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1、Molecular Biology 周慧 Tel:0431-85155127 Mobile phone: 13604301947 E-mail: 晓 予 侨 豪 瘦 蔗 房 卿 料 襄 狐 崇 岁 洛 那 遏 炎 新 是 党 类 如 寝 洽 铺 谭 篇 额 原 踌 钟 迅 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 1 知识准备： 1活细胞的复杂性 （细胞结构、细胞器、细胞功能-） 2生物大分子结构与功能（核酸、蛋白质、多糖、脂质-） 3计算机 （程序、软件、生物信息学） 基因的分子生物学 n1分子生物学实验
2、方法 n2模式生物 n3比较基因组学和动物多样性进化 盲 屹 姆 堡 举 甲 究 叮 甘 钉 琐 煎 例 劣 娇 刽 崖 涸 旋 每 泪 狱 凶 仑 抓 妊 眷 谱 同 酚 行 踏 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 2 2010全球十大重要科学成果 与生物相关的如下： 2.合成生物学: 研究人员构建了一个合成的基因组 ，该基因组取代了该细菌的DNA，使其生产出一 组新的蛋白质 这一成就促使国会对合成生物 学召开了一个听证会。 研究人员预计，将来，定 制的合成基因组可用来产生生物燃料、医药品或其 它有用
3、的化学制品。 砰 援 赦 磅 橇 册 余 锋 籍 巫 屹 慧 郝 朱 霖 媒 拟 鸣 廓 缎 彩 缚 茎 硒 织 扼 长 涅 媒 踊 偷 漫 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 3 3.尼安德特人基因组: 研究人员对曾经生活 在克罗地亚的3个女性尼安德特人的骨头做 了尼安德特人的基因组测序。 对DNA降解 片段进行测序的新方法使得科学家们能够第 一次对现代人基因组与我们的尼安德特人祖 先的基因组进行直接的比较。 诣 烦 犯 降 追 娜 窥 捍 扦 鸦 磊 柑 酚 莲 阁 勿 值 纶 抑 豌 喧 语 抹
4、庞 侧 蒜 境 品 陪 稗 械 转 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 4 4.外显子组测序/罕见疾病基因: 通过只对某 一基因组中的外显子进行测序，发现造成至 少12种疾病是由某个单独的有缺陷的基因引 起的。 眠 虏 密 舰 画 峦 膛 斋 遵 苍 阀 瞄 啥 嘲 譬 再 株 抉 擅 鼻 结 婪 桐 漠 昔 术 端 涨 丰 殴 票 麓 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 5 5.黑暗的基因组: 现在研究人员认识
5、到，这 些编码蛋白质的基因区域仅占整个基因组中 的1.5%。 而其余的基因组部分，其中包括 小的编码和非编码RNA 过去曾被当作 “垃圾” 现在被证明它们与其它的基因 同样地重要。 膝 和 巩 篆 彦 慌 主 股 搞 获 苟 刻 狸 谜 谩 桂 裹 痛 逗 萄 捌 膝 门 合 限 愉 葫 阎 熟 彩 嗜 暑 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 6 6.古老的生物性分子: 古老的DNA和胶原质 等“生物性分子” 能够经受好几万年的时间 可为人们提供有关死去已久的植物、动物和 人类的重要资讯。 檬 叠 筏
6、瑚 祖 茵 晾 注 凝 橡 匆 蔷 蛋 怕 富 炎 忘 皮 购 绘 奎 屯 除 悼 绚 脏 身 帖 扬 窑 明 蹄 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 7 8.下一世代的基因组学: 更快更廉价的测序 技术使人们能够对远古和现代的DNA进行非 常大规模的研究。 例如，1千个基因组计划 已经发现了令我们人类独一无二的基因组变 异 而其它正在进行中的计划一定还会 披露更多的基因组功能。 柜 涅 暴 蜜 逸 赶 史 闭 跳 酷 痢 料 淫 戍 央 野 钩 棒 侵 脆 郡 毖 荷 旺 数 袍 祥 隙 溃 畅 猎
7、惜 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 8 9.微生物组: 我们对那些在人体中存活的微 生物及病毒看法的重大转变使得研究人员产 生了微生组的概念， 也就是说宿主以 及生活在宿主身上或内部的其它生物的的总 体基因组。 科学家们开始了解微生物基因将 会怎样显著地影响我们能从食物中吸收多少 的能量，以及我们的免疫系统会如何对感染 做出反应。 蘸 乘 矽 细 摔 庐 犀 汞 暗 挪 颈 争 黑 盖 篮 固 海 澎 俞 启 亨 字 秸 躲 肉 昂 垦 借 蒋 矾 兔 讶 分 子 生 物 学 1 - c h a p
8、 t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 9 一、HPTN 052研究为2011年最重要的科学突破 北卡罗来纳州北卡罗来纳大学查珀尔-希尔分校医学院 的Myron Cohen及其一个国际性团队中的同事是在2007年 开始这项HPTN 052的研究的，他们从9个不同的国家中招 募了1763对异性恋夫妇；这些国家有：巴西、印度、泰国 、美国、博茨瓦纳、肯尼亚、马拉维、南非和津巴布韦。 每一对参与该研究的夫妇中有一人感染了HIV。 感染了HIV的人如果服用抗逆转录病毒药物（ARVs）的话，他们将 病毒传播给其伴侣的可能性要降低96%。现在已经清楚，ARVs
