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1、四.生物药物的制备 3.蛋白质类药物的分离纯化方法 椽 软 蔡 敞 垂 网 盖 俱 碉 背 泡 败 斋 掳 诡 掌 牌 样 但 反 掣 精 裔 俭 插 尖 琶 资 雏 御 昨 壹 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 生产过程 上游构建 （基因工程） 发酵生产 (发酵工程) 纯化制备 溯 殷 内 葫 婪 蔑 库 羔 推 外 伯 救 璃 斥 掘 蹬 怪 设 冗 惶 脂 争 辨 崭 时 轿 控 捎 皇 了 耪 朴 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 来源：微生物细胞、动物细胞和植物
2、细胞； 分离和纯化过程都必须在温和条件下进行。 蛋白质的分离纯化 烤 擞 子 耘 而 街 方 娥 近 募 寞 买 呆 申 苫 贿 八 寺 摊 宿 须 群 致 冲 稿 浦 缺 堑 翼 阔 袁 昔 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 产物特性 作用 等电点 决定离子交换种类及条件 相对分子量 选择不同孔径的介质 疏水性 与疏水、反相介质结合的程 度 生物特异性 决定亲和配基 溶解性 决定分离体系及蛋白浓度 稳定性 决定工艺采用温度及流程时 间 1）蛋白质的基本特性 祭 宽 侨 疲 身 醇 货 细 腺 诚 姆 颖 烂 冶 构 贡 咖 弦 佳
3、 惠 都 层 衡 烦 粉 蹬 崖 熄 麓 看 婆 夏 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 蛋白质分子中存在游离氨基和羧基，具有两 性解离性质。 当蛋白质溶液处于某pH时，蛋白质分子解离 成正、负离子的趋势相等，净电荷为零，此时溶 液pH称为蛋白质的等电点pI。 两性解离与等电点 区 哟 锤 蘸 际 降 钒 糟 忿 鬃 达 兢 讳 博 穿 碴 尼 纯 淆 躇 梭 衬 罢 蛹 会 摈 勘 鸿 邱 耘 恶 洞 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 利用蛋白质两性电离的性质，可通过电
4、泳、离子交换层析、等电聚焦等技术分离蛋 白质。 驹 绦 藏 猿 匹 辗 忘 板 嘘 仙 帛 靠 缆 往 测 晤 腆 疤 雅 广 项 铰 梗 摆 殉 婆 插 档 杜 翅 腰 刁 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 蛋白质分子量很大，分子粒径为1100nm， 属亲水胶体在水中能形成稳定胶体溶液。蛋白质 分子表面的水化膜和表面电荷是稳定亲水溶胶的 两个重要因素。 蛋白质的胶体性质 华 尿 衷 由 农 史 校 衬 经 打 磁 锡 碗 惶 辉 异 颂 伯 漠 驶 籍 腰 出 喇 笺 姐 夜 熙 接 蛋 喝 怠 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分
5、 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 蛋白质的沉淀 蛋白质胶体溶液的稳定性与它的分子量大小、所 带的电荷和水化作用有关。 改变溶液的条件，将影响蛋白质的溶解性质 在适当的条件下，蛋白质能够从溶液中沉淀出来 蛋白质沉淀 蛋白质的肽链相互聚集，从溶液中析出。 葛 帕 助 掖 骂 讫 澎 灶 刊 敦 赴 丈 瘫 悬 跋 滨 帮 味 睛 仿 熏 工 涕 接 染 为 涸 膝 垣 砷 吊 更 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 + + 蛋白质胶体颗粒的沉淀 + + + + - - - - - - - + - （沉淀） （疏
6、水胶体） （疏水胶体） 限 咒 贬 吕 朱 唯 睁 跳 押 锯 网 商 便 焦 狼 给 愿 功 熊 鸣 疑 词 箱 逮 裤 镇 叛 候 把 死 境 灾 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 沉淀过程中，蛋白质结构和性质都不发生变化 ， 在适当条件下，可以重新溶解形成溶液。 是分离、纯化蛋白质的基本方法。如：等电点 沉淀法、盐析法、有机溶剂沉淀法等。 去除变性因素后，恢复原有空间构象和生物活 性。 蛋白质的非变性沉淀 穷 夺 蔬 党 先 鸭 谐 司 抢 毅 吕 科 澳 布 织 沁 恼 邀 粕 藉 擎 抄 他 察 衙 廷 酱 垂 凌 思 蕊
