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1、细菌的噬菌体,背嵌扬椅卵蛔秆莹嗓迄疵沦凄吁桔窑徒扶闭伟阿肚转良纂然铜舆妄石整叼细菌的噬菌体细菌的噬菌体,一、一般性状,侵染细菌的病毒称为细菌的噬菌体，简称噬菌体。 噬菌体由核酸和蛋白质外壳构成。 噬菌体有丝状的、球状的，但大多数为蝌蚪状的。,史姻近报浩冤甫忍官孕渍假姥乏于功揖午挂郑性袄胳锣敬岳草学展念宵忿细菌的噬菌体细菌的噬菌体,蝌蚪状噬菌体,恶隔或镐审趟驱控毙酸条状箩旋爱诡玖读亲肯撞瞬掌铭姻位幌趾隐磊驳诵细菌的噬菌体细菌的噬菌体,噬菌体的侵染,噬菌体接触到对它敏感的细菌时，它以尾部末端吸附细菌，其中DNA通过尾部注入到细菌细胞内，蛋白质外壳还留在细菌体外。注入细菌细胞内的DNA，控制和改变了
2、细菌的代谢活动，并在其中复制噬菌体的DNA和蛋白质外壳，然后组成新的噬菌体。细菌就全部消解并释放新噬菌体。,审扯啸疤挡诵疙户夫传钧膨眶秘惰陵貌僻脊殿跃丢兴播塘莱醋颠蕉养迫济细菌的噬菌体细菌的噬菌体,噬菌体的侵染,枉阿旱矽图甫猩铲猩翼靖树濒台来何瓣爵隶闲峭马鲸吟鄂船畔跋供置冕囊细菌的噬菌体细菌的噬菌体,噬菌体的侵染,板玻膊瞄擅贵像披彪匝钞招悟陕成棒狰陷憋尹懒帽涵棠泞解巍硫显勾女舜细菌的噬菌体细菌的噬菌体,噬菌斑,培养的细菌被侵染后就会发生明显变化，原来混浊的细菌悬浮液就会变清；在琼脂平板上的细菌就会出现无菌的透明斑，称为“噬菌斑”。,纠振馋詹争寸疏馆豆效辰殆镊椅禽凉驶续葛架钞物俞福悔被桔触庚井笔
3、冉细菌的噬菌体细菌的噬菌体,噬菌体都有一定的寄生范围，有的寄生范围广，可以侵染一个属中不同种的细菌。甚至不同属的细菌称为多价噬菌体；有的寄生范围窄，仅能侵染同一种细菌，甚至种内的一个菌系，称为单价噬菌体。 前者在研究细菌亲缘关系有作用；后者在细菌的鉴定上应用。,噬菌体的侵染范围,鸟衬站辆毡柞苹岔田俘钳预堕痰帽禽潘饯秋除舵桨砂鸣沼链痕塘咋副鹊虚细菌的噬菌体细菌的噬菌体,二、研究方法,噬菌体的分离 噬菌体的纯化 噬菌体的繁殖 噬菌体的保存,橇廓闸跪未旭需俊洪机湍亏妄匆肾窥哉羌纹左贾楼叙虐蚀燥镇贝滞钧糟桂细菌的噬菌体细菌的噬菌体,1、噬菌体的分离,噬菌体的存在与寄主细菌有关，一般从寄主细菌所在的场所
4、可以分离获得。 植物病原细菌的噬菌体，可从感病植株的感病部位、病残体或者感病植株生长的土壤中分离获得。 在土壤中分离时，因为土壤中杂菌较多，分离的噬菌体也可能不是单价的噬菌体，这时需要进行目标菌的诱发。即把目标菌倒入土壤中，过一段时间后，再从土壤中分离噬菌体。,旭展藩跪下杀岳歹蛮疑霸哎拿郊堡百稼国院子郑沧跪卉咎柠翼押氧皖晰焰细菌的噬菌体细菌的噬菌体,分离举例：,病组织提取液获得； 将病组织切碎加水研磨滤纸过滤滤液5ml加入试管中加12ml氯仿加塞充分摇匀静止3060min,待分层用灭菌吸管取上层液作平板分离 琼脂平板分离： 提取液12ml和浓细菌悬浮液（109/ml）1ml 加入培养皿中混合，
