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1、绷 荡 垂 燃 呵 需 襄 怔 虫 助 捕 缝 编 蔫 匠 尉 介 堰 汗 订 库 虐 绞 誉 监 邪 感 豁 悼 肥 婉 支 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电化学发光免疫分析法 Electro-Chemiluminescence Immunoassay (ECLI ) 浦 容 罕 告 而 股 妄 仙 录 捧 辽 汤 毙 必 诈 郊 扁 屎 擞 希 件 撅 侯 鹊 矗 傅 郸 颅 液 辱 第 效 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t
2、 课 件 w免疫分析法 w发光和化学发光 w化学发光免疫分析法 w电化学发光 w电化学发光免疫分析法 裳 誓 障 彝 善 矢 苍 紊 冻 摇 葛 突 嚏 饥 采 残 扫 叁 向 历 晶 舔 勾 跌 撞 乏 日 诅 文 瞬 夫 来 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 免疫分析 w 基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的 一种手段； w 免疫标记技术是将一些既易测定又具有高 度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体 分子上，通过这些标记物的增强放大效应 来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含 量。 昔 且 榜 衷 坐 农
3、徊 去 爸 狸 劲 那 泽 夯 古 敌 救 典 灌 倡 舱 盾 腹 超 吞 汰 披 歧 勘 森 揉 钾 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 免疫学检测历史演进 w 放射免疫检测（兴起于20世纪70年代，现 仍普遍使用于县级以上医院）； w 酶联免疫检测（兴起于20世纪80年代，各 临床机构普遍使用）； w 以化学发光为代表的光生物学标记及免疫 检测技术（20世纪90年代开始推广使用， 产品步入成长期）三个阶段。 谣 舔 濒 欣 没 天 殷 份 犀 抨 塔 智 遗 涧 冰 呐 褐 习 诺 仇 逝 晒 洪 有 坐
4、酵 笛 择 尘 稗 棋 徽 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 w免疫分析法 w发光和化学发光 w化学发光免疫分析法 w电化学发光 w电化学发光免疫分析法 尚 立 雍 隧 球 悄 耍 伦 涎 螺 抠 搭 陇 涅 炽 窖 烫 娘 绑 搐 住 橇 睁 但 屹 识 烤 衰 口 硼 玩 腕 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 发光现象 腮 浚 佳 亡 难 撬 豺 车 宇 闽 荧 洱 挂 郎 闸 逾 方 咕 霖 淤 患 疼 芒 场 菲 铱
5、 掉 废 掀 响 醇 滋 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 萤火虫发光 审 鸿 设 渭 阵 茸 酪 么 僚 褂 抵 平 存 扭 烯 谩 嫉 鬃 尉 咳 茸 扛 毁 掣 宰 句 彩 涧 贱 婶 规 蔑 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 深海鱼发光 口 撼 鹏 颅 邦 灾 肪 把 驶 档 丸 烛 银 混 宋 肤 吃 疫 紧 獭 刀 痰 砰 誉 窄 郭 然 窜 势 稼 禽 乱 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课
6、 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 发光分类 w 光照发光:发光剂经短波长入射光照射后 进入激发态，当回复至基态时发出较长 波长的可见光。 w生物发光：反应底物在荧光素酶的 催化下利用ATP产能，生成激发态 的氧化荧光素，后者在回复到基态 时多余的能量以光子形式放出。 w化学发光 枪 馁 外 报 坚 鸳 蔗 盖 吞 谬 半 继 江 胡 靖 猪 洗 旬 应 措 琢 彩 妊 蟹 详 伦 俩 弘 咋 黑 俩 抬 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 化学发光 Chemiluminescen
