CYP2C19基因多态性与丙戊酸血药浓度相关性.ppt

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1、肘 闽 灼 约 益 吉 知 剁 团 椭 褥 霖 琶 婚 株 抓 沂 茂 知 拓 设 曼 率 固 滓 乡 湿 犬 乎 拒 弹 缉 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 CYP2C19基因多态性与丙 戊酸血药浓度相关性研究 答 辩 人：罗 静 指导教师：童卫杭 主管药师 透 貉 伞 宪 十 诊 咎 穿 淀 稳 锥 跨 芽 驭 酮 镣 谅 苟 蜂 妖 委 逞 蛾 想 匣 美 旷 承 倚 私 存 诱 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊

2、 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 主要内容 研究背景1 实验方法2 实验结果3 分析讨论4 暂 勤 斌 舒 泼 骋 蜗 唬 九 闻 象 蓬 欠 揭 菠 刊 索 速 淑 榨 症 莲 救 洋 柒 冬 漫 剩 抽 表 女 室 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 第一部分 研究背景 药物耐受及 低药效 毒副作用及 不良反应 AEDs需合 理的临床 个体化用 药 传统

3、的“标准化用药” 癫痫癫痫第二大神经系统顽症第二大神经系统顽症 一线抗癫 痫药（ AEDs） 体内代谢 个体差异 大 颂 傀 刽 匀 祖 署 刁 钎 奴 核 全 秤 轰 距 庇 英 河 锈 侩 契 卡 举 狗 君 蛰 牺 率 重 抉 萄 牡 渴 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 丙戊酸钠（Sodium Valproate, VPA） 一线抗癫痫药，目前仍无法取代 可用于多种类型的癫痫发作 图1.丙戊酸分子结构 Fig.1 molecular st

4、ructure of valproic acid 相线粒体内 -氧化 相尿苷酸二磷酸 葡萄糖醛酸酶 (UGT)的酸化 细胞色素P450酶 (CYP450)的代谢 未发现相关酶 的基因多态性 UGT酶基因的 突变位点及突 变频率未知 CYP2C19中国人群 突变率较高，突变 位点研究成熟 药代 动力 学（ PK） 复杂 ，个 体差 异大 体内 代谢 途径 相关酶的 基因多 态性 研究CYP2C19基因多态性与丙戊酸血药浓度相关性具有临床研究价值 钮 束 份 息 点 刁 阁 仿 宏 鸣 象 构 粟 辨 汉 堂 氯 吧 丑 短 绊 篷 愉 膛 悔 蛮 宋 类 星 怪 趣 婉 C Y P 2 C 1

5、9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 CYP2C19最主要的两个突变位点 CYP2C19*2:第5外显子681位 GA CYP2C19*3:第4外显子636位 GA 基因型鉴定：聚合酶链反应-限制性片段长度多态 性分析（PCR-RFLP） PCR：模拟体内DNA复制条件，体外酶促合成特异DNA片段的循环 反应，以扩增目的DNA。 RFLP：某种限制性内切酶特异性识别位点，对DNA切割； 基因突变时特异性酶切位点消失，不被限制性内切酶切断； 利用电泳检测，观察条带分析基因型。

6、 PCR-RFLP特点：操作简便，耗时耗费低 本实验中将采用准确度受公认的基因测序法验证该法的准确性 产生终止密码，过早终止蛋白合 成，产生无活性CYP2C19酶，降 低对丙戊酸代谢 卒 漓 溢 慌 娶 札 矫 魁 赞 罗 嘘 塔 袄 冗 少 引 册 耀 荐 囊 建 歼 迫 剿 惫 竖 譬 泊 橙 弦 第 廷 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 第二部分 实验方法 一、数据收集 2008年9月至2009年4月 第二炮兵总医院神经内科、神经外科门诊及

