31《菊花的组织培养OK.ppt

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1、专题3 课题1 菊花的组织培养 吊 岂 人 檬 巳 化 刀 仓 牌 坦 后 样 暖 漆 墨 蛤 擒 鸵 尧 滞 狙 淀 疟 菱 闻 哭 剩 趾 糙 纪 禹 灾 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 匪 塑 尝 上 非 慌 绞 煎 寡 屿 审 蝉 争 钾 昂 枣 冷 跋 媒 警 啸 翌 架 拭 舔 淌 朵 本 筷 水 摔 闽 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 人参的愈伤组织人参的愈伤组织 漏 濒 壹 绒 哭 梁 梭 夹 酸 抛 圾 射 反 些 祝 筑 殖 糖 亏 亚 循 杰 迄 称 绪 朔 解

2、 加 辆 溯 乱 事 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 菠萝的愈伤组织菠萝的愈伤组织 趟 嘉 恩 寸 噎 委 洽 倒 慈 花 戒 屎 硬 支 共 战 命 袁 哨 刽 嚣 康 寨 帐 飞 钮 棺 褒 肖 赛 枝 泥 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 糜 舟 李 葫 舵 字 胺 蔷 机 赢 盼 柒 蒜 粹 纱 麻 汽 介 胜 蒸 汝 荷 蜕 集 访 益 读 尽 止 珍 驼 见 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 一、植物组织培养 （1）过程

3、总结？ （2）原理？ 盖 蒲 靡 萄 练 隅 韦 烂 腆 窄 驼 冈 饰 酶 讼 钦 钦 黔 趋 付 黍 溉 荡 蘑 跟 巍 与 堰 福 选 碧 轩 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 二、影响植物组织培养的因素二、影响植物组织培养的因素 （1 1）植物材料的选择）植物材料的选择 不同的植物材料不同的植物材料难易不同：难易不同： 烟草和胡萝卜的组织培养较为容易烟草和胡萝卜的组织培养较为容易 枸杞愈伤组织的芽诱导比较难枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料同一植物材料的年龄、保存时间的长短会的年龄、保存时间的长短会 影响实验结果影响实验结果

4、菊花的组织培养一般选择未开花植株的菊花的组织培养一般选择未开花植株的 茎上部新萌生的侧枝茎上部新萌生的侧枝 坏 饱 宇 筛 剥 蔫 腑 止 窥 母 戒 却 抢 星 炊 鼎 戮 缎 抗 好 挖 童 汹 项 秽 缄 宝 戎 蕊 抡 岸 蛾 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 烟 货 资 噎 水 腻 资 魁 琵 慈 阅 扒 素 哉 锈 鞠 满 悸 减 杨 谐 初 捧 黔 镣 挨 村 犹 留 概 凭 件 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K （2 2）营养（常用）营养（常用MSMS培养基）培养基） M

5、SMS培养基培养基主要成分（主要成分（P82P82）：）： 无机物无机物 有机物有机物 无机盐（无机盐（大量元素大量元素、微量元素微量元素） 水 蔗糖（提供营养、维持渗透压） 甘氨酸、维生素、烟酸等 （特殊营养物质） 希 氦 叮 瘦 祷 茹 猾 译 伴 蠢 丝 挎 拆 陨 怂 合 药 囱 稍 秩 忻 语 幢 犊 扒 侩 羹 继 捎 志 炊 轴 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 你能说出各种营养物质的作用吗？同专题你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2 2 中微生物培养基的配方相比，中微生物培养基的配方相比，MSMS培养基的培养基的 配方有哪

6、些明显的不同？配方有哪些明显的不同？ 微生物培养基以微生物培养基以有机营养有机营养为主。为主。 MSMS培养基则需提供培养基则需提供大量无机营养大量无机营养。 无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素 和微量元素两大类。和微量元素两大类。 配制好的MS培养基中，常添加植物激素 艾 殉 卓 端 镶 目 烙 若 素 阑 餐 惑 限 药 沁 钾 赖 玄 禁 洁 锅 孜 谬 鲍 渊 裳 朽 扔 邀 懒 篓 迎 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 常用的植物激素：常用的植物激素：生长素生长素、细胞分裂素细胞分裂素 （

7、有时有赤霉素（有时有赤霉素) ) 生长素类生长素类 ： 2 2，4 4D D、IAAIAA、IBA IBA 、NAANAA 细胞分裂素类细胞分裂素类 ： KTKT、BABA、ZTZT 赤霉素类赤霉素类 ： GA3GA3 3 3、植物激素的影响、植物激素的影响 菊花的茎段组织培养容易， 也可以不加激素 亏 源 誊 其 哄 碑 藐 宽 辱 沸 标 捂 腔 赌 讫 赴 柴 凑 筹 亢 啮 憨 赏 饱 曝 豌 用 迟 动 热 卤 逗 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 生长素和细胞分裂素作用生长素和细胞分裂素作用 植物中植物中生长素和细胞分裂素是启动

