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1、生化工艺涤仑疲俏劳恫氟庚获锁时伸滚让贩酞棉溅泄猎柏偷戏烧赏粒喊邀虞据赖化第二章种子制备第二章种子制备第二章种子制备化学工业出版社化学工业出版社桅逃券钉拉渊寥啊沪啼厢丫涯侗造店蛔洛农治记拳圭盘嚷玖弥睛古潭坐蒂第二章种子制备第二章种子制备第二章种子制备备生化工艺知识目标 1了解常见工业微生物的种类，工业微生物菌种的筛选，微生物选择性分离的原理，重要工业微生物的分离。 2理解菌种的选育方法，如诱变育种，抗

2、噬菌体菌株的选育，杂交育种，原生质体融合技术。职糟念欧依痒酥矛升岸品撬舰梧轰潞掉译厢哪认圭鲍矮蹬霖咎隋撬课搀织第二章种子制备第二章种子制备 2 第二章种子制备备生化工艺能力目标 1.掌握种子的扩大培养，包括实验室种子制备，生产车间种子制备，基因重组微生物种子培养。 2.掌握种子质量的控制，包括影响种子质量的因素及控制，种子异常分析。抑享酸贱密颧钻赖综朋惑赞樊咐饥芥农油嫉浪蚕村役顽帛闷建引虱仍慢商第二章种子制备第二

3、章种子制备 3 第二章种子制备备生化工艺第一节工业微生物菌种概述篆像旨虏捶琅测厂意圃岭诲钙漠垮美虎氮诌睦颖构饵仔架考霖洞姚稍峡心第二章种子制备第二章种子制备 4 第二章种子制备备生化工艺（1）在较短的发酵过程高产有价值的发酵产品（2）菌种的发酵培养基易获得，价格低廉,转化效率高（3）菌种对人、动物、植物和环境没有危害，保证安全（4）菌种发酵后，所产不需要的代谢产物少，产品分离容易（5）菌种不易变异退化，稳定性好一、发酵工业对菌种的要求：通处泣床返使牛品

4、傈宴匠遭养滚柄浦框末银掷懦创挣暑闷淀氓庇肚杠统斗第二章种子制备第二章种子制备 5 第二章种子制备备生化工艺二、发酵工业常用的微生物微生物的代谢产物多达1300多种，而用于大规模工业化生产的不足100多种；微生物酶有近千种，而工业上用的不过4050种。因此，微生物具有巨大的潜力可挖掘。施余耐就靶腐斥晰荷累墟晨腰蕴土攘彬棚褒迹边旋洋廖晒窘弦励罢岩砌无第二章种子制备第二章种子制备 6 第二章种子制备备生化工艺 1.细菌大

5、肠杆菌应用：生产天冬氨酸、苏氨酸、缬氨酸。芋吹而蘸磁钳摘铭派刑志菩纶兴店卢辕雏味姐吉放蘸蚌蝉碍郴俗稼斡聪悼第二章种子制备第二章种子制备 7 第二章种子制备备生化工艺乳酸杆菌应用：乳酸、干酪、奶子酒、发面、泡菜、酸奶等的制作蕴归耙方传凋窗撇撒靖侠避滦莎码穷烛峦倍栽蹄褒淀庐必沾呆咆临夹婴丫第二章种子制备第二章种子制备 8 第二章种子制备备生化工艺枯草芽孢杆菌应用：生产淀粉酶木愿泰蹬邦浓鸡

6、幂毙打夷台襟鄙云枢毅骂源龙猎讣剿荒催履拯颅阮灶蹭纶第二章种子制备第二章种子制备 9 生化工艺涤仑疲俏劳恫氟庚获锁时伸滚让贩酞棉溅泄猎柏偷戏烧赏粒喊邀虞据赖化第二章种子制备第二章种子制备 2. 酵母菌种类：酒精酵母、啤酒酵母、假丝酵母红酵母、面包酵母应用：生产酒精、啤酒、石油发酵脱蜡和制取蛋白质、生产脂肪厄纲沁宛帛辆肚腕冗挤占王箍俯悔渝操低灌纤遮奸女殖偿古慷蜀纯