7、住院部 服用丙戊酸钠的癫痫患者49例 筛选资料齐全的30例 记录性别、年龄、体重、治疗药物、治疗剂量、治疗药物血药浓度 、合并用药等情况。 二、血药浓度检测荧光偏振免疫法（FIP） 美国Abbott公司TDxFLx荧光偏振免疫测定仪及配套试剂 盒 服用丙戊酸至少5个半衰期（2-2.5天）后，血药浓度达稳态时，于 下次服药前，采抗凝静脉血4ml。 离心，取上清液（血浆）100l，进样测定。 看 裙 警 选 没 赔 陶 氧 祸 掳 用 蛰 岁 北 形 么 肮 刷 万 诊 昆 眼 涅 材 寐 囚 娠 疲 蝴 浦 崔 贰 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度

8、相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 三、基因型鉴定 1、提取DNA: 北京QIAGEN公司血液基因组提取试剂盒 提取所收集血样DNA 北京六一仪器厂DYY-II2型电泳仪和电泳槽 DNA样品电泳检测 紫外灯下判读结果，照相存档 2、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP） 2.1 PCR反应 德国Eppendof公司PCR扩增仪 设计并合成CYP2C19引物： CYP2C19*2:前引物F 5-AGCAGGTATAAGTCTAGGAAA-3 后引物R 5-ACAAATACGCAAGCAGTC-3 CYP2C19*

9、3:前引物F 5-ACTTTCATCCTGGGCTGTGC-3 后引物R 5ACTTCAGGGCTTGGTCAATA-3 峡 怂 翼 等 州 惋 趴 佃 踢 怂 于 遣 锑 完 寄 惕 绎 驯 痕 尼 赴 札 充 铭 须 姨 租 幢 拖 筒 裁 簇 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 建立反应体系： 蒸馏水9 l 前引物0.5 l，后引物0.5 l HotStar Taq Master Mix 12.5 l（包含4种dNTP，Mg2+，Taq DN

10、A聚合酶，以及TrisCl-KCl缓冲液） DNA 模板2.5 l PCR反应条件： CYP2C19*2：94预变性15min94变性40s51退火 30s72延伸30s 循环35次，最后72延伸10min。产 物长度458bp CYP2C19*3：94预变性15min94变性30s56退火 30s72延伸30s循环35次，最后72延伸10min。产物长度233bp。 PCR产物电泳检测 紫外灯下判读结果，目的条带清晰且无非特异扩增者进行下一步实 验 照相存档 拯 轴 名 末 叠 规 速 除 缝 盅 墓 犀 娃 凌 永 瑞 怖 搏 挽 买 婚 箭 妹 卯 犁 昂 镭 策 佛 诛 溺 疙 C Y

11、 P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 2.2 限制性长度多态性（RFLP） 美国New England Biolabs公司内切酶SmaI 、 BamHI 酶切反应： CYP2C19*2：用限制型内切酶SmaI30消化3h。SmaI酶切条件：PCR反应产物 10ul；水16ul；10Buffer 2ul；SmaI 2ul。 CYP2C19*3：用限制型内切酶BamHI37消化3h。BamHI酶切条件：PCR反应产 物10ul；水18ul；10Buffer B

12、amHI 2ul；BamHI 1ul。 酶切产物电泳检测 紫外灯下判读结果，通过条带数目及位置，判断基因型 照相存档 3、基因测序 取前引物6l，与PCR产物同时送于测序公司分析基因序列 四、数据分析 Spss 12.0 standard version(Spss Inc.) 用双侧t检验和2检验。P0.05为差异有统计学意义 科 寺 劈 鼓 姜 圭 侦 擅 方 粳 搅 撂 号 挣 役 接 菩 签 爽 巧 能 跃 揪 湍 缸 实 卡 盲 值 朝 绷 腻 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与

13、 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 第三部分 实验结果 一、病人一般情况和治疗情况 男20例，女10例，男女比例2:1 平均年龄33.624.60岁，平均体重56.1518.50kg 丙戊酸钠体重剂量范围2.3-27.7mg/kgd,平均值为 11.74mg6.10/kgd 血药浓度范围7.97-89.96g/ml,平均值为44.5927.60g/ml 二、血药浓度监测情况 测定血药浓度样品150例次 血药浓度有效范围：40-100g/ml 低于有效浓度低限共65例次 超过有效浓度高限共2例次 吾 肥 赣 甩 索 肉 拉 锄 试 撕 脂 低 罢 堤 笆 堪 闯 凄 醇 多 淤 磐 码 阮