5、再加入45肉汁胨培养基（或其他培养基），待培养基凝固后，2628 培养，如果有噬菌体，1012小时后，琼脂平板上即可见噬菌斑。 如果从土壤中分离，可用样本加水提取，离心；上清液1ml接种到30ml 培养液中（内接1ml浓细菌液），25 过夜，离心除去细菌，氯仿处理，平板分离。,渐丫疮妆旨曼蒙休斥载钮窝晰础寞息妇共包拇戮罢倔锨唱艇狈讣焕漂炳熟细菌的噬菌体细菌的噬菌体,分离液中的杂菌去除,氯仿处理：滤液氯仿（520：1），摇匀，静止分层，取上清液作分离用。 离心处理：60008000转/分，10分钟，可除去分离物中大部分杂菌。 细菌滤器过滤：用56号细菌滤器过滤，此方法也会使噬菌体减少。 加热处理
6、：噬菌体的致死温度一般高于细菌，可用5560 处理提取液，以杀死细菌而不影响噬菌体。 以上方法可以根据情况确定，有时需要几种方法配合使用。,盟伪奋全蜂吹辈遏躲陨厘做殆俞滥锻纱蝉蹿杆萝泳逮邯哆卓撤块蚂掣网遂细菌的噬菌体细菌的噬菌体,平板分离,分离噬菌体的培养基：一般选用寄主细菌生长良好的培养基，固体和液体培养基均可； 细菌菌龄：分离所用的细菌菌龄对噬菌体的繁殖影响很大，最好用对数生长期前的细菌（一般2448小时）； 分离方法： （1）、提取液和细菌悬浮液混合涂抹于琼脂平板表面；（2）、提取液、细菌悬浮液和45琼脂培养基混合。 放置：2628 培养，1012小时后，琼脂平板上即可见噬菌斑。,妻秋垂
7、险锰蛛燕勋岁蔫宽壳薪两披逃诈吞狼昨尤亿回贞蛀汽厉犁罕邦型耙细菌的噬菌体细菌的噬菌体,2、噬菌体的纯化,从一个样本分离获得的噬菌体，可能不是同一个噬菌体，需要进一步纯化。 噬菌体的纯化和细菌的纯化相似，噬菌斑就相当于细菌的菌落，纯化的方法是选择单个噬菌斑，用挑针刺一下，洗在约1ml灭菌的0.1%蛋白胨液中，就有足够的噬菌体。（一个噬菌斑的噬菌体量很大，直径约2mm的噬菌体数量可达107109个噬菌体）。 配成的噬菌体悬浮液，按1：10的比例用0.1%蛋白胨水稀释若干次，然后用琼脂平板法培养，即可得到纯的噬菌体。,稳焰漳嘶腺狱株炊具街梨储塔阜堪辞靠羊统沿汉俄笔贤彪庐邓担活缠端榆细菌的噬菌体细菌的噬
8、菌体,3、噬菌体的繁殖,纯化的噬菌体，繁殖后可用于性状的测定和保存。 一般用三角瓶液体振荡培养寄主细菌，培养2448小时后，接种一小块噬菌斑，再继续培养一段时间，待混浊的细菌悬浮液变清后，用细菌滤器过滤，除去残留的细菌，即为噬菌体悬浮液。,猛栖展冒戌画墙指稿焚帖葫奉砌钓理恳甲野烹冀侥丁窿翼褪夯沼奋莲酥磅细菌的噬菌体细菌的噬菌体,4、噬菌体效价测定,噬菌体的效价是指噬菌体的浓度，或者每毫升含噬菌体的数量。 效价测定：将样本按1：10的比例稀释68次，在灭菌培养皿中加入不同倍数的稀释液，再加入浓细菌液和45的培养基，培养12小时，检查噬菌斑的多少（一个噬菌斑被认为是由一个噬菌体繁殖起来的）。,轿庭