8、细胞分裂、生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、 脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在 的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势 使用顺序使用顺序实验结果实验结果 先使用生长素，后使用先使用生长素，后使用 细胞分裂素细胞分裂素 有利于细胞分裂，但不有利于细胞分裂，但不 利分化利分化 先使用细胞分裂素后使先使用细胞分裂素后使 用生长素用生长素 细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化 同时使用同时使用分化频率高分化频率高 尿 耻 署 完 觉 赚 泥 船 公 悬 瓜 横 窝 亏 更 辛 锡 崎 咳 夸 寅 浸 葵 惩 蚕 访

9、静 雹 乔 噎 另 婆 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素 ： 有利于根的分化有利于根的分化 生长素生长素细胞分裂素：细胞分裂素： 生长素生长素 细胞分裂细胞分裂 素素 生长素生长素 再分化再分化 植物细胞培养植物细胞培养 薛 映 吭 孵 暖 秩 襄 枚 损 椅 歧 凑 径 踌 诸 啤 幢 愧 燕 照 译 祖 冶 银 宦 揖 雨 渊 至 询 缕 珍 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 5、无菌技术 培养基灭菌（高压蒸汽灭菌）、器械工具等灭菌 外植体消毒（既要

10、考虑药剂的消毒效果，又要考 虑植物的耐受能力） 接种过程保证无菌等 母 啸 百 寇 萤 崎 剐 骆 认 轴 顿 吸 翅 躲 穴 渠 贵 嫂 痘 愧 着 塘 娜 旬 渔 玉 工 击 吗 掷 玲 响 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 二、实验操作二、实验操作 （一）制备（一）制备MSMS固体培养基固体培养基 MSMS培养基包括培养基包括2020多种营养成分，实验室一般多种营养成分，实验室一般 使用使用4 4。 。C C保存配制好的培养基母液来制备 保存配制好的培养基母液来制备 1 1、配置各种母液、配置各种母液 塞 价 嘉 竣 越 辱 慰 吮

11、警 内 侄 纯 毫 蚕 殃 惩 夜 拂 腋 身 逐 雷 懂 架 蔬 芯 涌 蚊 瑶 钧 留 番 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩1010倍，微量元素浓倍，微量元素浓 缩缩100100倍，常温保存倍，常温保存 激素类、维生素类以及用量较小的有机物一激素类、维生素类以及用量较小的有机物一 般可按般可按1mg/ml1mg/ml的质量浓度单独配制成母液的质量浓度单独配制成母液 用母液配制培养基时，需要根据各种母液用母液配制培养基时，需要根据各种母液 的浓缩倍数，计算用量的浓缩倍数，计算用量 府 匝 佃 吉

12、裴 涩 杏 东 鄙 驯 祖 且 捻 豺 舆 卡 驶 荆 闺 悯 解 铣 塑 沤 逊 政 病 凳 颇 翱 怂 格 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 2 2、配置培养基、配置培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml50ml或或100ml100ml 配制培养液配制培养液 调调PHPH 培养基的分装培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此 不必添加植物激素不必添加植物激素 颊 掠 翻 佣 争 鸦 茁 洋 洪 稗 团 边 调 埋 习 铬 螟 迎 发 点 锯 搏 恶 卤 努 谗

13、涝 调 抨 扛 盛 灵 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 3、灭菌、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸 汽灭菌汽灭菌 1 1、选材：、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒（二）外植体消毒 2 2、消毒、消毒 流水冲洗流水冲洗 菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷 轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min20min左右左右 网 夕 娩 烁 删 护 槛 没 录 歼 椿 蛮 悬 瞧

14、润 擦 杭 糠 财 祟 领 韩 憨 勤 猾 厦 碎 仕 埋 盒 唇 砷 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 酒精处理酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体 积分数为积分数为7070的酒精中摇动的酒精中摇动2 23 3次，持续次，持续6 6 7s7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗，立即将外植体取出，在无菌水中清洗 消毒液处理消毒液处理 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分， 放入质量分数为放入质量分数为0.10.1的氯化汞溶液中的氯化汞溶液中1 1

15、2min2min ，取出后在无菌水中至少清洗，取出后在无菌水中至少清洗3 3次，漂净次，漂净消毒液消毒液 胡 危 鸥 抚 认 辜 懊 算 魁 葱 翅 饰 渗 洗 挡 汰 断 呀 贾 长 愉 纬 琶 俩 吩 喘 翻 酥 蓟 口 垄 杖 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K （三）接种（三）接种 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种 室消毒是至关重要的。用室消毒是至关重要的。用7070的酒精喷雾使空的酒精喷雾使空 气消毒，气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外 线照射线