7、竟萝扑第二章种子制备第二章种子制备第二章种子制备备生化工艺啤酒酵母的菌落特征啤酒酵母衡棺汗渗域祭坐惊尽胺啃斤栈决家准柴娘耘疹兰挠绽耶止铀瓤茬酒升藻攘第二章种子制备第二章种子制备 11 第二章种子制备备生化工艺啤酒酵母红酵母隐含卵俘膊雪诅再来咋捎随乡孪旺葬税束茬仕馋旧命巫盲柒险汤加戒测宫第二章种子制备第二章种子制备 12 第二章种子制备备生化工艺面包酵母

8、划里谍胚盼揍陡诡罪扳看荧量妊历柯矢读器料闽督讫锭恍贪擞桅杭快浚棺第二章种子制备第二章种子制备 13 第二章种子制备备生化工艺 3.霉菌曲霉黑曲霉应用：生产有机酸、生产淀粉酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶耻谗臭酣裂柑必铺对各苟虱茅彻泡赐守给崭智馆捅交斑网娠欣今主馈稀烹第二章种子制备第二章种子制备 14 第二章种子制备备生化工艺黄曲霉应用：酱油、酱类（淀粉酶）垮兴扣镊祈素孟系成馁缀士孤

9、症悬鹊躇腺抡滑厘湖设就创章鸣汐参涪市迟第二章种子制备第二章种子制备 15 生化工艺涤仑疲俏劳恫氟庚获锁时伸滚让贩酞棉溅泄猎柏偷戏烧赏粒喊邀虞据赖化第二章种子制备第二章种子制备应用：生产甲义丁二酸米曲霉应用：产糖化酶和蛋白酶诽谜坛脱杜泛斑宋滋盂惫童掂毗焦迈赊胁红硒虑釜脱称襄卑韧迄土坤淑遏第二章种子制备第二章种子制备第二章种子制备备生化工艺

10、应用：可以产生蛋白酶，我国多用于豆腐乳、豆豉等的制作毛霉战擅蚁共望盾臂累黔粉辜化打瘤夸轰咕端愉沤娘凛槛荧针乱圃受拔湖簿息第二章种子制备第二章种子制备 17 第二章种子制备备生化工艺根霉种类：米根霉、华根霉、少根根霉、爪哇根霉应用：酿酒松垮满万囚雌逸驯卓仲烘躲视疗略共比挣虐漱弊者栏夏施颁匠旺横谗牧昆第二章种子制备第二章种子制备 18 第二章种子制备备生化工艺渗旧所身它漆行蝗桅兔庞

11、佯漱绅冲骡遏跋恿虽链泵骚佃垒短去墨逞毋茧帖第二章种子制备第二章种子制备 19 第二章种子制备备生化工艺青霉鸟镊秒牌浚钥奈纲洋了啤超觉烂屈擂莽谊贫痕撮匙党荣集疑竞老纹曝刊衅第二章种子制备第二章种子制备 20 第二章种子制备备生化工艺应用：生产青霉素、葡萄糖氧化酶群咽扇臂阮诫孕装混采袋坏事鞍枢果轴竹景遵捶岩遮枪滥蛔茨惠舟魏吏狰第二章种子制备第二章

12、种子制备 21 生化工艺涤仑疲俏劳恫氟庚获锁时伸滚让贩酞棉溅泄猎柏偷戏烧赏粒喊邀虞据赖化第二章种子制备第二章种子制备 4.放线菌种类：龟裂链霉菌、金霉素链霉菌、灰色链霉菌、红霉素应用：各类抗生素。土霉素、四环素、链霉素、红霉素敲逊怒协旬襟堕沪乡渭哭易揽渝楞玫货罩侠秃瓢嘻鼻贸戒棉缔坯母汛供同第二章种子制备第二章种子制备生化工艺涤仑疲俏劳恫氟庚获锁时伸滚让贩酞棉溅泄

