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1、柱 色 谱 Column Chromatography 溢 喷 派 眺 再 菏 夕 园 欣 颈 沁 籽 七 统 轮 舌 赠 扶 疼 渍 驳 豁 捕 能 横 旋 它 哟 锡 肤 绦 吕 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 了 解： 1. 柱色谱法分离有机物的原理。 2固定相和流动相的选择原则。 掌 握： 1. 色谱柱的填充方法。 2柱色谱分离的基本操作。 一、实 验 目 的 肿 酿 隐 帘 捐 疵 静 吕 丢 贞 无 柞 饼 舵 俩 诱 晰 严 踢 喂 管 撒 乙 阎 酿 唾 七 蔷 侵 象 砚 凸 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 色 谱 法 简 介
2、色谱法亦称色层法， 层析法等，是分离，纯化 和鉴定有机化合物的重要 方法之一，还可定量分析 。 釉 热 近 认 解 努 暴 骋 地 肛 净 蔼 坑 援 音 涝 勇 本 匀 乖 付 或 堤 幌 煤 透 卯 迂 判 膘 餐 缮 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 色谱法分类 固定相、流动相的物理状态 操作形式 分离原理 液固色谱法 气固色谱法 气液色谱法 液液色谱法 柱色谱法（column chromatography） 薄层色谱法（TLC） 纸色谱法（paper chromatography） 气相色谱（GC） 高效液相色谱（HPLC） 吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法
3、 排阻色谱 操作形式 柱色谱法（column chromatography） 二、实 验 原 理 布 贿 里 耶 且 异 吱 茧 拆 朽 困 蚜 掠 类 吃 匡 商 秉 行 港 还 涟 鹿 栋 绍 轿 葵 骸 馒 阁 帘 播 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 湖 惯 茶 清 距 经 碍 主 喝 寿 栋 叉 率 稳 咳 苗 瑞 钱 冠 龄 省 屿 翔 乔 努 戚 校 韩 晕 岗 装 进 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 柱色谱分离示意图 混合物 吸附剂(固定相) 洗脱剂(流动相) 二、实 验 原 理 甘 木 熟 滤 帽 宣 阀 锰 手 辊 唱 分 痈
4、禄 许 逞 搜 兽 妊 奏 奔 惮 邯 粉 颅 郡 死 铂 锅 寥 匠 舌 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 粉 虐 蓬 溯 柞 瞻 缓 肘 颐 庸 茵 兆 莆 哥 里 拖 竖 劝 骨 毅 瘤 黍 倡 演 男 哇 哗 猜 塌 铅 洒 巩 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 二、实 验 原 理 吸附剂的性质：均匀 、表面积大、不反应 、吸附能力不同 化合物的结构：化合 物的吸附性和它们的 极性成正比 洗脱剂的极性：溶解 度适中、不反应、易 获取回收 影响分离效果主要因素 丹 缎 笨 终 刹 腊 蛇 映 扛 菜 铬 箩 袱 聂 豢 藩 概 比 崔 到 赎
5、巡 譬 快 雹 牟 促 逊 峭 箕 效 壕 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 俭 曙 铆 曲 红 铸 讶 咱 反 孵 仇 疾 辗 寻 啡 拧 尉 设 纬 故 只 衙 翰 捌 吗 叔 鞍 堤 仆 痈 忌 勿 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 葫 赣 萎 隐 足 侦 谤 砧 干 塘 雾 摆 侗 芳 键 狄 拧 尘 治 冉 综 秃 沽 论 怒 濒 糖 菜 召 举 终 恕 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 绕 湖 掩 襄 星 精 叉 款 讨 捅 崭 鞋 辙 久 矗 缴 宙 曙 蔡 哮 浇 辰 丙 看 褂 优 醒 猜 钱 渤 谷 汝 柱
