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1、第7章 蛋白质的分离、纯化和表征 p290 一、蛋白质的酸碱性质 二、蛋白质分子的大小与形状 三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 四、蛋白质分离纯化的一般原则 五、蛋白质的分离纯化方法 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 惯 盈 回 袒 个 粪 仅 哇 渠 肉 炒 规 概 涛 标 即 贡 扣 役 卜 嗽 霜 扒 肩 缕 语 沫 踏 蜡 挣 曳 股 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 一、蛋白质的酸碱性质 蛋白质分子由氨基酸组成，在蛋白质分子中保存着游离 的-氨基和-羧基及侧链
2、上的各种功能团，所以其物理化 学性质有些与氨基酸相同。 蛋白质也是一类两性电解质，能和酸或碱发生作用。在 蛋白质分子中，可解离基团主要来自侧链上的功能团，这些 基团能解离为带电基团，从而使蛋白质带电荷。 驱 涟 墨 晰 漳 籽 寞 晚 颤 拜 油 霜 侣 封 吮 咎 己 模 织 孤 声 原 弹 暮 垃 氧 关 奴 涣 税 鸳 虹 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 在酸性情况下，蛋白质中的各碱性基团接受质子，使蛋 白质带正电荷； 在碱性情况下，蛋白质中的各酸性基团解离出质
3、子，使 蛋白质带负电荷。 在某一pH值时，白质所带的正电荷与负电荷恰好相等， 即净电荷为零，此时溶液的pH值就是蛋白质的等电点。 每种蛋白质都有它特有的等电点，这也是鉴别蛋白质的 指标之一。 等电点和蛋白质分子中所含氨基酸的种类有关 中性 碱性 酸性。 坝 狗 赦 姻 娃 谤 浦 纸 养 恢 酵 逛 膛 污 搂 琳 睡 地 曰 儒 瑚 蹲 瀑 陪 九 烬 镶 酪 佳 母 辗 锣 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 蛋白质的酸性氨基酸和碱性氨基酸含量 与等电点的关系 蛋白质
4、 酸性氨基酸 每摩尔残基数 碱性氨基酸 每摩尔残基数 碱性/酸性 等电点 37 胃蛋白酶 60.21.0 血清蛋白 血红蛋白 核糖核酸酶 82991.24.7 53881.76.7 7202.99.5 柑 呵 聊 空 荚 簧 驾 冬 绚 功 退 吸 钨 黄 蚊 悉 挛 惊 疆 湖 伴 史 傈 高 酒 丽 啄 砧 碳 曙 除 轩 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 三、蛋白质的胶体性质 与蛋白质的沉淀 (一)蛋白质的胶体性质 (二)蛋白质的沉淀 喂 诛 沪 香 胃 阐 涎
5、崎 扣 甭 烛 宝 炮 骏 蒙 寓 皱 庐 懊 拷 肉 垫 禁 殖 挑 镣 帐 遵 各 秽 叔 咐 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 (一)蛋白质的胶体性质 蛋白质是高分子化合物，由于相对分子质量大 ，它在水溶液中所形成的颗粒具有胶体溶液的特征 如布朗运动、丁道尔现象、电泳现象，不能透过半 透膜以及具有吸附能力等。 利用蛋白质不能透过半透膜的性质，可用羊皮 纸、火棉胶、玻璃纸等来分离纯化蛋白质，这个方 法称为透析法。 饯 爪 鄙 韦 规 凸 徒 套 沙 劫 浊 惨 驼
6、冤 层 婶 渺 烤 主 痘 雌 沟 体 扶 镐 蓖 扣 谨 滞 嘉 尼 钟 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 蛋白质溶液是胶体溶液（如血清、蛋清 ） 胶体条件： 1. 1.大小：大小：1-100nm 2. 2.有水膜：有水膜：表面有许多极性、亲水基团 (-NH3、-COOH、-OH、-SH、-CONH2等）。 3. 3.带相同的电荷带相同的电荷（同性相斥） 氖 硬 况 苇 镑 囱 烫 踌 晌 藕 吵 桩 轮 专 批 冗 搓 僻 振 城 蠢 宾 农 勾 揉 捻 来 豢 羚
7、 添 赃 去 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 (二)蛋白质的沉淀反应 如果在蛋白质溶液中加入适当的试剂，破坏了蛋白质 的水膜或中和了蛋白质的电荷，则蛋白质胶体溶液就不稳 定而出现沉淀现象。 蛋白质可因加入下列试剂而产生沉淀。 1、加高浓度盐类 2、加有机溶剂 3、加重金属盐 4、加某些酸类或生物碱试剂 5、加热变性沉淀 妓 岿 浴 谊 凯 剁 订 赡 疥 灭 蚂 瑚 亩 沙 岛 盟 忘 千 思 假 袖 篮 惨 堵 蠢 庐 疯 茄 吠 拎 窟 森 第 7 章 蛋 白 质
8、 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 加高浓度盐类 硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等可以破坏蛋白质胶体 周围的水膜，同时又中和了蛋白质分子的电荷，因此 使蛋白质产生沉淀，这种加盐使蛋白质沉淀析出的现 象，称为盐析。盐析法是分离制备蛋白质的常用方法 。 根据各种蛋白质的颗粒大小、亲水性的程度不同 ，在盐析时需要盐的浓度也不一致。因此，这种调节 中性盐的浓度使蛋白溶液中的几种蛋白质分段析出的 方法称分段盐析法。 返回 答 削 云 蠕 宝 秘 否 选 俊 勇 石 鸟 峦 叫 揉 紊 菱 瘩 止 组 纯 晾 电
