧不凝集，为B型。 Ac 、Bc 侧均凝集，为O型。 Ac 、Bc 侧均不凝集，为AB型。 8、临床意义 8.1、复合正定型血型结果的准确性，纠正勿检、漏报，特别是一些具有弱抗原的亚型。此外， 还可以纠正某些病人因红细胞抗原弱碱性造成的正定型判断错误。 8.2、发现血清中存在的一些抗体。 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 6 页 9、注意事项 9.1、玻片法边缘易

15、干涸，易造成假阳性结果，所以应在2 分钟内判读结果。 9.2、溶血（排除物理溶血）和凝血都是血型抗原抗体反应阳性；首先观察溶血， 然后观察凝血。 9.3、若在反定型试验中，受检者的血清与O 血型红细胞试剂产生阳性反应，则需要添加自身 对照试验。如果自身对照为阳性，表明是自身冷凝集素导致。如果自身对照为阴性，则 表明被检者血清或血浆中可能存在ABO 系统意外的其他血型系统的抗体干扰。 9.4、反定型细胞如出现红细胞颜色变成暗紫色或红细胞自发凝集，出现菌落或溶血，则不能使 用，若开瓶使用后，每日应使用标准抗A、抗 B 血型定型试剂检测反定型细胞是否与已 知血型相符，以防制品污染、变质失效，而造成检

16、定错误。 9.5、新微板使用前每孔加入一滴20%-30%牛血清白蛋白（BSA） ，轻轻摇动微板混匀后室温放 置 10-15 分钟，然后弃去孔中的BSA，用水龙头水洗涤微板至少10 次，再用蒸馏水或去 离子水洗涤微板2 次，用力甩去版中的液体，自然晾干，备用。 医院 logo 大通县第二人民医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 7 页 Rh D 血型鉴定 1、 实验目的 鉴定被检标本的Rh D 血型。 2、 实验原理 红细胞作为一种颗粒性抗原，在液体介质中和电解质的参与下，可直接与相应抗体结合， 出现肉眼可见的凝集现象。 3、标本采集 3

17、.1 、采血管：应采用EDTA抗凝的采血管或不抗凝的采血管采集标本。 3.2 、标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所 采用血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。 3.3 、标本处理： 接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放2-8 范围的 标本冰箱保存3 天。 4、试剂及被检红细胞 4.1、单克隆混合检测IgM+IgG 抗 D标准血清。 4.2 、35%-45% 被检红细胞。 4.3、2%-4% 被检红细胞。 5、设备 5.1、血型血清学试验离心机：久保田公司。 5.2、eppendorf 多功能离心机。 5.3、振荡

18、器。 6、试验操作 6.1、玻片法 6.1.1 、取一张破片，分区标注-D 及被检者编号、血型。 6.1.2 、在标注的玻片上加入1 滴（ -50 微升）抗D标准血清及1 滴（ -50 微升） 35%-45% 被检红细胞。 6.1.3 、缓慢的旋转玻片30 秒，并尽可能在2 分钟让他们充分混匀。 6.1.4 、观察肉眼可见凝集并记录结果。 6.1.5 、当结果为弱凝集或阴性时，要用试管法进行确认试验。 6.2 、试管法 6.2.1 、取 1 只试管，标注-D 及被检者编号、血型。 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 201

19、2-8-1 第 8 页 6.2.2 、在标注的试管上加入1 滴 （ -50 微升）抗 D标准血清及1 滴 2%-4% 被检红细胞悬液。 6.2.3 、充分混匀，离心，1000rcf/15s。 6.2.4 、观察并记录结果。 6.2.5 、当结果为阴性或弱阳性时，要用间接抗人球蛋白法进行弱D抗原的检测。 6.2.6 、改良的间接抗人球蛋白法检测弱D抗原。 6.2.6.1、取 2 只试管，标注被检、阳性致敏细胞管。 6.2.6.2、准备洗涤3 次的 2%-4% 被检红细胞悬液。 6.2.6.3、在被检试管内加入1 滴（ -50 微升）单克隆混合检测IgM+IgG 抗 D标准血 清及 1 滴 2%-

