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1、第二十一章,基因诊断与基因治疗 Genetic Diagnosis and Gene Therapy,砍倡董层典滋凄竿贱去算显掉式偿凡瘴扦紧码半漏口烫昂腆郝培勒止妈泉21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,基因变异致病类型,1.内源基因的变异 基因结构突变 镰刀型红细胞贫血(遗传性疾病) 基因表达异常 血友病(遗传性疾病),2.外源基因的入侵 鼻咽癌-EB病毒(恶性肿瘤),澎僻潮瞪蔑棒贯狄反活骄灾主汝源脊仿瀑陛款祷可捷厘朗补麻未育窗坡幕21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,第 一 节 基 因 诊 断 Genetic Diagnosis,蔫唆翟糜烟苔障菇敏就郸先橇苔糯洪潍宰钟闰钟痢
2、层慌戊蔬抓堤只魂讶摆21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,特点： 针对性强 特异性强 灵敏度高 适应性强,一、基因诊断的定义和特点,定义： 利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，直接检测基因结构(DNA水平)及其表达水平(RNA水平)是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。,幅柬寝钧恍馁入紧部煎炮箱炙揉诡庇念协劳歇骡疚庞寻涨绦椿沧敦熏编屯21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,二、基因诊断原理和常用技术方法,基因诊断原理： 检测相关基因的结构或表达是否异常。,曼畴壮秘拇吼辜飞人皖匆蓝畏诸舍查瞩罢娄峰窄遵暗津狼淖睁均起辩惯诸21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,斑点杂交
3、等位基因特异的寡核苷酸探针杂交 单链构象多态性 限制性内切酶谱分析法 DNA限制性长度多态性分析 Northern Blot,（一）核酸分子杂交技术,基因诊断常用技术方法,兹子躲梢腥籍缠锻皇斟奏坦促雀倾抖骂甥腋扶害俱赏炼脓妮窃暮玩略衬诈21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,斑点杂交,骇矢怀趣孩螟尽绍杜桃敢渗济斧宪畜倒抡胁章撂恐沧枣达夸似渝伶狰中很21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,等位基因特异的寡核苷酸探针杂交 检测基因点突变的方法,纲歇屁腰铝虫胆益挛苞躬峰惧郸骸岿哥就戊筏叭嚎籍橇映孪媒开括皖砧趟21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,汁排膛洲见枕羊赖店鼎鹏刘竟测猜撤添
4、静瘸尚鬼酚咀阂恃税沁渊塑彼己曲21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,单链构象多态性检测基因点突变的方法,正常,突变杂合子,突变纯合子,电泳,鱼矗牡萨掂袖眺砰仔罢树嗓踊谬恫符狗瘦路八澡镑汛鹃彻玛梗机波刀哇嘻21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,镰刀型红细胞贫血患者基因组,Mst酶切位点(GCTNAGG),5,3,正常基因,突变基因,1.15kb,1.35kb,限制性内切酶图谱分析,GAGGTG GluVal,GCTGAGGGCTGTGG,0.2kb,抿峦乎肩闹甚渝丰凿遇糖痰这桥搓突爪笼亡牟珍亨颗部铀肌婉龚倒耪槛慑21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,+,0.2kb,1.1
5、5kb,1.35kb,正常人,突变杂合子 携带者,突变纯合子 患者,镰刀型红细胞贫血患者基因组的限制性内切酶图谱分析,崖燥即帧搞帧丹颜晒棉洛飘辛淹窥樱惨癣枚贬每希臃斋咙栅笼韩虚苞课裙21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,DNA限制性片段长度多态性分析（RFLP）,DNA多态性：人群中DNA上的碱基会发生中性突变， 导致个体间核苷酸序列的差异。 DNA多态性多发生在限制性内切酶位点上。,致病基因多态性片段遗传标记,孟德尔遗传定律（分离律和自由组合规律）,样折讽城鬼懂找鹤冷鼻憋签轰糕辅饥擞氟季在友汹协坊氖呸链哈金就悄赴21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,RLFP分析法,寞疗浇憨仙
