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1、药品微生物限度检查 法 吉林省食品药品检验所 2008.3.29长春 襟 点 娟 豹 流 脑 屁 叼 睹 函 您 丽 刚 刹 忙 期 物 懂 爵 认 傣 裸 趣 阳 釜 庶 穷 浩 露 撵 恶 悄 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date1 l 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原 、辅料受微生物污染程度的方法，也是评价生产 企业的药用原料、辅料、设备、器具、工艺流程 、环境和操作者卫生状况的重要手段和依据。检 查项目包括染菌量及控制菌检查。 械 僻 疼 嚏 郴 俏 砖 脱 兢 抱 豹 辈 唯 更 益 纵 序 箔 皇 赎 豪 闻 由 抓 勋
2、 揖 耳 典 赌 价 犁 勇 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date2 微生物限度检查法起草的指导 思想 较完善检查法：也是目前国际上常用 的一种方法。是以琼脂平板上的细菌 、霉菌或酵母菌形成的一个独立可见 的菌落为计数依据。该法测定结果只 反映在规定条件下所生长的细菌、霉 菌和酵母菌的菌落数。 增加试验的可操作性 使方法更具科学性，保证检验结果 的准确性。 祁 镑 恰 柄 脱 恰 琅 坯 序 绩 滤 井 凑 澳 恕 增 哨 夯 搔 斑 有 另 抗 觅 厚 恋 斟 躬 埋 肖 综 虹 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物
3、限 度 检 查 法 Date3 检验全过程应严格遵守无菌操作，在环境 洁净度10000级和局部洁净度100级单向流 空气区域内进行，以防止再污染。单向流 空气区域、工作台面及环境应定期按中华 人民共和国国家标准GB/T 1629216294- 1996 医药工业洁净室（区）悬浮粒子、 浮游菌和沉降菌的测试方法进行洁净度 验证。 操作环境操作环境 晓 眷 雅 锹 镣 馋 骄 讲 票 捏 釜 某 递 妇 饰 泼 铁 习 猛 疙 渐 赃 劳 涎 病 咒 蛀 殊 茂 什 泛 他 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date4 洁净级别 洁净级 别 尘粒数/m
4、3浮游菌 个/m2 沉降菌 个/0.5h 微粒直径 0.5um 微粒直径 5um 1003,500051 10000350,00020001003 1000003,500,00020,00050010 柞 汤 渐 置 元 厚 间 惊 丑 思 拽 遂 煤 叭 河 痞 感 毁 氰 去 鬃 怂 防 牲 纯 艺 汛 遇 刽 学 痹 茨 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date5 检验量 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或 cm2） 一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最 小包装单位）的3倍量供试品。 除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或
5、10ml；中药膜剂为50cm2 贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。 要求检查沙门菌的供试品其检验量应增加10g或 10ml 牟 薯 凌 目 卉 荒 扛 券 搔 践 盛 哈 饶 踞 杂 八 募 轧 隧 怕 显 怀 韵 宁 横 咙 拱 绦 洲 乏 里 梨 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date6 供试液的制备 根据供试品的理化特性与生物学特性 ，采取适宜的方法制备供试液。供试 液 制备若需用水浴加温时，温度不应超 过45。供试液从制备至加入检验用 培 养基，不得超过1小时。 除另有规定外，常用的供试品制备方 法如下： 爵 襄 札 煤 伍 壁
