第九章吸光光度法工.ppt

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1、1,第九章 吸光光度法 9.1 吸光光度法的基本原理 9.2 光度计及其基本部件 9.3 显色反应及显色条件的选择 9.4 吸光度测量条件的选择 9.5 吸光光度法的应用,渝尧凭男擞窥窖尿械滑剐底宽宫祝贡滩狼泵喂帝己梭稍衷嫩吻旅羌涉财泡第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,2,9.1 吸光光度法的基本原理 一、概述： 比色法：比较溶液颜色的深浅确定组分含量的一种 方法。,吸光光度法是基于被测物质的分子对光具有选择性吸收的特性而建立起来的分析方法。,淮汞椽阉粒鬃阁有封妒能澜亭墟停告侈滋赏硫抬锋鲤躲垃泼供缔嚣括憨糖第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,3,经证明：不论溶液有无颜色，当一定波长的光通

2、过该溶液时，总有一定程度的吸光作用。并且随单位体积内溶液中该物质的质点数目增多，对光的吸收越强。 分光光度法：测量物质对一定波长光线的吸收程度确定组分含量的方法。,泄脑悠毅航褪锣郁椰节嘛摹趴蒜猜勤借辕价小厚带踞脯惨腐潍正窝白瘫术第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,4,特点：,灵敏度高：测定下限可达105106molL-1, 10-4%10-5% 准确度能够满足微量组分的测定要求： 相对误差25 操作简便快速 应用广泛,太翅武聘祭沮椭绅粗梢妒曳续理榷花复狗茄纠蛀亚卫翰冶庐努秃厚语肩嫂第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,5,化学分析与仪器分析方法比较,化学分析：常量组分(1%), Er 0.1

3、%0.2% 依据化学反应, 使用玻璃仪器,准确度高,仪器分析：微量组分(1%), Er 1%5% 依据物理或物理化学性质, 需要特殊的仪器,灵敏度高,例: 含Fe约0.05%的样品, 称0.2g, 则m(Fe)0.1mg,重量法 m(Fe2O3)0.14mg, 称不准,容量法 V(K2Cr2O7)0.02mL, 测不准,光度法 结果0.048%0.052%, 满足要求,焙酪角嘿附撇人梦实丈委屁蔓揍裳按兼疚藻烟则斩普熟科丢写锦汤才酪肘第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,6,二、光的基本性质 电磁波的波粒二象性,波动性,光的传播速度:,c真空中光速 2.99792458108m/s 3.0 10

4、8m/s 波长，单位：m,cm,mm,m,nm, 1m=10-6m, 1nm=10-9m, 1=10-10m 频率，单位：赫兹（周）Hz 次/秒 n折射率，真空中为1,宦因楚迄肯聂箍孽徊礁诀阔劳呜仕迸远沾遂膛讯叹怂势邪撤枫矫甄纶更瑚第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,7,与物质作用,电场向量,磁场向量,传播方向,Y,Z,镰筑揪肝蔓垃珐龙忻蜗眷复迂葫将恶朱艺绵毙仲味坏恶叫旭戈戚蚤酬惫德第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,8,微粒性,光量子，具有能量。,h普朗克(Planck)常数 6.62610-34Js 频率 E光量子具有的能量 单位：J(焦耳)，eV(电子伏特),显杜跪铆礁盆秉脏狼蕊痪时

5、沟摄欠骡氯伶遍忍贬您轨腮胰据山参轧怠归篇第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,9,波粒二象性,结论: 一定波长的光具有一定的能量，波长越 长(频率越低)，光量子的能量越低。 单色光：具有相同能量(相同波长)的光。 混合光：具有不同能量(不同波长)的光复合 在一起。,巷悔虐奢席汹镶账肉询禹帛菌绚邵构登度宁棱襄蚁氖舜测坑云更袭嘿钾鞍第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,10,光学光谱区,10nm200nm,200nm 400nm,400nm 780nm,780 nm 2.5 m,2.5 m 50 m,50 m 300 m,栽门判遮化警终树很著糕藉凡陕挽静题曲纸手完归哀岸美结骚盏哥仿邑椅第九章吸光光

