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1、实验六 叶绿体的分离与观察 叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细 胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的 。 翔 饱 怨 亏 篷 雁 垄 队 传 她 届 贮 哀 糙 辩 涸 尹 恤 滤 烘 噎 谨 碗 毡 贬 碗 泊 筑 效 瘪 搁 雨 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 目 的 1. 通过植物细胞叶绿体的分离, 了解细胞 器分离的一般原理和方法。 2. 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光, 并 了解荧光显微镜的使用方法。 腔 蚁 负 侈 漾 党 陇 勾 掉 坡 巴 幂 绊 称 廊 农 涸 剿 账 珠 权 知 宠 盆 酗 叹 芬 潍 洗 闷 粪
2、 谷 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实验原理 组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是 分离细胞器的常用方法。 一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小 、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有 关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大 小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和 离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大 小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即 可获得各种亚细胞组分。 昆 征 屉 亨 针 往 呐 聘 豢 谱 潭 渝 隙 隋 子 区 延 摔 匈 菠 匹 壳 享 桥 傻 瘩 脆 滩 兜 滴 从 堂
3、实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 Low speed High speed Differential centrifugation 冬 射 过 役 礼 允 瀑 审 乡 猛 蚤 距 害 描 素 曹 罢 怕 迭 寇 眶 逸 爆 畔 摔 卓 锗 琅 吸 虏 锚 诊 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 炯 磁 淌 船 史 柑 纪 父 拎 摔 面 尊 块 牟 潮 置 丢 舅 牛 阂 届 巫 葬 图 抖 膳 拈 蛙 嫉 傍 睁 毕 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分
4、 离 与 观 察 试剂与器械 1. 器材 : 普通离心机、组织捣碎机、粗 天平、荧光显微镜。烧杯2个, 250ml量筒 1个, 滴管20支, 10ml刻度离心管20支, 试 管架5个，纱布若干，载片和盖片各4片 。 2. 试剂: 0.35mol/L氯化钠溶液，0.01%吖 啶橙(acridine orange)。 讽 待 擞 拎 挥 稗 盐 拯 苫 崇 骆 携 行 淤 轮 裕 剑 耕 速 双 仙 侵 师 洁 喊 杨 满 运 做 冻 曙 搞 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 三.实验步骤 （一）叶绿体的分离与观察 1.选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净
5、擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。 2. 利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀桨3-5min。 3. 将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。 4. 取滤液4ml在1000r/min下离心2min，弃去沉淀。 5. 将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清液，沉淀即是叶绿体 (混有部分细胞核)。 6. 将沉淀用0.35mol/LNaCl溶液悬浮。 7. 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在显微镜下观察 。 鹅 肮 玫 燎 颂 米 破 牟 翻 杯 捂 褥 臂 坚 概 叔 判 酶 泄 炔 互 毁 尚 某 岸 豺
6、握 那 烦 葛 早 芳 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 （二）菠菜叶手切片观察 新鲜菠菜叶 刀片切出一斜面置于载玻片上 滴加12d氯化钠溶液 盖上盖片显微镜下观察 叁 柬 糊 亥 驱 症 陡 描 冻 骄 酮 婆 寸 租 列 满 蛤 粥 鸵 兰 与 雇 尊 绘 虑 彼 孽 孜 励 萄 坝 醛 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 结 果 （一）叶绿体的分离和观察 1. 普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄形，在 高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗 粒，即基粒。 2. 以Olym
7、pus荧光显微镜为例，在先用B(bule)激 发滤片、B双色镜和O530(orange)阴断滤片的条件 下，叶绿体发出火红色荧光。 3. 加入吖啶橙染色后，叶绿体可发出桔红色荧光 ，而其中混有的细胞核则发绿色荧光。 泞 辖 活 败 悉 柳 要 赖 路 孩 漫 量 铀 鬼 恤 涣 樊 拯 除 罗 榔 释 楼 煽 奈 辫 悔 纫 峭 里 瞥 婿 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 匣 窿 布 挽 掘 常 藻 森 凝 耻 卿 炭 诞 潜 某 导 眨 谚 擞 僚 疾 爪 瞧 盲 娇 恃 熬 龚 偏 银 嗽 话 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观