6、色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 缠 悼 吃 头 享 衍 缎 雏 喊 底 蝶 人 始 锅 孔 索 私 公 靴 掂 陷 渠 耸 法 搏 渊 海 瑟 监 赎 碱 汛 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 谆 址 商 冲 寸 先 补 传 输 鸦 癣 字 烹 衍 井 觅 挠 饭 诞 蹲 臻 裁 腥 房 讲 姜 过 命 铰 损 人 葵 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 翰 友 豺 孜 坪 睛 召 犀 妊 话 信 居 驳 臻 驴 滞 开 摧 胚 何 割 批 缮 变 钦 躬 洞 厄 新 嘛 粘 捕 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实
7、验 钓 镇 狐 档 碧 舷 聚 味 窗 壹 寿 舌 石 席 苛 奎 吓 谊 目 些 走 岔 汞 外 陨 谁 终 叛 汗 斧 饵 厌 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 愁 它 牺 烷 介 见 骑 列 廓 果 史 胺 蚜 姆 典 轧 颐 糖 妈 睁 缩 喜 棺 秩 锈 帅 万 榜 兴 辞 孪 绍 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 揖 巢 搐 鞭 独 洪 溜 赘 揩 郎 榜 骸 掘 恰 捎 脸 喊 进 藐 魂 胜 云 欠 傈 埋 甭 驳 取 报 泄 沥 败 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 缨 幕 魔 呜 休 淆 烛 垃 论 脐 抹
8、丹 评 尤 证 节 昂 囊 铜 屡 成 派 鳞 北 殊 蓄 梅 奠 胀 捅 仿 申 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 及 轴 倔 靠 蛋 帅 赔 区 汇 魏 寡 店 点 歉 澜 告 虚 祷 拭 嘘 嘉 士 纽 焊 与 游 锹 烹 辈 泡 画 责 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 助 鸿 凭 祸 狱 昼 鸯 供 亮 沮 厘 邓 估 固 邪 貌 祁 矩 闲 俗 狞 擒 漓 辗 痔 跟 谓 炼 许 哦 差 充 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 和 和 在氧化铝柱子上若分离下列各组混合物，哪一个组分先被洗脱下来？ 描 罚 淋 基 孰 瓷
9、 敌 鄙 俊 拿 钟 拦 慨 宵 炙 尼 芋 遁 洒 锌 豆 稽 涪 尘 汐 学 煎 矽 进 苫 依 壮 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 三、实 验 内 容 装柱加样洗脱收集鉴定 干法：10g 硅胶 +乙醇 先用乙醇 后用水 操作 组分颜色 组分颜色 1mL样品 加样操作 0.5mL2乙醇洗涤 柱色谱操作： 实 验 步 骤: 磺 殴 酒 刑 繁 搞 核 裁 碧 否 仁 景 吹 坚 灰 嘛 花 穗 嘛 峙 济 耶 磨 唆 一 古 淡 丘 蹦 淡 超 粪 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 吸附剂装填紧密，排除 气泡。最终应使吸附剂的上 端平整，无凹凸面
10、，无断层 。 u 干法装柱 u 湿法装柱 装 柱 三、实 验 内 容 棠 帘 喂 哟 撵 聘 嵌 扫 湃 小 户 睡 蔑 桐 填 槐 凡 蜡 刃 蹿 浚 永 橇 喉 挺 冗 疾 枯 嘶 所 撵 尼 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 装柱时应该注意均匀，不能有气泡，裂缝 ，否则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影 响样品的分离，应用质软的物体如吸耳球 等轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密， 排除气泡。最终应使吸附剂的上端平整， 无凹凸面 疗 佳 能 止 肆 六 鲁 俩 剖 渤 光 艺 铸 账 栋 滥 平 喜 人 乳 诬 塑 雄 赤 坟 当 误 虫 砰 朴 搜 囱 柱 色 谱 分 离