20、4% 被检红细胞悬液。在阳性致敏细胞管内加入1 滴 IgG 抗 D 及 1 滴 D阳性抗筛细胞。 6.2.6.4、充分混匀后，于37孵育 60 分钟或每管加PEG4滴孵育 15 分钟。 6.2.6.5、用生理盐水洗涤试管中细胞3 次，最后一次充分弃去管中液体，保留红细 胞扣。 6.2.6.6、加入 2 滴多特异性抗人球蛋白至被检管中，轻轻混匀重悬红细胞扣。 6.2.6.7、1000g 离心 15s。 6.2.6.8、轻轻重悬红细胞扣，肉眼观察结果（不能井下观察结果）。 6.2.6.9、当出现阴性结果时，使用阳性致敏细胞管IgG 致敏的红细胞加入到被检管 中进行阴性结果的确认。 6.3 、微板法

21、 6.3.1、取一准备完毕的微板，取一合适的孔标注-D 及被检者编号、血型。 6.3.2 、在标注的孔中加入1 滴（ -50 微升）抗D标准血清及1 滴 2%-4% 被检红细胞悬液。 6.3.3、轻摇微孔板，混匀孔中液体。此时应避免西标间交叉污染。 6.3.4、400g 离心 30s 或 18-25孵育 10 分钟。 6.3.5、用震荡仪震荡微量板，震动能使阳性反应出现凝集细胞扣，而若是阴性反应细胞扣 则很快消除。 6.3.6、观察肉眼可见凝集并记录结果。 6.3.7、当结果为阴性或弱凝集时，要用试管法进行确认试验。 7、结果判定 7.1、阳性 出现红细胞凝集，则为Rh（D）阳性，表示被检红细

22、胞上有相应的D抗原存在。 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第页 7.2、阳性（弱D） 7.2.1、若试管法出现弱的红细胞凝集，可能表明弱D 或部分 D 抗原存在。当出现弱凝集结 果时，要通过间接抗人球蛋白试验证实D 抗原的存在。 7.2.2、当间接抗人球蛋白试验结果为阳性时，表明被检红细胞上可能有弱D 或部分 D 抗原 存在。操作可见6.2.6。 7.2.3、当间接抗人球蛋白试验结果为阴性时，若向阴性被检管内加入阳性致敏细胞后结果 为阴性时，证明原来的阴性结果不可靠。 7.3、阴性 若试管法不出现红细

23、胞凝集，则为Rh（D ）阴性，表示被检红细胞上无相应的D抗原存。 但出现阴性结果时，要通过抗人球蛋白法来证实，操作可见6.2.6。 7.4、结果判读注意 当被检红细胞为致敏状态时（ DAT 阳性），在间接抗人球蛋白试验中加入IgG 致敏的对照 细胞后结果为阳性，并不能确证弱D抗原的存在。 8、临床意义 8.1、诊断 RhD 、部分 D和弱 D，防止 RhD血型系统引起的溶血性输血反应：Rh阴性患者若输入 Rh阳性血液后可刺激机体产生抗D抗体， 当再次输入Rh阳性血液时， 就会发生溶血性输 血反应。如Rh阴性孕妇曾发生过Rh阳性胎儿，当输入Rh阳性血液时，也会发生溶血反 应。所以需要输血的患者，

24、要常规进行RhD血型的鉴定。 8.2、预防新生儿溶血症：Rh阴性孕妇生育Rh阳性胎儿时， 胎儿的红细胞若有一定数量进入母 体，即可刺激母体产生抗D 抗体，如母亲再次怀孕生第二胎时，此抗体便可通过胎盘， 溶解破坏胎儿红细胞造成新生儿溶血。若孕妇原曾输过Rh阳性血液，则第一胎即可发生 新生儿溶血。 9. 注意事项 9.1 玻片法边缘易干涸，易造成假阳性结果，所以应在2 分钟内判读结果。 9.2 溶血（非物理性）和血凝都是血型抗原体反应阳性；首先观察溶血，然后观察血凝。 9.3 间接抗人球蛋白检测弱D时的结果必须用肉眼观察。并且应有阳性对照证实。 9.4 微板法中振荡器震荡的调整要严格遵守标准，以便