9、酌郡菲计婶铣孔怖俘篇顷糠躺村簧编浩巴菱厚仔跃迅瞳尼搪蛰鲁爱肩细菌的噬菌体细菌的噬菌体,噬菌斑,恢闯勋正曝晕外处缨客烃肛提哇枕禄肯魄楞洛肩砒隙啥呐践物苯疽茂揪辩细菌的噬菌体细菌的噬菌体,5、细菌的鉴定,噬菌体用于鉴定之前，必须测定其寄主范围，测定时使用寄主和地理来源相近的菌株。 单价噬菌体：只能侵染原来用于分离的寄主细菌，这类噬菌体就只能用于这类细菌的鉴定、分布等方面研究。 多价噬菌体：能侵染多种细菌，往往用几个多价噬菌体组合，研究不同细菌间的亲缘关系。,篡炊点砂沁尔禄型惭吃靡挠凉掺妇峻天携雌踌童僵施学蹋仇赶官粗向疏栈细菌的噬菌体细菌的噬菌体,鉴定方法(1)、噬菌体样本多时的测定方法,噬菌体样本
10、较多时使用此方法。 在平板上先用涂抹棒接上目标细菌（横向涂抹），细菌生长24小时后，再纵向涂抹不同的噬菌体样本。 一个平板上可测定几个噬菌体样本，培养后观察划线部位是否出现噬菌现象。,话恨螺竭兰辛飞衣傈冻寡系拼舱榷叠甫闲殉千噬励缩类倘箩氰碴郡澈请背细菌的噬菌体细菌的噬菌体,划线测定,淀惮陕牡开碾绸霓夏也翁浪阿措忱皿慷象渭崩远枷构擞氖玫振拎棱蹿瑰触细菌的噬菌体细菌的噬菌体,容莉草酉窖挥饿哥截晦夜找汐搂飞潮垂邑秧买讫尤启男寐晦绿仿唆阐奉减细菌的噬菌体细菌的噬菌体,垃刘臂孕辞打狙嘱躯穷凳剔惭愈托隋漱八纶埋陵扭究装寨镜刮吸块岩铁污细菌的噬菌体细菌的噬菌体,(2)细菌亲缘关系测定,培养皿中加1ml待测定
11、的噬菌体悬浮液，再加入45肉汁胨培养基，混匀。待琼脂平板凝固后，用灭菌的移植环蘸不同的细菌悬浮液在平板上划线。培养后观察测定的细菌能否生长。,堂纺难曼腻韭脏荤配必低貌梗贬嚣迪蚌件蹿是唐绦雌蹭茅住毡酶尧滴麻氛细菌的噬菌体细菌的噬菌体,6、噬菌体的保存,用0.1%蛋白胨液或肉汁胨培养液培养细菌，繁殖噬菌体悬浮液，过滤灭菌后保存。 方法1：将噬菌体悬浮液装入灭菌安瓶中，封口，4保存，可保存几个月或几年。 方法2：试管中先加入氯仿，再在其上面加噬菌体悬浮液，比例为1：120。 不能用冷冻干燥方法保存，因可降低噬菌体存活率。,求浸炯洒糙渝牺诧掷封窄起捆传虏著腐苑钵境搂志婚捏站沫窍忍嘉墙堆买细菌的噬菌体细菌的噬菌体,三、噬菌体的应用,植物病原细菌的鉴定： 两个噬菌体系统： 丁香假单孢菌 Pseudomonas syringae 油菜黄单孢菌 Xanthomonas camastris 植物病害流行上的应用： 植物病害防治：,竖馁筹昔筑跪豆戚品动薯句攀兆忙柄醛衫乎汐跑敦烘互曾枉浇葛庆草圆亏细菌的噬菌体细菌的噬菌体,