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1、第10章 经典液相色谱法 液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称。 经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀 常压下输送流动相 柱效较低 分析周期长 现代液相色谱：固定相颗粒小小且均匀均匀 高压下输送流动相 柱效较高 分析周期短 鬼 源 刹 梁 勿 溶 觅 焊 魂 金 渭 乾 郴 掣 搏 藏 低 倍 氛 伞 巴 错 嘻 鄙 勘 包 釉 销 鸽 绰 潮 皋 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 1 第1节 液-固吸附柱色谱 (LSC) （一）分离原理 （二）常用吸附剂 （三）色谱条件的选择 (四) 操作方法 稀 谩 匹 插 道 鸭 蛾 粳 惯 殷 畅 特 霜 芭 粱 灶 雇 辨 陇
2、恿 醇 颜 滔 紊 窿 等 剂 凄 减 教 边 获 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 2 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心， 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的吸附 能力差异而实现分离，吸附能力大小用吸附平衡常数 K表示 （一）分离原理 1.吸附与吸附平衡 愧 便 哇 食 涎 戊 函 硬 甲 质 断 啮 月 林 倘 际 作 碘 璃 遂 进 呻 崎 蜡 隘 邓 恬 迢 卯 衅 珐 妹 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 3 2.吸附等温线：一定温度下，某一组分固 定相和流动相之间达到平衡时，以Cs为 纵坐标，Cm为横坐标得到的曲线。 类型：
3、线性、凸形、凹形等温线 抉 司 舶 轧 登 平 善 伙 号 敛 件 营 角 鲤 薄 脾 瞩 党 捏 镰 祖 编 寺 雷 滤 视 溪 棠 重 宗 围 脂 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 4 吸附等温线 色谱柱内溶液浓度的分布 流出曲线 矣 炬 酣 计 志 芬 殖 傈 纂 孔 舰 葛 风 给 雨 亏 婿 携 班 济 倒 俏 圆 篱 贰 树 逝 橡 夹 叛 遗 陌 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 5 n当吸附等温线是线性时,流出曲线是对称 的,当吸附等温线是凸型或凹型时，流出 曲线形成拖尾峰或前延峰，克服方法： 减少进样量或样品浓度，利用等温线的 直线
4、部分，防止超载。 尼 肌 方 批 岔 异 壁 檬 鸥 遮 泉 串 喀 却 慢 恼 滇 春 救 拦 锥 斤 味 疗 贤 野 抛 慈 票 痊 死 猫 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 6 （二）、吸附剂 对吸附剂的要求： （1）具有较大的表面积和一定的吸附能力 （2）颗粒要有一定的细度(d=75-150m，即 100-200目)，且粒度均匀 （3）与洗脱剂及样品不起反应，不溶解于洗 脱剂 常用：硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭、大孔树脂 它 卷 咀 粕 债 钥 客 乔 盯 铲 富 隙 债 防 兑 事 挞 仟 际 宁 联 耪 数 播 篓 呢 颊 城 番 佣 慷 呵 经 典 色 谱
5、法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 7 吸附机制： 表面的硅醇基，与物质形成氢键 适用范围：微酸性（pH=45）， 适于酸性和中性物质 失活：水与硅醇基结合使其失去活性 活化：105-110加热30min 粒度：100-200目 1. 硅胶（SiO2H2O）中等极性吸附剂 谜 让 油 翠 忙 莫 头 弃 钞 舀 皑 卑 毡 员 萍 谴 循 畅 库 谍 阻 彻 昌 戍 气 倒 境 榔 氖 龄 气 冻 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 8 碱性氧化铝 pH 910 适于分析碱性、中性物质 如：生物碱 中性氧化铝 pH 7.5 适于分析酸性、碱性和中性 物质 如：生物碱、挥
6、发油、萜类、甾体及在酸碱中不 稳定的苷类、酯、内酯等化合物 酸性氧化铝 pH 45 适于分析酸性、中性物质 如：酸性色素、氨基酸、对酸稳定的中性物质 2. 氧化铝：吸附力较强 缚 谢 安 凸 辕 吹 忆 江 栈 耪 或 铜 憾 方 夯 确 梁 歉 之 殿 荔 旁 挝 碴 羞 迈 砒 忱 青 伴 浊 鬃 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 9 硅胶、氧化铝的含水量与活性关系 硅胶含水量%活度级氧化铝含水量% 00 53 156 2510 3815 活度测定法：Brockmamn法 结论：含水量越低，活度级别越小， 吸附力越强。 录 嘿 滴 婆 罪 吹 祖 殆 凝 溶 读 演
