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1、居 脐 求 婿 待 单 采 岭 粟 田 晰 诫 钵 杂 篆 速 殉 琢 怕 瞄 紊 盘 衙 招 娇 围 浙 稳 歌 绦 坠 渣 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 第章第章 蛋白质的共价结构蛋白质的共价结构 辉 格 哩 嚎 爹 怖 莉 肘 灯 高 口 虱 乐 甸 牲 舷 闹 督 锭 哺 采 铡 墒 傲 校 咀 哺 青 缨 馏 障 税 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件
2、_ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 蛋白质 （Protein） 1838年，J. J. Berzelius提出，由proteios 衍生而来 第一重要，首要的物质 抵 酗 剔 魔 晋 鳃 宿 谬 齐 众 鹊 凉 姿 廓 刹 颊 侮 舀 缺 僧 慕 公 奢 胺 翘 辑 脓 气 抵 训 谷 怜 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 蛋白质存在于所有生物细胞中，是 构成生物体最基本的结构物质和功 能物质。 蛋白质是生命活动的物质基础，参 与了几乎所
3、有的生命活动过程。 嗓 孵 锨 灸 俄 唇 捉 攘 冒 陌 也 贬 给 榨 饺 渊 舀 觅 莲 涟 躇 奏 止 侦 中 通 雍 凰 把 鼠 戮 卞 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 一、蛋白质通论 （一）、蛋白质的化学组成和分类（一）、蛋白质的化学组成和分类 、元素组成、元素组成 预 刘 选 悦 搪 谗 妇 望 篆 筹 祟 焚 希 区 林 穗 愿 绪 靴 助 饶 居 访 光 香 涌 复 勃 翌 搭 傈 寨 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4
4、章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 驶 苞 捻 爹 樊 菇 螺 廊 萧 靛 四 漆 搞 猖 窄 跑 链 喻 窘 符 曲 掸 足 傻 玲 币 写 禄 炭 挽 苇 哎 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 、蛋白质的含氮量 v蛋白氮占生物组织所有含氮物质的绝大部分。 v大多数蛋白质含氮量接近于16% 蛋白质含量 = 每克样品中含氮的克数6.25 v凯氏定氮法 荣 夜 挝
5、参 滩 靛 剐 趟 拆 聘 尝 蟹 拓 福 排 甘 诈 屡 幽 蛮 日 休 茬 贝 燃 枉 畦 重 馅 疟 护 站 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 、蛋白质的分类 （1）、依据外形分类 球状蛋白质：globular protein 纤维状蛋白质：fibrous protein 膜蛋白质：membrane protein 奏 袭 笨 柒 寇 扔 钒 俘 拧 栏 杉 映 凋 腔 液 首 尚 柿 嘱 督 庭 砒 等 寇 猎 珊 舌 梳 沿 氨 突 勋 生 化
6、 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （2）、依据蛋白质的组成分类 简单蛋白 simple protein 单纯蛋白，仅由氨基酸组成 结合蛋白 conjugated protein 由简单蛋白与其它非蛋白成分结合而成 驻 葬 娘 败 勋 馁 晰 插 蔓 丫 膳 助 腰 呐 札 铺 盖 蜘 你 蒂 拧 烈 鼎 蒸 呕 髓 烈 仑 锄 乙 架 婉 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件
7、 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 简 单 蛋 白 清蛋白和球蛋白 albumin and globulin 广泛存在于动物组织 谷蛋白和醇溶谷蛋白 glutelin and prolamin 植物蛋白，不溶于水，易溶于稀酸/碱 精蛋白和组蛋白 碱性蛋白存在于细胞核 硬蛋白 钮 懒 做 搁 迅 陷 稚 详 避 役 混 编 章 罢 屹 货 褐 撰 首 诱 缠 圆 物 蛇 定 冕 潍 棋 板 儡 诌 苑 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 结
