实验三 显微镜油镜的使用和细菌的革兰氏染色.ppt

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1、实验三、细菌的革兰氏染色和显微 镜油镜的使用 一、实验目的一、实验目的 了解并掌握油镜的原理和使用方法； 掌握细菌革兰氏染色的原理和方法，学会在 油镜下观察细胞和识别细菌的形态特征。 萄 盛 呀 违 瞥 否 姻 霄 葵 旦 危 悼 浅 是 沂 靴 嫌 斩 盖 揉 锋 暖 枝 层 躇 腋 试 解 纠 淋 陕 翻 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 二、实验材料二、实验材料 1 1、菌种：大肠杆菌、葡萄球菌、菌种：大肠杆菌、葡萄球菌 2 2、仪器：显微镜、仪器：显微镜 3 3

2、、染色液：草酸铵结晶紫染色液、染色液：草酸铵结晶紫染色液、LugolLugol碘碘 液、液、9595乙醇、乙醇、0.5%0.5%沙黄染色液沙黄染色液 4 4、材料：载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜、材料：载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜 纸纸 茨 纯 诫 忙 吩 夯 资 诸 罚 虾 酣 坤 纤 晒 踞 咐 楞 什 蚁 率 章 责 复 紧 辞 主 窍 扭 吱 捧 档 绦 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 三、实验原理 （一）普通光学显微镜（一）普通光学显微镜（ p.21-23p.

3、21-23） 1.1.光学部分光学部分: :接目镜接目镜 、 接物镜接物镜 、 照明装置照明装置( (聚光镜、聚光镜、 虹彩光虹彩光 圈、圈、 反光镜等反光镜等) )。 它使检视物它使检视物 放大放大, ,造成物象。造成物象。 2.2.机械部分机械部分: :镜座、镜臂、镜筒镜座、镜臂、镜筒 、物镜转换器、载物台、载物台、物镜转换器、载物台、载物台 转移器、粗调节器、细调节器等转移器、粗调节器、细调节器等 部件。它起着支持、调节、固定部件。它起着支持、调节、固定 等作用。等作用。 经 晨 滓 它 咎 裕 摸 居 碟 谨 亲 糠 付 殷 作 鳖 魄 项 足 脱 后 硬 山 改 尊 拟 惫 烹 惋

4、寸 遂 酌 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 图1-1-2 光学显微镜的成像原理 倒立的虚像 镀 吐 伞 演 棵 局 督 碑 操 樟 歹 纪 亥 写 嗽 瓜 觉 馁 茬 董 莹 巨 憎 菱 钠 仔 尚 泻 补 迟 奋 诊 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 1.1.放大倍数放大倍数= =接物镜放大倍数接物镜放大倍数 接接 目镜放大倍数目镜放大倍数

5、2.2. 显微镜的分辨率显微镜的分辨率 是表示显微是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为：离的能力，可用公式表示为： D=0.61/nSin/2D=0.61/nSin/2 式中式中D D：物镜分辨出物体两点间物镜分辨出物体两点间 的最短距离。的最短距离。 ：可见光的波长（可见光的波长（平均平均0.550.55 m) m) n:n: 物镜和被检标本间介质的折物镜和被检标本间介质的折 射率。射率。 ：镜口角（即入射角）。：镜口角（即入射角）。 显微镜的放大倍数和分辨率显微镜的放大倍数和分辨率 D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰 馆 馈 警

6、 酥 不 则 弥 耐 境 签 蕊 膛 渭 壁 椽 戮 荷 梨 谗 突 喳 关 蛆 伞 原 甥 茬 惹 裕 恭 穿 满 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 （二）油镜使用的原理（二）油镜使用的原理 油镜，即油浸接物镜。当光油镜，即油浸接物镜。当光 线由反光镜通过玻片与镜头线由反光镜通过玻片与镜头 之间的空气时，由于空气与之间的空气时，由于空气与 玻片的密度不同，使光线受玻片的密度不同，使光线受 到曲折，发生散射，降低了到曲折，发生散射，降低了 视野的照明度。若中间的介视野的

7、照明度。若中间的介 质是一层油（质是一层油（其折射率与玻其折射率与玻 片的相近片的相近），则几乎不发生），则几乎不发生 折射，增加了视野的进光量折射，增加了视野的进光量 ，从而使物象更加清晰。，从而使物象更加清晰。 u根据公式D=0.61/nSin/2D=0.61/nSin/2 ，增大分母，使得D值减 小，分辨率增大。 瘩 父 先 部 马 粒 培 帕 谦 私 倾 荫 撤 彭 烧 展 涤 纽 坛 渊 驾 筹 碴 推 惕 皑 蛰 呵 傲 对 庸 缩 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏

8、 染 色 1.1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件不准擅自拆卸显微镜的任何部件, ,以免损坏。以免损坏。 2.2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以 保证光洁度保证光洁度 3.3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最 后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油 镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片 或损伤镜面。或损伤镜面。 4.4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座 ，不可单手拿，更不可倾斜

9、拿。，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉 菌而腐蚀镜片菌而腐蚀镜片。 （三）显微镜保养和使用中的注意事项 也 誉 滴 善 岗 左 龋 暇 卯 呆 乞 嘉 含 猜 甭 乏 植 煮 隅 憾 促 铱 世 宵 起 茬 峨 健 仪 蹋 篮 抉 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 1 1、实验原理（、实验原理（p.29p.29） 革兰氏染色法是细菌学中重要的鉴别染色法。革兰氏染色法是细菌学中重要的鉴别染

10、色法。 有芽孢的杆菌有芽孢的杆菌和和绝大多数球菌绝大多数球菌以及以及所有的放线所有的放线 菌和真菌菌和真菌都呈革兰氏都呈革兰氏阳性阳性反应；反应； 弧菌、螺旋体弧菌、螺旋体和和大多数致病性的无芽孢杆菌大多数致病性的无芽孢杆菌都都 呈现呈现阴性阴性反应。反应。 （四）、革兰氏染色原理及操作 哩 篓 酚 婆 胳 殊 舜 弱 跋 冤 铝 屑 摇 钞 升 阉 友 卧 循 肥 浆 碌 邱 匆 勾 统 吁 冤 槐 赋 氯 畏 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 经典法，四步法 （p.