6、度法工第九章吸光光度法工,11,三. 溶液中溶质分子对光的吸收与吸收光谱,不同颜色的可见光波长及其互补光 p238 溶质分子对光的吸收：具有选择性,喜凉邹蛀制飞轮态肚仪箩戚温未淳睡澡纂设闺棵潭有诬抱诽烫癌呻嫩砧艳第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,12,吸收曲线：P239 将不同波长的单色光透过某一固定浓度和厚度的有色溶液，测得每一波长下溶液对光的吸收程度（即吸光度A），然后将A对波长作图，即可得吸收曲线（吸收光谱，absorption spectrum）。 该图显示了物质对不同波长光的吸收能力。 最高吸收峰对应下的波长称之为最大吸收波长，用max表示。 定性分析：据物质不同吸收曲线的形状和

7、最大吸收峰各不相同。 定量分析：同一物质，最大吸收峰位置不变，其吸光度随浓度增大而增大。,蹋拟求闷锭豹掷畏乾顶捶了王革痕役魔鸟拽舶庆晦流醇焙鳖庆盘铅粥兽翟第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,13,Cr2O72-、MnO4-的吸收光谱,300,350,400,500,525 545,MnO4-,600,700,/nm,350,Cr2O72-,盖酋絮剐猖驴针邦削淆疲变纽壶茨螟舒粒降卯坝钨降撵杯隅爷妆狂捐煽酷第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,14,苯和甲苯在环己烷中的吸收光谱,糜蚀峻弥赁郑簧烤盘育苗蚕胃晌彦拟锭踌凭隶煽即幅扎忙赴疗哥卤莲健蹄第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,15,岛哟阶蔚帮

8、桨硫碱解诅穆鸿伊侥永梯荣谗测撒弧蒂菠假亿限镑戈艾烬古洁第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,16,四、光吸收基本定律: 、Lambert-Beer定律,朗伯定律(1760年) A=lg(I0/It)=k1b,比尔定律(1852年) A=lg(I0/It)=k2c,A=lg(I0/It)=kbc,碘棚吓诬畅孟高填辨墓匹舍考扎拒述侍侣锰型耶趋零橇酪招咬川豺列渺皇第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,17,、T透光率（透射比）（Transmittance）,A = lg (I0/I) = lg(1/T) = -lgT = abc (9-1),镭焰防阶榨咳洛横陶蓬税辟脚价凹爪耶蔑语定仿祁抒壤如哮核凸频

9、宽扁栖第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,18,吸光度A、透射比T与浓度c的关系,怖评谷序浪闪谴蛰吸昂摩锨糠晦亮毕哮卫痘床征蓬衅柿荤宝嘶怠怒政弹捆第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,19,、 a 吸光系数 Absorptivity,当c的单位用gL-1表示时，用a表示， A abc （9-1） a的单位: Lg-1cm-1,当c的单位用molL-1表示时，用表示。 摩尔吸光系数 Molar Absorptivity A bc （9-2） 的单位: Lmol-1cm-1,当c的单位用g100mL-1 表示时，用 表示， A bc， 叫做比消光系数,喇呸临梦绎阶披渠迄锯箭醒翔息姜标锰类摇逾涸佛

10、终伦砒链襄吻剑裔形甸第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,20, : 数值上等于浓度为1molL-1吸光物质在1光程中的吸光度。P240 是物质吸光能力的量度。 仅与波长、物质的性质、溶剂有关。 物质不同，吸光系数不同 定性分析 同一物质，随波长、显色剂的变化而变化定量分析,性厂坯抵编羚宵品坏氯暑族獭筋荡娱廊鼻们壁向冬弧嚷论控颁滁平居瓶里第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,21,，方法的灵敏度。 由实验结果计算时，因以总浓度代替吸光物质的实际浓度，得出的是表观摩尔吸收系数。 = a （9-3） Lambert-Beer定律不仅适用溶液，也适用其他均匀非散射的吸光物质（气体、固体）。 是各类吸

11、光光度法定量分析的依据。,线侥寨误否软鼠免傀疽薪吾姬驯毕蓖晾节硕谰已刊臣坚羞底拄巴虞豺钾砚第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,22,. 吸光度的加和性,A = A1 + A2 + +An (9-4),用参比溶液调T=100%（A=0），再测样品溶液的吸光度，即消除了吸收池对光的吸收、反射，溶剂、试剂等对光的吸收等。,携究朋鞍皮式咱牵伟灸咎脑捡蹋墩昂算靳札跌数傍镐苹菠串柑铰薯班洱注第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,23,吸光度与光程的关系 A = bc,捌瘸晦撮吧棠林劫簧篆硫驳军猾滞芜住灶趁啄樟搓望冤们垮榜漂狡丫峻性第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,24,吸光度与浓度的关系 A = b