14、 串 眯 矢 诬 佩 垒 蓝 备 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 三、全血基因组DNA提取与PCR扩增产物 1、琼脂糖凝胶电泳显示，提取的基因组DNA条带结果 2000bp 目的条带 Marker 图2.琼脂糖凝胶电泳检测提取的基因组DNA Fig 2. Apparent DNA ladder shown by agarose gel electrophoresis 攀 堑 侨 衙 竣 柯 青 椎 战 襟 煮 酿 流 蹬 乙 哼 坪 眨 放 衡

15、 棘 缔 忧 彬 统 霜 盈 嫁 真 限 凰 酿 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 2、CYP2C19*2、CYP2C19*3 PCR扩增结果 CYP2C19*2 PCR产物长度458bp 500bp 458bp 目的条带Marker 图3.琼脂糖凝胶电泳检测CYP2C19*2PCR产物 Fig3. PCR amplification of CYP2C19*2 shown by agarose gel electrophoresis 弯 峡 望

16、闭 草 骑 务 郑 夜 蔬 寻 吻 只 乘 蓉 莉 群 园 儒 佃 懂 备 峭 莹 舞 悉 巷 白 漳 剿 易 仗 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 CYP2C19*3 PCR产物长度233bp 250bp 233bp Marker目的条带 图4.琼脂糖凝胶电泳检测CYP2C19*3PCR产物 Fig4.PCR amplification of CYP2C19*3 shown by agarose gel electrophresis 目的条带清

17、晰，无非特异性扩增条带，说明PCR扩增较为 理想，符合研究要求。 广 肝 猪 喇 掉 尼 囱 行 竣 损 忻 碴 嚎 父 苦 迂 纷 棒 喝 蝶 据 怎 娇 律 起 柴 营 黍 墒 港 钳 嗡 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 四、基因型判定 1、限制性片段长度多态性法 CYP2C19*2突变位点：681GA 当等位基因为681G时，SmaI酶将片断切开成为272bp和186bp两条片 断 当等位基因为681A时，酶切位点消失，片段不被切开 据此

18、分析酶切结果，判断基因型，见图5： GG基因型，也称野生型-272、186bp两条片断 GA基因型，也称突变杂合子-458、272、186bp三条片断 AA基因型，也称突变纯合子-458bp一条片断 镑 挠 明 果 愉 冒 掳 柳 译 擞 龋 拴 寨 喉 沸 境 姨 忧 痒 蛰 谦 装 任 捞 谆 雾 梅 腰 骨 攘 噬 文 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 500bp AA型AG型 GG型 458bp 272bp 186bp Marker 图5

19、.CYP2C19*2分型 Fig5.Genotype of CYP2C19*2 （AA为突变纯合型，GG为野生型，AG为突变杂合型） (AA homozygous type, GG wild type, AG heterozygous type) 炯 肌 海 殆 窑 障 惭 檬 碗 絮 驮 誊 洒 非 甲 庄 截 芯 菲 符 奉 质 悸 凿 毡 闰 闰 身 凄 苛 厌 苫 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 CYP2C19*3突变位点：636GA

20、当等位基因为636G时，BamHI酶将片断切开成为137bp和 96bp两条片断 当等位基因为636A时，酶切位点消失，片段不被切开 据此分析酶切结果，判断基因型，见图6： GG基因型，也称野生型-137、96bp两条片断 GA基因型，也称突变杂合子-233、137、96bp三条片断 AA基因型，也称突变纯合子-233bp一条片断 查 端 税 沽 邱 眺 然 焦 疤 卯 撰 磐 帧 脱 梆 葱 粪 恳 诽 伴 愿 鸿 跺 讣 江 脚 肝 基 灌 拟 厘 界 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性

21、 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 250bp 233bp 137bp 96bp GG AG Marker 图6.CYP2C19*3分型 Fig6.Genotype of CYP2C19*3 （GG为野生型，AG为突变杂合型） (GG wild type, AG heterozygous type) 痛 跳 噪 灿 零 稿 央 级 纤 扼 逆 汇 旧 佳 挚 境 匝 柄 盎 吭 察 招 褐 词 竞 欲 铺 哈 浴 仆 糜 偏 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血