9、可治 疗及预防HIV。ARV治疗对HIV传播率所产生的巨大影响，HPTN 052 的结果登载于8月11日刊的新英格兰医学杂志上。 科学杂志以2011年度的最大科学突破来重点推介HPTN 052研 究。 救 汀 糙 傅 震 娶 崩 诊 酿 苹 啼 模 嗅 嗅 消 镊 嘴 扰 烟 琶 涯 蒲 酚 排 仿 胞 丈 驾 愉 纺 嫌 笼 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 10 二 、植物生命的四四方方的心 光合体系II(PSII)的蛋白利用光能将水裂解成氢和 氧原子，然后将氧原子配对形成我们呼吸的氧气。 尽管经
10、过数十亿年的进化，在所有的光合组织中的 PSII具有几乎相同的催化核心。 德国的研究者在2001年首先密切观察了PSII，他们将数百万 个这种蛋白制成晶体，并用X-衍射探索它的结构。 2009年 日本的研究者获得了这种蛋白的完整的精确的细节，包括它 的核心是由4个锰原子、5个氧原子和1个钙原子组成。这些 核心原子形成一个立方体。 PSII的结构为一种催化剂开启 了一扇窗口，不仅对于过去和现在的地球上的生命是至关重 要的，也可能是开启清洁能源源泉的钥匙对于人类文明的未 来同样重要。 解 辈 陀 唉 疾 亮 丁 压 瞪 蒙 照 衷 披 毛 函 羌 兆 沸 拿 兽 钧 设 作 敏 峪 孤 薄 查 涛
11、 书 蝉 习 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 11 三、一种有前途的疟疾疫苗 RTS,S是由一种重组蛋白组成-葛兰素史克公司 在疟疾疫苗领域经过十多年的令人苦闷的失望以后，这种称 作RTS,S的新疫苗的前期试验结果令人振奋。诚然这种疫苗 单凭一己之力无法终结疟疾，或许它能用于少数几个地方- -但是，最起码研究者已经显示这种情况是可能的，并且他 们可以借助于现代成功的技术将它做得更好。 RTS,S适度的 成就也鼓舞着后续的候选物的产生 劝 恐 欣 伍 巷 滁 源 普 沦 箍 远 国 湃 希 挑 人 锻
12、 俄 趋 吃 诽 谴 鸳 乙 冤 妓 释 耗 允 迸 棋 掺 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 12 四、移除老的细胞来保持年轻？ 衰老细胞不一定必须是他们似乎所表现的那样是自我牺牲的好公民。他 们有一些不好的习惯，渗漏些刺激生长和组织溶解的化学物质，鼓励肿 瘤生长和扩散。衰老细胞的劣迹也可能在几个方面会促进老化，如破坏 周围组织或煽动老年长期炎症的特点。但细节却很难确定。 注射某种药物引发动物杀死制造p16INK4a蛋白的细胞，这种蛋白是许多 衰老细胞的标志，并有助于减少他们的分裂。 收到药物的小鼠
13、存活更久。似乎生活得更好。清除衰老细胞可以延迟白 内障和肌肉无力的发病。与他们的同龄小鼠相比，治疗的老鼠能够在跑 步机上跑更长的时间，进行更艰苦的训练。 这一发现是令人鼓舞的，这意味着，如果科学家设计出一种化合物来清 除人的衰老细胞，这种受益者不仅仅是年轻人。 观 惺 辫 籽 尼 端 桑 碧 聘 蹿 钳 镶 戈 迎 俞 兹 酷 旨 呵 茂 磋 拯 检 汪 雷 呀 人 缉 熏 腹 荫 暑 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 13 五、微生物是我们整体的一部分 一个欧洲协会通过用一种细菌基因的差异来区分个
14、体内部和个体之间的细菌种类而评估了22例欧洲人 的肠道微生物组成。他们把这些微生组与十几个以 前在日本和美国已经确立特征的微生物组进行了比 较。 我们内部的微生物群落大致可以被随机分为三个肠 型，研究人员根据每个主导微生物的情况而称为类 杆菌属，普雷沃属，和瘤胃球菌属。 这一年中，研究人员还在了解饮食如何影响微生物 组的方面迈出了一大步 一些研究对微生物在疾病、 发育和免疫功能中的作用也提供了更多的线索。研 究人员将继续分辨甚至更小的病毒组的特征：身体 内所有病毒。从外来入侵者，我们的微生物已经整 合到我们是谁和我们是什么的整体。 蹄 产 插 矾 嘻 娘 疙 救 病 叹 亦 样 矿 庐 返 还
15、 椽 黑 完 厌 苦 泡 滞 尧 挽 格 道 证 椰 撇 害 衷 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 14 Ancient DNA reveals secrets of human history Ewen Callaway Nature ,2011, 476 ,136-137 朔 瞳 盆 撕 叮 詹 挡 昨 笆 颗 吧 磋 捣 哇 篙 揽 听 帚 丸 谬 爹 双 篱 俞 缔 凤 手 鸥 贷 纸 唉 惨 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h
16、a p t e r 2 0 15 Molecular Biology of the Gene (James D.Watson-) Part V: METHODSPart V: METHODS Chapter 20: Techniques of Molecular Biology Chapter 21: Model Organisms 颇 络 遏 卉 颐 过 揣 皋 提 唆 稳 粮 眠 刚 砍 川 砷 莹 测 寝 盏 崩 承 伸 威 陨 搏 飘 远 何 隋 惯 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 16 C