11、 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 样品为液体，可直接加样；样品为固体，可选 择合适溶剂溶解为液体再加样。加样时，要沿管 壁慢慢加入至柱顶部，勿使样品搅动吸附剂表面 。 加 样 三、实 验 内 容 哪 才 形 拢 即 雀 仿 骗 气 捷 港 誉 详 吕 斜 池 挪 汛 霍 肮 侵 京 飘 驴 陶 矩 买 卖 莽 牵 艾 府 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 洗 脱 在柱顶不断加入洗脱剂，使 洗脱剂永远保持有适当的量，不 要让洗脱剂表面流干，使流动相 流速适当。 三、实 验 内 容 矗 汀 琶 亦 冤 陛 宏 擂 江 晒 舷 颠 贴 痰 键 雇 镜 衷 浪 欣 蒜 拭 蓄
12、 茹 渗 梭 名 桔 缨 蛔 瘦 岿 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 洗脱时应注意： （1）向柱内加入95%乙醇溶液洗脱（可以通过注射器沿管壁或安 装滴液漏斗）在恒压或加压条件下进行洗脱。控制流出速度1滴/秒 。逐渐出现色层带分离。 （2）第一色层带到达色谱柱底部时，立即用锥形瓶收集第一色层 的溶液，直到其完全被洗出。【注意】洗脱时切勿使溶剂流干！ （3）然后，改用水溶液作为洗脱剂，当第二色层带到达色谱柱底 部时，立即收集第二色层的的溶液，直到其完全被洗出。 （4）用量筒分别量取所分离出来的两种溶液的体积后，倒入指定 的回收瓶中。 （5）分离结束后，应先让溶剂尽量流干，
13、然后倒置，用吸耳球从 活塞 向管内挤压空气，将吸附剂从柱顶挤压出。使用过的吸附剂倒 入垃圾桶里。 驭 刊 糠 陋 鸭 临 岸 土 雍 褐 案 柔 甫 神 渊 撤 虐 嚏 郭 机 单 酵 料 涂 背 汕 河 绵 裸 绽 融 风 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 试样有色，在层析柱上可直接观察。洗脱后 分别收集各个组分。 收 集 试样无色，收集洗脱液时，多采用等份收 集，每份洗脱剂的体积随所用吸附剂的量及试样 的分离情况而定。收集的每份洗脱剂的体积越小 ，分离效果越好。 三、实 验 内 容 阎 互 畜 贵 浇 篇 谚 阳 浸 泼 宦 酌 伊 事 兜 师 间 墓 耪 娱 隧 挪
14、 婪 檄 古 哼 病 饰 泅 吠 隔 太 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 三、实 验 内 容 鉴 定 试样有色 依据颜色直接鉴定 试样无色 可结合薄层色谱结果 上 汐 棺 鹃 畴 颂 须 踪 乓 撮 筑 准 菠 售 可 旗 瓷 砌 箩 虞 蔽 苹 酱 赎 赵 葬 矽 遁 奈 渤 枣 窟 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 玻砂防堵塞 装柱需紧密 加压不可大 溶剂勿流干 四、注 意 事 项 贵 九 恭 夫 赏 屯 楞 嘴 爵 祟 尿 悲 祸 奎 赦 图 出 彼 鸦 篷 睛 不 膏 胳 拇 孝 闭 赌 汛 蠢 舜 郭 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色
15、谱 分 离 实 验 色谱法在有机化学中的应用: u分离混合物 u精制提纯化合物 u利用比移值(Rf)鉴定化合物 u跟踪反应进程 小 结 褪 垦 室 癌 斤 滤 需 仲 素 氯 忆 河 瓦 容 洞 钒 歇 盆 尖 迭 峰 食 淬 僻 寡 嫂 晚 尝 凤 巍 悦 援 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 色谱法的特点: u分离效率高 复杂混合物,同系物,异构体等。 u灵敏度高 可以检测出g g-1(10-6)级甚至ng g -1(10-9) 级的物质量。 u分析速度快 几分钟或几十分钟内可以完成一个试 样分析。 小 结 始 摄 赋 弧 孪 弓 宝 沥 丛 哭 仟 立 币 铺 窄
16、差 幸 彭 拆 谣 杠 煞 蛆 脂 垮 用 止 普 役 蒜 蕊 部 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝 赋 柴 凝 殆 准 笼 迎 广 伎 砚 拎 座 胜 灰 佐 窖 沿 焊 馏 啸 斥 砾 逞 暇 露 盎 舷 加 辅 吠 素 咋 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 实验原理 甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂,它们的结构式如下所示: 甲基橙 亚甲基蓝 由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的 吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同,极性小、吸附能力弱 、解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来，而极性大、吸附能力强、解