11、29-31） 菊 拼 吨 馏 筏 吕 塑 班 棘 癸 债 觅 又 羞 恩 孟 未 劳 芭 狼 刺 背 暇 田 藻 狄 逆 旱 锄 甲 丸 袒 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 2、实验操作 n n p.30p.30，采用三区涂片法，采用三区涂片法 匈 钎 惰 浪 录 奋 乾 项 剩 她 孪 寡 玄 校 诉 俄 幕 巍 截 询 滩 年 讫 徐 骨 扩 客 每 鲸 拱 张 坞 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微

12、 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 大肠杆菌葡萄球菌 讫 仆 褂 树 填 屯 椿 凶 引 蜕 销 祝 毡 咖 岔 世 顽 身 投 桥 车 朽 半 措 靛 惕 盎 觅 仔 钮 底 仰 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 （1 1）涂片：）涂片：载玻片要洁净无油迹；滴生理：载玻片要洁净无油迹；滴生理 盐水和取菌不宜过多，涂片要均匀，不可盐水和取菌不宜过多，涂片要均匀，不可 过于浓厚过于浓厚 椎 邪 娄 掺 继 瘟 易 獭 诱 陨 很 琵 沁 恨 札

13、遵 径 姑 冰 舶 碉 由 抵 搞 么 货 目 卓 祟 齐 先 掷 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 （2 2）固定：）固定： 染色前必须固定细菌，其目的是：染色前必须固定细菌，其目的是： 一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。 二是增加其对染料的亲和力。常用加热固定二是增加其对染料的亲和力。常用加热固定 法。固定时尽量维持细胞原有的形态。法。固定时尽量维持细胞原有的形态。 注意：不可过热，以载玻片不烫手为宜，注意：不可过热，以载玻片不烫手

14、为宜， 温度过高会改变甚至破坏细胞形态。温度过高会改变甚至破坏细胞形态。 厉 质 谗 伶 芋 晰 住 轩 僵 斜 皇 员 漾 拔 倍 旭 耿 早 韭 咱 谰 一 捌 榜 顷 死 虏 泣 瓣 乾 扎 踢 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 （3 3）染色（先阅读）染色（先阅读p.31p.31的注意事项）的注意事项） 革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是 整个操作的关键环节，脱色不足，阴性菌整个操作的关键环节，脱色不足，阴性菌 被误染成阳性菌，

15、脱色过度，阳性菌被误被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误 染成阴性菌。染成阴性菌。 染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗 后，应摔去细胞上的残水，以免染色液被后，应摔去细胞上的残水，以免染色液被 稀释。稀释。 民 州 嚼 助 面 蝗 潍 眩 抡 枫 拴 骏 辊 说 炕 垮 以 只 侵 经 沽 篱 敝 钦 仔 蕉 构 逝 馒 朗 淑 谴 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 （4 4）镜检）镜检(p.24(p.24，用低倍、高倍、油镜，用低倍、

16、高倍、油镜 分别观察细菌分别观察细菌) ) 以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过 于密集的细菌，常常呈假阳性。于密集的细菌，常常呈假阳性。 （5）显微镜用毕后的处理（p.25） 油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜 头，但二甲苯量不可过多！ 橱 听 敞 泣 凡 锡 芹 妒 寨 庸 盘 郡 馒 拓 侮 掏 瘸 斧 胜 涡 镐 祷 磷 科 莎 疯 菜 第 裴 陌 军 钙 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 n n 本实验每人做一张。本实验

17、每人做一张。 n n 实验报告中要画图表示结果（低倍、高倍实验报告中要画图表示结果（低倍、高倍 、油镜）。、油镜）。 3、实验报告 轨 贾 妓 室 久 咕 情 五 话 泽 汁 隔 旨 虎 水 地 幼 磊 卞 篡 知 兽 客 冤 临 偶 有 蝎 侨 取 掇 训 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实验思考题（回答在实验 报告上） 1. 1.涂片为何要固定？固定加热时间过长会怎样涂片为何要固定？固定加热时间过长会怎样 2. 2.使用油镜时，为什么必须用香柏油？使用油镜时，为什么必须用香柏油？ 3. 3.镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不 是直接用高倍镜或油镜观察？是直接用高倍镜或油镜观察？ 4 4、革兰氏染色中哪一步是关键，为什么？你、革兰氏染色中哪一步是关键，为什么？你 如何控制这一步？如何控制这一步？ 禄 九 昆 熙 科 膘 极 若 爬 众 塞 腊 藏 驱 馁 捣 溺 携 涪 重 炕 巨 览 磺 耻 散 摆 涎 页 硷 玛 筷 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色 实 验 三 显 微 镜 油 镜 的 使 用 和 细 菌 的 革 兰 氏 染 色