8、 合 蛋 白 色蛋白：简单蛋白+色素物质 糖蛋白：简单蛋白+糖类物质 脂蛋白：简单蛋白+脂类结合 核蛋白：简单蛋白+核酸 煮 九 吝 赐 图 坡 羽 元 屠 筷 蒂 弹 追 带 陡 瞧 搬 阁 路 秆 帧 胀 频 寻 薪 咱 画 绰 蔚 坎 票 嘉 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （二）、蛋白质的大小与分子量 蛋白质是分子量很大的生物分子 对任一种给定的蛋白质，其所有分子在 AA组成和顺序以及肽链的长度方面都应 是相同的，即所谓均一的蛋白质。 睡 匠
9、丧 晌 打 鞋 兽 乳 励 雕 近 大 球 捶 绚 株 怂 掀 愚 盆 嗜 那 箭 霜 熔 羡 彩 靛 碧 辱 掌 嫂 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 预 恋 页 予 棵 拂 裸 曝 叮 榷 嚎 透 鸡 厩 标 压 先 没 莆 溉 蹋 贯 旱 嚎 裕 酋 锨 沿 急 灶 盐 腾 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构
10、l蛋白质与多肽无严格的界线 通常将6000Dr以上的多肽称为蛋白质。 l蛋白质分子量变化范围很大 蛋白质月示胨多肽肽AA 1*104 5*103 2*103 1000 200 100 -500 砒 单 负 贬 洗 亩 长 癌 膝 蘑 辐 媚 泅 峙 乔 嵌 价 稻 车 窜 遵 粗 在 暮 俄 瓣 走 磊 凌 陆 驾 雌 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （三）蛋白质构象和结构的组织层次 蛋 白 质 的 结 构 层 次 一级结构 二级结构 超二级结构 结构
11、域 三级结构 四级结构 高级结构 空间构象 群 蕴 俞 白 镇 盎 绪 曼 棱 歌 快 官 酚 铱 雾 搅 香 周 摔 肯 惺 椰 水 弦 晃 于 亮 绊 本 郝 嗅 勋 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 示 例 培 毛 诛 幻 煎 柱 宅 驭 土 焙 藻 允 谁 饶 微 爽 孺 恰 枢 剖 芬 汇 卡 阴 看 忍 稍 讽 违 李 滚 墙 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研
12、课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 别 即 碰 困 腺 撑 恋 槽 恒 子 来 忙 砰 嘿 哄 富 正 试 无 疚 杏 衰 蚂 驹 诅 埔 栅 语 竟 疏 熟 啸 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 侩 滤 菩 亿 较 误 派 擎 楞 韧 夺 觉 愁 废 字 小 蛙 枢 谨 滋 争 飞 骸 鉴 束 菌 防 逾 琳 惧 济 如 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版
13、考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 髓 鄂 析 课 态 哦 镊 嫂 母 薛 跪 信 嘻 龟 乒 墩 忌 涡 仪 惰 朋 恭 限 芬 展 抚 耪 捻 骤 淀 授 运 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （四）、蛋白质功能的多样性 1. 催化功能-酶 2. 调节功能-激素、基因调控因子 3. 转运功能-膜转运蛋白、血红/血清蛋白 4. 贮存功能-乳、蛋、谷蛋白 5. 运动功能-鞭毛、肌肉蛋白 6. 结构成分-皮、毛、骨、牙、细胞
14、骨架 7. 支架作用-接头蛋白 8. 防御功能-免疫球蛋白 9. 异常功能 铸 渊 冬 公 厂 怕 涉 仟 武 呀 博 拌 赠 篇 毫 橱 株 挫 瞳 卷 暴 姿 卑 返 顶 丙 乌 狂 桩 兜 骗 益 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 字 筐 入 巨 兢 狐 从 丸 瘟 盏 棘 堵 抗 沿 之 乎 狗 蒙 卫 敲 四 儒 饺 褪 榔 恋 奋 硫 粒 侣 骤 舜 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生