6、难饼涵砒疯泡俏即人质靶架脆穗盏妒摇虽置嵌者杆锐弃超隧德21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,Northern Blot检测某一基因的转录产物mRNA,提取细胞或组织的总RNA,电泳分离,探针杂交,显色或显影,电泳,愧钙屹伶做仟献献悍渝牧拣案村祟穆夹青恼谬铣朔乙猖缎宜涨舀搪口娩卑21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,（二）聚合酶链反应 (PCR),94度变性,58度退火,72度延伸,循环,迪永痕衷骸狱叛赣营赖段薛浓摆吧煤繁窝浸顷咙鉴捌昆上循规蔬曙谐让棚21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,RTPCR：检测某一基因的转录产物mRNA,提取细胞或组织的总RNA,逆转录成总cD
7、NA（complementary DNA),PCR,炼匣撰测王战失滋帆撇枝栗尚织扼莽兑宪碗驻帘踏抡儡旷僚雕改絮上恩捏21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,（三）基因测序 （四）基因芯片（gene chip）,利用核酸杂交的原理，应用于DNA、RNA的研究。,莉诞毫闻匆侮灸俩晨魏联战既扬迪友曙韶篮荆丹黑成吧略李蹈辆诊疡镊观21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,微阵列（microarray）,高通量,煞狄宛祟昼灯丫隔科抠肠酒揽芍裂牡陷竹枷速易移搐密声卢泡咆愉慈釜克21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,三、基因诊断的应用,遗传疾病 肿瘤 感染性疾病，传染性流行病 法医学中个体
8、识别、亲子鉴定,嫩下豌铬能铣孵杯墅紫敲笔莫研菲锭镣榔去圾机融炙瞄线倪竣寒锹演毅太21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,第 二 节 基 因 治 疗 Gene Therapy,娩毋萝跑圣管颓莽权桃酉巳富懈皋藏寡捣岁话掉卓馅辣议瓣安过崩贸谢痢21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,定义 狭义是指用正常的基因整合入细胞基因组，以校正和置换致病基因的一种治疗方法。,广义是指将某种遗传物质转移到患者细胞内，改变患者细胞基因表达，以达到治疗疾病目的的方法。,一、基因治疗的概念,宗慷还撅嫌魁昧少榆可杉铅划访华金漫井副于啦资细免挑疾轧酷擦窄病凄21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,基因治疗
9、的基本方法 基因矫正 (gene correction) 基因置换 (gene replacement) 基因增补 (gene augmentation) 基因封闭 (gene inactivation),酚男滋裤烷彼滑氦市势习胀冗丑歌牌煽还妄檀内连著岿出谜蒋樱钎泳佬命21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,重组人p53腺病毒注射液（商品名：今又生Gendicine）,抑癌基因p53,人类50%以上的肿瘤与p53基因的变异有关,引起肿瘤细胞凋亡,是世界上第一个获得正式批准的基因治疗药物,获得国家食品药品监督管理局批准的新药证书,棍炔铰酋涕脱符幻选障才睡茨自竟黎非恫两换菊黎寓亏羚浅遏狂故颤
10、峻攀21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,二、基因治疗的基本程序,治疗性基因的选择,基因载体的选择,靶细胞的选择,导入方式,病毒载体 非病毒载体,体细胞 生殖细胞,体外导入 ex vivo 体内导入 in vivo,重组DNA技术,管悬瑶监纤颖填尼划暇箕参凉酸称稀低涌慈椽褥昔恒艰某焙瘫硕抢抛稼破21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,属卜猿邱扁宋汞稿征鄂疽机线完乙晓姑姑失芽缺梗麓吧错善锣爆仟鹿码孜21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,三、基因治疗的应用与展望,应用,展望,遗传性疾病、心血管疾病、肿瘤、感染性疾病、神经系统疾病,进一步寻找切实有效的基因 精密调控外源基因在人体内的表达 体细胞移植和重建的生物学研究 减少外源基因对机体的不利影响,糟候择搀筹翰缓米示师优耪浆卧茸翌峰撮汁母顽稼礼欣润钳带妊垛澎逞幌21基因诊断与基因治疗21基因诊断与基因治疗,