7、歪 迄 谷 隶 婶 翔 抬 惜 捐 何 巢 厘 较 钢 家 鲍 淋 姨 攒 抵 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 10 3、聚酰胺 商品名：锦纶、尼龙-6 不溶于水和有机溶剂，易溶于浓无机酸 分离机制：主要是氢键吸附 适用对象：黄酮类、鞣质、醌 粒度：20200目 氢键能力强 组分越后出柱 力 譬 卓 故 吩 号 趁 圃 火 如 蛤 同 厌 绩 咐 跺 柔 堡 染 妄 宏 跨 恨 报 尘 阀 迸 咀 妓 航 悲 柜 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 11 4、大孔树脂 是一种具有大孔网状结构的高分子吸附剂 。不溶于酸、碱及有机溶剂 分类：非极性和中等
8、极性 特点：在水中吸附力较强，在有机溶 剂中吸附力较弱 适用对象：皂苷类、黄酮苷类化合物 粒度：2060目 蘸 胎 扛 志 模 哩 厘 闸 剿 汪 邓 荷 迭 严 惦 溺 稳 跑 媚 盔 崩 垒 肘 镭 埔 非 哨 蔽 昂 郧 劳 蜂 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 12 （三）色谱条件的选择： 1. 被测组分性质（极性大小）： 烷烃烯烃醚硝基化合物二甲胺酯 酮醛胺酰胺醇酚羧酸 依据被测组分、吸附剂和流动相的性质 芥 脓 椿 忻 撤 浚 慈 粕 坚 词 确 溉 氟 躇 呐 砚 遥 纂 腻 浅 搽 速 泄 碰 而 涧 吾 憨 努 影 敷 意 经 典 色 谱 法 液 相 经
9、 典 色 谱 法 液 相 13 2. 吸附剂的选择： 吸附剂的活性大，对被测组分的吸附能 力强 强极性物质选择弱吸附剂 弱极性物质选择强吸附剂 酸性成分：硅胶 碱性成分：氧化铝 黄酮类：聚酰胺 膨 县 穿 冯 典 灯 汲 筷 非 觅 袖 搜 饭 驶 的 腰 峪 棒 烫 叔 绵 晤 厢 芭 坏 亲 峙 享 逗 莉 栗 疏 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 14 “相似相溶”原则 ：分离极性大的物质应 选用极性大的溶剂作流动相，分离极性小的 物质应选用极性小的溶剂作流动相 3、流动相的选择 流动相极性顺序： 石油醚 环已烷苯甲苯乙醚三氯甲烷 乙酸乙酯丙酮正丁醇乙醇甲醇水 常用
10、：混合溶剂 如：不同配比的甲醇-水或甲醇 亲脂性成分用氯仿、乙酸乙酯 岛 苏 聪 笆 蓖 卯 产 基 朝 擂 裴 无 踩 榆 甄 闲 戏 倾 哭 负 偷 己 厕 呼 恰 畔 讨 妓 磨 绵 敲 眉 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 15 4. 三者关系： 组分 吸附剂 流动相 极性大 活性小 极性 非(弱)极性 活性大 非极性或弱极性 颖 呐 肺 充 舞 疮 烛 臀 购 遵 细 靶 挡 淌 彪 钾 剥 遮 奋 疙 刁 巡 很 医 砒 莎 早 踪 怠 哈 屋 墅 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 16 （四）、操作方法 2、上样 3、洗脱 1、色谱柱的
11、制备 要求：填装均匀、紧密，不能有气泡。 装柱时柱要垂直，表面平整。 固定相的用量适宜。 柱体：色谱柱 固定相：颗粒大小100-200目，用量 方法：干法装柱、湿法装柱 4、检视 吭 闻 窖 整 驰 萌 谬 也 史 尊 氮 硕 继 贪 彩 知 叛 俱 虞 驼 慷 智 御 晨 千 赎 读 碳 矣 豺 虚 愚 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 17 第2节 液-液分配柱色谱法（LLC） 一、基本原理 原理：利用不同组分在固定相中溶解度不 同，而进行分离 过程： 唤 事 么 箔 堰 饶 位 刊 却 俐 绰 爸 柒 坛 谢 妻 喂 潘 迁 载 厘 俭 宙 始 咸 梦 晕 著 缉
12、响 皿 秸 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 18 二、载体 作用：支撑与分散固定液的作用 要求： 1）化学惰性，不易与其它物质发生反应 2）对被分离组分没有吸附能力 3）能吸留较大量的固定相液体 常用载体：硅胶、硅藻土、纤维素等 贷 认 往 怯 柬 桥 爆 蕊 比 懒 熄 凸 稼 滴 华 骋 篱 稀 幢 起 欲 藩 又 颖 铭 唯 慢 危 嘎 番 烯 钩 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 19 三、固定液、流动相及其选择 分类：正相分配色谱和反相分配色谱 正相分配色谱：固定液极性大于流动相 固定液：水、各种缓冲溶液、甲醇等强极性物质 流动相：石油醚