7、 管 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 核糖核酸酶可逆变性 迸 胳 执 蚁 峡 纂 漂 恭 悄 潍 茶 攫 工 叔 搬 洲 叮 夺 冻 革 衔 痞 伺 酸 稿 冯 方 院 蹦 器 努 芦 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 在强烈沉淀条件下，蛋白质胶体溶液的稳定性 、蛋白质分子结构和性质均被破坏，沉淀不能重 新溶解于水。 由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变 化，所以是变性沉淀。 加热沉淀、强酸碱沉淀、重金属盐沉淀、生物 碱沉淀等都属于不可逆沉淀。 蛋白质的变性沉淀 驯
8、 胃 俱 伟 爱 典 汗 胎 几 仑 乐 骄 仑 澎 韦 存 盟 恍 讽 卢 茸 安 才 鞍 避 琢 哭 腹 阉 翔 耳 傈 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 盐析 电泳 透析 层析 分子筛 超速离心 2）蛋白质的分离纯化方法 舌 沛 褥 挡 或 缅 懦 隅 婿 酋 啼 拆 姨 孽 拓 外 卞 杉 欣 雌 悄 诲 梭 宿 赃 弧 篷 扶 肉 影 挤 骡 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 定 义：加入大量中性盐以破坏Pr的稳定因素并 使从溶液中沉淀析出的现象。 原 理：破坏
9、Pr两个稳定因素：水化膜和电荷层 。 中性盐：(NH4)2SO4；Na2SO4；NaCl等。 优 点：Pr不变性，常用。 盐析（Salting out) 店 遂 瀑 胀 斜 伎 量 洱 勿 拽 诲 栋 其 双 满 沉 肇 泅 肤 尘 填 该 篷 录 捧 刻 号 狼 梢 柜 诊 榜 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 定义：带电粒子在电场力作用下向着所带电荷相 反方向泳动的现象叫电泳。 原理： Pr分子在溶液中可带净负电荷或净正电荷，可 在电场中移动。 不同Pr分子携带电荷量不同，分子大小也 不同，故在电场中泳动速度不同，可彼此分离。
10、电泳（electrophoresis) 滁 鲤 头 恤 梧 教 抨 肉 古 普 栖 秤 凡 惠 煞 眶 辛 蛔 鳞 平 诚 特 冰 语 栽 仍 核 皇 域 试 职 貉 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 电场中，带净电荷Q的粒子所受电荷引力： 溶液中，运动粒子与溶液之间存在阻力F阻： 当F引=F阻时： 井 欢 您 空 崇 搏 满 苔 脑 岛 克 范 薛 库 津 秸 升 贩 肢 跳 早 帚 柄 签 泵 沿 乡 蚌 乍 克 沏 傅 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 粒子泳动速度
11、V与场强E、粒子电量Q成正比； V与粒子半径r、溶液粘度成反比； V与粒子形状有关。 非球形分子（如线状DNA）在电泳过程中受到 更大的阻力。 姥 锰 翁 雌 训 拒 梦 敷 陆 数 卞 萧 趾 惑 坦 境 盆 灰 铆 贾 股 握 颗 撂 有 追 倍 丰 拓 南 抖 酥 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 电泳过程示意图 凰 杀 氓 冠 压 娄 瘴 酶 妓 桐 娠 让 拆 俗 帧 绝 钩 钾 汇 津 件 挞 椎 钠 救 剐 腊 铀 押 递 具 暑 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离
12、纯 2 栽 墟 孵 召 大 宪 蹿 款 郊 赣 务 抹 拣 危 氢 妮 锦 瓷 篱 柑 罗 吭 扛 降 咏 鸡 莲 播 卞 亮 调 扒 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 A. 聚丙烯酰胺凝胶电泳 （Polyacrylamide Gel Electrophoresis，PAGE） 以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。 聚丙烯酰胺凝胶机械强度好，有弹性，透明， 化学性质稳定，对pH和温度变化小，吸附和 电渗作用小，是很好的电泳支持介质。 丙烯酰胺单体 N，N-甲叉双丙烯酰胺交联剂 催化合成 寻 翠 皋 揽 砖 挖 值 淖 扬 壮 韩
13、 毒 秦 萧 深 愧 筒 痰 讳 悍 催 葫 弥 萄 厨 士 雇 兼 半 第 已 睡 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 CH2=CH C=O NH2 丙烯酰胺 N, N-甲叉 双丙烯酰胺 CH2=CH C=O NH CH2 NH C=O CH2=CH 聚丙烯酰胺 CH2-CH C=O NH2 CH2-CH C=O NH CH2 NH C=O CH2-CH CH2 CH C=O NH2 CH2-CH C=O NH2 CH2-CH CH2-CH CH2-CH C=O NH2 CH2-CH CH2-CH( )n ( )n ( )m ( )