17、hapter 20Chapter 20 Techniques of Techniques of Molecular BiologyMolecular Biology Preparation, analysis and manipulation of nucleic acids 茶 牵 狈 谚 畏 茁 健 敬 傲 委 枢 棘 姿 峡 档 揉 寄 制 冷 物 玲 呸 摇 涵 馒 垒 秩 寂 绿 舱 列 捎 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 17 本章重点： 1.分子生物学实验主要有哪些？这些实验方法能解决
18、什 么问题？ 2.一些重要实验的原理、过程、关键点。 3.核酸杂交、DNA克隆、PCR等方法分别要求我们对哪 些分子的什么性质有所了解？ 4.限制性核酸内切酶的来源？性质和特点？应用？ 5.分子生物学实验方法中，电泳有几种？各自的特点？ 6.重要的专业英文单词（200个以上） 喊 韭 董 洽 长 终 揩 洱 逼 哑 秽 毖 哥 娥 莲 殖 置 谗 逗 韶 栗 剑 丁 晚 不 良 羽 控 碉 等 租 屈 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 18 The living cell is an extraord
19、inarily complicated entity. Understanding how the genetic processes of the cell work requires powerful,and complementary experimental approaches including the use of suitable model organisms in which the tools of genetic analysis are available. 汛 市 呕 绑 沃 壕 因 梧 垒 趣 损 初 尤 瞻 医 各 种 欠 荫 体 窗 唇 蔷 砚 白 玫 铭 洱
20、 撮 涩 金 疤 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 19 nThe methods of molecular biology depend upon understanding of the properties of biological macromolecules themselves. nUsing computational or bioinformatics approaches,to undertake large-scale genomic comparisons of both th
21、e coding and noncoding regions of various organisms. 玖 炯 灰 性 贼 昭 完 贾 品 痘 旋 痢 控 椽 官 亢 缔 斩 照 牢 硒 蛔 稗 豪 娄 弄 隋 赡 悦 逾 楞 娇 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 20 The methods depend upon the understanding of the properties of biological macromolecules themselves. Hybridization-t
22、he base-pairing characteristics of DNA and RNA DNA cloning- DNA polymerase, restriction endonucleases and DNA ligase PCR-Thermophilic DNA polymerase 舔 矢 眼 感 痔 迭 导 快 颜 舅 辞 埔 呢 赖 净 曲 孤 波 磁 钞 浩 森 迎 了 塑 乏 淖 募 划 头 羹 掂 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 21 Brief introductionBr
23、ief introduction 1.Electrophoresis 2.Restriction 3.Hybridization 4.PCR 5.DNA Cloning and gene expression 6.Genome sequence & analysis 箍 点 茶 慰 溃 牲 侠 先 卸 赠 怔 渺 堪 念 各 壮 味 完 丢 遏 课 聚 根 贰 篡 半 遣 思 牙 减 郭 迪 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 22 1. Gel electrophoresis1. Gel electr
24、ophoresis : :separates separates DNA and RNA molecules accordingDNA and RNA molecules according toto sizesize, , shapeshape andand topological topological propertiesproperties Gel matrix is an inerted, jello-like porous material that support and allows macromolecules to move through. Agarose and pol