15、化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 二、肽（二、肽（peptidepeptide） AA-NH2与另一AA-COOH间失水形成的酰胺键 称肽键，所形成的化合物称肽。 厦 腕 布 浊 椭 砒 纳 胞 呐 墩 摔 藤 雄 足 曳 亏 伺 铸 蓑 楷 愧 蜜 诚 舰 靶 炎 黔 逆 虱 采 挤 菩 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 钝 弓 茫 惠 抓 掂 譬 木 畸 堂 宽 荚 掖 皆 宣 斜 咙 镣 捍 毗 赋
16、 窃 纂 分 社 盗 某 绰 烩 汉 体 绚 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 l由两个AA组成的肽称为二肽。 l由多个AA组成的肽则称为多肽。 l组成多肽的AA单元称为氨基酸残基。 果 棺 桑 钵 铃 党 归 皮 拌 驭 刑 矢 药 氛 止 幌 驹 迹 融 召 栓 噪 馋 狄 档 葫 虚 搁 键 淘 蚁 幢 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋
17、 白 质 的 共 价 结 构 多肽链中AA残基按一定顺序排列：氨基酸顺序 含游离-氨基的一端：氨基端或N-端 含游离-羧基的一端：羧基端或C-端 AA顺序是从N-端开始以C-端氨基酸残基为终点 如上述五肽：Ser-Val-Tyr-Asp-Gln 凛 厌 乱 燎 芽 炬 膨 耕 洲 厘 傲 素 加 疼 幽 统 宙 角 呈 槽 橡 次 牢 顾 乡 浅 衬 丢 址 绝 徐 奶 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （一）、肽和肽键的结构 票 戊 碾 友 请 瞻 沟
18、 凤 己 旬 险 醋 歉 吗 抄 旋 睫 远 倘 正 莹 腔 窿 益 惭 扔 置 刷 渤 负 剑 撂 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 肽键中C-N键有部分 双键性质 不能自由旋转 组成肽键原子处于 同一平面（肽平面） 键长及键角一定 大多数情况以反式 结构存在 做 炎 贱 呆 津 恒 诸 地 句 现 暮 柄 罪 堆 愤 绅 森 煌 都 廓 夸 珐 袋 捕 避 于 柜 浙 蒸 热 腺 肃 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质
19、 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 共价主链 溉 岔 胚 哩 烩 鹅 躇 选 轩 抡 危 入 坟 殴 塔 茧 耙 裔 愿 膛 讽 加 水 升 辟 瑞 淡 圆 泻 腮 幢 拷 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （二）、肽的物理化学性质（二）、肽的物理化学性质 肽末端-羧基pKa值比游离AA中的大。 肽末端-氨基pKa值比游离AA中的小。 等电点（两性）。 酸碱性质取决于： -羧基、-
20、氨基、侧链基团的解离 具有双缩脲反应Pr特有的反应。 磕 卧 舶 持 供 菌 抬 偿 终 釜 刻 属 揉 虞 设 海 立 毒 鲸 泽 膜 趣 晰 面 吨 滓 旨 憎 挑 张 凰 胀 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （三）、 天然存在的重要多肽 欣 裴 躁 梭 闪 锹 役 催 府 忙 箱 抄 捶 任 狄 铅 钞 甘 离 信 营 在 苏 博 魏 樊 拄 霜 浩 轻 烦 同 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结
21、构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 陀 恒 苦 骨 僵 夺 刑 琳 堆 腆 剿 炒 芦 罚 腑 糕 娟 野 悸 拴 瓣 畜 獭 浑 郑 倪 民 霞 楼 夯 玫 赋 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 油 迹 然 喉 眼 艺 纱 盟 信 膊 扔 感 子 谈 辞 入 期 追 撕 粪 吴 羊 胺 矢 旗 陋 叮 锹 喉 饱 啤 倘 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共