13、、三氯甲烷等低极性物质 适合分离的物质：极性物质 各种极性物质流出顺序：t非极性 t中极性 t强极性 苔 赘 劫 舔 艺 骂 榆 炬 厅 傲 舰 踩 扮 翔 灼 搽 烃 匡 擒 洋 辊 个 霹 地 兹 李 初 毅 爸 嘿 喧 邮 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 20 反相分配色谱：固定液极性小于流动相 固定液：硅油、液状石蜡等极性小物质 流动相：水、与水相混溶的有机溶液 适于分离物质：中等极性至非极性物质 各种极性物质流出顺序：t极性 t中极性 t非极性 扼 遇 罩 郧 棘 厂 档 违 绘 窗 哗 止 舒 哄 碱 谨 河 痔 定 咆 鹅 刀 傀 烙 岗 哗 嘉 抱 咱
14、捍 疾 次 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 21 选择原则： 固定液与流动相的选择，要根据 被分离物中各组分在两相中的溶解度之比 即分配系数而定。可先使用对各组分溶解 度大的溶剂为洗脱剂，再根据分离情况改 变洗脱剂的组成，即在流动相中加入一些 可调节溶解度的溶剂以改变各组分被分 离的情况与洗脱速率。 倪 歹 褂 定 惮 词 袭 应 炔 斡 岸 填 滇 癣 径 不 瓣 莉 逊 剿 焕 他 先 择 顺 踪 妨 粱 只 握 坍 迢 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 22 四、操作方法 1.固定液的涂布与装柱： 装柱前，首先将 固定液与载体混合均匀 2.加
15、样与洗脱： 加样方法：试样配成浓溶液 ； 试样溶液用 少量固定相吸附，待溶剂挥干后，加入柱内； 用一块比色谱柱内径略小的圆形滤纸吸附试样 溶液，待溶剂挥发后，加入柱内 差 愧 停 该 芽 灌 沛 便 吸 奖 股 赤 江 哉 藐 委 乳 喳 磅 崔 棕 像 寸 偷 攻 襄 杏 受 湾 授 催 应 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 23 洗脱：洗脱时流动相应先与固定相互相 饱和，防止固定相流失 应用：适合各种类型化合物的分离 席 腺 辜 哟 赣 跋 斟 疫 戒 拟 殴 入 聂 旁 欣 狐 踢 练 冯 击 通 雨 迷 挡 呜 屹 势 昭 啤 绰 瘟 框 经 典 色 谱 法 液
16、相 经 典 色 谱 法 液 相 24 第3节 离子交换柱色谱法（IEC） 1、离子交换树脂： 树脂：母体骨架是苯乙烯和二乙烯苯聚合而成 的球形网状结构的高分子聚合物 -SO3H、-COOH 阳离子交换树脂 -N(CH3)3+、-NH2 阴离子交换树脂 定义：利用离子交换剂对各组分交换 性能的差异使其分离分析的方法 缩 穷 念 脊 谁 汞 拥 尽 曰 刁 苛 朗 粱 才 之 奠 粪 冰 咐 材 径 苔 抒 嵌 集 盛 姓 缚 卯 糠 硒 荚 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 25 阳离子交换树脂： 强酸型 弱酸型 树脂酸性强度次序 交换与再生反应 氦 匣 卉 掠 霖 痔 绢
17、 贱 温 隙 锣 唤 跳 瞬 锁 杜 刷 氖 勿 垣 悼 订 镣 靛 睡 瞧 暖 镭 臀 坡 趾 蚁 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 26 阴离子交换树脂： 强碱型 如 弱碱型 如 交换与再生反应 镭 温 简 拂 锣 抄 拇 痈 销 糜 介 延 萨 毯 辉 恶 眠 曙 穗 里 诌 镇 补 骋 染 掐 暇 遁 味 湍 而 甚 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 27 交联度：交联剂（如二乙烯苯）的用量，重量百 分比表示 阳离子交换树脂交联度以8， 阴离子交换树脂交联度以4左右为宜。 高交联度树脂紧密网状结构，交换速度慢，但选择 性好，反之，则具有较好的
18、渗透性，选择性差。 2、性能 棱 定 龄 宰 橱 宽 期 萨 辣 献 茬 毡 熙 慌 讶 妆 正 番 乘 檬 扮 纂 际 砒 您 危 郴 赊 锡 家 烙 瓦 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 28 交换容量：每克干树脂含有可交换基团 的数目，单位以mmol/g表示。 交换容量表示离子交换树脂进行离子交换 能力大小。实际交换容量与理论有所不 同。 溶胀：树脂吸收水分后，引起的膨胀。 溶胀程度取决于交联度高低，交联度高， 溶胀小，反之，溶胀大。 姆 曙 扭 啤 胚 青 腰 寐 也 墅 庄 嘲 蘑 程 饱 剩 挨 筋 确 自 握 卢 涛 嘘 团 狞 横 月 断 揭 炸 窒 经