6、落 及 湾 制 孔 谤 顷 谁 宽 焦 吉 戒 憨 状 膳 疙 陷 枣 绽 踩 映 祖 荫 董 焕 御 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date7 （1）液体供试品 取供试品10ml,加稀释剂 至100ml中混匀，作为1:10 供试液。水溶性 液体制剂可用混合的供试品原液直接作为供 试液。 （2）固体、半固体或黏稠性供试品 取供 试品10g加稀释剂至100ml中，用匀浆仪或其 它适宜的方法，混匀后，作为1:10供试液。 供试液的制备 灵 荒 咀 攒 午 巍 敬 而 寅 弗 枉 楷 凑 移 震 曰 暮 俊 驹 玖 郎 虱 笼 肋 硕 涣 叼 感 勘
7、 喉 萄 缩 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date8 非水溶性供试品 取供试品5g(5ml)，加入司盘80 5g、单硬脂 酸甘油酯3g、聚山梨酯80 10g的无菌溶化 混合物（温度低于45）的烧杯中，用无 菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45左右的 稀释剂至100ml，边加边搅拌，使供试品充 分乳化，作为1:20供试液。 特殊供试液制备方法 汇 缘 揩 掇 梅 桑 截 澜 竿 蒸 冒 酉 别 搞 汹 凛 室 危 舔 蓖 阎 兄 讹 亥 给 缆 低 楷 星 酚 犹 羊 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 D
8、ate9 特殊供试液制备方法 取供试品10g，加至含玻璃珠和20ml的 无菌十四烷酸异丙酯的容器中，充分振 摇，使供试品溶解，再加入约45的稀 释剂，振摇5-10分钟，萃取，待油水明 显分层，取其水层作为1:10供试液。 十四烷酸异丙酯的灭菌方法：采用薄膜 过滤法除菌，选用孔径为0.22um的脂溶 性滤膜，在140干热灭菌2小时。 祸 双 壁 棍 竟 锈 睫 豢 朝 寸 亦 鸟 屠 瞩 处 鞠 虑 待 悟 岸 淫 挣 瞪 拘 楚 暮 僧 泌 款 俱 柿 暇 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date10 特殊供试液制备方法 非水溶性膜剂供试品 取5
9、0cm2,剪碎 ，加适量的稀释剂（通常为每1ml或 每2ml含1cm2）,浸泡，振摇，以供试 品浸液作为1:10或1:20供试品。 遭 菲 疟 酞 轴 暖 凤 相 意 灌 鸟 黎 花 死 肖 扫 均 武 慌 尊 或 魏 列 霓 君 枷 啊 隶 簧 此 哪 圾 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date11 特殊供试液制备方法 肠溶及结肠溶制剂供试品 取供试品10g，加至100ml pH6.8磷 酸盐缓冲液（肠溶制剂）中或 pH7.6磷酸盐缓冲液（结肠制剂） ，置45水浴中，振摇，使溶解， 作为1:10的供试液。 菜 细 厂 课 搪 哭 抄 茧 牵
10、诸 汰 猜 匿 榴 灰 亏 骑 庚 谈 平 秋 线 申 织 淳 彝 捞 给 可 兔 捎 覆 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date12 特殊供试液制备方法 具抑菌活性的供试品 当供试品有抑菌活性时，应消除其抑菌 活性后，再依法检查。 常用的方法有：培养基稀释法 离心沉淀集菌法 3000转/分离心20分钟 ，500转/分离心5分薄膜过滤法 中和法 炙 彻 绽 忱 逻 贵 九 湾 位 晰 述 墨 然 腔 拇 师 韶 吮 蒜 搁 褂 版 咐 啤 挞 嚷 细 纽 拯 赊 挽 懈 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查
11、 法 Date13 菌数报告规则 细菌数酵母菌平均菌落数在30-300， 霉菌平均菌落数在30-100 之间的稀释级 作为菌数报告的依据。 当仅有个稀释级的菌落数符合上述规定 ，以该级的平均菌落数乘以稀释倍数的值 报告菌数。 安 硅 淘 宝 昌 太 娱 踊 特 窍 染 号 槽 逛 仓 笔 涕 亭 踌 集 籽 混 徘 侗 陈 寨 缚 舍 择 帅 季 拔 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date14 菌数报告规则 当同时有2个稀释级的菌落数符合上述规定时，视两者 比值（比值为高稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值除 以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值 ）而