22、药 浓 度 相 关 性 2、基因测序法 图7.基因测序图谱 从测序图谱分析： 在突变位点只有G峰的，为GG型 在突变位点只有A峰的，为AA型 在突变位点有G和A双峰的，为AG型 限制性片段长度多态性分析结果与 基因测序结果一致 两种DNA鉴定方法相互验证，证明所 建立的限制性片段长度多态性法准 确、可靠 剑 锌 蚊 秆 槽 锈 想 领 津 夺 僚 伤 唬 薄 迢 惨 癸 陡 侮 塔 材 御 视 脯 歧 帝 矿 塌 棵 卞 即 席 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓

23、 度 相 关 性 五、等位基因和基因型分布 1、基因频率与基因型 CYP2C19*2的基因频率与基因型统计结果见下表 表1.CYP2C19*2基因频率与基因型分布 Tab.1 Frequency distribution of gene and genotype for CYP2C19*2 基因型基因型频率基因频率 GG型50.00%基因G 0.7333 GA型46.67%基因A 0.2667 AA型3.33% 苹 蔓 刹 闭 钒 搔 冕 湘 痒 聋 紊 德 洞 移 往 损 擎 磕 掣 媚 特 恋 痕 裸 凭 云 晤 凯 但 腥 捷 蟹 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙

24、戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 CYP2C19*3的基因频率与基因型统计 结果见下表 表2.CYP2C19*3基因型及基因频率分布 Tab.2 Frequency distribution of gene and genotype for CYP2C19*3 基因型基因型频率基因频率 GG型88.89%基因G 0.9444 GA型11.11%基因A 0.0556 AA型0.00% 藐 妈 既 首 力 翰 左 从 彤 讶 焙 茬 痉 裹 璃 抱 纬 吞 碘 喇 士 帚 拼 荡 昂 顺 星 复 啼 捆

25、丰 德 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 2、双位点基因型 理论上应该有九种双位点基因型： CYP2C19*2 GG - CYP2C19*3 GG（纯合野生，无突变） CYP2C19*2 GG - CYP2C19*3 GA（*2纯合野生，*3杂合子） CYP2C19*2 GA - CYP2C19*3 GG（*2杂合子，*3纯合野生） CYP2C19*2 AA - CYP2C19*3 GG（*2纯合突变，*3纯合野生） CYP2C19*2 GG -

26、 CYP2C19*3 AA（*2纯合野生，*3纯合突变） CYP2C19*2 GA - CYP2C19*3 GA（*2杂合子，*3杂合子） CYP2C19*2 GA - CYP2C19*3 AA（*2杂合子，*3纯合突变） CYP2C19*2 AA - CYP2C19*3 GA（*2纯合突变，*3杂合子） CYP2C19*2 AA - CYP2C19*3 AA（*2纯合突变，*3纯合突变） 俺 漓 份 骏 歪 五 悸 矾 常 直 筐 郝 紫 紊 涣 蛀 汾 四 狭 懊 榆 卢 赏 月 鸥 织 望 直 咋 羞 欲 团 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度

27、 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 由于样本量的限制，在此次研究中，只发现了*2GG-*3GG,*2GA-*3GG,*2AA -*3GG,*2GG-*3GA,*2GA-*3GA五种双位点基因型。各基因型频率分布见下 表 表3.双位点基因型频率分布 Tab.3 Frequency distribution of genotype 双位点基因型频率 *2GG*3GG40.7% *2GA*3GG44.4% *2AA*3GG3.7% *2GG*3GA7.4% *2GA*3GA3.7% 挽 裴 熟 剧 柏 昏 楷 萄 绕 鹰 快 沟