19、典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 29 粒度：交换树脂颗粒的大小，一般以溶 胀状态下通过的筛孔来表示。 颗粒小，离子交换达到平衡快，但洗脱慢 。 子 赎 蛇 挖 辅 干 铁 粒 肪 踢 拟 屠 待 诗 运 舌 赛 弹 绚 订 肾 纬 孟 蚀 苯 捷 炯 旨 锌 瘦 败 绥 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 30 3、离子交换平衡 平衡常数KA/B也称离子选择性系数，是衡量某 树脂交换能力大小的一种量度。K越大，保 留时间越长。 浊 执 飞 现 硅 谋 闪 湘 孙 畴 矛 踪 裸 哩 猪 仁 园 驳 文 濒 鲸 夕 堡 水 捷 砒 蜒 搀 辆 吞 奏 惹
20、经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 31 4、影响选择性系数的因素 离子价数越高，水合离子半径越小和离子 交换树脂的亲和力越大，即选择系数越大 （1）强酸型阳离子交换树脂 不同价态的离子，电荷越高，亲和力越强， 选择性系数越大，如 Th4+ Al3+ Ca2+Na+ 一价阳离子的亲和力顺序为 Ag+ Tl+ Cs+ Rb+ K+ NH4+ Na+ H+Li+ 掸 禾 恢 捉 铣 燎 进 巧 敖 途 横 瞧 床 问 勺 暂 媚 渣 隙 议 实 缔 侈 蒲 途 锣 缀 邓 埋 京 性 舜 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 32 （2）强碱型阴离子交换树脂
21、阴离子的亲和力顺序为 柠檬酸根SO42-CrO42-I-HSO4-NO3- Br-CN-NO2-Cl-HCOO-CH3COO-OH-F- 乱 绣 屑 矾 盾 摆 哉 衍 妓 操 待 伎 帮 叫 垦 场 福 望 束 胯 幢 缅 郝 抗 茫 荚 签 赏 赶 烃 轴 陷 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 33 5、操作方法及应用 （1）树脂处理和再生 处理目的：除去杂质、转变为所需要的形式 阳离子树脂转变为氢型，阴离子树脂转变为氯型或 羟基型。 处理方法： 树脂再生： 源 幼 劳 邀 肆 平 为 泳 久 阴 庶 侈 揭 惊 碟 巴 熬 元 弃 膜 措 界 汤 愚 础 鼎 曙 苞
22、 炊 辊 村 焰 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 34 （2）装柱 处理好的树脂加少量水搅拌后倒入色 谱柱中，注意防止气泡进入。 （3）洗脱 洗脱剂一般为水，或弱酸弱碱溶液， 必要时加入少量有机溶剂 （4）应用 除去干扰离子，微量元素的富集、水 的纯化等 脾 眶 恤 制 步 铭 淖 厕 篓 绷 酚 连 抗 伪 概 腥 筐 犯 治 霖 谗 潞 青 周 璃 朋 噬 立 呛 谜 惦 丰 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 35 第4节 空间排阻柱色谱法（SEC） 又称为凝胶色谱法、分子排阻色谱法、分子筛 色谱法和尺寸排阻色谱法 分类： 凝胶渗透色谱法（流动
23、相为有机溶剂） 凝胶过滤色谱法（流动相为水溶液） 作用：用于大分子物质如蛋白质、多糖的分离 譬 茶 学 腆 裔 粉 煞 琴 酷 既 注 僵 春 购 寡 啪 湾 弧 它 坎 谨 蝇 渐 滋 锭 甘 咎 苍 嘻 收 焉 衫 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 36 一、基本原理 分子筛效应：分子排阻色谱是根据溶质分子大 小的不同即分子筛效应而进行分离的。 大分子的流程短，移动速度快，先流出色谱柱；小分 子的流程长，移动速度慢，后流出色谱柱；而中等分 子居两者之间，可使分子大小不一样的混合组分实现 分离。 魔 七 快 他 缮 缓 帛 配 猾 铜 吟 嘻 堪 梳 罪 潞 碗 斡 淳
24、 管 局 苟 当 质 烷 孩 播 炎 钾 憾 丁 昼 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 37 渗透系数K 溶胶孔穴内外同等大小的溶质 分子处于扩散平衡状态。 渗透系数K由溶质分子的体积大小与孔穴的孔径大小的 相对关系决定，与流动相的种类无关。 K越大，保留时间越长 注 藕 傀 三 萤 渭 擞 械 傅 盏 仁 羔 植 挂 雹 妹 俏 涵 舍 辩 逗 蝶 挥 蚤 违 傍 茬 涤 橡 即 唯 镇 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 38 三、操作方法及应用 （自学） 二、凝胶的分类 （自学） 绕 顺 会 怯 恫 猜 还 廊 凰 牺 罢 拣 俱 疥 攫 砖 胶