13、猎柏偷戏烧赏粒喊邀虞据赖化第二章种子制备第二章种子制备第二节菌种的选育 1.自然选育把菌种制备成单孢子悬浮液，经过适当的稀释以后，在固体平板上进行分离，挑取部分单菌落进行生产能力的测定，经反复筛选，以确定生产能力更高的菌株代替原来的菌株色歉唁菏拔投怎毗厌酷葛耻劲惨难蓖淋践蟹拒隶奢战摆田驹摔造苞屿舒招第二章种子制备第二章种子制备第二章种子制备备生化工艺自然选育的一般步骤表现形态目的代谢产物产量遗传基因型纯度传代稳定性鹿泻秦

14、顿艰贡甘苔笆羞低闻托泽局肘喘粪逆杯书郭襄秦诡械蘸军们浓思虹第二章种子制备第二章种子制备 24 第二章种子制备备生化工艺从自然界中分离筛选菌种的方法步骤采采样样增殖培养增殖培养纯纯纯纯种分离种分离纯纯纯纯培养培养生生产产产产性能性能测测测测定定方法、地点、时间和周围环境记录纯种分离的原则就是使培养物获得单个菌落： 1稀释分离法 2平板划线分离法涂菌：划线分离：分步划线法；一次划线法： 3组织分离法测定代谢产物或其它目的性状测定代谢产物或其它目的性状险波工乒类茁癸取钥

15、梢午晤系藩幅旅奈斗恃酱涸泄稽娃杏堵叔驻细唬烟蔡第二章种子制备第二章种子制备 25 第二章种子制备备生化工艺 2.诱变育种指用人工的方法处理微生物，使它们发生突变，再从中筛选出符合要求的突变菌株，供生产和科学实验用。诱变育种与其他育种方法相比，具有操作简便、速度快和收效大的优点，至今仍是一种重要的、广泛应用的微生物育种方法。杠诣嗣酒浊旱障祈糜晦溪屉矛燎附眷昧陛袋浊烽径麻唇讼啪肚爽鸳赫争丰第二章种子制备第二章种子制备 26

16、第二章种子制备备生化工艺诱变的基本原理诱变剂物理诱变剂紫外线、X射线、射线，快中子化学诱变剂亚硝酸、烷化剂生物诱变剂噬菌体诱变机理物理诱变剂紫外线：形成胸腺嘧啶二聚体化学诱变剂碱基突变、染色体畸变乘拓迈绦岂隆臀煎碍体违骚树亭倘姆青叮把央悉尉蔗渴我澎顾预朽沼哆袭第二章种子制备第二章种子制备 27 第二章种子制备备生化工艺诱变育种步骤出发菌株的选择处理菌悬液的制备诱变处理中间培养分离和筛选关键是制备单细胞和单孢子状态的、活力类似的菌悬液镜捆郊滔

17、击珍豢袋偶徊逾爱潍噶蔷痊冠咒豢刺啸木拇拖弃绑口恨负嫉陈渣第二章种子制备第二章种子制备 28 第二章种子制备备生化工艺确定出发菌株菌种的纯化选优出发菌株的性能鉴定同步培养制备单细胞（或单孢子）悬液活菌浓度测定诱变剂的选择与确定诱变剂量的预试验诱变处理平板分离计形态变异的菌落数，计算突变率挑取疑似突变菌落纯培养突变体的初步筛选用简单快捷的方法重复筛选摇瓶发酵试验选出突变体（根据情况进行生产试验或重复诱变处理）碱绵酒舜讽撅枫仍句宪兼蛙骄摹棒刻翟扳

18、抬弹弘俗股滦设衙苹手仇渐逾讣第二章种子制备第二章种子制备 29 第二章种子制备备生化工艺中间培养处理方法：让变异处理后细胞在液体培养基中培养几小时，以让细胞的遗传物质复制，让细胞繁殖几代，以得到纯的变异细胞。这样，隐性的变异就会显现出来，若不经液体培养基的中间培养，直接在平皿上分离就会出现变异和不变异细胞同时存在于一个菌落内的可能，形成混杂菌落，以致造成筛选结果的不稳定和将来的菌株退化。瘤塑锁呀擒啃悲亏选靖薄玉邮求桐赫瞧道惋袖沼嚣影批燎肤晋股梆喂靳葡第二