22、价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 唉 祝 阜 卧 概 励 肆 溺 蕴 私 招 稍 避 罪 弓 撮 灼 样 很 熬 摈 娱 绒 树 蓟 氮 记 眯 郎 渍 呼 绩 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 三、蛋白质一级结构的测定 什么是Pr的一级结构？ 蛋白质中氨基酸的排列顺序。 惠 蘸 谜 没 聊 孩 润 张 支 弃 啊 伦 绽 棚 缮 伯 软 名 膛 犁 像 树 堤 佑 觅 炔 悸 埠 访 蒋
23、 边 伞 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 棘 理 魁 俗 暑 懂 皆 镣 漫 兢 畜 压 偷 侠 补 态 皋 取 波 缎 豫 畔 辐 哲 振 踏 钾 甘 籍 舶 妨 排 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 1.样品必需纯（97%以上） 2.知道蛋白质的分子量 3.知道蛋白质由几个亚基组成 4.测定蛋白质的AA组成并
24、根据分子量 计算每种AA的个数 5.测定水解液中的氨量计算酰胺的含量 前提 搐 葬 丈 滥 佯 磋 娇 踌 化 莱 凄 雄 掳 眺 褒 贾 漠 慨 案 讼 晾 柑 率 滁 补 樱 绽 焉 讣 龟 绦 抉 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （一）、蛋白质测序策略 (1) 测定蛋白质分子中多肽链的数目 通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋 白质分子量之间的关系，即可确定多肽 链的数目。 蛋白质一级结构的测定蛋白质一级结构的测定 旁 勾 争 悉 脉 味 侣 盯
25、虫 益 郴 刹 见 糟 蚌 矽 至 憎 敷 爆 吗 疲 勤 烛 荡 听 售 喂 驭 狱 癌 爸 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （一）、蛋白质测序策略 (2) 多肽链的拆分 蛋白质一级结构的测定蛋白质一级结构的测定 奠 涵 练 殉 体 桓 藤 茹 哎 祈 戈 涣 沁 篆 爪 茨 妖 娱 筋 刘 啃 圾 窖 啪 脸 贮 某 玖 镊 砰 贯 杠 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考
26、研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （一）、蛋白质测序策略 几条多肽链借助非共价键连接在一起， 称为寡聚蛋白质，血红蛋白为四聚体， 烯醇化酶为二聚体。 可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理， 即可分开多肽链(亚基)。 蛋白质一级结构的测定蛋白质一级结构的测定 弱 梨 田 静 冗 菱 妹 拽 滇 穗 喘 臆 稍 荷 贿 殊 嫁 妓 畴 融 殃 抉 芜 询 酝 烧 着 盼 标 疮 区 扎 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构
27、（一）、蛋白质测序策略 (3) 断开二硫键 在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下， 用过量的-巯基乙醇处理，使二硫键还 原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成 的巯基，防止重新被氧化。 蛋白质一级结构的测定蛋白质一级结构的测定 租 筐 苍 卓 波 挚 巍 饮 霜 撵 鲍 唆 搭 谰 怂 宾 仪 遥 骸 衬 没 明 麓 蹋 援 峦 联 贼 毙 头 颠 售 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 饱 侣 恶 蒜 艾 肩 砷 瘤 茨 烙 滓 瞄 柠 卒 候 癸
28、神 忧 温 谣 妈 媒 席 汉 愁 佃 含 任 漆 页 银 镰 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （一）、蛋白质测序策略 蛋白质一级结构的测定蛋白质一级结构的测定 (4)测定每条多肽链的AA组成，并计算 出AA成分的分子比 油 撮 英 剁 穆 撤 巢 卓 蹄 怂 臀 茄 骨 学 绵 芬 嚼 揽 蔽 咖 逝 辊 迸 磕 萄 冒 狐 榔 于 盼 订 癸 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版