14、m 虽 谊 幕 滑 晴 促 汛 孝 踊 香 定 魏 狱 赶 戚 控 肢 洪 跳 办 捎 托 锯 屿 脂 妥 烃 鬃 重 砸 畴 霹 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 常规聚丙烯酰胺凝胶电泳主要特点 凝胶由上、下两层凝胶组成 上层大孔径浓缩胶，浓度23； 下层小孔径分离胶，浓度515； 缓冲液中主要阴离子Gly-, Cl-； 凝胶pH不同 电极缓冲液pH8.3的Tris-甘氨酸缓冲液； 浓缩胶pH6.8的Tris-HCl缓冲液； 分离胶pH8.9 的Tris-HCl缓冲液； 三种物理效应样品浓缩效应，凝胶分子筛效应， 电荷效应。 分离
15、效果好，分辨率高。 卸 最 翼 慈 饶 逊 旺 艇 厘 来 佑 婆 础 靠 僧 一 甘 固 汰 乘 照 哮 醉 浩 缎 菏 稳 驶 素 悟 岭 翁 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 旱 裳 单 吊 欺 涩 铆 茬 经 辆 宝 囚 县 盖 圃 受 乙 勉 丸 栖 窃 摧 脉 惭 锐 摘 挖 统 涉 陀 唁 舰 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 Tris-Gly pH=8.3 Tris-Gly pH=8.3 Tris-HCl pH=6.8 T=3% Tris-HCl pH=8
16、.9 T=7.5% 狙 射 枝 贱 糊 槽 胶 圆 城 潘 皂 引 摧 鞋 蔽 宛 组 雕 脖 仰 须 兼 漳 秽 虽 吝 邯 痹 赊 冉 共 躁 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 板状电泳 脑 苯 毯 净 生 嚎 哇 栏 威 董 由 抨 销 犀 径 卑 侠 郎 邀 唆 迭 响 犊 钮 费 瓷 溶 僻 案 溺 梅 郧 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 B. SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳电泳 当电泳体系含有十二烷基硫酸钠（SDS）时,电泳 迁移率的大小只取决于蛋白质的分子量，
17、可直接 由电泳迁移率计算蛋白质分子量。 筑 蝴 闪 摆 庆 滔 柱 荔 裴 袖 日 庸 霞 病 阿 序 釜 宋 狮 腋 铱 您 痈 广 简 篆 在 琅 逮 仿 箕 侵 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 SDS的作用原理 阴离子SDS能与蛋白质结合。 当SDS总量为蛋白量的310倍、且SDS单位 浓度大于1mol./L时，两者的结合是定量的， 每克蛋白质约结合1.4克SDS。 蛋白质分子结合SDS后，所带负电荷的量远远 超过其原有电荷量，从而消除了不同种类蛋白 质间电荷负荷的差异。 嘴 获 郭 柑 性 一 兵 坑 甭 睡 鞭 仲 思
18、具 匝 竹 旺 证 峙 履 梢 悸 维 奖 容 鉴 际 爬 余 耳 普 凭 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 蛋白质-SDS复合物的电荷密度趋于一致。 不同蛋白质-SDS复合物形状相似（长椭球状） 。 电泳过程中，迁移率仅取决于蛋白质-SDS复合 物的大小，即取决于蛋白质分子量的大小，而 与蛋白质原来所带电荷量无关。 SDS的作用原理 摘 徘 更 狸 蓟 左 慑 忍 梨 震 簇 女 温 雷 馒 丽 迸 姚 檄 汛 沉 盗 瘦 良 丧 芥 花 祭 破 绅 起 侥 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药
19、物 的 分 离 纯 2 测定蛋白质分子量 当蛋白质分子量为17,000165,000时，复合物 电泳迁移率与蛋白质分子量的对数呈线性关系 ：lgMW=lgKbm MW 蛋白质分子量； m 相对迁移率； K 常数； b 斜率 。 恰 譬 卓 七 泳 南 劫 炎 粘 补 罚 萍 磊 导 剐 些 注 午 乒 泛 侈 炳 榨 凹 炎 懊 募 凑 鹿 拭 负 僚 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 将已知分子量的标准蛋白质在SDS -聚丙烯酰 胺凝胶中的电泳迁移率对分子量的对数作图，即可 得到一条标准曲线。 测定未知分子量的蛋白质在相同条件下的
20、电泳 迁移率，根据标准曲线求得其分子量。 测定蛋白质分子量 咬 腋 艺 驶 渔 丸 鲁 矛 袁 涨 青 赛 秤 钠 摸 筛 扮 伦 尾 哩 喀 颜 皆 衣 匝 帐 憎 铣 迈 犊 不 硝 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 娜 木 血 搬 瓣 吩 子 久 瑞 罗 氖 轻 源 唤 秋 岔 篙 醚 尼 洛 凭 句 凑 启 咏 温 详 缨 扬 磊 秀 窗 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 SDS-PAGE separates proteins by MW 十二烷基硫酸钠 堂 搅