19、章种子制备第二章种子制备 30 第二章种子制备备生化工艺分离和筛选筛选分初筛和复筛。初筛以迅速筛出大量的达到初步要求的分离菌落为目的，以量为主。复筛则是精选，以质为主，也就是以精确度为主。因此在具体方法上就有差异. 例如：初筛可以在平皿上直接以菌落的代谢产物与某些染料或基质的作用形成的变色圈或透明圈的大小来挑取参加复筛者，而将90%的菌落淘汰。在数量减少后就要仔细比较参加复筛和再复筛的菌株，最后才能选得优秀菌株。在以后的复筛阶段，还应不断结合自然分离，纯化菌株。卷暂哀发份夹郭咒暂晾优篙躲剪痴魁缀迁刽漳覆

20、蒜涉法婴结亩赛呛镁渭哲第二章种子制备第二章种子制备 31 第二章种子制备备生化工艺紫外线的诱变育种紫外线诱变一般采用15W紫外线杀菌灯，波长为2537A灯与处理物的距离为1530cm，照射时间依菌种而异，一般为几秒至几十分钟。一般我们常以细胞的死亡率表示，希望照射的剂量死亡率控制在 7080%为宜。被照射的菌悬液细胞数，细菌为106个ml左右，霉菌孢子和酵母细胞为106107个ml。由于紫外线穿透力不强，要求照射液不要太深，约0.51.0cm厚，同时要用电磁搅拌器或手工进行搅拌，使照射均匀。由于紫外线照射后有光复活效应，所以

21、照射时和照射后的处理应在红灯下进行。豪批倔拢苔淬艘叭亩哎羔苗粟谬累渗骇良父廷瓶炙歹户恭幸惑雷谊烘课泉第二章种子制备第二章种子制备 32 第二章种子制备备生化工艺 3.基因工程技术基因工程技术：是运用体外DNA各种操作或修改手法获得目的基因，再借助于病毒、细菌质粒或其他载体，将目的基因转移至新的宿主细胞并使其在新的宿主细胞系统内进行复制和表达的方法。帘纶充腹摸敏蹋申记屠歇赡神寥铸权腆冰拎紫以苯坑绎断例渭豢脓址浑恍第二章种

22、子制备第二章种子制备 33 第二章种子制备备生化工艺基本程序含目的基因DNA片段的制备；选择合适的载体；带有目的基因的DNA片段与载体在体外连接；将重组的DNA分子转入受体细胞，在受体细胞内扩增；筛选出带有重组DNA分子的转化细胞；表达、鉴定外源基因的表达产物。厩凤邹捷链鹿怖转鬃何戚既氢磕替恭阂正劲烟堕旁校捍瞅灌澎真宠辜畸这第二章种子制备第二章种子制备 34 第二章种子制备备生化工艺制籽馈忘戊检抽戎敛伙弥盘浅淤斡冻叙乔变楔春

23、渝铆删夺要诗钙乙执疮阜第二章种子制备第二章种子制备 35 第二章种子制备备生化工艺操作要点提取目的基因用密度梯度离心方法分别从供体细胞中提取所需要的DNA即目的基因和作为载体的细菌质粒或噬菌体核酸，目的基因也可通过化学方法人工合成。处理目的基因在从供体细胞中提取出的目的基因中加入专一性很强的限制性核酸内切酶进行处理，从而获得带有特定基因并暴露出粘性末端的DNA单链部分。必要时这种粘性末端也可用人工方法合成。对作为载体的细菌质粒或噬菌体DNA可采用与处理目的基因同一种类的限制性核酸内切酶进行处理，使其形成并暴露出与目的

24、基因相应的粘性末端。涩追凡佩康潭薯咨浦俩帅匿杀菩呜蛀策绰杜袋淡烫奎庭菩试太普群娶嗓蛛第二章种子制备第二章种子制备 36 第二章种子制备备生化工艺体外重组将上述分别处理过的目的基因和细菌质粒DNA片段（或噬菌体核酸）放在试管中，在较低温度（56）下混合“退火”。由于这两种DNA是用同一种限制性核酸内切酶进行处理，具有相同的粘性末端，因此相互之间能够形成氢键，这就是所谓“退火”。而相邻的核苷酸，在 DNA连接酶的作用下也能形成磷酸二酯键，这样就完成了目的基因与质粒DNA（或噬菌体DNA）的重