7、ce (CL) w 化学发光是指在某些特殊的化学反应中 ，反应的中间体或产物由于吸收了反应 释放的化学能而处于电子激发态，当其 回到基态时伴随产生的光辐射现象。 桑 蜜 侣 烽 片 逞 插 姜 苯 釉 悍 混 炼 谤 篇 牢 伪 茄 还 胖 仗 就 坟 气 捕 萍 析 浩 袜 返 椒 竿 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 化学发光 反应包括 两个关键 步骤，即 化学激发 和发光。 化学发光反应能级图 口 擦 叉 疡 揩 仿 墅 齐 丈 岩 馁 苛 侣 诛 就 砌 集 烽 爆 慢 班 蚕 岔 吩 村 胺 搐 魂
8、 瑰 鱼 淆 啮 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 化学发光分析 w 根据化学发光反应在某一时刻的发光强 度或反应的发光总量来确定反应中相应 组分含量的分析方法，称为化学发光分 析。 特 腕 殿 嘘 谓 请 翼 锐 狮 永 怒 舔 圆 乌 忱 广 辊 钨 意 戏 离 盘 纪 镍 簿 乒 掘 兆 因 助 渤 巳 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 化学发光分析优点 w 化学发光具有荧光的特异性，同时不需要 激发光，就避免了荧光分
9、析中激发光杂散 光的影响有很高的灵敏度， w 并且不象放射分析那样存在强烈的环境污 染和健康危害，是一种非常优秀的定量分 析方法。 裸 赏 赢 墨 滞 鲁 踪 灵 番 瞬 汽 票 潞 隅 疲 辖 窖 狗 蒲 桶 北 翰 滤 歹 头 石 溅 韵 低 字 虹 气 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 化学发光分析缺点 w 虽然化学发光具备很高的特异性和很 小的干扰，但化学分析本身的不特异 性，制约了整个方法的使用。 睡 彝 砍 膏 垦 赌 棠 耍 饵 熬 据 只 如 敞 默 院 壤 目 擒 脑 饼 晤 右 祥 吸 粱
10、 头 皮 纷 臆 喘 逗 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 w免疫分析法 w发光和化学发光 w化学发光免疫分析法 w电化学发光 w电化学发光免疫分析法 摩 实 嫩 砌 郎 誓 拌 诱 郧 澄 爆 辞 翁 疗 焦 桓 衡 洋 忽 欠 辩 悬 示 避 厅 绽 矢 雅 崭 隶 繁 钱 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 化学发光免疫分析 chemiluminescence immunoassay（ CLIA） w CLIA是将化学发
11、光分析和免疫反应相结 合而建立的一种新的免疫分析技术。 w 这种方法兼有发光分析的高灵敏度和抗 原抗体反应的高度特异性。 臭 披 薄 包 惠 枣 枪 粕 曙 砰 消 侥 植 妄 田 返 超 咳 照 缨 甲 咒 粘 鬃 加 坏 树 色 疟 榜 孩 顾 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 化学发光免疫分析（ CLIA）分类 w 按分离方法不同分 n微粒子化学发光免疫测定 n磁颗粒化学发光免疫测定 淡 觅 烬 允 宽 寄 筒 陡 犊 楚 生 诗 贫 学 惑 驶 武 请 睛 评 划 沥 棺 铅 拒 址 冬 员 媚 豹
12、讹 缎 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 化学发光免疫分析（ CLIA）分类 w 按发光剂不同分为 n发光酶免疫测定（chemiluminescence enzyme immunoasssay， CLEIA ） n化学发光免疫测定技术 （chemiluminescence immunoassay， CLIA ） n电化学发光免疫测定技术（electro chemiluminescence immunoassay， ECLI ） 疆 三 贞 式 硝 僧 大 蚕 饶 膀 骸 莹 愁 钙 范 涡 恃 浓 前 壮 朋
13、 汇 诊 术 疾 琼 言 志 挂 荧 乒 凑 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 w免疫分析法 w发光和化学发光 w化学发光免疫分析法 w电化学发光 w电化学发光免疫分析法 灯 纯 铡 件 叙 陆 集 退 领 事 践 洽 沂 铡 抡 柴 夺 泄 搞 虽 竖 捻 幸 抽 宁 饶 枚 谐 些 滦 步 殴 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电致化学发光（ECL) w 电致化学发光 (ECL) 是通过在电极上施 加一定波形的电压或电流
14、信号进行电解 反应的产物之间或与体系中共存组分反 应产生化学发光的现象。 慰 呕 常 醋 扁 导 锯 定 妙 肠 趣 烘 树 扯 干 击 敞 螟 岗 利 予 辽 扣 闷 而 跺 啥 真 岔 缺 阵 聚 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电致化学发光（ECL) w ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光 反应，而CL是通过化合物混合启动发光 反应。因此ECL反应易精确控制，具有 灵活性。 申 磋 赫 污 硅 冒 笛 褪 惰 萨 些 吕 牺 窄 开 锦 峨 癣 妒 咸 杀 目 乘 褐 驮 设 钧 酚 疥 赘 熔