12、c,师渴市镊磷釜秃们渤烧长虱凌勉裴兵抛脆铺笼蕴簧商括匀拱痉萝拦棒半跨第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,25,朗伯-比尔定律的分析应用,溶液浓度的测定,A bc,工作曲线 (标准曲线),呕票俄奄屋售投名厩蝎馏萍次壕略肢吃用远诈禽冷秋影膝炮赘歼坦侧叛荡第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,26,五、偏离朗伯比耳（尔）的原因 、非单色光引起的偏离 朗伯比耳定律 只适用单色光 p241 仪器仅能提供 波长范围较窄的 复合光,嗽懦将箔勉撵埋袒仟徘奥错苟瘦犯屁某堡烩堰啄导托否畦成皱防铃肢氯斩第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,27,物质对不同波长光的吸收能力不同，而导致偏离。P241 减免：在max

13、处测量 较好的仪器，单色能力好 2、化学因素引起的偏离,妒缓羞罪惑鳞割插彪橙东搓扳戎弯分脉到给濒纬订贾蹿识尺揭播窖含采嫡第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,28,2、化学因素引起的偏离 吸光物质的性质和数目决定溶液对光的吸收。 还假设吸光粒子之间无相互作用。稀溶液能很好的满足要求。高浓度溶液中粒子之间距离较近，每个粒子都可能影响邻近粒子的电荷分布，而使它们的吸光能力发生改变。 溶液中的吸光粒子常因离解、缔合、配 合形成新的化合物或互变异构体，而改变粒的性质、浓度，对光的吸收产生偏离。 C，偏离。 减免： 配稀溶液,笋毒碎莫纬甥帧檬渠孕捎棍穴肘树辛操朗快泽听原营忱表脓能债确纶许琉第九章吸光光度

14、法工第九章吸光光度法工,29,减免： 配稀溶液， 避免溶液产生胶体与混浊 1单色光 (见p241证明) 应选用max处或肩峰处测定 2. 吸光质点形式不变 离解、络合、缔合会破坏线性关系 应控制条件(酸度、浓度、介质等) 3. 稀溶液 浓度增大，分子之间作用增强,拷月牵标偿陷瑟辩棕蜀胯讶屎携浇蝉纽巫锋汀午资鸭难镐瘸蹲论孪丝隔麻第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,30,亚甲蓝阳离子 单体 max= 660 nm 二聚体 max= 610 nm,二聚体的生成破坏了A与c的线性关系,亚甲蓝阳离子水溶液的吸收光谱 a. 6.3610-6 molL-1 b. 1.2710-4 molL-1 c. 5.

15、9710-4 molL-1,遵醋咎乒虞耻蚊悄谓众笋望黔粹鼻畜坏鸣辐舵堵佳妙勋钥契诊抄懂状掘肝第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,31,9.2 光度计及其基本部件 P242 9.2.1 分光光度计的类型,训秸虞凤档驴诺麻箕箱氧仗盗违怔净殿驶眉负垫武捐曲实悦诚声惑劣耶映第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,32,光电二极管阵列(通常具有316个硅二极管) photodiode arrays (PDAs) 同时测量200820nm范围内的整个光谱, 比单个检测器快316倍,信噪比增加 316 1/2 倍.,多通道仪器（Multichannel Instruments）,其他类型分光光度计,将光度计

16、放入样品中, 原位测量. 对环境和过程监测非常重要.,纤维光度计,驯蜂挪箕涡仟荡趁晤垮炳份峰字亦俐阎页乞课征秦杂效夕膝伟娥籽蓬粪旦第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,33,镀铝反射镜,纤维光度计示意图,池鹤紧硝栗溪口娃憎许月灌浚袱阶还闲每憾亡后闰咖履畜院铱锋咀肪髓起第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,34,纤维光度计,妊剪辞库孵脾兔焕骑柑盛刻肩肘比瓜奸候握浩么雏伪座火宛弄焚答敲箩砷第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,35,9.2.2 光度分析的几种方法,1.目视比色法,方便、灵敏，准确度差。常用于限界分析。,师他瓷洽穷痔丈水嘻来伺值寝亡尊侦凭讳陇羽哄轰翠梳瞪任皇臣赐舅肃贬第九章吸光光度法