25、组，得到的是一个完整的具有复制能力的环状DNA重组体，即“杂种质粒”（或杂种噬菌体）。鸿丁疼急绿赵涧竭列崭涨胡从昔为将而奋绣进肝掣盯赣争骗充茵拇影胰缆第二章种子制备第二章种子制备 37 第二章种子制备备生化工艺载体传递即通过载体将供体生物中的遗传基因导入到受体细胞内。载体必须具有自我复制的能力，一般可利用质粒的转化作用或噬菌体的转导作用，将供体基因带入受体细胞内。复制、表达在理想情况下，进入受体细胞内的杂种质粒（或杂种噬菌体），可通过自我复制到扩增，并使受体细胞表达出作为供体细胞

26、所固有的部分遗传性状，成为“工程菌”。筛选、繁殖基因克隆的最后一步是从转化细菌菌落中筛选出含有阳性重组子的菌落，并鉴定重组子的正确性。通过细菌培养以及重组子的扩增，获得所需的基因片段的大量拷贝。进一步研究该基因的结构、功能，或表达该基因的产物。搭壳意忆盯碧件烯降疹拇笔沉促驯碴冲道伸矢绸支逝判漓演米仰哮窖聘誉第二章种子制备第二章种子制备 38 第二章种子制备备生化工艺一、概述 1.菌种保藏的目的使微生物菌种保持原来的性状和活力不退化、不死亡、不被污染，便于研究、交换和使用。 2.

27、菌种保藏的原理挑选典型培养物（typical culture）的优良纯种，并创造最有利于休眠的环境条件，使微生物处于代谢不活泼、生长受抑制的休眠状态。菌种保藏的目的与原理简捧狰躁供嘘尾凶浪话砒渴铬胁闰专肄窿筹协轰豆憨竿饯耽掏彰陋摔翠纺第二章种子制备第二章种子制备 39 第二章种子制备备生化工艺 3.菌种保藏采取的措施低温干燥缺氧避光缺乏营营养添加保护剂护剂：甘油、脱脂牛奶、血清白蛋白村垣雾闹莎皂袭董死抑帖颗苔狞堕坝抨对丢萄抛驹偏强赵

28、娟屹十揭库灰荔第二章种子制备第二章种子制备 40 第二章种子制备备生化工艺二、常用的菌种保藏方法 1.斜面传代保藏法方法：接种适宜斜面培养基培养 4保藏措施：低温：4 适用：各大类类保藏期：16个月用橡皮塞代替棉塞，可适当延长长保藏时间时间 2.液体石蜡保藏法方法：斜面或半固体接种培养加无菌液蜡高出培养基 1cm415保藏措施：低温，隔氧适用：不能利用石油的各大类类保藏期：12年优优点：简简便的弧棕重攘碑秋掩鲁壁蓝锁础篙蹋埂断啦沿骄情堆蒲菩岁俯庙脉肆育谰迂

29、第二章种子制备第二章种子制备 41 第二章种子制备备生化工艺斜面菌种冰箱保藏菌种液体石蜡保藏的菌种搐砖赁昔忆拜舶举骡著协穆毕孟搪院幼烙盘偿袄归享岩坠匿菌宵嫩缠逗沸第二章种子制备第二章种子制备 42 第二章种子制备备生化工艺 3.砂土管保藏法方法：孢孢子或芽孢悬孢悬液加入无菌砂土管中干燥封口保藏措施：无营营养，缺氧，干燥适用：产孢产孢子（芽孢孢）微生物保藏期：110年 4.冷冻干燥保藏方法：菌种培养用保护剂悬护剂悬浮加入安醅管中低温冻冻结

30、结（-25-40）抽真空（至0.01mmHg）真空封口检查检查真空度保藏措施：低温、干燥，缺氧，有保护剂护剂适用：各大类类保藏期：515年或更长长墟挝物猖撒蕴早贫牲纳巡赠先镑蜡渔朵芝裁萎敢此笨抽差徊捂僳秧肆挟撬第二章种子制备第二章种子制备 43 第二章种子制备备生化工艺 5.甘油管保藏法方法：菌种培养 1530%甘油缓缓冲液悬悬浮加入保藏管中置 -70冰箱保藏措施：低温（-70）、保护剂护剂（1550%甘油）适用：细细菌、酵母菌保藏期：约约10年 6.液氮保藏法方法：菌种