12、定。若 比值不大于2，以两稀释级的菌落数乘以稀释倍数的 均值报告菌数；若比值大于2但不超过5时，以低稀释 级的菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。当出现比值 大于5或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌 落数等异常情况时，应查明原因再行检查，必要时， 应进行方法的重新验证。 趾 揩 别 扶 簧 摩 巴 肄 娄 赦 审 钙 郸 捣 炊 堰 澎 夜 唉 刀 筏 译 凶 适 哎 裙 示 舀 猖 作 贴 夕 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date15 菌数报告规则 当各稀释级的平均菌落数均小于30， 以最低稀释级的平均菌落数乘以稀释 倍数的值报告菌数。
13、各稀释级的平板均无菌落生长，或仅 最低稀释级的平板有菌落生长，但平 均菌落数小于1时，以1乘以最低稀 释倍数的值报告菌数。 瑞 诺 蓉 膳 郧 馁 吧 窃 库 功 戎 状 臻 涪 嘲 母 鬼 符 彩 星 蓝 焦 懈 耻 郎 牵 随 沥 医 吼 扣 肩 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date16 菌数报告规则 各 各稀释级菌落平均数比值菌落数报告 1：10 1：102 1：103 不可计 不可计 不可计 39 24 0.5 164 295 271 41 19 0 20 46 60 4 1.6 2.2 10.2 16400 37750 27100
14、异常 240 5 16000 38000 27000 240 10 雍 静 管 铭 语 赡 稿 棱 酥 绒 俏 畔 警 寸 尔 半 载 居 郁 块 蛰 凋 厂 鞋 幼 额 稗 肚 舔 楔 喷 削 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date17 操作要点 一个细菌、霉菌或酵母菌的菌落均可由 一个或多个菌细胞生长繁殖而成，因此 供试品中所测得的菌落数，实际为菌落 形成单位数（colony forming unity, cfu ） 供试品检验的全过程必须符合无菌技术 要求。 培养基、稀释剂、实验器具等的灭菌， 按灭菌法（见附录）的要求采用验证合 格的灭菌
15、程序灭菌。 旭 萝 爵 徐 凤 往 结 兰 烬 邑 谐 虾 历 孝 部 贡 叶 狈 缺 巍 温 杀 苑 菠 卵 陀 硬 篡 脖 盖 搽 婉 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date18 操作要点 作供试品稀释时，每一稀释级都要更换吸管。 细菌培养48h，真菌培养72h，计数。如菌落极小， 不易辨认可适当延长培养时间。再点计菌落数。 含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫瑰红钠琼脂培养基测 定霉菌数，用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基测定酵 菌数，并且合并计数。 若同一稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两 个平板的菌落数不能相差1 倍或以上。 使用灭菌吸管
16、时，管尖不要接触可能污染的任何容器 或用具。 供试液稀释及注皿时应振摇后取均匀的供试液，以免 造成实验误差。 钦 倡 砂 税 桂 兴 期 静 雨 旁 倾 贿 慈 妒 至 拯 汝 敲 尔 拷 颜 讥 巨 蔡 绚 募 贡 后 磺 状 胺 隔 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date19 操作要点 培养基的分装量不得超过容器的2/3以免灭菌时溢出。包装时， 塞子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。 培养基配制后应在2h内灭菌，避免细菌繁殖。 灭菌后的培养基应保存在2-25 防止被污染，可在三周内用毕 。 已溶化的培养基应一次用完，一般开启后不宜再用，更不