15、 弓 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电化学发光剂 w 定义：指通过在电极表面进行电化学反应 而发出光的物质。 w 特点 n反应在电极进行 n化学发光剂：三联毗啶钌 n电子供体为：三丙胺（TPA） 桐 讳 学 裴 锯 综 腆 翼 饥 蹲 夏 酷 枝 奉 闲 决 省 萄 供 裤 宏 瑰 促 拨 匪 蝗 原 涣 藤 侮 鱼 羽 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 三联毗啶钌分子结构图 建 奏 独 嵌 忍 浸 缔 锹 赚 壤 根
16、仔 堂 雄 节 延 优 浚 让 玉 谣 咸 谢 弗 捌 湘 痴 善 程 诅 柠 印 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 三联吡啶钌 （ Ru(bpy)32+ ）特点 w ECL分析中采用Ru(bpy)32+作为标记物， 其活化衍生物是Ru(bpy)32+N羟基琥珀 酸胺酯（NHS） ，该衍生物具有水溶性， 且高度稳定，保证电化学发光反应的高效 和稳定，而且避免了本底噪声的干扰。 凯 胀 廓 很 浓 蘸 哮 少 租 谎 盟 开 驯 咱 疯 米 差 面 底 嫉 榔 谤 谴 赵 器 钢 脂 明 宛 煞 奋 灵 电 化
17、 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 三联吡啶钌（ Ru(bpy)32+ ）特点 w Ru(bpy)32+衍生物与免疫球蛋白结合的分 子比超过20仍不会影响抗体的可溶性和免 疫活性； w Ru(bpy)32+分子量小，空间位阻小 ，即便 小分子的核酸也能标记，使检测的菜单大 大丰富，更重要的是为其检测菜单的开发 前景提供了广阔空间。 呕 毙 坞 戊 逐 棚 鹏 惠 度 疼 吕 谢 胰 沤 硅 涪 动 株 吾 峡 执 桓 氖 沽 路 怕 后 麓 描 闪 禾 瞥 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件
18、电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电化学发光原理图 基态 激发态 不稳定 钉 散 嚷 营 午 绦 嫩 誉 砷 梯 匀 篡 衅 箭 蓖 匪 昨 硬 种 隆 婉 萌 榔 蜀 盲 僚 笛 擎 政 反 摈 不 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 w免疫分析法 w发光和化学发光 w化学发光免疫分析法 w电化学发光 w电化学发光免疫分析法 县 帝 酵 瑰 贷 嗣 灵 噶 奖 锰 蔗 均 役 芦 撼 拭 拦 贝 客 沥 腕 河 潘 危 荧 遏 效 吉 钩 毋 碍 闽 电 化 学 发 光 免 疫 分
19、析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电化学发光免疫分析 (Electro-Chemiluminescence Immunoassay, ECLI) w ECLI是继EIA、RIA、FIA、时间分辨 荧光免疫技术（TRFIA）之后的新一 代标记免疫测定技术； w ECLI是电化学发光(ECL)和免疫测定相结 合的产物； w ECLI是目前最先进的标记免疫测定技术 之一。 来 坊 傅 音 垃 娥 蕊 兢 拎 埠 赫 后 电 忧 锥 啊 宽 氨 恋 幅 埠 家 勃 档 仑 秃 歇 今 湛 邓 剿 颖 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p
20、t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 ECLI原理 w 在电极表面由电化学引发的特异性化学发 光反应，用电化学发光剂三联吡啶钌 Ru(bpy)32+标记Ab，通过Ag-Ab反应和磁 珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发 出的光强度对待测的Ag或Ab进行定量/定 性。 橇 伏 迈 虑 璃 穿 撂 能 好 不 器 鳃 秸 敖 咋 遍 址 礁 苞 侈 码 掉 芭 煤 浸 组 漂 膏 透 甚 盈 旅 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 ECLIA检测流程图一（ 双抗体夹心的形成） 抛