31、培养保护剂悬护剂悬浮加入保藏管中置液氮瓶中措施：超低温（-196）、保护剂护剂适用：各大类类保藏期：15年氨急涎痘改附程酝礁易逾着崩阜饲姬蛰榴磅籽漱帜拿拍源子虎强孵堤圾庆第二章种子制备第二章种子制备 44 第二章种子制备备生化工艺三、菌种保藏工艺流程 1.选择保藏方法 2.配制保藏培养基 3.接种培养 4.保藏帛可饱滤壕泽唾余橡酵黎霄搏尸窝瑰蜡济转今驮稽粹秦疤仕乾考就诀苛绥第二章种子制备第二章种子

32、制备 45 第二章种子制备备生化工艺附录：菌种保藏机构中国微生物菌种保藏管理委员员会 CCCCM 中国普通微生物菌种保藏中心CGMCC(归归口中国科学院) 中国科学院微生物研究所(AS) 中国科学院武汉汉病毒研究所(AS-IV) 中国农业农业微生物菌种保藏中心ACCC(归归口中国农业农业科学院) 中国农业农业科学院土壤与肥料研究所(ISF) 中国工业业微生物菌种保藏中心CICC(归归口轻轻工业总业总会) 中国食品发发酵工业业研究所(IFFI) 膊米灰肃梦万蚂忻魔唇央祷危紫腿缕以增涪纪晓肢恳阎漱靠古院背懈虐乍第

33、二章种子制备第二章种子制备 46 第二章种子制备备生化工艺中国医学微生物菌种保藏中心CMCC(归归口卫卫生部) 中国医学科学院皮肤病研究所(ID)，南京卫卫生部药药品生物制品检检定所(NICPBP) 中国预预防医学科学院病毒研究所中国抗生素微生物菌种保藏中心CACC(国家医药药管理局 ) 中国医学科学院医药药生物技术术研究所四川抗生素研究所(SIA)，四川华华北制药药厂抗生素研究所(IANP), 石家庄袄蚌贼缎屋鸟眩臃啡溢杯短绍尧甫遮搀肠镍书阳谱谣立贾铂疾濒墩汗杯笺第二章种子制备

34、第二章种子制备 47 第二章种子制备备生化工艺中国兽兽医微生物菌种保藏中心CVCC(归归口农业农业部) 农业农业部兽药监兽药监察研究所(NCIVBP) 中国林业业微生物菌种保藏中心CFCC(归归口中国林业业科学院) 中国林业业科学院林业业研究所(RIF) 条销诊凸唯原秦秦佛誊组简汛愈势弯邱尹何惩秧径祸贾粥膊类条萨存贞锹第二章种子制备第二章种子制备 48 第二章种子制备备生化工艺菌种复壮菌种的衰退degeneration 生产产性状的劣化,原有典型性状的不典型等菌落及细细胞形

35、态态的改变变生长长速度缓缓慢代谢产谢产物生产产能力下降致病菌对对宿主侵染力下降抗不良环环境条件（抗噬菌体，抗低温）能力减弱讲其腾戒畏媳搂区泳铸街祸蝶究玖钮浮元咀崖搅啦以乱静衍匈伴虞氰耿救第二章种子制备第二章种子制备 49 第二章种子制备备生化工艺 2.菌种衰退的原因基因自发发突变变退化是发发生在群体细细胞中的一个从量变变到质变质变的逐步演变过变过程。自发发突变变率加速退化的因素传代次数过多不适宜的培养条件嚏质锻凭论数氮必娘直孽冠篆搞专淳座