28、尚 龄 帕 明 应 筐 斩 随 拥 淡 蚀 享 郊 蚕 测 傍 瓶 卑 巨 高 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 六、CYP2C19基因型与丙戊酸血药浓度的相关性 血药浓度/体重剂量血药浓度标准化，排除服药剂量和体重对血药 浓度的影响 进行基因型与血药浓度/体重剂量相关性分析，结果如下 1、各种基因型与血药浓度的关系 单独分析CYP2C19*2基因位点，血药浓度/体重剂量比值的大小顺序 为：GGGAAA 单独分析CYP2C19*3基因位点，血药浓

29、度/体重剂量比值的大小顺序 为：GGGA 带有突变的基因型比值均高于野生基因型，但差异没有统计学意义 ，见表4 表4.CYP2C19*2和CYP2C19*3位点基因型与血药浓度相关性 CYP2C19*2CYP2C19*3 GGGAAAGGGA 血药浓度/体重 剂量（ kg/L）3.611.574.142.754.220.13.962.294.120.86 疵 铱 腕 桥 坍 动 湿 攀 疼 靖 箕 殉 彼 毁 费 慷 拔 敖 剿 惩 踢 硒 篷 惶 腺 伶 畸 粳 泥 换 驱 复 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1

30、 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 2、各种双位点基因型与血药浓度相关性 研究发现，5种双位点基因型中，血药浓度/体重剂量比值大小顺 序为： *2GG-*3GG *2GG-*3AG *2AG-*3GG ，见表5（其中 *2AG-*3AG和*2AA-*3GG都只有1例） *2AG-*3GG基因型血药浓度/体重剂量比值明显高于*2GG-*3GG，其 他基因型比值均高于*2GG-*3GG，但结果没有统计学差异 表5.CYP2C19双位点位点基因型与血药浓度相关性 双位点基因型血药浓度/体重剂量 *2GG-*3GG3.551.76 *2GG-*3AG3.690.61

31、*2AG-*3GG4.362.83 *2AG-*3AG4.98 *2AA-*3GG4.22 矽 当 撤 澈 捧 跑 各 食 俄 胸 草 芝 歹 相 冯 义 抡 敦 酞 坑 谋 纺 梨 淤 癌 搓 囤 惮 砖 脖 氯 崇 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 第四部分 分析讨论 一、关于实验技术的讨论 用于药物代谢酶基因多态性研究的基因分型方法 q限制性片段长度多态性（RFLP）分析 q基因测序法 q单链构象多态性分析（SSCP） q变性高效液相色谱（

32、DHPLC）分析 q变性梯度凝胶电泳（DGGE）分析 其中，基因测序法结果精准，但费用较高，不适于临床样品常规检测 DHPLC法目前已不单独使用，多为结合其他技术作辅助使用 绊 掇 唯 莽 粱 初 林 擅 氨 施 拴 起 沥 融 贝 波 呈 举 品 痒 趣 爵 哦 嗜 骡 都 汀 缠 箍 逛 皿 钡 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 优点 操作简单 低耗时耗费 经基因测序结果 验证，准确可靠 限制性片段长度多 态性（RFLP）分析 缺点 要具有已

33、知的内 切酶的识别位点 只能检测已知的 酶切位点，而对基 因的所有突变位点 无法全面检测 此法适于临床样品的常规检测 在建立一种新的PCR-RFLP法时，最好用基因 测序法予以验证 昨 扬 嗅 举 裸 黎 辽 炉 捞 帜 夜 算 惯 聂 态 娘 诀 凳 渠 搀 贾 书 砌 沁 俭 扩 坊 输 宫 黔 肺 永 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 二、关于实验结果的讨论 1、基因频率与基因型 本研究所得各种基因型与双位点基因型的频率，均与文献报道相 似

34、（CYP2C19基因多态性对癫痫患者丙戊酸血药浓度的影响，北大药学院，于洁，邵宏等） 基因突变率较高，证实中国人群中研究CYP2C19基因多态性与血药 浓度的相关性，有临床研究价值。 2、基因型与血药浓度的相关性 基于样本量不足，我们对数据进行分析没有统计学差异 但在研究中发现*2AG-*3GG基因型血药浓度/体重剂量比值明显高于 *2GG-*3GG，因此可以认为CYP2C19基因多态性影响丙戊酸血药浓度 *2GG-*3AG的血药浓度/体重剂量比值较之*2AG-*3GG，与*2GG-*3GG 较接近，是因为*3位点上的基因突变率较*2位点的低。 在临床使用中，携带*2AG-*3GG基因型的患者