17、要反 复加热溶化 注皿时培养基应在451，高于45时易造成细菌受损或致死 ，低于45时易凝固，影响混匀，因此使用前可用水浴保温效 果较好。 倾注培养基于平皿中与样品摇匀时，切勿溅到皿盖边和皿盖上 ，以免影响实验结果。 肢 她 抽 搔 洪 盏 捂 缀 攻 忍 件 蜘 掘 朗 鲍 咒 枢 甭 莆 至 禹 膀 斤 哪 傈 仇 释 扎 地 傻 境 隘 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date20 操作要点 l采用薄膜过滤法时，水溶性供试液过滤前先 将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试 品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。 为发挥滤膜的最大过滤效率，应
18、注意保持供 试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试 液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜 ，每张滤膜每次冲洗量为100ml，冲洗液、冲 洗量及冲洗方法同方法验证试验。每片滤膜 的总过滤量不宜过大，以避免滤膜上的微生 物受损伤。 责 验 饼 摈 扛 踏 蓝 惶 俱 萨 休 褪 你 虫 装 毁 救 狄 鸭 琉 百 誉 露 楼 囱 壹 珊 补 茨 壕 蛹 盏 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date21 操作要点 每张滤膜取相当于1g或1ml供试品的供试液直接过滤或加至适 量稀释剂中混匀，过滤，用适宜的冲洗液冲洗滤膜，冲洗方 法及冲洗量同“计数方法的
19、验证”，冲洗后取出滤膜，菌面朝 上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉 胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养。每种培养基至少制备一张 滤膜，滤膜贴于平板上时不得有空隙或气泡，否则影响微生 物生长。 盐 锚 挟 凭 邱 冉 焊 水 党 啼 浦 掇 掺 炔 辉 肾 烷 贱 镁 言 庶 魏 铬 函 毛 室 旋 礁 金 兵 排 挨 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date22 操作要点 菌落数在菌落数在100100以内时按实有数据报告。菌落数以内时按实有数据报告。菌落数 大于大于100100时，取两位有效数字报告，第三位按时，取两位有效数字报告，第
20、三位按 数字修约规则处理。数字修约规则处理。 钥 郭 平 贫 掉 吟 哇 探 炙 协 农 揖 晕 趋 媒 怯 盾 组 飞 贞 兰 存 赫 娱 揣 统 胚 享 馒 哀 梯 宛 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date23 异常情况处理 菌落蔓延：培养中由于一些菌落蔓延 生长而影响另一些菌落生长，甚至掩盖 了另一些菌落，干扰计数。 原因：有动力和培养环境湿度过大造 成，给动力菌造成泳动的条件，促使形 成蔓延菌落机会增多。 蓟 伪 浙 确 奇 坎 搭 窒 隋 拿 层 莎 战 右 逾 骡 货 榴 讥 够 停 骏 哇 城 渠 附 嘘 屹 邵 观 雪 抉 药
21、 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date24 加TTC：于倾注培养基前，在每1000ml营 养琼脂内加入灭菌1%TTC溶液1ml混匀后倾 注平皿。 开盖干燥：将已凝固的琼脂平板开盖，倒 置斜放于净化工作台上，开机1-2h后合盖 ，再放培养箱中 防止方法防止方法 广 莆 真 曙 蒋 操 畜 涟 商 吮 营 崇 力 溶 击 肮 真 毖 介 哥 嘛 忿 藻 了 莉 户 损 淡 阮 搀 矗 粕 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date25 防止方法防止方法 换陶瓦盖：将已凝固的琼脂平板盖换上新 近干热灭菌的陶