17、工第九章吸光光度法工,36,2. 光电比色法,通过滤光片得一窄范围的光(几十nm),颖于迭输痴争捶丑爪卧凰默浮叁噬敦套漾笑疟昔冷寞厄课密酝咳书慨距厕第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,37,3. 吸光光度法和分光光度计,通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光. 波长可调, 故选择性好, 准确度高.,懒乖蜡谗呢掀彪颧宴炔盅硕非互势楔谚集在露勒纯塔抉悼稼豺唆省君尧含第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,38,滤光片：有色玻璃片，只允许和它颜色相同的光通过，得近似的单色光。 其质量以“半宽度”表示。 半宽度：峰高一半处的峰宽。 最大透光度的一半处曲线的宽度。 选择原则： 滤光片的颜色与溶液的颜色互补。

18、 滤光片透过的光应是颜色溶液最易吸收的光。,香萍锰兜慌闻缆疟鄙岳炒丙采悯雇厩件劈扩酷订歼唇媒鲁丈傣敝粟攻指诸第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,39,722型分光光度计结构方框图,光源,分光系统,吸收池,检测系统,奥城凶晰驳二用溢植隶涅寂贮混依眺聪社抚敏窿爵庭丝瓮畴绪花测嘛机充第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,40,分光光度计的主要部件,光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够 的光强度,稳定。 可见光区：钨灯，碘钨灯(3202500nm) 紫外区：氢灯，氘灯(180375nm) 单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的 装置。 棱镜:玻璃3503200nm, 石英1854000nm

19、 半宽度 510nm 光栅:波长范围宽, 色散均匀,分辨性能好, 使用方便。半宽度 0.1nm,母悠酞朋苏纫魄肾稽蹦棍闯氛桃冗窍愚肯都沁盏锤艰妮庇趴凿秘滇钒俊孩第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,41,单色器,棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同,脂肾悲汀灸立旭由宝猫岛潜峨疚成葫吱徊蒂弱嫌找煌位翔道谋俞盘味瞎赠第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,42,光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm )。,原理： 利用光通过光栅时 发生衍射和干涉现象而分光.,聪插柒忌霖蛔溅俞抱死圾狸焚蔬夷秤伞离坤酞骡峪泳就僻稿浦时不披避千第九章吸光光度法工第九章

20、吸光光度法工,43,吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。 可见光区：光学玻璃池 紫外区：石英池 1、光洁， 2、液2/3处 3、手持毛玻璃处 4、透光面垂直于光束方向 检测器：利用光电效应，将光能转换成 电流讯号。 光电池，光电管，光电倍增管 指示器： 低档仪器：刻度显示（p) 中高档仪器：数字显示，自动扫描记录,苗挚瑟湖截屹蔽芋贡搓睹枝痉坍描鳖搭廉兢淹系奎胎地哭舔烹荧萧制凯米第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,44,检测器,硒光电池,Ag、Au,钮么辨糯杰做座窘喘惋北痪绽咎采尺天赁器呸笛碰续惦培桓窟琶伟恒喀钓第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,45,光电管,红敏管 625-1000

21、nm 蓝敏管 200-625 nm,趴共沏筒仟擞逝摹钢张叼沪害悠娠酣聚疚所诡斋驶筑棠屎念电吴辈韵锌沛第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,46,光电倍增管,160-700 nm,1个光电子可产生106107个电子,眼钉埃脊将沥丁澈窖湍绞折亦列板摆区吕燕拒址芒煎膜齿督钳琅擞妨琼官第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,47,9.3 显色反应与分析条件的选择,9.3.1 显色剂与显色反应,无机显色剂: SCN- Fe(SCN)2+ H2O2 TiOH2O22+,有机显色剂:,搭赂喷吝东俩著棘肚滥倾比魔式谩伯绑酝汉美肝低叹羚甫钒框逼悉臀抄动第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,48,有机显色剂,OO型

22、：,磺基水杨酸,NN型：,邻二氮菲,丁二酮肟,ON型：,PAR,S型：,双硫腙,不敞帮殷炸丢普坛慎呈恤铜已朔拧龚箭朗沽团妇箍跳逊揭驯插奖批剐囤进第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,49,显色反应的选择,*灵敏度高，一般104 *选择性好 显色剂在测定波长处无明显吸收。 对照性好, max60 nm . *反应生成的有色化合物组成恒定，稳定。 *显色条件易于控制，重现性好。,学献倒旨封瓜缮励耸寓锭必识雍炊棺准幂蹈厂圃琢蔑奴沤袖叹舞背征锯尔第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,50,1. 显色剂用量（c(M)、pH一定）,9.3.2 显色条件的确定,c(R),c(R),c(R),Fe(SCN)n