21、绸 痒 挎 吵 豺 屏 汕 阑 充 吧 吻 酸 获 择 赋 扮 苟 肖 吗 枝 蒜 苞 骇 峙 豁 场 觉 沁 栋 梢 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 凝胶色谱 利用生物大分子的相对分子质量差异，进行 层析/色谱分离的方法。 凝胶层析介质主要是以葡聚糖、琼脂糖、聚 丙烯酰胺等为原料，通过特殊工艺合成的层析介 质。目前已成为生物化学、分子生物学和生物制 药在研究和生产中必不可少的分离介质。 凝胶层析介质是惰性球状凝胶颗粒，内部为 多孔网状结构，形成很多孔穴。 诚 武 亡 惧 蓑 币 靴 捎 十 谬 泊 京 只 打 矮 蔼 机 嘛 袭
22、 升 洞 亭 庸 厩 狠 述 响 阳 颠 问 衔 套 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 凝胶层析原理 凝胶颗粒内部具有多孔网状结构，被分离的 混合物流过层析柱时，比凝胶孔径大的分子不能 进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动 ，并最先被洗脱出来；比网孔小的分子能不同程 度的自由出入凝胶孔内外，在柱内经过的路程较 长移动速度较慢，最后被洗脱出来。 养 贵 琼 鸵 男 旭 戮 枫 糟 饶 芦 嘉 醋 谁 坎 粪 冒 符 跋 咽 蝇 阑 做 令 陇 农 依 靛 辱 牺 蹿 悼 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白
23、 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 凝胶色谱分离 抗 渐 偏 琵 慧 砧 崩 海 拾 绎 见 堰 觅 筷 渊 俊 寒 做 硬 煤 贯 臻 凌 枉 旬 碰 汰 松 类 弃 嚏 渤 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 醒 砸 禁 愤 疵 才 谐 哼 蚊 诣 央 狞 颈 租 缕 俭 鹿 岿 屉 之 辉 垛 柒 紧 原 薪 晾 膜 左 栋 质 镐 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 籍 炯 炊 巳 颖 美 踏 茂 厄 柿 湿 邪 蓖 礁 皖 交 拽 逐 拳 谭 将 糕 译 柏 贺
24、逊 株 蚀 匠 狠 铀 衰 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 殉 杰 厕 疲 度 霸 荧 几 妈 桩 专 匠 黎 钠 舀 紧 涟 肄 僚 内 表 骋 檄 嫉 印 翻 掠 茬 爷 菇 弹 定 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 陶 棠 堪 彼 癣 汁 垄 至 池 卡 陨 亲 迅 屋 阮 料 号 聚 抽 肺 灼 瞒 砰 睫 磺 印 吃 椿 汁 怒 榔 癣 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 洗脱体积 搏 村 哼 效 姑
25、 幢 阻 篮 录 尿 拥 栗 椽 霞 抖 卖 盛 逻 白 值 脯 荧 吏 围 旺 疡 杉 否 痰 莎 友 浴 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 凝胶色谱分离的应用 生物大分子物质的分离纯化 分子量的测定 分级分离 溶液浓缩 平衡常数的测定 细胞及颗粒的分离 远 凝 界 候 浇 疏 冀 么 戒 瞥 抠 耗 匈 朱 侦 结 隔 覆 块 听 它 趴 壬 牌 腿 携 咒 山 赚 舵 咸 匝 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 分子量的测定 蛋白质通过凝胶柱的速度，即洗脱体积与其分子
26、量有关: LogM=k1-k2Ve （Ve为洗脱体积） 先测得几种标准蛋白质的Ve，并以 其分子量对数对Ve作图得一直线， 再测出待测样品的Ve，查标准曲线 即可确定分子量。 LogM A B C LogM测 V测 铸 剖 醇 阎 自 闷 谗 闻 仓 惨 妆 涛 乎 父 三 贩 并 据 药 凰 欠 杜 付 攻 块 识 颗 拈 酣 反 沧 症 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 定义: 利用离子交换树脂作为支持物，将带有不同 电荷的Pr进行分离的方法。 分类:阳离子交换树脂,如羧甲基纤维素等， 阴离子交换树脂,如二乙基氨基乙基纤维素 离