25、保证细胞间无交叉污染及充分悬浮。 9.5 微板法若用读板机读结果，红细胞悬液浓度和加入孔中液体的体积标准化，可以使用自动 加样器。 9.6 新微板使用前每孔加一滴20%-30% 牛血清白蛋白（BSA ），轻轻摇动微板混匀后室温放置 10-15 分钟，然后弃去孔中BSA ，用水龙头水洗涤微板至少10 次，再用蒸馏水或去离子水 洗涤微板2 次，用力甩去板孔中液体，自然晾干，备用。 9.7 Rh 血型系统的抗体多由获得性抗体免疫产生，血清中很少有天然抗体，不需要做反定型。 9.8 对于受血者不要求弱D的检测。 9.9 对于表面结合IgG 抗体导致直接抗人球蛋白实验阳性的红细胞不能通过间接抗人球蛋白技

26、 术报告血型。 9.10 本血清也会漏检不完全D 9.11 可导致假阳性阴性的因素：违背操作常规、离心速度不当、不正确孵育温度及时间、使 用污染的玻片、试管及材料。 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 9 页 Rh 血型定型 1. 实验目的：检定被检标本的Rh 血型。 2. 实验原理：红细胞作为一种颗粒性抗原，在液体介质中和电解质的参与下，可直接与相应抗体 结合，出现肉眼可见的凝集现象。 3. 标本采集 3.1 采血管：采用EDTA 抗凝的采血管或不抗凝的采血管采集血标本。 3.2 标本接收：接收标本

27、时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所用 采血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。 3.3 标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放4标本冰箱 保存 3 天。 4. 试剂 4.1 抗 D、抗 E、抗 e、抗 C、抗 c 标准血清： Immucor 公司产品。 4.2 2-4被检红细胞悬液。 5. 设备 5.1 血型血清学试验离心机：久保田公司产品。 5.2 eppendorf 多功能离心机。 6. 试验操作 6.1 取 5 只试管，分别标注抗D、抗 E、抗 e、抗 C、抗 c 及被检者编号、血型。 6.2 在标注的试管中分别加入

28、滴（50L）相应的抗D、抗 E、抗 e、抗 C、抗 c 标准血清及1 滴 2-4被检红细胞悬液。 6.3 充分混匀，离心，1000rcf/15s。 6.4 肉眼观察可见凝集并记录结果。 7. 结果判定 若出现红细胞凝集，表示被检红细胞上游相应的抗原存在。若不出现红细胞凝集，表示被 检红细胞上无相应抗原存在。 8. 临床意义 8.1 判定 Rh 血型表现型又住院抗体定性和筛选供者。 8.2 系统尤其是Rh(D) 具有重要的临床意义，因为Rh 阴性的个体经过输血或怀孕解除D 抗原 后，大约有70会产生 -D 抗体。此抗体可引起输入的Rh 阳性红细胞破坏，在怀孕期间， 医院 logo 大通县第二人民

29、医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 10 页 抗-D 能影响 Rh 阳性胎儿，引起新生儿溶血病。常规鉴定Rh 血型对于降低溶血性输血反 应的发生和提高优生优育方面具有重要意义。 9. 注意事项 9.1 溶血（非物理性）和血凝都是血型抗原抗体反应阳性：首先观察溶血，然后观察血凝。 9.2 对于受血者不要求弱D 的检测。 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 11 页 凝聚胺实验 1. 实验目的 应用于完全抗体及不完全抗体的筛选检测机交叉配血实

30、验等血型血清检测工作。 2. 实验原理 红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳 离子回被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双重离子云所围绕，而形成 Zeta 电位， Zeta 电位决定红细胞之间的排斥作用。 凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM ） ，降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子 云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。 其后，加入凝聚胺（Polybrene）溶液，它是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后 能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta 电位降低， 缩短红细胞 之间的距离，使红细胞产生非特

31、异性的凝聚。 最后，加入悬浮液（Resuspending） ，Resuspending 具有中和凝聚胺（Polybrene）的作用， 使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会 被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。 3、采集标本 3.1 采血管：采用EDTA 抗凝的采血管或不抗凝的采血管采集血标本。 3.2 标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所用 采血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。 3.3 标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放4标本冰箱 保存 3 天