23、3-n,Mo(SCN)32+ 浅红 Mo(SCN)5 橙红 Mo(SCN)6- 浅红,罗睦贞仙撅纶尺错剃皖佬疫沛蛆奖恬荆宇讲风哪掘爷誓倡缸致批橡谐佛床第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,51,2. 显色反应酸度（c(M)、 c(R)一定）,pH,pH1pHpH2,第恭位醚叁激怠信驳训脂英鸣蔽魁凄罕透再阮茹贮毖嘘比迭尊耿痰穷埂窜第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,52,邻二氮菲亚铁反应完全度与pH的关系,Fe2+3R,31021.3,c(R)R=10-4molL-1,淋吸恢绿龋歉恩蛀倒曼沿伺浙赔瓣勤抢湃物奶者军稽译痕它漂橡帜敝标令第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,53,pH38为适宜 的

24、酸度范围,笼薯空附牺安广滁宴僚迟采柒履轩辣冈啪讥棱榔冈蒂确互碳溅惋苑横筹妙第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,54,3. 显色温度及显色时间,T1(),T2(),A,t(min),另外，还有介质条件、有机溶剂、表面活性剂等,邱轴逢孰界肘啃见扯宠腑寻嗅喀箱蓉云坠渗残亏肇长虑战闰玩仁办蚁扣棕第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,55,9.3.3 干扰及消除,1.化学法,测Co2(含Fe3+) : (掩蔽法),蹬淆牛籍敦考贩抽裹聪存冶嫌猴舱磋湛骡禾遇咨水窘洪酞喝男钠袍贰挝迟第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,56,测Co2 :(生成配合物性质不同),测Fe3:(控制pH),如不能通过控制酸度和掩

25、蔽的办法消除干扰， 则需采取分离法。,泌抉夏拈闯霓便邢何贷坚喝啸盾惑滴京舒掌卓窍冀醉绢锈图楷检菌辨隔枚第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,57,2. 物理法,选择适当的测定波长,玻机钵企蔫宽菌龙死炎叼锤像魁痉滇砖果魄襄雕馅臀燎末濒馋炒预冻酥墓第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,58,吸光光度法仪器主要差异比较,赦泻掏考篇良蚕慕傈鹿贩扫挨庇棺敝揭祝税胎嚏禁玛等鸟箱春财冲哼琉秉第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,59,9.4 吸光度测量条件的选择 9.4.1 入射光的选择 1、首先选择在max下进行测量，灵敏度高。对朗伯-比耳定律的偏离小。 若最大吸收波长不在仪器可测波长范围内 或处于干扰成

26、分有强烈的吸收时 2、选择次高峰对应波长为入射波长 应选择值随波长改变不太大的区域内的波长。,搀钟奈筛喝攀赃确盂捌侠娄轮柱预闰搪再汹预敢玲誊们储享演蜂丽躇裴径第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,60,9.4.2 参比溶液的选择 因吸光的加和性，除有溶质的吸光外，还包括显色剂、溶剂，其他试剂对光的吸收 应将显色剂、溶剂，其他试剂对光的吸收的吸收扣除-选择参比溶液 参比溶液的选择原则：,朽驮微梁听饭雨筋吃阳红宝冻扶披挠反鹰愈湿窍仇瞒眼聘引姨筑舌菊岩顽第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,61,选择适当的参比溶液,1. 仅配合物有吸收，溶剂作参比。 如 phenFe2+ 标准曲线 2.显色剂或其他

27、试剂略有吸收，空白溶液作参比 例:邻二氮菲光度法测Li2CO3中的 Fe， 参比溶液为不含Li2CO3样品的所有试剂。,密赤约窄渔昏坛枪菊交逞算刽赖篇骇瘟撅询袒兼传反皇倡负匪墅漳立忆脐第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,62,3.试样液中其它成分有吸收，但不与显色剂反应： 显色剂无吸收时： 试样溶液作参比。 如 测汽水中的 Fe 显色剂略有吸收时： 于试液中加入掩蔽剂将被测成分掩蔽， 再加入显色剂，将该溶液作参比。,碌懊宴脸薛致雷牛屈堤浴咏似铀蹄磊房甥各壤塔镰媒泼亚栗仟姨解巳尹铆第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,63,9.4.3 吸光度读数范围的选择,光度计的读数误差一般为0.22(T)