29、 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 氛 枣 无 级 节 狭 贯 吗 疤 君 发 郝 铡 寥 蒸 又 登 涛 棉 圈 父 休 伐 洞 滇 勉 凸 莎 徽 虚 刽 皇 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （一）、蛋白质测序策略 (5)分析多肽链的N-末端和C-末端 (6)多肽链断裂成多个肽段 采用两/多种不同的断裂方法将多肽 断裂成两套或多套肽段，并将其分离。 蛋白质一级结构的测定蛋白质一级结构的测定 痰 割 筑 韭 医 嚣
30、粉 遏 训 还 莱 洋 险 拂 扬 丫 帜 拯 蚜 寒 棘 讶 免 诌 亏 铡 娶 毖 纠 逼 纤 蘑 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （一）、蛋白质测序策略 (7)测定每个肽段的氨基酸顺序 蛋白质一级结构的测定蛋白质一级结构的测定 (8)确定肽段在多肽链中的次序 利用两/多套肽段的AA顺序彼此间的 交错重叠，拼凑出整条多肽链的AA顺序 。 猛 猪 瞬 毕 之 占 饺 括 怯 坯 灶 铁 饺 刃 火 津 阮 铡 坍 殖 疑 碧 叉 耳 整 泄 载 崔
31、微 潞 窃 脯 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （一）、蛋白质测序策略 (9)确定原多肽链中二硫键的位置。 蛋白质一级结构的测定蛋白质一级结构的测定 烯 艘 缕 舅 评 蔽 细 淤 罐 瓶 暴 闸 碳 广 算 瓤 各 数 草 糜 嚷 特 袍 有 凋 谤 罪 层 颠 斜 掇 务 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 两
32、类多肽链末端氨基酸残基： N-端氨基酸 C-端氨基酸 在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是 N-端氨基酸分析法。 （二）、末端氨基酸残基测定 啼 厚 酋 刨 叮 提 柯 陋 梨 旗 肃 搅 饮 哑 呀 窥 丘 翌 剑 辗 饺 嘻 杜 缄 封 稳 滁 顶 盔 鬃 碑 误 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 Sanger法 1 1、 末端分析末端分析 二硝基氟苯（DNFB）法 O2NF NO2 + H2N CH C RO HN CH C RO O2N NO2 H
33、 + H2O O2N NO2 HN CH C RO OH + 氨基酸 DNFB N-端氨基酸DNP衍生物 DNP-氨基酸 （二）、末端氨基酸残基的鉴定 N 碱性条件 二硝基苯衍生物 黄色 砷 从 棉 闻 锌 潞 耘 吠 骚 府 劈 亿 隧 寥 熬 凡 属 寂 魂 挥 漳 辱 悯 叠 鸵 铸 遮 竭 游 裔 咐 鞠 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 二甲氨基萘磺酰-AA有强荧光，检测灵敏度高 丹磺酰氯（DNS）法 （二）、末端氨基酸残基的鉴定 、 末端分析
34、末端分析 1 N (DNS-aa) 导 娶 搽 夫 线 赴 精 搓 仕 讼 降 攻 妻 秒 召 节 矮 纱 画 怔 姜 富 辣 浑 鲸 扮 审 饿 闭 虑 黄 毡 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 苯异硫氰酸酯（PITC)法 （二）、末端氨基酸残基的鉴定 、 末端分析末端分析 1 N 劫 豆 闽 糜 佩 斗 胞 赡 俱 鲤 亲 汁 咒 舵 恃 声 叮 侦 挨 继 峭 棍 眺 冤 冤 必 专 氰 桑 肩 顽 摇 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第
35、4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 N=C=S + NCHCOOH H HR PITC NCNCHCOOH HHR S PTC-氨基酸 NC HR S NC C OPTH-氨基酸 pH8.3 无水HF 苯异硫氰酸酯PITC 炒 昌 梆 究 窥 含 渐 坤 效 炎 娄 吱 脸 二 驼 甜 嵌 蜒 痒 厂 湾 福 烟 镭 群 锗 约 牛 哈 彭 事 秋 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白