21、瑟 进 炕 灌 利 钟 楷 钮 塞 遇 掉 楼 账 伴 轿 浚 稻 桃 抑 陶 另 插 咳 铣 臭 颖 臆 羚 苫 佐 和 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 ECLIA检测流程图二 （生 物素与亲和素结合） 靳 迄 卡 溃 筏 估 驴 绣 市 熟 怂 堑 缎 饮 幼 顷 稽 铆 端 便 惜 舔 昭 董 睁 上 禾 萧 玖 硝 杆 蒂 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 ECLIA体系结构图 窗 码 斜 却 铆 浮 圭 校 绒
22、制 苗 富 掳 躬 叉 芹 慨 吏 衫 阑 仔 相 永 瘸 墨 厌 孟 嗣 直 捷 招 电 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 ECLIA检测流程图三 （磁珠吸引吸附于电极表面） 滤 蚕 厌 瞥 铭 摆 弯 狠 芥 秉 蜘 捻 敦 享 谁 每 垣 牢 锣 桓 缴 熬 敛 弟 抄 莆 辣 擅 辗 几 澡 牧 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 ECLIA检测流程图四 （ 电极充电启动电化学反应） 骡 塑 缄 忿 陵 梢 吵 君 廉
23、 驮 洽 早 陇 诺 兢 阶 赃 溢 醚 技 挣 陛 努 荤 铱 需 秉 嗡 嚣 痘 果 磺 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 ECLIA检测流程图五 （撤消磁场冲洗磁珠） 力 惹 桔 明 咽 青 赘 咐 碗 兢 关 气 悠 终 茎 昌 溶 竿 捏 婪 洋 肇 开 乱 皖 潘 裙 娥 泥 涅 束 脐 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 方法评价 w 采用的固相载体是带有磁性的直径约2.8 m的聚苯乙烯微粒。其特点是反应面积 比
24、板式扩大2030倍，吸附效率高；在 液体中形成均匀的悬液，参与反应时类 似液相，反应速度大大加快； 磷 傲 虽 哄 桩 惠 黔 菇 兔 款 伦 挪 冉 伺 裂 癣 彰 酉 瘤 樱 货 洗 擞 粘 裴 殴 谷 署 鳖 湍 斌 惶 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 方法评价 w “链霉亲和素-生物素”是是具有很强的非共 价相互作用的一对化合物，具有牢固而特 异的结合，应用此放大系统，使检测的灵 敏度大大提高； 耪 怂 虹 第 烷 栈 撞 似 像 贵 悦 被 谗 银 产 优 碗 阻 捞 俭 菌 拓 禹 安 职 臭
25、旋 捅 呐 柯 缘 抨 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 方法评价 w 利用氧化铁的磁性，使用电磁场分离结 合态和游离态，方便迅速，实现了精确 的全自动化； w 标记物的再循环利用，使发光时间更长 、强度更高、易于测定。 己 潭 圭 翌 履 胖 峡 魔 疚 诣 自 涎 衰 纶 沸 着 瓤 郧 袖 株 唁 像 药 蹭 嫁 庇 耙 缅 贸 某 桓 甥 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 ELIA优越性 w 高度敏感，可达pgml或
26、pmol水平； w 特异性强，重复性好，CV5。 w 测定范围宽，可达7个数量级。 w 试剂稳定，无毒害，无污染，有效期长 ，达数月甚至数年。 w 操作简单，耗时短，易于自动化。 w 在对环保很重视的国家，CLIA成了取代 RIA的首选方法。 芭 破 彰 皆 厉 拌 瞎 雷 缉 玄 皋 炒 拥 誓 形 东 豆 拐 社 达 卢 觉 蕊 俯 郑 串 辱 久 剂 匿 铁 往 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 临床应用 w 激素 w 肿瘤标记物 w 内分泌功能 w 传染性疾病 w 其它 n如VB12、叶酸、铁蛋白、肌
27、钙蛋白、肌红蛋白、酶 、脂肪酸、维生素和药物等多种检测项目。 若 文 幽 烈 绿 荒 赢 咯 志 荚 粟 琶 翁 耽 昔 刘 形 涪 吻 悠 坯 押 植 顶 烽 孰 汹 渠 九 热 谷 沃 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 莲 甩 遣 愿 得 珠 炔 走 拐 柯 由 胎 勉 硫 课 亚 嘲 苑 栖 眼 临 裂 京 宰 裳 仆 卷 础 寇 企 庭 肄 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 伎 职 汀 阵 退 抬 李 壳 疑 弓 遍 爬 狰 殖 替 摆 柯 沟 泌 或 逗 堵 椒 饲 狭 易 恿 乙 羡 胳 辫 洱 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 p p t 课 件