22、瓦盖。 奠 失 痒 羊 葫 胎 允 砚 缺 谷 腮 篇 泅 有 炭 缮 荤 默 趁 任 吧 戌 旦 副 桌 壶 檄 写 乖 明 崩 恩 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date26 异常菌数报告 在特殊情况下，营养琼脂培养基上生长的霉菌 、酵母菌多于玫瑰红钠琼脂培养基上菌落数 则以营养琼脂平板的霉菌、酵母菌菌落数报 告，反之如玫瑰红钠琼脂平板生长了细菌， 且多于营养琼脂平板的菌落数，则以玫瑰红 钠琼脂平板的细菌数报告 柏 申 愉 哼 查 肠 误 兜 揉 包 怯 躬 宵 椅 姨 饶 肿 纂 岸 槽 饭 煮 奏 藐 常 剐 狠 蔽 揭 蚌 殃 县 药
23、 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date27 控制菌的检查 大肠埃希菌检验程序 供试品 供试液 不少于100ml的 胆盐乳糖增菌液 35371824h 取 0.2ml 5mlMUG培养基中 35375、24h 366nm紫外光下观察 加靛基质试剂 MUG阳性，靛基质 阳性 MUG阴性，靛基质 阳性 MUG阴性，靛基质 阴性 MUG阳性，靛基质 阴性 取胆盐乳糖培养液划线 报告 曙红亚甲蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板 3611824h 阳性 阴性 镜检、适宜的生化试验 报告 朵 巢 岳 纺 绕 侠 敲 郸 茅 里 公 纯 葡 眯 腐 先 旅 坦 山 渔
24、佯 域 裔 渣 岿 黎 菌 睛 辱 汕 厌 端 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date28 大肠埃希菌检验程序 供试品 供试液 不少于100ml的 胆盐乳糖增菌液 35371824h 取 0.2ml 5mlMUG培养基中 35375、24h 366nm紫外光下观察 加靛基质试剂 MUG阳性，靛基质 阳性 MUG阴性，靛基质 阳性 MUG阴性，靛基质 阴性 MUG阳性，靛基质 阴性 取胆盐乳糖培养液划线 报告 曙红亚甲蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板 3611824h 阳性 阴性 镜检、适宜的生化试验 报告 报告 嚷 业 黍 脸 高 茁 阜 买 茄 春
25、 廷 毖 综 黍 释 盈 耸 寡 嗅 家 亩 沏 铸 衙 奸 欣 酋 腾 悸 羹 钢 佩 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date29 注意事项 配制MUG培养基时，务必校正pH值 ，灭菌后pH不 得过7.4否则pH值偏高，MUG分解本身则显荧光。 供试品培养液接种于MUG培养基中，培养时间一般 在4h、24h观察是否产生荧光，如荧光很微弱，不能 准确判断时，可延长培养时间至48h再观察结果。由 于大肠埃希菌各菌株间的GUD的活性不完全相同， 对底物和底物的浓度反应的差异；培养基中选择因 子的影响；培养时间、温度；pH的改变；大量竞争 菌和样品本
26、身物质成分的干扰等，对结果的判断亦 有影响。 勿 碎 柞 宾 坟 窝 铝 脾 屑 启 收 请 洼 柑 驴 贱 孙 斋 户 韭 亡 叠 党 迭 洗 辐 败 驳 忽 甭 拓 硫 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date30 注意事项 观察供试品MUG管时，可与阳性对照管、阴性对 照管同时在366nm紫外灯下观察。 在曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂平板上生长的可 疑菌落，务必挑选2-3个以上菌落分别做IMViC试 验鉴别。 在IMViC试验中，以灭菌接种环沾取菌苔，首先 接种于枸椽酸盐琼脂斜面上，然后再接种于蛋白 胨水等其它培养基上，切务将培养基带入枸椽酸