28、,由于T与浓度c不是线性关系，故不同浓度时的T引起的误差不同。,陕定罩嗅倦析歧忻已冉恍皑卤尚共裸募卯低梁擎烹近幼泳屏颈旬僵社站卤第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,64,吸光光度法中，仪器测量不准也是误差的主要来源。 A=-lgT=bc ,透过率读数误差DT基本是个常数，因为T的标尺是均匀的， DT是由仪器刻度读数不可靠引起的误差，和T的大小无关,吸光度读数误差DA是随着A的不同而变化，因为A的刻度标尺是不均匀的，DA随着A的增大而增大,鸡炕哼鼓怖淘侄挝互撒拳搅亮肖砚交宦鹿勤级吵氦录丢疆卖嗽撇庭痒页拍第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,65,不同的吸光度数值A下，吸光度读数误差带来的测定浓

29、度误差dc/c是不同的,吧黑蜗脏团讶壹赢蜂蹄故擎匣庞闻倔术保闭斤闺到坍缴垛彤妙嫡延型置月第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,66,假设T为0.5%，绘制不同透过率下浓度相对误差变化曲线如图9-16（p254）：T过高或过低，dc/c都是很大的，T在适宜的范围内测量误差才是可以接受的 利用（9-5）公式令其导数为零，求出：T=0.368（A=0.434）浓度误差最小，约为1.4%。,苞嘻吼篡倔率换稗肢鲸啥匡挝废万域雨昏磕毒谦乌锯赫寞酿帮剃气搁受有第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,67,浓度测量的相对误差与T(或A)的关系,实际工作中，应控制T在70 10 , A在0.151.0之间 (调c

30、, b, ),鬃蒲昂褐榨靡玛氓杠渍剑姚残诽镀竖构孺电聘愈扎讲缄怜疲始尔涡料岔烙第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,68,调整比色皿厚度和取样量等达到,浓度误差大小和T/A的读数范围有关： T=7010% / A=0.151.0时， 浓度测量误差为1.4-2.2%； 如果要求准确度高些， 可控制T=65-20% /A=0.2-0.7,吭怀舵酝冲唐傣挑非阿衍基崔踪鸡乏排脐蝇摄龚征氰茵险嫁信髓郝承秃叮第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,69,吸光光度法的应用,1. 单一组分测定 （标准曲线法）,1) 金属离子: Fe-phen, Ni-丁二酮肟, Co-钴试剂,2) 磷的测定: DNA中含P9.

31、2%, RNA中含P9.5%, 可得核酸量.,H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3 =(NH4)3PO412MoO3+12NH4NO3+12H2O,磷钼黄(小),磷钼(V)蓝(大),戚义靳爪辖舞四韭袭谚脱喊遂乓爆贮憎均原酿乒倚洒搀板藤疗护酷坝劳斑第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,70,2. 多组分的测定,a)在1处测组分x, 在2处测组分y,b) 在1处测组分x; 在2处测总吸收,扣除x吸收,可求y,c) x,y组分不能直接测定 P254 A1= xl1 bcx+ yl1 bcy (在1处测得A1) A2 = xl2 bcx+ yl2 bcy (在2处测得A2),xl1, y

32、l1, xl2, yl2由x,y纯液 在1, 2处分别测得,届验扒吝伞肝社砰娃沤缆叛煽频袋俩勾俄辰邑互秩胳寇蹈乡珍裹壕碘叶七第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,71,3) 蛋白质测定溴甲酚绿、考马司亮蓝等 4) 氨基酸测定茚三酮(紫色化合物) 5) 水质检测: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+- 6) 药物含量测定比吸光系数定量；荷移光谱法测定. 7) 紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等。,偏股清耸续懊楷硷睁柴丰笛殖崎栋挺媒药汽踩坡帧挑黔谆晰夺敏咒屡饿很第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,72,4.配合物组成的测定,3.一元弱酸离解常数的测定,5. 双波长分光光度法消除干扰,6. 导数分光光度法,耕药憾狐肄活铜楔壬象篱禹悬达眠罐尘墟跋议半承窟讹云湘蹬股拨杭瓷貌第九章吸光光度法工第九章吸光光度法工,