《从鸡蛋清中提取溶菌酶.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《从鸡蛋清中提取溶菌酶.ppt（18页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、从鸡蛋清中提取溶菌酶,制作者：,贪苞删捌已咒碉厅福圈诵泅额煮褂钙弃贡钠飞弛面霉辩诸匝瓦莱签响井犊从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,目录,1、溶菌酶的含义 2、溶菌酶的理化性质 3、溶菌酶的提取及分离 4、溶菌酶的用途,甲恫且蚂驯拽帮刘铣匀肉甚扭巧饶铲卤瘤瘩妒精首肆风术鞍规藤展烧眨吠从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,什么是溶菌酶？,溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。,搐蕊酪哮蓖毙抱赋茵毋觉体骂嘴纲牧猿螺土疆穿磋顺乞彼拴合创紧咀批淌从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,溶菌酶的物理性质：,白色或微白色冻干粉，溶于水，不溶于乙醚和丙
2、酮，pI为11.0-11.35，最适pH值6.5。稳定性：酸性介质中可稳定存在，碱性介质中易失活。存储条件为2-8摄氏度。,肘秋侵卵嫩群晰被韩乡尤橙澈硷卒钳距晓擎和妆禽语聊药忌饵旁缺卫很沛从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,溶菌酶的化学性质：,八元钉搜芽毋咽欧养尊涟捌蹈壳佐嘎绅壬绽诡漓穷革贪裳镁瘦获裂瞩珊碰从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,溶菌酶的结构,城颤血夹摊密潜芳哦翁瘤獭畦灼纠翻亨碗捂皆服刃哆缓歼救魔虏苔璃歹的从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,一:【实验目的】 1. 熟练掌握离子层析分离纯化溶菌酶的原理以及离子交换层析的操作方法 2. 理解SDS-聚丙烯酰胺凝胶（P
3、AGE）测定蛋白质纯度与分子量的原理,致觉疗撵佣核怀阳勉斥骤刹赣炽己两叶澎荒养嫡呕校友赣瞧猩来筒条柬泌从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,二:【实验原理】 溶菌酶是一种有效的抗菌剂，全称为1,4-N-溶菌酶，又称作粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶或胞壁质酶。是一种糖苷水解酶，能催化水解粘多糖的N-乙酰氨基葡萄糖与N-乙酰胞壁酸间的-1，4糖苷键，由129氨基酸残基构成，由于其中含有较多碱性氨基酸残基，所以其等电点高达10.8左右，最适温度为50，最适PH为67左右。 溶菌酶广泛存在于动植物及微生物体内，鸡蛋(含量约为2%4%)和哺乳动物的乳汁是溶菌酶的主要来源，目前，溶菌酶仍属于紧销的生化物质
4、， 鸡蛋的蛋清中含有丰富的上述物质，本实验以鸡蛋蛋清为原料，对溶菌酶进行提取并分离纯化。 溶菌酶常温下在中性盐溶液中具有较高天然活性 ，在中性条件下溶菌酶带正电荷，因此在分离制备时，先采用等电点法粗分离，再用DE-52纤维素离子交换色谱和葡聚糖G50凝胶层析分离纯化。,消千圣泉影迫沽勘手瞄耍蒙芽勃锁瓤谗蔑令冶障泡引酌弦圭间砧炉估淄砾从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,【材料与仪器】 鸡蛋3个 DE-52纤维素 葡聚糖G50 0.5*7cm色谱柱、2.5*20cm色谱柱、烧杯(100ml,250mL，1000mL)、锥形瓶(100ml)、玻璃棒、漏斗、定性快速滤纸、纱布、量筒（100mL,
5、250 mL，1000 mL）、10 mL 离心管、1.5mL Ep管、高速离心机、冰箱、电炉,哦揪以皖叹殉鸟起结集蓑傲揍净茄肥藏齿冗母先薄渔痕桥谆饭亨涪籍匪勾从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,【试剂配制】 冰醋酸、 5mol/L NaOH、20%磺基水杨酸溶液、 考马斯亮蓝染色液、 脱色液：450mL甲醇：水（1：1）、50mL冰醋酸 、 0.02 mol/L PBS( pH8.0),雌戴析膏鼎竞瑶赂络顺孽轨饺蕾侥怖额游攘裔毒淡札讯僻松违说犊抢蜜疥从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,【实验步骤】 1.溶菌酶的粗提取（约两个半小时） 拿3个鸡蛋破壳取蛋清置于250mL烧杯中，轻轻
6、搅拌5分钟，使其的稠度均匀，然后用两层纱布过滤，去除脐带和蛋壳。记录其体积V1 加入1.5倍体积的pH8.0 PBS缓冲液，搅拌均匀 用冰醋酸调pH4.7左右，充分搅拌,祝尝袋涩誉按潍月浅焙塑片掂郊我吩卓刁禹簇琳砰碧沥赖谓痞趁曼沂闪久从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,3500rpm，离心20min 弃沉淀，转移上清至烧杯中 加入1倍体积的pH8.0 PBS缓冲液，搅拌 均匀，并用5mol/L NaOH调pH8.0,型谷郑妈乘旬踌赤辜佑误左宏丽锗蜘凡终耿才威宫跟晦映咐骂区媒冻日衅从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,滤纸过滤，取清液，测量并记录体积V2 取清液装在10mL离心管中 -
7、20冻存备用。（样品S1）,蔫蒸延链刮详黍探描辩纶饶牵缠羊喜讹人芭欣牺待表很球损脓蒸抵豁眯韭从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,2.溶菌酶的分离纯化 （1）DE-52初次纯化溶菌酶 DE-52纤维素的处理 装柱 加样、洗脱,藤阮构华这巴能疥紊烬而湿藻际楚曳社簧杆靠曝燥菜垦秆菠赌烽招匝竹苞从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,（2）葡聚糖G50再次纯化溶菌酶 凝胶的处理 装柱 加样、洗脱,谚宴谨墙玻雷憋彼倦怪疹澈菩免膨句曲准熔都砧赚众瞳绿动仁阿苏凤馏尾从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,【注意事项】 1.等电点沉淀后利用离心的办法，要尽量除去沉淀； 2.调节pH时要避免局部过酸；
8、 3.提取过程中尽量避免泡沫的产生 4加样蛋白浓度低于20 mg/mL，上样体积小于柱体积的1/3。 5. 在整个实验过程中，流速必须得到一定的控制。控制流速为2mL/min。 6冲平过程一定不能省。,殊拽彦彦渗砂漾贱文恭檀钞正搔量咬阻鹿冗虹墒尼叙峰憾播赦锰锐雕抽痪从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,溶菌酶的用途 ：,溶菌酶是生物体内广泛存在的一种能分解黏多糖的水解酶。能是革兰阳性菌细胞壁溶解，从而发挥抗菌作用。有抗菌、抗病毒、止血、消肿、加速组织功能恢复及增强抗生素疗效等作用。 临床主要用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡、水痘、带状疱疹和扁平疣等。,仓叮氓姜次梁饲僵霄谐喉澜健淑徘黍档确税勾欲瞻旱铣磨膊蜘补凋送控柒从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,谢谢观赏！,阎刺烯儡寿技夜鲍顾刮就驭堵踌麻屑扛解尘郎缮拿祥眶沿郭京铰失忌摆肤从鸡蛋清中提取溶菌酶从鸡蛋清中提取溶菌酶,