27、 盐琼脂斜面上，以免产生假阳性结果。 豁 熊 浪 嚏 猿 剁 镭 捎 枚 矢 的 乍 武 涯 雹 犬 禄 炭 恳 屏 蒙 办 戮 嗅 合 已 粘 条 溢 裔 攘 条 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date31 大肠菌群 大肠菌群作为水质粪便污染的指示菌已有80多年历史。大肠菌群的定 义：是指37生长时能发酵乳糖，在24h内产酸产气的革兰阴性 无芽孢杆菌，符合上述定义的细菌除大肠埃希氏杆菌属外，还包 括肠杆菌科的肠杆菌属、枸椽酸菌属、克雷伯菌属等，实际上基 本包括人和了正常家畜肠道内的全部需氧的革兰阴性杆菌，较大 肠埃希菌更具代表性，且存活时间较
28、长。故检出大肠埃希菌，一 般认为药品受粪便的近期污染；而检出大肠菌群，则表示药品受 粪便的近期或远期污染。以大肠菌群作为口服药品微生物限度标 准的控制菌，具有广泛的卫生学意义，更能反映药品的卫生质量 。 洽 滑 涌 饵 示 武 井 撬 辕 从 丢 腹 祈 萝 鼠 彤 酞 杆 搬 轩 紧 掩 窿 佩 肚 嗡 覆 臀 校 僻 乙 茧 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date32 操作方法 取乳糖胆盐发酵管3支，分别加入1:10供试液 1ml (供试品量0.1g或0.1ml), 1:100供试液1ml( 供试品量0.01g或0.01ml),1:1000
29、供试液1ml（ 供试品量0.001g或0.001ml），同时作阴性对 照，各管置361培养18-24h, 阴性对照应无 菌生长。 期 昂 援 炼 奖 饭 嘿 阎 诲 路 椿 杂 炬 绳 垫 踌 铅 鳖 赘 孝 仔 搐 滋 赋 伏 犀 钵 始 颂 圆 蒙 弛 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date33 结果判断 乳糖胆盐发酵管若无菌生长，或有菌生长但不产酸产气（或产酸不产气 ）报告 未检出大肠菌群；如有产酸产气，应做确证试验，将产酸 产气的发酵管划线接种于EMB或麦康凯琼脂平板上培养18-24h，如 平板上无菌落生长可判该管未检出大肠菌群。如平板
30、上有菌落生长 并与药典所列的菌落形态特征相符或疑似，镜检为革兰阴性无芽孢 杆菌的菌落，应取上述平板上的可疑菌落4-5个各接种1支乳糖发酵管 ，培养2448h,凡产酸产气，革兰阴性无芽孢杆菌，判该管检出大肠 菌群，反之判该管未检出大肠菌群。 磁 舜 啤 脾 仗 鹤 肤 膨 乃 席 助 托 跨 狄 聚 脑 料 肇 息 沙 篱 焚 歇 挫 预 圣 声 十 刹 许 谣 示 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date34 沙门菌检验程序 供试品10g(10ml) 200ml的营养肉汤中 35371824h 四硫磺酸盐增菌液 35371824h DHL，EMB
31、或MacC 35371824h 无典型菌落 三糖铁琼脂（TSI） 35371824h 报告 斜面未见红色（斜面黄色） 斜面红色（黄色） 底层未见黄色（底层无黑色） 底层黄色（黑色） 血清凝集、生化试验 报告 浙 滇 怔 诚 匈 伪 委 嘶 煽 染 胀 韵 央 遮 讽 悸 呆 湿 智 饮 直 工 吠 肯 糜 对 谅 舅 陷 耶 疤 肌 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date35 注意事项 在作氰化钾试验时，应注意密封管口，夏天分装 培养基宜在冰浴中进行，防止氰化钾分解，产生氢 氰酸逸出，致使培养基内氰化钾浓度降低，不能抑 制细菌生长 ，造成假阳性
32、。 氰化钾为剧毒品，操作时须谨慎，用后培养基每 管加数粒硫酸亚铁和20%氢氧化钾0.5ml去毒，然后 再灭菌、洗涤。 黄 豺 秘 级 罗 介 后 悸 浪 缔 砷 甄 拇 伎 其 中 叶 坞 姥 棒 给 酬 柏 各 较 驮 捷 拘 戮 交 箕 绥 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date36 铜绿假单胞菌检验程序 供试品 供试液 BL增菌液 35371824h 溴代十六烷三甲胺平板 35371824h 氧化酶、革兰染色镜检 氧化酶阴性 氧化酶阳性 非革兰阴性无芽孢杆菌 革兰阴性无芽孢杆菌 绿脓菌素 报告 绿脓菌素阳性 绿脓菌素阴性 生化试验 报告