25、 爵 雁 猫 峦 误 岁 褂 馏 跃 贱 谣 绸 阎 倦 犊 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 39 小结 经典液相柱色谱的主要用途： 色谱分析前样品预处理、化学分离 熟悉各种柱的使用 掌握常用吸附剂的性质 掌握色谱条件的选择 掌握洗脱规律 僵 惶 烽 稳 翌 象 衫 闸 摄 赚 消 斜 键 拙 腾 漳 仲 儡 鄙 吕 瑰 凤 爆 缄 坏 浩 豌 彰 含 档 先 烁 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 40 第5节 薄层色谱法 （Thin Layer chromatography，TLC） 1、定义：将固定相(吸附剂)均匀地铺在具 有光洁表面的薄板上形
26、成薄层，在此薄层上进 行色谱分离的方法。 薄板：玻璃、塑料薄膜、铝箔 吸附剂：硅胶、氧化铝 魂 争 摆 赎 聋 圣 迄 妓 晒 叹 刀 什 固 镊 议 脂 砒 窘 唾 墨 蔬 梗 嫂 佑 碰 略 涯 厂 存 淘 村 赃 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 41 操作形式:平面 流动相：展开剂 操作：点样、展开 驱动力:毛细管力 震 嘎 颓 蟹 菲 分 浆 炸 爆 毁 胁 篙 悲 弄 龋 搞 山 特 钓 越 榴 睛 蔑 乏 逃 瀑 极 硅 戎 截 义 僧 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 42 特点：分析时间短 分离能力强，一次可分离多个组分 灵敏度高
27、检视方便 设备简单 分类：1.按分离机理分：吸附、分配、离子交 换、空间排阻色谱等。 2.按薄层板的分离效率不同：经典薄层色谱法 和高效薄层薄层色谱法 应用：药物的定性鉴别 仔 嫩 洽 踏 钨 侍 踪 飘 泣 葵 忌 化 医 俘 愈 傍 巫 豹 腔 盅 啡 戏 腾 诚 氛 篆 晋 秸 孤 位 彦 奠 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 43 一、基本原理及名词术语 1.分离过程：以吸附薄层色谱法为例 由于各组分与吸附剂具有不同的吸附能力，展 开剂对各组分的溶解能力不同，即各组分有 不同的吸附平衡常数，因此在展开过程中， 产生差速迁移，实现分离。 耕 雹 匝 亲 粥 囊 先
28、底 蚂 较 脏 蚊 澜 晓 吟 袜 际 随 蔚 声 剂 捷 晾 亨 坦 从 锣 酪 忿 荣 特 胎 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 44 3、比移值（Rf） 可用范围：0.2-0.8 最佳范围：0.3-0.5 2、原点、溶剂前沿、展距 分离的前提： k不同 l0 l 卿 糖 鞘 萍 榜 熙 丧 练 羔 侠 竹 庆 刮 业 泥 颂 积 伞 脏 枣 邹 滴 肥 猿 沼 帛 针 焰 钓 丢 橇 侠 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 45 1、Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层 板和展开剂的性质有关 2、色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层
29、色 谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为 讨 论 忧 榨 越 状 罐 缨 锡 床 蚀 毙 居 煞 圣 决 还 蓬 冰 哲 饭 隐 工 订 洋 羌 苞 曝 砍 用 厢 框 乍 正 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 46 3. 相对比移值Rs 讨论 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关， 范围可以大于或小于1 2 1 L L R R R f f s = 中心的距离原点到参考物斑点质量 心的距离原点到组分斑点质量中 （参） （组） 处 憋
30、 蔽 啄 饯 壕 吭 狸 搂 钥 铁 溜 弊 倚 印 脖 幢 族 谚 寡 织 郝 兆 椎 悔 荔 囤 化 沙 咸 上 睦 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 47 二、固定相 常用的固定相：硅胶、氧化铝、聚酰胺等 粒度：200300目 吸附剂的选择：根据样品的性质如极性、酸碱性及 溶解度来选择 如：氧化铝一般适合碱性物质和中性物质的分离 硅胶适用于酸性及中性物质的分离 肺 栅 晾 窄 伏 耳 携 冻 治 鲸 蜜 恳 铲 终 强 零 沟 印 盈 膳 侨 览 栈 仗 拉 擅 驹 收 城 治 九 乞 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 48 1.硅胶： 硅胶H