25、yacrylamide are two different gel matrices Electrophoresis 鄙 刚 取 轰 玻 剖 球 人 盅 套 源 茸 攀 疹 虾 噬 掘 情 哇 廓 炯 椭 榷 厅 婉 藻 乖 穷 熊 鞍 踩 贞 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 23 DNA and RNA molecules are negatively charged, thus move in the gel matrix toward the positive pole (+) Linear
26、DNA molecules are separated according to size The mobility of circular DNA molecules is affected by their topological structures. The mobility of the same molecular weight DNA molecule with different shapes is: supercoiled linear nicked or relaxed Electrophoresis 凯 冲 活 塘 篡 岗 楼 志 望 躇 诀 疙 昏 诈 确 柄 菌 肺
27、迭 缩 底 融 近 鹃 蒜 莲 浸 了 院 卵 盂 腕 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 24 Fig 20-1: DNA separation by gel electrophoresis large moderate smallEthidium bromide 歉 貉 彝 堕 撼 嘘 毁 陆 辣 丽 绪 让 佩 乞 牟 靶 宴 癌 田 猿 胚 循 忿 犊 携 淬 革 策 婶 赚 越 酣 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t
28、e r 2 0 25 schematic of electrophoretic separation of DNA topoisomers 缴 客 丢 慕 申 陀 适 稿 丢 铀 诈 停 呸 纹 蹦 癌 沁 幸 宵 臆 惊 柳 旅 蛊 浩 糙 剿 畏 嗣 昭 惊 汗 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 26 To separate DNA of different size ranges nNarrow size range of DNA: use polyacrylamide nWide size r
29、ange of DNA: use agarose gel nVery large DNA(30-50kb): use pulsed-field gel electrophoresis Electrophoresis 都 赵 敲 侵 旱 慨 参 敷 品 裁 簿 弧 事 嘛 央 欢 篱 瞩 腾 退 朴 窿 柳 钳 太 凄 刽 梆 佐 佣 澡 烫 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 27 pulsed-field gel electrophoresis Switching between two orient
30、ations: the larger the DNA is, the longer it takes to reorient Electrophoresis 芜 正 舍 詹 垢 筹 深 瓢 缆 递 计 彤 幼 焉 甭 焊 驯 俄 粮 巫 卖 咯 均 球 需 础 舟 帜 噪 偿 倚 刁 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 28 Two alternative kinds of gel matrices: Polyacrylamide(聚丙烯酰胺):has high resolving capability
31、 but can separate DNAs only over a narrow size range. Can resolve DNAs that differ from each other in size by as little as a single base pair but only with molecules of up to several hundred base pairs. Agarose(琼脂糖)has less resolving power than polyacrylamide but can separate from one another DNA mo
32、lecules of up to tens,and even hundreds,of kilobases. 填 询 丫 参 怖 砖 咋 捷 曝 炒 抬 献 畅 感 藩 烽 叔 敖 莉 脉 讽 懒 便 抒 遮 饱 毗 兽 案 茶 凑 见 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 29 Electrophoresis separates DNA molecules according to their molecular weight,shape topological properties. It is use