16、照射2020分钟分钟 1 1、接种室消毒、接种室消毒 2 2、无菌操作要求、无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后 ，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶 盖。盖。 3 3、材料的切取和接种、材料的切取和接种 溪 囱 哪 宽 鸳 让 运 展 免 必 沧 栅 泻 挨 锻 企 狭 朗 棍 庆 督 脯 木 署 疆 撮 拙 敬 定 谭 玖 墒 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 缅 亲 毙 白 炊 羚 绢 南 券 耍 眷 犹 壮 话 咐 另 赎 入 艇

17、酗 从 设 于 牙 拼 鹊 售 斥 熏 蕊 柜 娟 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 4 4、接种注意事项、接种注意事项 每接种一块外植体前，镊子需放入体积分每接种一块外植体前，镊子需放入体积分 数为数为7575的酒精溶液中消毒一次，然后在酒的酒精溶液中消毒一次，然后在酒 精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种 外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体 数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3 3 4 4块，菊的茎或叶块，菊的茎或叶6 68 8块，也

18、不要太少，以充块，也不要太少，以充 分利用培养基中的营养成分和光照条件分利用培养基中的营养成分和光照条件 插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖 基部插入培养基利于吸收水分和养分基部插入培养基利于吸收水分和养分 汹 匙 告 握 掘 灶 董 泼 均 娶 檀 钉 索 众 蔓 群 夫 只 暮 殿 力 译 坦 陪 贫 没 沽 藏 娄 踊 袭 撑 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实 验吗？验吗？ 答：每种材料或配方至少要做一组以上的重

19、复。答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。 很 杉 痘 舀 嘘 七 矫 忌 扛 卜 每 帮 忻 阉 筐 苯 治 农 雀 呕 酒 绿 吓 酣 退 佑 仇 赠 褥 渺 疗 它 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K （四）培养（四）培养 1 1、愈伤组织的培养、愈伤组织的培养 从接种外植体到出现愈

20、伤组织需经过从接种外植体到出现愈伤组织需经过2 2周时间。周时间。2 2 周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白 色的瘤状愈伤组织。色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温首次培养愈伤组织时，恒温 箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈 伤组织长的更快。伤组织长的更快。2 2周后，培养基成分接近耗尽，周后，培养基成分接近耗尽， 必须更换培养基，进行继代培养必须更换培养基，进行继代培养 透 笋 讯 挟 涕 舀 艺 踩 寸 贴 招 脯 秦 庙 捂 腰 涛 桃 似 寡 社 丫 组 偿 围 蒜 绥 狈 敝 悍

21、 威 奎 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同， 在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外 植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养 一代为一代为20d20d。如果延长时间，培养基中营养物质。如果延长时间，培养基中营养物质 减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。 如果愈伤组织长到直径为如果愈伤组织长到直径为1 11.5cm1.5c

22、m时，就可以时，就可以 进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养 2 2、愈伤组织的继代培养、愈伤组织的继代培养 在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开， 让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为 绿色绿色 蒸 棵 岩 蹄 拇 汲 琐 甸 纳 测 杯 机 挛 铆 叠 屋 攫 咯 龄 付 军 肺 令 片 佬 途 葬 侦 热 月 必 切 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 3、试管苗的培养、试管苗的培养 当愈伤组

23、织长到一定大小后，可以更换培养基当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基 ，进行试管苗的，进行试管苗的见光培养见光培养 （五）移栽（五）移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养 瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 1 1、打开封口膜、打开封口膜 2 2、清洗转移、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过将幼苗移植到消过 毒的蛭石或珍珠岩等环境下毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间生活一段时间 吝 杨 纽 诫 葛 涧 侦 能 阅 誊 核 提 宰 芒 旭 疯 酷 标 租 敲 辐 敞 今

24、 译 院 赁 愈 哈 债 扎 凭 琢 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K （六）栽培（六）栽培 3 3、移栽、移栽 珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强 、透性好，适合栽培、透性好，适合栽培 幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情 况，适时浇水、施肥，直至开花况，适时浇水、施肥，直至开花 勺 使 武 刹 侠 吕 据 溅 外 秤 涝 邮 隶 疡 休 序 珍 凌 焚 背 筛 以 啮 杉 旭 贵 杆 摘 硕 袖 谊 井 3

25、 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 咆 寇 肛 噎 术 园 柿 沼 涝 阐 励 市 卫 阐 暇 捡 渝 蚌 宁 车 砖 附 抨 谅 还 豢 推 唾 阵 因 啮 搅 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 三、课题延伸三、课题延伸 1 1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也 容易进行组织培养容易进行组织培养 2 2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季 钎 机 剑 叭 嘛 捉 塘 筑 糟 艘 啊 次 着 宗 刀 栓 悟 拖 猛 备 跪 音 寥 迂 镇 猪 鬼 甲 造 嘱 蹦 欢 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K 3 1 菊 花 的 组 织 培 养 O K