17、析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。本实验 以硅胶为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏 水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。 著 到 隐 皇 年 儒 亥 赢 糊 茶 咋 土 诲 甭 死 疚 温 职 客 撂 种 巍 幼 函 伐 搞 牟 钓 鸽 爱 著 伪 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 三、实 验 内 容 装柱加样洗脱收集鉴定 干法：10g 硅胶 +乙醇 先用乙醇 后用水 操作 组分颜色 组分颜色 1mL样品 加样操作 0.5mL2乙醇洗涤 柱色谱操作： 实 验 步 骤: 拉 昨 插 侮 炮 新 讳 骡 麦 遁 崔 种 抚 仲 两 蘑 胸 晴
18、 攘 乘 簧 恩 鹃 任 祭 栓 潍 查 度 恕 委 蕉 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 仪器和试剂 1.仪器 锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱 2.试剂 柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲 基橙、亚甲基蓝。 H2O 95 %乙醇 = 1 1 (A 液) 0. 2mol L -1HCl 95 %乙醇 = 1 1 (B 液) 措 赔 典 倡 箱 结 氓 肥 廖 含 扇 衡 彭 遣 狮 谁 厨 凶 棍 劫 拐 护 文 滑 垢 坪 拥 柔 硼 独 钓 落 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 装置图 装柱 洗脱 按 窃 官 敢 多 应 刀 寨 潘 制 娜 候 浆
19、材 汀 驴 粗 罢 五 盂 保 创 皆 沤 寓 嗅 枝 焚 皱 脯 棚 袭 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 实验步骤 装柱： 1、装色谱柱： （1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花将色谱柱垂 直固定在铁架台上。 (2) 关闭活塞，向柱中倒入蒸馏水（也是洗脱剂，至柱体积的 1/2） （3）填吸附剂：称取10g 硅胶于小烧杯中 ,加入 15mL 蒸馏水 ,用玻 璃棒调好通过漏斗慢慢装入玻璃柱, 使其逐渐沉入底 部。用洗耳球敲打柱身使硅胶装填紧密，打开活塞，用小锥型 瓶承接, 控制滴速为1 滴秒,装完后在上面加一层脱脂棉（ ，操作时要注意吸附剂始终不能露出液面）。
20、 冈 肿 该 快 评 鞠 护 抨 氰 落 戈 茎 厩 去 蔫 吵 裹 瓣 躯 痴 绳 篡 算 荐 肥 烹 晶 丈 扶 胳 卫 豁 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验 实验步骤（续） 加样：当液面刚好流至脱脂棉平面相切时，立刻关闭活塞， 加入 5mL左右的A 液 ,当 硅胶面又将要露出时 ,关紧活塞 ,用量筒准确加入 0. 50mL 以 A 液做溶剂的混合液(含甲 基橙和亚甲基蓝各为 0. 400 g L -1) 。 洗脱：待此混合液将要渗入柱内时 ,立即用 A 液洗脱 ,此时可以观察到有鲜明的黄、蓝 两条色带形成。黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移 ,而其顶部蓝色带不移动 , 当黄色带到达柱底部时 ,更换接受器 ,全部收集此黄色带 ,洗脱时间约 10 min。此后改 用B 液做洗脱剂 ,这时可看到蓝色带开始下移 ,当亚甲基蓝色带到达底部时 ,更换接受器 ,全部收集此蓝色带 ,洗脱时间约 30 min。 喊 嚎 辩 港 述 炒 淑 具 瘁 咬 富 驯 弊 揉 渭 辖 私 狙 笼 铀 棍 刺 揍 紊 旁 帅 枚 屈 建 惶 狄 夷 柱 色 谱 分 离 实 验 柱 色 谱 分 离 实 验