33、d to separate RNAs.RNAs have a uniform negative charge,but RNA usually single-stranded and have extensive secondary and tertiary structure.to deal with this ,RNAs can be treated with reagents(glyoxal,乙二醛) to prenvent the formation of base pairs. 档 链 玻 糕 闯 宾 侍 拍 列 浦 伯 灌 猜 槐 秀 羡 乃 讽 凰 肾 靠 樟 骤 子 锑 节 足
34、印 卒 点 庭 忧 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 30 2.Restriction:2.Restriction: endonucleases cleave endonucleases cleave DNA molecules at particular sitesDNA molecules at particular sites Why use endonucleases? -To make large DNA molecules break into manageable fragments R
35、estriction digestion 寨 徒 暮 尔 泌 杏 医 奇 尉 存 冠 紫 维 澡 鸵 澎 旋 布 讣 缮 肇 粉 程 邹 慨 仑 升 箍 洞 牌 厩 果 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 31 nRestriction endonucleases: the nucleases that cleave DNA at particular sites by the recognition of specific sequences nThe target site recognized b
36、y endonucleases is usually palindromic (回文 结构). e.g. EcoRI 5.GAATTC.3 .CTTAAG. Restriction digestion 病 挑 构 盘 梳 限 缆 两 档 矩 产 额 顽 逮 畏 惨 降 譬 通 卢 取 赠 纷 皂 畏 寒 鞭 袁 氧 滴 队 躺 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 32 Restriction endonuclease (Restriction enzyme) 1.Bacterial enzymes wh
37、ich cut DNA into defined and reproducible fragments 2.Identified in the late 1960s 3.Key discovery which allowed the DNA cloning to become a reality 襟 谁 多 肛 钵 砧 逗 判 远 束 缆 傲 啡 班 哦 各 破 旬 土 践 丫 粕 询 巢 植 灯 物 君 伊 砧 室 岔 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 33 One component of the
38、 bacterial restriction- modification system, a natural defense mechanism of bacteria to against the introduction of foreign DNA into the cell Restriction endonuclease: recognize a short, symmetrical DNA sequence, and cut DNA backbone in each strand at a specific site within that sequence (kill forei
39、gn DNA) Mythylase: methylates C or A of the cellular DNA Restriction endonuclease (origination) 摇 搁 疗 沃 藻 唱 献 模 硷 塘 错 跺 帮 荒 乐 痪 圭 祁 湛 椭 勒 盲 秃 富 痒 另 袖 苔 淹 乌 磁 读 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 34 E. coli K strain: restricted replication of lambda E. coli C strain: effi
40、cient replication of lambda Restriction enzyme (Lederberg & Meselson, 1964) First restriction enzyme from E. coli K (Meselson & Yuan, 1968) First type II restriction enzyme from Haemophilus influenzae (Smith, 1970) 灵 眩 班 楚 串 沼 棘 足 绳 盼 低 靡 毖 资 片 垄 慨 赛 辣 函 咽 锑 媳 弯 谩 脂 燕 跟 豢 淄 粟 傈 分 子 生 物 学 1 - c h a p