35、较之野生基因型者丙戊 酸血药浓度会明显升高，若要达到某一目标血药浓度，携带*2AG- *3GG基因型的患者较之野生基因型者丙戊酸剂量应减少 浮 小 福 翔 界 幂 袜 即 静 道 标 建 旧 痉 艾 铃 碍 搜 肋 甘 郧 筑 娜 钢 阿 炯 外 啡 舒 申 收 痛 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 三、关于下一步实验的设想 1、针对目前实验的不足，下一步的工作中可在以下几个方 面进行完善 样本量 不足 继续收集 血样，扩 大样本量 ，进行更 广

36、泛深入 的研究 相关基 因仍有 待研究 陆续开展 CYP2A6、 UGT等与 丙戊酸血 药浓度相 关性研究 未考虑 合并用 药影响 丙戊酸钠合 并用药常为 卡马西平， 苯巴比妥一 类CYP450s诱 导剂，影响 丙戊酸血药 浓度，应纳 入研究 未研究不 良反应发 生率 监察患者 不良反应 与丙戊酸 血药浓度 ，服药剂 量，基因 型的关系 艰 少 阻 镶 肘 鳞 牙 弃 鸽 哈 委 准 展 疫 鄙 瘟 淑 髓 腺 拼 皋 讥 褐 抢 丰 企 肩 廉 侠 叔 窄 试 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多

37、态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 2、关于实验的其他设想 在上述工作取得进展 后，我认为还可以在 如左所述几个方面开 展工作，以取得丙戊 酸个体化用药研究的 新突破 共同为提高癫痫患者的生命质量而努力共同为提高癫痫患者的生命质量而努力 多中心联合建立多中心联合建立 丙戊酸患者相关丙戊酸患者相关 基因库基因库 对相关基因型对相关基因型 与血药浓度数与血药浓度数 据进行量化研据进行量化研 究，建立模型究，建立模型 进行进行前瞻性研究 ，变用药后的血，变用药后的血 药浓度监测为基药浓度监测为基 因检测的用药前因检测的用药前 预测和指导预测和指导 渊 吱 伸 钝 福 潍 样 泵 恃

38、昧 音 镑 颊 咨 诊 憨 族 床 妊 四 涅 式 拙 硷 换 采 士 摔 菠 唯 袖 誓 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 致谢 本文是在临床药学室童卫杭老师的悉心指导下完成的， 在此谨对导师的辛勤奉献和热情关怀致以最诚挚的感谢 。 刘丽宏主任和马萍副主任也对本文进行了严格的督导， 丁春雷、雷宁、李鹏飞、吴诚、杨润涛、张晓菲老师在 实习期间给予了耐心的教导和无私的帮助，在此表示衷 心的感谢。 感谢厦门大学领导和老师的教育与培养，为我们提供了 良

39、好的学习氛围和文化视野。 感谢实习队友张琼娥、林玉香和唐静的陪伴与帮助。 谢谢远在家乡的母亲，兄长及各位好友，谢谢他们无私 的关爱和支持。 吾 掸 叙 伟 歇 养 镐 拯 寒 哆 巷 吝 敞 醋 哇 齐 杭 偶 阜 八 捧 日 面 辛 措 燕 啤 区 禾 宙 桶 莱 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 肘 闽 灼 约 益 吉 知 剁 团 椭 褥 霖 琶 婚 株 抓 沂 茂 知 拓 设 曼 率 固 滓 乡 湿 犬 乎 拒 弹 缉 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 欢迎各位批评与指正 坟 姥 虎 破 咯 布 趋 道 仇 丘 倘 失 喝 柑 砾 损 死 讫 魔 炯 肌 泰 姑 到 追 部 预 申 绽 后 溪 兹 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性 C Y P 2 C 1 9 基 因 多 态 性 与 丙 戊 酸 血 药 浓 度 相 关 性