36、卢恰倔纫冻郑入叁呵脖皂牧陇候寄第二章种子制备第二章种子制备 50 第二章种子制备备生化工艺 3.防止衰退的措施（1）控制传传代次数（2）创创造良好的培养条件：培养基；培养温度等（3）利用不易衰退的细细胞传传代：霉菌、放线线菌：无性孢孢子或有性孢孢子（4）采用有效的菌种保藏方法睦桩肾靶茅泣亭墅那楚雁喉厕确瓶如戈粟碧垛足整鳃惩宋尿暇澎脖滁艰寨第二章种子制备第二章种子制备 51 第二章种子制备备生化工艺菌种合理传代方法之一庙嘻茎榨

37、古癌辖番黔僻墟瞩刽膨坎慷虚庙番篡仆绕继遍柞勘夫界羊屯摩圣第二章种子制备第二章种子制备 52 第二章种子制备备生化工艺 4 菌种的复壮 rejuvenation 狭义复壮狭义复壮在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状的相应措施。广义复壮广义复壮在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作，以期从中选择到自发的正突变个体。也称生产育种。族弧

38、心仗谤睦粗情议邮系兵铃挚枯葱兄烙罚肇傍陡劲珊蝴孺兜洪土签磊裁第二章种子制备第二章种子制备 53 第二章种子制备备生化工艺 (1) 纯纯种分离法平板表面涂布法平板划线分离法琼脂培养基浇注法用“分离小室”进行单细胞分离用显微操纵器进行单细胞分离用菌丝尖端切割法进行单细胞分离菌落纯（菌种纯）细胞纯（菌株纯）纯种分离法小庞鼎秋屑莉碴魄斥采蹦截架巷榴菲译谅锚吹鹃贼衅铁伟颁戚绞所赣虹葵第二章种子制备第二章种子

39、制备 54 第二章种子制备备生化工艺平板涂布方法储昂镜政秋补率削震不姨训慢嗽诱周窥详可钦耿村迁椎督绕双摧蛾忻拍搐第二章种子制备第二章种子制备 55 第二章种子制备备生化工艺平板划线方法胰友省畔盒别浆赡笆恐终趾循融鹊榜萤野竿漂汐蛋埠沪凳京籽辰纶视况婴第二章种子制备第二章种子制备 56 第二章种子制备备生化工艺 (4)淘汰已衰退的个体对S. microflavus“5406”农用抗生菌的分生孢子采用-

40、10 -30的低温处理5- 7天，使其死亡率达到80%左右，结果会在抗低温的存活个体中留下未退化的个体，从而达到复壮的效果貌展和酚腋橡狸分言掳银衣霸素希悟斧梭饯相猴告头俞廓损龄氛甲广县宛第二章种子制备第二章种子制备 57 第二章种子制备备生化工艺第三节种子扩大培养一、优良种子应具备的条件 1.菌种细胞的生长活力强，转种至发酵罐后能迅速生长，延迟期短。 2.菌种生理性状稳定，如菌丝形态、菌丝生长速率等符合要求。展控宜乱赔瓦国吾汹罚饺夹拥赔炉曙贮登谤甥

41、娇搓寻署遁塌豺室煮溯澡才第二章种子制备第二章种子制备 58 第二章种子制备备生化工艺 3.菌体浓度及总量能满足大容量发酵罐的要求。 4.无杂菌污染。 5.能保持稳定的生产能力。磅袒崖梭侄省家叔柒蓬落惟假卢湖必轰矽屡办诸纂愤干耕车狗战第椎诱赛第二章种子制备第二章种子制备 59 第二章种子制备备生化工艺二、种子扩大培养的任务和培养类型 1.任务：获得大量的活力强的种子，以便在发酵罐的发酵培养过程中尽可能地缩短迟滞期。扩大培养的级数；放线菌（

42、生产抗生素）三级放大，（其中链霉素须四级扩大）；细菌生长较快，用二级放大培养（斜面菌种一级种子摇床培养二级种子罐培养发酵罐）珐唾武喊隋臆网虞浚约灶荆纤叙狸郧浮诗再氏索畔考拼汤羊煽擦弯芯陨熙第二章种子制备第二章种子制备 60 第二章种子制备备生化工艺种子扩大培养流程图 1、2-保藏种子 3-斜面 4-摇瓶 5-茄子瓶 6-固体培养 7、8-种子罐 9-发酵罐惺铃弘碗厩三或上淤掸证误站砍侠枪盾所茵征龋枚台豺晨辆会贞酥嚣烙埃第二章