32、。 4. 试剂 4.1 厂商：珠海贝索生物技术有限公司 4.2 包装量： 150 Tests/400 Tests 4.3 储存 试剂盒打开使用后，可置于室温贮存，未开发者2-25贮存。 5. 仪器 5.1 血型血清学试验离心机：久保田公司产品。 5.2 eppendorf 多功能离心机。 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 12 页 6. 实验操作 6.1 交叉配血实验 6.1.1 取试管二支，标明主、次侧，主侧加入病人血清2 滴和供者3-5红细胞悬液1 滴； 次侧加入供血者血清2 滴和病人3-5红细

33、胞悬液1 滴。 6.1.2 各管加入 LIM 0.7ml ，混合均匀后，在各加Polybrene 液 2滴，混匀。 6.1.3 离心， 3000rpm/15s，然后倒掉上清。 6.1.4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。 6.1.5 最后加入 Resuspending 2 滴，轻轻转动试管混合后镜下看结果。 6.2 抗体筛检试验 6.2.1 取试管 3 支，注明I、 II、III 号后，各加入被检血清2-4 滴，分别加入1 滴 3-5筛检 红细胞 I、II 、III 至相对应的试管中。 6.2.2 各管加入 LIM 0.7ml ，混合均匀后，在各加Polybrene 液

34、 2滴，混匀。 6.2.3 离心， 3000rpm/15s，然后倒掉上清。 6.2.4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。 6.2.5 最后加入 Resuspending 2 滴，轻轻转动试管混合后镜下看结果。 6.3 辅助性抗球蛋白试验 本试验主要检测抗-K ，由于中国人K 抗原阳性率几乎是零，所以一般情况下不需作此 试验。 6.3.1 接续交叉配血实验步骤6.1.5 之后，于试管内Resuspending 1 滴。 6.3.2 用生理盐水洗涤红细胞1 次，离心之后将上清液倒掉，再续加Resuspending 3 滴，混 合均匀后，再以生理盐水洗涤红细胞3 次，并把最后

35、一次的上清液完全地去除。 6.3.3 加抗 -IgG（单特异性）抗人球蛋白血清2 滴，混合。 6.3.4 离心 1000rpm/15s，观察有无凝集反应。 7. 结果判定 7.1 交叉配血试验：凝集在30s 散开，表示配血结果相合，如凝集不散开，则为红细胞抗原体 结合的特异性反应，表示配血结果不相合。 7.2 抗体筛检试验：如凝集不散开，抗体筛查结果为阳性，应进一步做抗体鉴定。 7.3 辅助性抗球蛋白试验：如有凝集反应表示有抗-IgG 抗体，必须进一步做抗体鉴定，供血者 的学不适合病人使用。 8. 临床意义 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 S

36、OP文件 生效日期： 2012-8-1 第 13 页 8.1 确认供血者及受血者的ABO 血型的相合性。 8.2 可检测出受血者血清中不规则抗体，此抗体可能在抗体筛选试验中由于筛选试剂红细胞缺 乏相应抗原而漏检。 8.3 即可以检出完全抗体，又可以检出有临床意义的不完全抗体，有效避免了迟发性溶血性输 血反应的发生。 8.4 筛检自身免疫性溶血性贫血的有效方法。 8.5 方法简便，可快速进行完全抗体及不完全抗体的筛选检测及交叉配血实验。尤其适用于在 紧急情况下的输血。 9. 注意事项 9.1 可以用含EDTA 之血浆代替血清使用。 9.2 若病人血清（血浆）含肝素，如洗肾患者，需多加4-6 滴

37、Polybrene 溶液以中和肝素。 9.3 本试剂盒的操作方法也适用于抗体鉴定。 9.4 若试剂使用前为低温贮存，请回复室温在操作。 9.5 加做辅助抗球蛋白试验，目的是增加检测抗-K 的敏感性，对检测其他红细胞抗体无帮助。 故本实验室不用此步骤。 9.6 在冬天室温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清中可能含有冷凝集素等因素， 而导致假阳性的结果出现。若有此怀疑，建议在最后滴入Resuspending 时，将试管立即置 入 37水浴中，轻轻摇动试管混合，并在30s内观察结果。 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期：

38、 2012-8-1 第 14 页 盐水配血试验 1. 实验目的 应用于完全抗体（IgM 类血型抗体）的筛选检测工作。 2. 实验原理 天然 IgM 类血型抗体与对应红细胞抗原在室温下的盐水介质中出现聚集反应。通过离心， 观察受血者血清与供血者红细胞（主侧）以及受血者红细胞与供血者血清（次侧）之间有无凝 集现象，判断受血者与供血者之间有无ABO 血型不合的情况。 3. 标本采集 3.1 采血管：采用EDTA 抗凝的采血管或不抗凝的采血管采集血标本。 3.2 标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所用 采血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。