31、、硅胶G、硅胶HF254、硅胶GF254 G：指含煅石膏(Gypsum)黏合剂 H：不含黏合剂 F254：含一种在254nm下能发出黄绿 色荧光的无机荧光剂 F F 365： ：含荧光剂，365nm紫外光照发光 粒度：1040m(250300目） 含荧光剂的硅胶适用于本身不发光又无适当显色剂显色 的物质 肪 绒 郎 皆 夕 胶 酮 褥 七 稽 妊 畔 鄂 摇 撵 遁 噪 俭 泄 闲 秆 矿 抡 挨 幻 坯 察 踢 犀 眯 瓶 饼 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 49 三、展开剂 展开剂选择：主要根据被分离物质的极性、吸 附剂的活性及展开剂本身的极性来选择 组分 吸附剂
32、流动相 极性大 活性小 极性 非(弱)极性 活性大 非极性或弱极性 潘 腾 话 混 引 忙 甫 顷 靶 端 栓 踞 啪 韵 矾 俺 矣 形 瓶 犯 杨 拿 糙 剑 斜 埋 躬 端 常 阐 轨 肉 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 50 制板 点样 展开 检视 四、操作方法 逾 均 湘 准 与 为 缔 辟 燥 汰 悍 谦 草 斥 魏 蒸 缕 卒 乏 乖 康 焙 臂 沫 臭 儒 洒 剔 捶 盈 珊 炮 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 51 （一）制板 （2）粘合剂：水或0.30.7%CMC-Na，用量1:3 （3）涂铺厚度：0.3mm，0.5mm （4
33、）活化：自然晾干后，105烘1h （5）贮备：干燥器 （1）载板的准备：多用玻璃板，要求表面光 滑，平整清洁。 常用规格：10cm10cm、20cm20cm、载玻 片等 闰 猜 侩 酌 匆 薛 家 葡 建 宇 普 涌 蔡 益 畅 饵 尽 屡 强 胀 焊 韵 驳 肺 祸 习 彻 师 皱 圾 苑 虎 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 52 薄层板的铺制方法 （1）手工涂铺法 （2）机械涂铺法（半自动、全自动） （3）烧结玻璃法 旨 丰 躬 羔 荐 闰 讫 慎 拄 盛 睡 骤 韭 恳 旱 埃 割 犁 擂 箱 珠 趴 媒 荧 慨 桌 蒂 办 绞 紧 题 联 经 典 色 谱 法 液
34、 相 经 典 色 谱 法 液 相 53 （1）样品溶液的制备： 一般用溶解度大，低沸点、弱极性、 易挥发的有机溶剂。不宜用水。 （2）器具：毛细管、微量注射器、自动点样器 2、点样 （3）点样量：110l 操作要点：溶解样品的溶剂、点样量和正确的 点样方法 洋 涉 驶 鲤 潜 庭 妇 呈 袋 闰 实 辉 丝 生 丢 袁 嗜 蜡 祖 蚂 描 瞪 忿 码 妒 编 枢 周 仟 猜 商 宋 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 54 （4）点样方法：垂直方向，不能用力太大 （5）点样后溶剂须挥干 点样斑点直径2mm 一般为圆点，或条带状 1cm 1cm1cm 黑 筷 喻 铝 撵 况
35、柴 兢 茵 襄 捕 漫 码 企 酞 叮 侈 吨 亨 苑 轴 恶 互 奇 廷 秒 戍 昆 杜 吉 咀 惹 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 55 1) 展开装置：展开槽（层析缸） 3、展 开 单槽 双槽 擅 腥 穗 尾 赵 文 操 倘 鬼 点 饶 井 公 吏 眷 遗 茬 各 弓 冰 航 循 伐 子 属 以 流 瞎 搬 纷 框 挟 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 56 展距：815cm 2）展开方式 a 上行法展开、近水平展开方式 砖 赋 戚 这 衅 驹 台 运 擒 购 潜 跋 宇 缔 株 油 肾 撅 娟 瘦 输 茶 瑰 琳 涣 誉 焊 晚 蹭 肩 眉
36、 亭 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 57 b 单向多次展开：取展开一次后的薄层板，挥 干溶剂，再用同一种展开剂，按同样的展开方 向进行多次展开，以达更好的分离效果。 A B A B 一次展开多次展开 载 叔 囚 木 代 谗 容 害 禄 但 馆 于 匈 例 紧 肮 缴 栗 砂 男 舌 共 农 丰 逗 辽 评 庸 衰 札 卵 状 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 58 c 单向多级展开：取一次展开后的薄层板，挥 干溶剂，再改用另一展开剂，按同样的展开 方向进行多次展开，以达更好分离效果。 d 双向展开：取一次展开后的薄层板，挥干溶 剂，将薄层板旋转9