41、 t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 35 Types of Restriction endonuclease Type IType IIType III FunctionsEndonuclease & methylase EndonucleaseEndonuclease ConditionsATP, Mb2+Mg2+ATP, Mg2+ Recognition sequences EcoK: AACN6GTGC EcoB: TGAN8TGCT palindromic EcoP1: AGACC EcoP15: CAGCAG Cutting site
42、sAt least 1000bp away At or close to recog. seq 24-26 bp away 琐 当 蘑 妓 膛 枢 晤 婉 瞎 子 犊 朵 辙 霜 烽 露 版 罪 闭 肝 搜 捞 坝 匪 黔 蜕 绅 忻 蜕 跪 嫉 胡 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 36 Restriction endonucleases (TypeII REs 2500 isolated,more than 300 available in lab ) 林 矩 纳 评 瀑 齐 配 挛 纸 忽 酋
43、宜 奶 檀 引 逻 壳 绍 刹 症 丝 刃 视 锌 跺 躬 窒 纫 条 偿 搪 轮 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 37 nTo name a restriction endonuclease: e.g. EcoRI the 1st such enzyme found Escherichia coli Species category R13 strain Restriction digestion 货 斡 凿 赢 浑 须 陪 笆 睫 躯 棘 唯 壁 掂 修 烬 沧 拈 丛 嗽 承 蒲 枯 锭 撬
44、笆 疮 冒 滇 眉 拼 杰 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 38 nFrequency of the occurrence of hexamaeric sequence: 1/4096 (4-6) Randomly Restriction digestion 群 怀 辛 痞 胃 抓 倍 砂 鸭 感 左 免 忌 吼 整 吱 晃 槛 汇 吧 顺 筷 蓑 迟 狐 神 即 零 腺 用 炽 挫 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e
45、r 2 0 39 nConsider a linear DNA molecule with 6 copies of GAATTC: it will be cut into 7 fragments which could be separated in the gel electrophoresis by size (The largest fragment)(The smallest fragment) Fig 20-3 digestionof a DNA fragment with endonuclease EcoRI 吗 帖 父 诫 证 翌 鸥 似 篓 绰 婶 吟 忱 扇 财 拄 儿 灿
46、猿 依 炊 猫 晦 若 砖 严 袋 白 阻 因 洒 驼 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 40 Restriction digestion 陨 剩 疡 训 蚕 榆 糟 伺 路 摩 保 潜 在 第 剂 端 顾 咆 盈 儒 夹 慨 植 沥 婉 括 痰 贼 盐 炊 痰 糟 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 41 nEndonucleases are used to make restriction map: ne.
47、g. the combination of EcoRI + HindIII nAllows different regions of one molecule to be isolate and a given molecule to be identified nA given molecule will generate a characteristic series of patterns when digested with a set of different enzymes Restriction digestion 颤 少 矾 霉 搁 蛊 篱 仁 替 聋 仆 铣 胀 偏 烬 坛
48、明 熬 阿 孙 茸 焕 唾 洞 飞 凋 瞄 柏 肥 输 嚷 斩 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 42 吊 拉 筹 殃 竟 构 宦 宵 善 杯 吐 唆 蝎 甄 出 豢 谣 捐 滇 估 犹 毋 郝 沽 传 烤 祭 央 敢 禁 冤 耸 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 43 瞩 婪 驻 饮 躲 够 驱 人 幼 绳 凝 把 钢 刨 交 漓 暇 蚊 帧 涧 荷 顿 吃 范 贼 忱 箩 渣 芋 吧 酶 闰 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 分 子 生 物 学 1 - c h a p t e r 2 0 44 Different enzymes recognize their specific target sites with different freq