39、 3.3 标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放4标本冰箱 保存 3 天。 4. 材料 4.1 3%-5%供者红细胞生理盐水悬浮液。 4.2 3%-5%病人红细胞生理盐水悬浮液。 4.3 献血员血清。 4.4 患者血清。 4.5 0.9%生理盐水。 5. 仪器 5.1 血型血清学试验离心机：久保田公司产品。 5.2 eppendorf 多功能离心机。 6. 实验操作 6.1 取试管二支，标明主、次侧，主侧加入病人血清2 滴和供者3-5红细胞悬液1 滴；次侧加 入供血者血清2 滴和病人3-5红细胞悬液1 滴。 6.2 混匀，离心， 3000rpm/15s。 6.3 轻

40、轻摇动试管，目测红细胞有无凝集。 7. 结果判定 凝集散开，表示盐水配血结果相合，如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合反应，表示 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 15 页 配血结果不相合。主、次侧任何一侧发生溶血或凝集，表示不相和。 8. 临床意义 8.1 能检出 ABO 血型不配合的完全抗体，此方法只能检查出IgM 性质的完全抗体，但可漏检 IgG 性质的不抗体。 8.2 用于鉴别抗体性质的检测诊断。 9. 注意事项 9.1 盐水配血实验阴性但有输血史或妊娠使的病人，必须应用聚凝胺介质法，抗球蛋

41、白介质法 或酶介质法进行交叉配血试验。 9.2 实验中遇到缗钱状凝集时，可将血清适当稀释后进行实验。在显微镜下观察到缗钱状凝集 时加 1 滴生理盐水通常也可以消除。在做试管试验时发现缗钱状凝集，可将试管离心，倾 去上清液，沥干，再加2 滴生理盐水，重悬，假凝集会消失，真凝集不会消失，严重的可 重复一次，或者在37孵育前加1-2 滴生理盐水，孵育过程中轻轻摇动数次。 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 16 页 抗体筛查试验 凝聚胺 1. 实验目的 应用于烦请抗体及不完全抗体的筛选检测等血型血清学检测工

42、作。 2. 实验原理 2.1 凝聚胺法：同凝聚胺试验 2.2 抗人球蛋白法：同间接抗人球蛋白实验 3. 标本采集 3.1 采血管：采用EDTA 抗凝的采血管或不抗凝的采血管采集血标本。 3.2 标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所用 采血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。 3.3 标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放4标本冰箱 保存 3 天。 4. 试剂 4.1 凝聚胺法 4.1.1 凝聚胺试剂盒，其包装量：同凝聚胺试验。 4.1.2 抗体筛查细胞：Diana 公司产品或Immucor 公司产品或上海血

43、液生物医药有限责任公 司产品。 4.2 抗人球蛋白法 4.2.1 测定试剂 4.2.1.1 抗人球蛋白血清：Immucor 公司产品。 4.2.1.2 PEG：血液中心供应。 4.2.1.3 抗体筛查细胞： Diana 公司产品或Immucor 公司产品或上海血液生物医药有限责 任公司产品。 4.2.1.4 低离子溶液（ LISS） ：市售。 4.2.1.5 生理盐水： 0.9% 4.2.2 质控试剂 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 17 页 4.2.2.1 不完全抗 D 血清： Immucor

44、公司产品。 4.2.2.2 3-5%阳性红细胞悬液：Immucor 公司产品， II 号抗体筛查D 阳性细胞或按要求 自制 D 阳性红细胞。 4.2.2.3 AB 血清：按要求自制。 5. 仪器 5.1 血型血清学试验离心机：久保田公司产品。 5.2 37恒温水浴箱：北京市医疗设备厂产品。 6. 实验操作 6.1 凝聚胺法 6.1.1 取试管 3 支，注明I、 II、 III 号后，各加入被检血清2-4 滴，分别加入1 滴 3-5%筛检 红细胞 I、II 、III 至相对应的试管中。 6.1.2 各管加入 LIM 0.7ml ，混合均匀后，在各加Polybrene 液 2滴，混匀。 6.1.3