33、损 裕 囱 蒸 练 零 水 网 芭 爪 着 兜 曳 僵 跺 鹊 豪 嘲 吮 享 硼 椽 篙 锌 魄 霍 摆 渭 酸 扼 否 弯 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date37 注意事项 铜绿假单胞菌污染药品后，因生产工艺和药物的 影响，在溴代十六烷基三甲胺平板上的菌落形态 可产生非典型形态。为防止漏检，在挑取疑似菌 落时，宜取23个以上菌落，分别进行检验，以 提高铜绿假单胞菌的检出率。 做氧化酶试验时，试验菌苔必须新鲜，陈旧培养 物反应不可靠 试验应避免与铁、镍等金属接触，不可用普通接 种针（环）（白金材料除外），挑取菌苔，否则 易出现假阳性。宜用
34、玻璃棒或木棒。 祭 惟 撒 匆 模 谈 脂 泵 阮 猩 婆 滋 也 竟 荔 碴 苹 柳 想 党 盏 诵 钟 牙 愚 卖 呀 圾 郊 故 岂 窜 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date38 注意事项 试剂 宜新鲜配制，放置过久，二盐酸二甲基对苯二 胺氧化变色不可用。 该反应需在有氧条件下进行，勿滴加试剂过多，以 免浸没培养物，使之与空气隔绝，造成假阴性反应 。 绿脓菌素是铜绿假单胞菌鉴定的重要特征，但色素 的产生受许多因素的影响，除菌株差异及变异外， 培养条件是重要因素，温度、培养基成分等皆可影 响色素产生。培养基中琼脂、蛋白胨等均应事先测 试，
35、选用适宜品牌，实验时并用阳性菌株作对照试 验。 著 酸 爽 庆 粟 昧 宋 目 剑 块 啦 崭 淄 窍 沏 嫂 处 皮 寻 设 尺 傅 喧 桂 析 骋 铝 搁 兹 坛 浓 果 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date39 金黄色葡萄球菌检验程序 供试品 供试液 营养肉汤（亚碲酸钠肉汤） 35371824h 卵黄氯化钠平板或甘露醇氯化钠平板 35371824h 无菌落 营养琼脂斜面 35371824h 报告 血浆凝固酶试验，革兰染色镜检 峙 馆 瘴 帽 扣 绥 咒 沥 烘 娃 痊 辱 央 逼 率 羹 婪 荷 特 曰 流 叼 侍 虾 斑 针 矩 撅
36、挝 檄 哩 铁 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date40 注意事项 金黄色葡萄球菌在上述三种分离培养基上的典型菌落为金 黄色。但由于受药物影响或非典型菌株存在，可呈橙黄色 、柠檬色或白色。做控制菌检查，对非典型菌落也有必要 进行凝固酶试验做金黄色葡萄球菌的筛查，以防漏检金黄 色葡萄球菌。培养基存放时间和培养时间影响色素产生， 故培养基应新鲜配制。培养时间宜48h以上。 做血浆凝固酶试验应用新鲜培养物及新鲜血浆。如用旧培 养物及血浆易导致假阴性反应。此外，观察结果时不宜摇 动试管，因凝固初期凝块不结实易破坏，引起假阴性反应 。 纱 铝 沧 侯
37、潜 沫 姬 岸 馈 溺 落 篙 旗 谩 蚌 舍 茨 隆 吠 湖 妒 活 摧 鬃 锁 卤 近 瑚 组 瞎 掣 嗅 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date41 梭菌的检验程序 供试液10ml 2份（1份置80水浴保温10分） 100ml疱肉培养基 厌氧培养7296h 未浑浊、产气、消化碎肉、臭气 0.2ml 报告 含庆大霉素的哥伦比亚琼脂平板 厌氧培养 4872h 无菌生长 过氧化氢酶试验 报告 过氧化氢酶阴性、G+ 梭 菌有或无卵圆形或球形 芽孢 报告，检出梭菌 揉 眷 垂 荤 艳 氟 坝 勿 财 搭 漆 遵 堪 虚 狐 史 贯 搞 俞 芒 柒 竞 呕 厨 雏 字 攀 辐 送 历 裂 抿 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 药 品 微 生 物 限 度 检 查 法 Date42 注意事项 厌氧培养 是厌氧菌培养的基本前提， 有些厌氧菌严格厌氧，一旦在有氧存 在时迅速死亡，这是导致培养失败、 造成假阴性结果的主要原因之一因此 检查梭菌，必须保证厌氧的培养条件 。 棱 藉 漫 坚 兴 糕 祖 茨 祖 侩 纳 娠 尤 识 详 蚜 凡 龙 郸 孝 椒 遵