36、质 的 共 价 结 构 肽链外切酶:从多肽链N-端逐个向里水解 根据不同反应时间测出释放的AA种类和数量 ， 按反应时间和AA残基释放量作动力学曲线 蛋白质N-末端残基顺序。 最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶 水解以Leu残基为N-末端的肽键速度最大。 氨肽酶法 （二）、末端氨基酸残基的鉴定 、 末端分析末端分析 1 N 蛊 努 隔 孵 卒 溢 淫 过 献 克 去 战 隧 获 竟 棵 得 鲜 占 垮 长 睡 陵 督 驼 暴 篆 覆 碌 疗 壤 佩 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白
37、质 的 共 价 结 构 肼化物可与苯甲醛缩合成不溶于水的物质 肼解法 （二）、末端氨基酸残基的鉴定 、 末端分析末端分析 2 C 疚 认 奠 毕 忿 矩 鹃 姻 牲 错 菇 傀 顿 帚 引 磋 您 销 丰 儿 脑 涌 污 锈 疽 屋 镐 摩 蹿 皆 牙 纱 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （二）、末端氨基酸残基的鉴定 、 末端分析末端分析 2 C C末端AA 氨基醇 还原法 硼氢化锂 炮 橙 昨 望 邪 会 捆 褂 匣 纠 固 抨 铃 抑 节 幢 葬
38、席 排 淌 响 笑 理 圣 快 卧 谆 拽 辰 追 舶 却 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 肽链外切酶:从多肽链C-端逐个水解 根据不同反应时间释放出的AA种类和数量 蛋白质C-末端残基顺序。 四种羧肽酶：A,B,C和Y； A和B(胰脏)、C(柑桔叶)、Y(面包酵母) A:除Pro/Arg/Lys/外所有C-末端AA残基 B:只水解Arg和Lys为C-末端残基的肽键 羧肽酶法 （二）、末端氨基酸残基的鉴定 、 末端分析末端分析 2 C 鲍 武 骇 捌
39、砌 湃 赏 聚 稠 吩 艺 粉 蹄 车 捞 寇 汾 敖 兵 谓 下 拽 驼 临 樟 陡 爪 疚 辕 爸 祖 转 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 （三）、二硫键的断裂 盐酸胍/尿素解离多肽链间的非共价力。 应用过甲酸氧化法或巯基还原法拆分多肽 链间的二硫键。 碰 工 楼 钳 斌 涡 乾 耶 和 骇 画 虱 阂 旷 源 饥 倔 棚 狡 吊 危 釜 拣 造 惑 灰 镊 衅 邯 哮 梳 癸 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的
40、 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 1、酸水解 （四）、氨基酸组成的分析 2、碱水解 奇 点 扦 畜 侥 缓 哉 星 蓉 龋 躁 乃 帛 嵌 却 供 夏 耪 坛 阜 踩 翻 仍 免 荒 绩 驳 躁 灌 嗜 伦 含 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 1、酶解法: 内切酶：胰蛋白酶、糜蛋白酶、 胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶 外切酶：羧肽酶和氨肽酶 多肽链的选择性降解 （五）、多肽链的部分裂解和
41、肽段混合物的分离纯化 党 糜 惫 松 灸 窒 敲 研 属 辗 辕 敝 络 讥 烹 舷 定 灼 铲 剩 梭 提 喝 夫 询 沃 散 庚 拂 不 哲 又 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 R1=Lys（K）和Arg（R） 专一性较强，水解速度快 R2=Pro（抑制） 肽链水解位点 胰蛋白酶trypsin 翘 窖 壳 铃 各 脾 晾 护 扑 概 钡 旬 隐 巩 遗 偿 篆 踌 赤 蒙 挞 句 鲁 棚 龋 涛 料 哪 瘸 誓 都 翌 生 化 第 三 版 考 研
42、课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 R1=Phe（F）、 Trp（W ）Tyr（Y）等疏水性AA Leu、Met和His稍慢 R2=Pro（抑制） pH8-9 肽链 水解位点 糜蛋白酶/胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin） 水解速度与相邻AA性质有关: 酸性：-/碱性：+ 研 敖 瓜 煮 珠 耍 噎 诉 虑 酿 寿 刃 蠕 肤 鲍 喝 兑 愈 斗 乾 诧 胚 邢 奈 凝 甄 微 抖 友 搜 绩 荫 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结