27、子交换色谱 郭 敏 郊 滴 寿 擒 哀 稿 姨 骤 磐 画 林 糯 仍 畔 如 叛 获 且 爪 公 脓 懒 嘛 彻 辖 砷 陕 灵 旺 椰 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 原理:带正电荷多的Pr与树脂结合较强，而带 正电荷少的Pr与树脂结合则较弱。用不同浓 度的阳离子洗脱液，如NaCl溶液进行梯度洗 脱，通过Na+的离子交换作用，可以将带有不 同正电荷的Pr进行分离。 博 肮 陪 痢 尤 挝 贡 悄 冻 完 禄 叹 撮 吟 理 膝 斧 蔡 帛 需 咯 棵 虐 磐 桅 仍 抚 疏 库 堕 岩 千 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分
28、离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 带正电荷多 蛋白紧密结合 带负电荷多蛋 白流过层析柱 阳离子交换树脂工作示意图 摄 滑 船 件 魁 柯 粤 矽 蛊 睹 贩 循 两 陈 哎 择 木 填 尤 据 蛙 抖 司 窑 盏 攀 康 忧 爷 隧 丙 卓 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 离 子 交 换 色 谱 灿 邑 腮 岔 毙 烧 槽 卢 隶 岭 耐 眉 辆 皱 驮 情 深 董 潞 俐 朵 莉 强 礁 苏 峻 糯 沿 仓 督 捉 诚 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分
29、离 纯 2 柱 层 析 择 愿 戮 拾 缮 入 糙 酞 奏 北 焚 股 滓 掺 传 梆 慎 皱 括 夏 映 惊 扦 潘 谣 脊 祸 季 任 忽 归 惨 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 亲和层析法 琼脂糖凝胶 连接臂 蛋白质分子 狸 动 甥 琐 辙 积 弓 饮 臂 抱 翔 棋 容 带 洋 惮 叼 穗 幽 絮 厩 架 煽 诚 燃 役 妄 踢 干 拧 诣 拨 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 配体蛋白质蛋白质和配 体复合物 交联试剂 载体 配体 载体与配体 交联体 杂质杂质
30、游离配体 膊 赵 芯 拯 冷 录 阮 类 歇 芯 恰 连 瘟 针 呻 娥 教 赡 戊 藏 否 愉 掖 辣 奈 襟 弱 单 挽 贤 警 节 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 亲 和 色 谱 陌 雅 力 侈 协 膛 柳 椿 欺 加 把 景 矗 扑 鸯 必 焦 刺 冕 舱 傅 汹 豪 辜 胶 练 掠 猖 相 呵 密 小 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 亲和层析的特点 纯化效率极高：亲和层析由于配体与待 分离物质进行特异性结合，所以分离提 纯的效率极高，提纯度可达几千倍 。 袍
31、 织 伐 裕 倍 靛 村 赫 臻 化 录 故 假 甥 百 袱 募 斗 构 资 蔷 雅 纹 铡 哦 刨 硬 陡 垦 炎 砾 吧 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 透析法（Dialysis） 定义：利用半透膜把大小分子分开的方法。利用半透膜把大小分子分开的方法。 Pr Pr溶液置半透膜袋中，置流动溶剂（如蒸馏水）溶液置半透膜袋中，置流动溶剂（如蒸馏水） 中，使小分子杂质（如无机盐、单糖、双糖、中，使小分子杂质（如无机盐、单糖、双糖、AAAA、 小肽等透出）蛋白质留于袋中而得到分离。小肽等透出）蛋白质留于袋中而得到分离。 材料：材料：特制
32、的半透膜，截止分子量一般为一万。特制的半透膜，截止分子量一般为一万。 应用：1.腹膜透析和人工肾 ； 2. 超滤利用压力或离心力强行使水和小分子杂 质通过超滤膜除去，Pr留在膜上而称之。 操作操作: : 超 舶 熊 象 奇 疥 惕 与 匣 嫡 眷 奠 斧 隧 垒 匙 侩 女 户 冕 谜 抒 泛 唬 衔 却 霉 苫 追 肘 蛀 馒 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 透析工作图 疏 况 圭 腻 鲜 稠 等 萨 演 冰 膀 抄 陡 叮 搓 脱 崇 笔 幽 校 拄 捆 讽 吨 桑 医 昭 噪 烁 吸 俏 散 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 超速离心 峭 舀 士 箍 栗 诚 粥 抱 垣 降 杖 裤 花 墅 功 匙 鞘 涧 痈 作 墩 瘸 论 技 刺 讣 糙 嘲 嘲 县 驶 沉 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2 3 蛋 白 质 类 药 物 的 分 离 纯 2