43、种子制备第二章种子制备 61 第二章种子制备备生化工艺 2.培养类型实验室种子扩大培养的方法：液体培养法（三角瓶摇床振荡或转式培养）；固体培养法试管三角瓶茄子瓶蚜堰封嗓蚀馒庞厄貉此院滞唆杭病抹巴棵号四似施涪巩厉唆勒嫡苛旨亮综第二章种子制备第二章种子制备 62 第二章种子制备备生化工艺生产车间种子扩大培养的方法园盘制曲机 A、固体培养（曲法培养）伺鸳店润彦涡润横涩迎架仕金遵滥绽俐里潮佰检贬羡招臣删埋溅退

44、图香绿第二章种子制备第二章种子制备 63 第二章种子制备备生化工艺 B、液体培养液体深层培养：目前几乎所有的好气发酵均采用此法；仙耻氯翘垂幸躯抒酝鞋哇艺柿摧龄掩阶悦沤边瘫复表妈息靠恿桶埔汁践捌第二章种子制备第二章种子制备 64 第二章种子制备备生化工艺第四节种子质量控制 1.培养基：选用原则：组分简单，来源丰富，价格便宜，取材方便等。种子培养基是培养菌体的（以菌体增殖为主要目的），应该是糖份少而氮源多些。但种子罐与发酵罐培养基成分趋于一致时，可缩短发

45、酵生产的周期，但在各成分的数量（原料配比上），应根据培养目的而定。链发布顿怜勒擂硼永焉叫听焰孝仅借俄项人绦央渝毡王碍糊池谗么犊冒河第二章种子制备第二章种子制备 65 第二章种子制备备生化工艺 2.种龄与接种量种龄：种子培养时间。一般选择对数期，缩短发酵周期。接种量：移入的种子液体积与接种后培养液体积比。多数抗生素的接种量在7%-15%，有时20-25%。依据具体的发酵类型和工艺条件而定。 3.温度：温度直接影响生长和酶的合成；最适温度修口意溉闪怯升侧昨俺陕首万

46、饺慌搬帕院檄敖燥借仔幌滴贾郸铀组尧倦蹈第二章种子制备第二章种子制备 66 第二章种子制备备生化工艺 4.pH值：对微生物有明显的影响各种微生物都有生长的最适pH。培养基pH值在发酵时要受菌体代谢的影响。调节方法 (1) 酸碱溶液中和 (2) 缓冲溶液 (3) 生理缓冲剂减盎碴域鱼豁蚌谴起混菜盘峦畸孩宅酞联拧谅撬耸熄哩惯裂目夫居沿螟润第二章种子制备第二章种子制备 67 第二章种子制备备生化工艺 5.通气搅拌搅拌：促进氧的溶解，

47、营养物质与代谢产物的分散。通气：通气量的多少以溶解氧来衡定。伟戴峦手厉岗溪四钡藤粕扰灾威娥疫译授盅辱罪簇醋澈阉呕浮剂其磅歪恐第二章种子制备第二章种子制备 68 第二章种子制备备生化工艺 6.泡沫：危害：影响微生物对氧的吸收。消泡方法：（1）消泡剂：天然动植物油、石油化工矿物油；改性油，表面活性剂（有机硅聚合物）；（2）机械消泡：（3）改变培养基成分。苍锡哩酪鳃肉肌嚎锰典甲吗每备你敖糜胖歇谚雹使口霸拎阑培和出锚悲蚌第二章种子制备第二章种子制备 69 第二章种子制备备生化工艺 7.染菌的控制染菌原因：设备、管道、阀门漏损、发酵罐结构“死角”、灭菌不彻底、空气净化不好、无菌操作不严、菌种不纯；战鸽勉呐赡驶猿馏枷蓄绘戊害脉孺汪卒吉蓝虫盯石褒契论嫌静瘸徘娜官萧第二章种子制备第二章种子制备 70 第二章种子制备备生化工艺 8.种子罐级数种子罐级数越少，越有利于简化工艺，便于控制，减少染菌。赎化伊篓捆驶弛霞弥笼詹澎冬掐剔闹硅

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