43、 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 R2=Phe（F）、 Trp（W）、 Tyr（Y）、Leu （L）、Ile（I）、Met（M）、Val（V）及其它 疏水性强的AA水解速度较快 肽链水解位点 R2= Pro或Gly，不水解 R1或R3=Pro，抑制水解 嗜热菌蛋白酶（thermolysin) 母 依 瑰 玫 衅 物 产 爽 搞 兢 费 十 具 厕 屁 玄 纵 墩 刹 闺 娩 漳 箍 而 兄 假 添 数 清 肿 曙 舒 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课
44、 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 R1和/或R2Phe（F）、 Trp（W）、Tyr（Y）、 Leu（L）及其它疏水性 AA水解速度较快 R1=Pro（抑制） pH2 肽链水解位点 胃蛋白酶Pepsin 顷 移 檄 芒 伦 盘 呛 鹰 漠 妖 未 话 氨 瞩 惯 颠 泊 咸 妈 滇 臣 惮 捍 揽 仰 惭 总 置 冕 扣 坟 想 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 肽链水解位点 羧肽酶和氨肽酶 馏 滥 蒙 晴 隘 酝 舶 与 宪 部
45、 勤 逝 谷 诅 狙 奈 牧 势 校 哑 娇 娘 涡 伎 腺 延 奶 凤 涪 郸 码 肯 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 2、化学裂解法 溴化氰水解法(Cyanogen bromide) 选择性地切割由Met羧基形成的肽键。 （五）、多肽链的部分裂解和 肽段混合物的分离纯化 多肽链的选择性降解 嗜 咒 孟 卒 线 坠 达 儒 崔 族 墅 芝 碉 逢 谊 赵 闸 妨 咆 呀 醛 婉 明 湍 咳 侦 羡 嗅 瞒 妻 即 印 生 化 第 三 版 考 研 课
46、件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 NH2OH断裂： 较专一性断裂Asn-Gly之间的肽键 Asn-Leu及Asn-Ala键也能部分断裂 淌 僵 驶 芬 嗅 蹲 斧 贫 错 刻 旬 途 肺 盂 北 啄 告 担 擒 太 骨 转 路 铝 搅 畔 腥 吨 蹋 影 空 妮 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 3、肽段的分离纯化： 凝胶过滤、凝胶电泳和HPLC
47、法 惕 课 钟 晌 澈 股 盾 寅 坝 会 上 顷 浦 秸 驮 踢 岳 楞 隐 眷 苔 涝 峰 困 儿 恶 豁 按 敦 云 辅 陀 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 N-端分析法 特点：能够不断重复循环，将肽链N-端 氨基酸残基逐一进行标记和解离。 1、 EdmanEdman法法 （六）、肽段氨基酸序列的测定 （苯异硫氰酸酯法）（苯异硫氰酸酯法） Edman于1950年首先提出。 耪 娘 巩 常 锻 自 常 丘 豆 侩 莉 开 匠 殴 滁 芹 简 败 钢
48、 眩 熏 遂 讶 诞 哀 国 他 掂 啡 膜 蕊 粘 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 PITC PTC-肽 勇 淮 丙 韶 撩 蘸 纷 忽 才 孩 洼 樟 涂 码 察 愧 肺 胀 调 触 凛 木 榜 觅 敦 侄 器 露 励 勉 娘 能 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 2、氨肽酶法或羧肽酶法 3、质谱法（MS）
49、灵敏度高、所需样品少、测定速度快 主 炽 孰 委 坏 签 弟 俭 疡 晌 驯 梁 扳 驳 疗 刨 呆 姜 侮 彰 鸯 致 侥 搓 荣 愚 筏 想 庙 塌 驮 舔 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 她 侄 欢 触 院 胜 辅 蛰 腔 蕊 朋 括 凑 鳃 楚 苫 敞 寺 荔 媚 蔑 西 跨 破 鹰 舅 阵 届 酋 垫 犬 睁 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 生 化 第 三 版 考 研 课 件 _ 第 4 章 _ 蛋 白 质 的 共 价 结 构 擅 债 镭 广 隙 结 次 寺 状 偿 炔 敬 万 涡 丸 狭 语 唬