9、 太 删 承 汹 淫 谨 率 搏 疵 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 加有机溶剂 酒精、丙酮等可使蛋白质产生沉淀，这是 由于这些有机溶剂和水有较强的作用，破坏了蛋 白质分子周围的水膜，因此发生沉淀反应。 返回 互 缎 望 铂 唉 豪 瘫 蹄 味 壹 乒 身 寻 模 险 牺 抚 暴 堑 距 狐 面 疽 赴 哥 祟 诡 悉 懒 首 拢 剿 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、
10、 纯 化 和 表 征 1 加重金属盐 氯化高汞、硝酸银、醋酸铅及三氯化铁等，因 为蛋白质在碱性溶液中带负离子，可与这些重金属 的正离子作用而生成不易溶解的盐而沉淀。 返回 几 缔 帝 从 也 辟 昔 陆 樟 啸 峪 团 湖 矢 烹 付 丧 莲 乐 弊 森 支 铣 挥 幽 瑟 富 颇 逆 慨 煮 拽 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 加某些酸类或生物碱试剂 加苦味酸、单宁酸、三氯乙酸等能和蛋白质化合 成不溶解的蛋白质盐而沉淀。 生物碱试剂是指能引起生物碱沉淀的一类试剂，
11、如鞣酸、苦味酸、碘化钾等。 返回 猪 帚 亮 幽 级 梨 轴 权 态 颈 冬 奥 娄 冗 肤 设 掉 袋 怪 秤 酶 宵 绎 李 到 里 念 燥 腺 古 投 飞 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 加热变性沉淀 几乎所有的蛋白质都因加热变性而凝固。少量的 盐类促进蛋白质加热凝固。当蛋白质处于等电点时， 加热凝固最完全最迅速。 加热变性引起蛋白质凝固沉淀的原因可能是由于热 变性使蛋白质天然结构解体，疏水基外露，破坏了水 化层。 返回 绒 千 芹 旬 鳖 索 饯 幂 申 鹏
12、码 咕 坠 份 姐 细 猜 镜 估 剐 潞 镶 谍 描 簇 望 私 猪 阑 辰 链 锌 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 五、蛋白质的分离纯化方法 蛋白质的分离纯化依据 （一）根据分子大小不同的纯化方法 （二）利用溶解度差别的纯化方法 （三）根据电荷不同的纯化方法 （四）利用选择性吸附的纯化方法 笔 隐 使 谰 牛 脸 籽 贰 先 沛 诛 歧 空 喧 壶 哺 峦 梳 聪 仇 飞 肋 诣 序 畅 牛 栓 静 荧 谦 绿 糙 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分
13、离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 蛋白质的分离纯化 依据 分子大小分子大小 溶解度溶解度 电荷电荷 吸附吸附 特异亲和力特异亲和力 其它其它 植 鸵 酉 踊 洁 朴 栗 榆 往 野 坤 悄 赐 小 育 垮 卷 酸 敖 渍 父 塔 蓬 吸 果 疽 若 各 让 狼 蓑 苛 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 （一）根据分子大小不同的纯化方法 1、透析和超过滤：利用蛋白质分子不能通过半透膜而与 小分子
14、分离。 2、密度梯度离心：蛋白质颗粒在具有密度梯度的介质 中离心时，质量和密度大的颗粒比质量和密度小的颗粒沉降 得快，且每种蛋白质颗粒沉降到与其自身密度相等的介质密 度梯度时，即停止不前，最后各种蛋白质在离心管中被分离 成不同的区带。 3、凝胶过滤 活 囤 赋 仁 止 职 咀 鸭 田 哮 锐 滴 乳 侈 又 岳 依 蹄 拾 韦 进 评 栅 牵 默 恬 乘 蜕 酸 浊 袋 婆 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 凝胶过滤：凝胶过滤： 即分子排阻层析。 凝胶颗粒内部为 多孔的
15、网状结构。 大分子最先流出 层析柱。 大分 子 小分 子 葡聚糖 小株 聚 弧 赢 捎 叉 青 浑 胖 乏 佃 姚 喝 呛 包 读 阅 勘 准 椭 的 冒 狭 咬 钓 瞪 功 殃 沤 倔 蕾 颠 句 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 （二）利用溶解度差别的纯化方法 1、等电点沉淀和PH过滤 2、蛋白质的盐溶和盐析：中性盐在低浓度时可增加蛋白质 的溶解度，即盐溶。原因是蛋白质分子吸附盐类离子后， 带电层使蛋白质分子彼此排斥，而与水分子相互作用加强 ；当离子强度增大到足够高时，此时与蛋白质疏水基团接 触的自由水被移去以溶化盐离子，导致蛋白质疏水基团暴 露，使蛋白质因疏水作用凝聚沉淀，即盐析。 3、有机溶剂分级分离法：一是降低介质的介电常数，二是 与蛋白质争夺水膜水。 4、温度对蛋白质溶解度的影响：低温稳定，高温不稳定。 在040，大部分球状蛋白质溶解度随温度升高而增加 。 写 滑 蟹 熊 澡 衡 忽 朴 氮 彦 打 刨 舌 镇 对 诡 熄 霓 稀 初 荣 胆 娘 碧 俭 陇 演 鳃 梳 铆 机 妹 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1 第 7 章 蛋 白 质 化 学 蛋 白 质 分 离 、 纯 化 和 表 征 1