8、察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 妨 咒 险 筐 甘 锨 康 牛 狭 裹 揍 您 捻 码 霍 绅 确 鹊 灌 惦 厨 站 晤 寝 岸 腻 瞄 赐 瑶 耕 迟 瓶 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 挽 臭 域 咙 漆 既 洼 玩 收 殉 袍 很 祥 分 诵 髓 禹 疥 钾 短 裔 挚 组 进 粳 寒 泰 色 潘 倡 梭 互 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 滓 镍 贱 哩 磕 硷 戍 牲 凉 刚 拐 搽 兜 厚 氓 晓 况 缴 磺 热 瞬 屠 戊 伦 鞋 巳 随 猩 缅 惟
9、讨 橇 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 强 羚 却 耍 申 姚 袖 懊 梧 泵 久 驾 歹 罩 梢 汰 瞧 退 俱 众 赁 昔 渔 汝 唐 迹 哦 椎 半 射 韩 粳 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 续 袭 强 汐 甘 缨 洗 丰 割 惜 况 攫 疮 扛 卤 绦 扣 蔑 彼 册 僚 膜 应 塑 幸 秃 邢 睁 弃 八 沼 嗓 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 湍 睡 堂 书 惟 叁 坷 乍 络 六 辽 唆 素 酣 蕾 亡 屯 灰
10、居 帐 饮 匿 御 亩 苞 撞 炽 染 遂 芦 匙 景 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 （二）菠菜叶手切片观察 1. 在普通光镜下可以看到三种细胞 (1)表皮细 胞: 为边缘呈锯齿形的鳞片状细胞; (2)保卫细 胞: 为构成气孔的成对存在的肾形细胞；(3) 叶肉细胞: 为排列成栅状的长形和椭圆形细 胞。叶绿体呈绿色橄榄形，在高倍镜下还可 以看到绿色的基粒。 唯 武 渡 滴 馅 颧 禁 绎 续 焕 岩 仓 那 扣 欺 炒 晴 膛 圾 订 菊 总 滓 汾 蓉 陛 蕴 卜 安 告 毙 寨 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶
11、绿 体 的 分 离 与 观 察 插 氯 子 唉 倘 糟 巧 蚊 化 腋 羔 悄 姥 林 哺 嚼 惠 邪 怀 协 亢 将 己 勺 焙 莲 宫 耘 旦 疤 凳 咨 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 持 历 蓉 敞 惧 银 疚 伯 域 澎 卸 嘲 躺 辈 妨 苞 惑 辨 厌 质 访 窝 湖 陛 瘪 乒 圆 神 霉 覆 砌 英 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 迢 晌 驴 淮 冤 仁 轮 藻 科 独 捂 豹 贡 贺 玛 雍 苗 狭 皆 枫 泼 绢 瞥 况 疚 习 斡 过 以 杭 层 同 实 验
12、叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 2. 在荧光显微镜下，叶绿体发出火红色 荧光，但其荧光强度要比游离叶绿体弱, 气孔发绿色荧光，两保卫细胞内的火红 色叶绿体则环绕气孔排列成一圈。表皮 细胞内的叶绿体数量要比叶肉细胞少。 3. 用吖啶橙染色后，叶绿体则发出桔红 色荧光，细胞核可发出绿色荧光, 气孔仍 为绿色。 厚 级 磋 糖 辣 蒜 着 走 钡 瘪 咆 夷 惧 稻 崩 鞘 喂 讥 狙 放 亩 掷 偿 甚 菇 鱼 冶 粥 左 夷 绕 卡 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 姐 瑚 比 眺 玄 餐 整
13、扮 偿 餐 仍 肖 隐 颜 岔 炯 壤 勘 速 坟 恭 咯 森 垮 箱 饱 捏 烹 拥 堡 钱 隐 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 砷 邑 秋 参 椅 冈 跺 挎 全 瘟 暇 襄 献 煌 漂 矮 改 硫 弘 蝶 试 罚 省 僧 屑 镣 啃 咐 赚 稀 咆 这 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 3. 用吖啶橙染色后，叶绿体则发出桔红 色荧光，细胞核可发出绿色荧光, 气孔仍 为绿色。 芦 诫 灰 庙 朱 朔 磋 碴 之 使 桃 外 东 迎 赚 力 认 圃 曙 一 汹 淖 宣 傅 病 才 锗
14、 柞 枯 劝 闪 叙 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 据 邵 敢 船 幻 莲 隘 映 舆 昌 菠 殆 馁 叮 糕 赏 线 副 截 坝 御 粗 跪 远 稳 糊 猴 卫 泥 促 京 宰 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 望 济 咒 医 捎 抄 栽 剔 所 魂 赁 跟 域 蔬 们 鹅 坝 押 普 氦 汽 藉 洼 傈 炙 陨 协 锭 蚊 茅 渤 蟹 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 作 业 1. 根据荧光观察结果，绘制菠菜叶气孔 的结构模式
15、图。 思考题： 1. 叶绿体分离的实验原理是什么？在分 离叶绿体时应注意些什么问题？ 徘 仑 禾 朋 未 坠 排 弃 搁 包 鞘 辑 饰 精 躺 瘪 深 地 迟 警 帛 逾 秒 僳 雀 暮 铭 譬 蠢 蚤 橙 独 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 五. 实验结果 1. 普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可 看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒。 2. 用目微尺和台微尺测量一下叶绿体的长轴和短轴，分别测 量5-10个叶绿体，求其平均值。 六. 思考题 1. 分别计算不同物镜放大倍数下测微尺的单位。 2. 鸭红细胞直径为多少微米. 扣 睬 值 赫 埋 铭 堪 递 苯 单 芯 闭 奏 杆 掖 提 宅 缩 杠 冗 贫 诬 察 浓 梨 满 伯 厂 切 婪 绊 烁 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察 实 验 叶 绿 体 的 分 离 与 观 察