45、 离心， 1000rcf/15s，然后倒掉上清。 6.1.4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。 6.1.5 最后加入 Resuspending 2 滴，轻轻转动试管混合后镜下看结果。 6.2 抗人球蛋白法 6.2.1 取试管 3 支，注明I、 II、 III 号后，各加入被检血清2-4 滴，分别加入1 滴 3-5%筛检 红细胞 I、II 、III 至相对应的试管中。 6.2.2 阳性对照管内加不完全抗D 血清 1 滴， 3%D 阳性红细胞悬液1 滴。 6.2.3 阴性对照管内加AB 血清 2 滴， 3%D 阳性红细胞悬液1 滴。 6.2.4 混匀 37水浴 1 小时或每

46、管加PEG 4 滴混匀后37水浴 15 分钟，用生理盐水洗涤3 次，去上清。 6.2.5 每管内各加抗人球蛋白血清1 滴，混匀 500rcf/1 分钟离心观察结果。 7. 结果判定 7.1 凝聚胺法 如凝集不散开，抗体筛查结果为阳性，应进一步做抗体鉴定。 7.2 抗人球蛋白法 阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检管出现凝集者为阳性，为受检者血清中有不完 全抗体。 8. 临床意义 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 18 页 有利于早起发现和确认具有临床意义的抗体，并可以在配血前鉴定此意外抗体，获得充足

47、的时间来选择缺少相应抗原的相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情的延 误。 9. 注意事项 9.1 凝聚胺法 9.1.1 可以用含 EDTA 之血浆代替血清使用。 9.1.2 若病人血清（血浆）含肝素，如血透患者，须多加4-6 滴 Polybrene 溶液以中和肝素。 9.1.3 若试剂使用前为低温贮存，请回复室温在行操作。 9.1.4 某些病人血清中可能含有冷凝集等因素，而导致假阳性结果出现。若有此怀疑，建议 在最后滴入Resuspending 时，将试管立即置入37水浴中，轻轻摇动试管混合，并 在 30s 内观察结果。 9.2 抗人球蛋白法 9.2.1 每次洗涤时生理盐水至少

48、要充满试管的3/4，并充分混匀悬浮离心沉淀，离心后完全 去掉上清液。切不可用手指或手掌按住试管口来悬浮摇散离心沉淀，以免造成假阴性 结果。 9.2.2 一旦抗人球蛋白试剂加到试管中，应立即离心，并立即镜下观察结果，因为IgG 包被 的细胞凝集经常随试剂延长而减弱。 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 19 页 ABO 血型定型试剂质量控制 （标准血清） 1. 质量标准 1.1 抗 A：效价不应低于128 1.2 抗 B：效价不应低于64 2. 检测频率 2.1 单克隆血清每批次做：物理检查、效价测定、

49、特意性试验、亲和力试验一次。 2.2 单克隆血清每日做特异性试验一次。 3. 检测方法 3.1 物理检查： 抗 A 血清为透明的蓝色液体，抗 B 血清为透明的黄色液体，不应有沉淀或异物。 3.2 效价测定： 3.2.1 材料和试剂 3.2.1.1 待检血清 3.2.1.2 A1、 B 型标准红细胞 3.2.2 方法： 3.2.2.1 将试管排成2 列，标明 -A 、-B，每列 8 只，自第2 管每管加入2滴生理盐水。 3.2.2.2 第一管加入2 滴待检血清，自第二管起比倍稀释。 3.2.2.3 在-A 、-B 管被加入相应的2%的标准红细胞1 滴。 3.2.2.4 置于室温15 分钟， 1000 转离心 15 秒，观察结果。 3.2.3 结果： 效价滴度以生产“”凝集的被检血清最高稀释度计算，做凝集效价。且效价应 符合要求。如有一列效价不符合要求，则要取双倍的待检血清复试，且应符合要求。 3.3 特异性测定： 3.3.1 材料和试验： 3.3.1.1 待检血清 3.3.1.2 A、B、O 型标准红细胞（市售） 3.3.2 方法： 医院 logo 大通县第二人民医院医院血库 编号： XK-SOP 版次： 1 实验 SOP文件 生效日期： 2012-8-1 第 20 页 3.