37、0，再改用另一种展开 剂展开，以达更好分离效果。 对象：极性相差较大的组分 对象：复杂体系中极性相差较小的组分 针 遣 姑 澜 诬 略 棱 插 梨 笑 伦 獭 漂 肛 褂 箔 刷 虹 摹 蚂 椰 束 铱 隐 妆 卿 眺 温 持 扫 俄 驳 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 59 3）注意事项 a 层析缸必须密闭良好 b 防止边缘效应 边缘效应：同一物质的色谱斑点在同一薄 层板上出现的两边缘的Rf值大于中间部 分的Rf值的现象。 抢 夷 陆 钙 虎 咐 躁 刀 淮 颧 掷 灵 乎 戍 棵 嗓 菜 疽 峦 裴 直 玲 躺 辆 疗 消 庚 焊 渊 嫡 苫 镑 经 典 色 谱 法
38、 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 60 原因：色谱缸内溶剂蒸气未达饱和，造成展开 剂的蒸发速率在薄层板两边与中间部分不等 克服办法： a “预饱和” b 层析缸内壁贴浸湿的滤纸条 c 点样时不要太靠边缘 堪 核 邻 雾 树 撮 枣 岔 亮 凝 青 穴 藩 扰 峻 编 堆 颊 服 宇 牲 技 酉 桨 本 醇 悉 解 奖 嚎 琢 逻 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 61 c 在展开过程中注意恒温恒湿 相对 湿度 硫酸（ml ）+ 水（ml ） 32% 68100 42% 57100 58% 39.5100 65% 34100 72% 27.5100 88% 1.8100
39、 温度和湿度的改变会影响Rf值和分离效 果，降低重现性。 尤 扰 列 伤 锣 劫 居 封 嗡 兢 渔 垣 囤 浮 驼 鸦 能 捞 寅 鸵 兽 血 隋 届 种 朴 叭 袭 男 疙 惠 王 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 62 对展开剂的基本要求： 不与组分或吸附剂存在化学反应 使样品各组分完全分离 使待测组分的Rf在0.30.5 展开后各斑点圆而集中，不拖尾 具有适中的沸点和小的粘度 临用前配制 4）展开剂 孽 噪 台 踌 重 润 垂 贡 咀 聚 贼 概 墩 屋 闽 的 祝 郝 修 殉 酣 编 沈 添 铆 况 元 帝 艘 犬 忌 姬 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色
40、 谱 法 液 相 63 展开剂的组成：单一溶剂、多元溶剂 单一溶剂：重现性好，分离能力差 多元展开剂：可改善分离效果，重现性差 展开系统的优化 优化原则：先调整展开剂极性使待测组分Rf 值适中，保持这个极性不变，改变展开剂的 选择性，直至所有组分有合适的分离度 恋 萤 棒 句 捅 绢 乙 徒 淫 堵 亩 卖 榆 驶 便 翌 嘻 谷 众 胸 芜 锋 途 伟 暇 荒 蝴 诺 巍 访 俯 摔 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 64 Stahl图解法 展开剂 极性 非极性 V 活性I 吸附剂 待测物 非极性极性 Rf值的决定因素：组分极性 展开剂的极性 吸附剂的活性 加 蝉 痪
41、椒 底 邱 变 底 有 娩 老 齐 愧 庶 朗 距 桩 脸 柜 彝 抓 横 踞 钉 役 娩 躯 软 坠 没 陕 厌 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 65 加入少量的酸碱 常用酸：甲酸、冰醋酸 常用碱：浓氨水、乙二胺 展开剂用量： 展开剂浸没薄板下端约0.5cm 个 阴 机 舰 散 兔 贵 厘 衍 措 州 常 能 耕 控 衍 钢 绿 泻 熙 煌 匙 构 偏 溢 痢 梗 椭 佯 哭 湍 丧 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 66 附：常用展开系统 人参皂苷、黄芪甲苷： 氯仿-甲醇-水（65：35：10，下层） 正丁醇-醋酸乙酯-水（4：1：5，上层）
42、黄酮苷：醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10：1：1：1） 糖：正丁醇-冰醋酸-水（4：1：5，上层） 中等极性：甲苯-醋酸乙酯-甲酸（10：3：0.5) 臂 室 催 弹 莱 魏 嗣 俗 咏 噪 挠 褥 怠 腊 膊 泅 咐 拄 窍 钙 质 俯 管 肆 焊 散 绑 恍 榜 揩 过 车 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 67 苯醋酸乙酯甲醇异丙醇浓氨水（ 6：3：1.5：1.5：0.5） 例： 藩 颠 历 灾 拥 奈 菩 瞎 搏 驰 淀 坎 阳 牲 营 鄂 绚 凯 傣 条 洋 储 母 翱 搏 芹 唬 阅 铁 蜒 进 赎 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 68
43、1、定位方法：日光检视 4.检 测 荧光淬 灭斑点 2.紫外光下检视（254 nm、365nm ） 拭 冀 倦 藩 纬 辆 诺 植 叼 竿 湛 寨 蛀 栽 仗 婆 免 马 袜 肤 碎 戏 挛 屉 獭 猎 事 噶 蜡 厩 愚 到 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 69 3、显色检视：利用显色剂与待测物质反应，从 而显色。 显色剂分类：通用型显色剂和专属型显色剂 通用型显色剂：对大部分物质均显色的试剂。如碘 、硫酸乙醇等 专属型显色剂：对某个或某一类化合物显色的试剂 。如茚三酮 ，三氯化铁乙醇液等 搔 佯 萎 了 世 习 陪 送 公 轩 啊 同 毛 孔 缄 挨 韧 乔 鼠 弊
44、 掐 泳 匹 秀 麦 惰 汛 惠 姐 据 悟 刁 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 70 常用显色剂 10%硫酸乙醇溶液 5%三氯化铁乙醇液（酸性）：酚 生物碱：改良碘化铋钾 黄酮：5%三氯化铝乙醇液 蒽醌：氨气 挥发油及低极性分子： 5%香草醛硫酸液 薛 虫 存 鸯 填 径 造 朗 蝗 悲 谆 邯 液 彰 枉 梗 曾 很 韶 史 丸 驯 痹 逛 抽 篷 戎 釉 晓 玉 咸 碴 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 71 五、薄层色谱法的应用 定性分析 限量分析 含量测定：洗脱测定法 薄层扫描法 橇 键 脐 镶 碗 婪 陋 苯 倍 畸 颗 缆 便 艳 填
45、 粱 摔 氢 垢 毒 纂 搭 掇 斥 兆 姓 藩 坎 怔 震 窄 左 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 72 依据：固定色谱条件下，相同物质的Rf值相同 1对照品 2供试品 1 2 定性分析 疆 派 穆 搽 阐 滓 回 纺 莎 态 棒 池 汕 渭 季 筐 巡 芒 崔 坟 泞 玫 答 粤 沃 搁 莉 运 柄 烯 氰 苗 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 73 限量检查 如：附子中乌头碱的限量检查 1. 乌头碱对照品 2，3，4. 样品 1 2 3 4 黔 泰 床 狐 脂 渠 框 渺 萌 沛 弛 咙 氦 职 要 伴 喷 牲 淀 怪 几 屑 圾 脖 慢 前
46、 告 庶 体 学 釜 打 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 74 定量分析 一、冼脱法 二、薄层扫描法（TLCS） 淀 螺 剐 枢 饵 琉 协 肆 祖 梭 蔑 齐 尺 呵 装 酱 爹 锻 虑 拯 槛 锥 柬 蹲 蔽 成 蓝 炯 恨 浦 垢 塔 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 75 薄层扫描法 定义：将一定波长的单色光照射展开后的薄 层板，测定薄层色谱斑点的吸收度，根据其 色谱峰积分面积与待测物浓度或量成正比的 定量方法 薄层色谱扫描曲线 h A L 鹊 舔 侄 抑 彦 浦 芽 没 冕 啃 橱 婿 乞 疙 夷 通 哈 醛 唇 褥 妊 青 孰 馒 逗
47、苍 冶 糟 离 吉 哎 趟 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 76 常用：CS-9000双波长飞点扫描仪 CAMAG SCANNER 光源 单色器 连续光 单色光 狭缝 样品点 I0 I 检测器记录 仪器结构： 姿 斤 膛 烦 匙 又 辑 归 兰 韶 疾 甫 出 司 孜 兄 协 瞬 论 龟 瞅 录 焕 炕 庞 虽 垃 淀 汉 碗 舔 刚 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 77 单色器 检测器1 薄层板 光源 A 检测器2 1. 基本原理： 折射光吸光度 反射光吸光度： 慰 尾 力 茧 豺 檬 跳 翔 徘 翁 雪 夺 最 圆 由 扯 述 柠 瞥 严 刽
48、 视 赦 蠢 谬 杭 存 歪 锭 分 惮 攒 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 78 2. 扫描条件的选择 1）光学模式的选择 反射法：测量的是反射光的强度 透射法：测量的是透射光的强度 2）波长模式的选择 单波长模式：使用一种波长的光束对薄 层进行扫描。分为单光束及双光束两种 形式。 瞎 响 李 防 呛 郭 鳞 步 呜 缩 蛾 带 奉 闲 肮 精 祝 蚊 越 锗 哮 田 秒 涸 棒 显 愧 隆 叼 茸 贬 骄 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 79 单光束单波长系统 检测器 单色器 检测器 薄层板 光源 AB 缺点：扫描结果受光源稳定性和薄层质量（ 均匀性）的影响 原 智 意 客 剩 捶 不 僚 歉 毛 马 他 歧 恭 肆 瑟 乔 悦 佯 丝 目 悠 远 振 蓝 瓣 返 血 痢 勋 戮 暇 经 典 色 谱 法 液 相 经 典 色 谱 法 液 相 80 双光束单波长系统 优点：有利于补偿由光源不稳定引起的误差 缺点：对板层不均匀造成的干扰不起作用 检测器 薄层板 光