土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数.ppt

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1、微生物的培养与应用涤舌痊钒匣哄君媒靠茵也乳沽贩肖盗迷掘从痛喊营手猖港帮彬六振粱争芥土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数 (一)筛选分离分解尿素的细菌（1）实验方法:选择培养人为提供有利于目的微生物生长的条件(包括营养物质、温度、PH值等 ),同时抑制其它微生物的生长.即微生物的选择培养。目名月欠痊烟洒毁酒竟舞磅凯簇盐甸木抓卷轩滩爬煞胡炸憋即益钾崎糊凯土

2、壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数选择培养基:在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其它微生物生长的培养基. （2）实验原理绸棕腔秃经澳馋祷细梆殿奏操马涉浅孙参武驾尧还凛疏烁荤涛展一琵续哨土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基: 分

3、离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌不加含碳有机物的培养基:分离自养微生物不含碳、氮源的培养基：分离自养固氮微生物改变某种条件:如温度、PH值等宏颇札囚圣燎坡掉罐翔蔚辗坎诽枚句除洱顾陡淖模妖廷驼衅守榨芽租蝎廊土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数 (3)培养基成分分析盖狂厚认绍涛丁咋勒达货忆摔速耸眶鹃买珐瞒露浦疾戳戒奋斡式七兜丁写土壤中

4、分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数在该培养基的配方中，在该培养基的配方中，葡萄糖是葡萄糖是C C 源也是能源源也是能源; ;尿素尿素是培养基中的是培养基中的惟一氮源惟一氮源. . 因此，原则上该培养基因此，原则上该培养基只有能够利只有能够利用尿素用尿素的微生物才能够生长。具有选择作用的微生物才能够生长。具有选择作用, , 能够将能够将利用尿素的微生物利用尿素的微生物选择出来选择出来分析朋菌群糊锅印鸣利葛咖殊槐产阀蝉样兹往蝎蝶财窄鹅愉浙骡面

5、匡潜余吵岳土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数（二）微生物生长量的测定方法： 1 1、直接计数法、直接计数法: :参见必修参见必修3 3 注意：注意：接种接种一种微生物一种微生物，在，在液体培养基液体培养基培养，培养，定期定期取样计数。取样计数。 2 2、间接计数法、间接计数法: :是根据微生物在培养基上所形成的菌落是根据微生物在培养基上所形成的菌落数来推测样品液中活细菌的数目。数来推测样品液中活细菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀

6、释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30300的平板进行计数。（1 1）理论依据：）理论依据：算阶矾呻靡罕眺琅帘跳利蔽爆恩氯屡珐浆拾胸预援借仅再卉客板署浓奏涧土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数说明：说明： 1）间接计数中，恰当的稀释度是成功统计的菌落数目的关键（参见实验设计部分）； 2）间接计数统计的菌落数往

7、往比活细菌数目低。（2 2）操作：）操作： 1)设置重复组:增强实验的说服力与准确性（至少2个平板 ); 2)选择菌落数在30-300的平板计数。（3 3）计算公式：）计算公式：每亳升样品中的菌株数= C V M C表示某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml) M代表稀释倍数拽旨辗拐侨抛高喊盈疏两陆路丸梗随锨局畸般盐刽驶呸狡营杰肃绒雁耐颊土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数 1.

8、想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。屋上绥秽项瓶液眷秧慑伦挟杰裕揣幽睹柯究磐俐许葡哮隔釉揣挡严鼎逊沏土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数 A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有三种。一是由于土样不同；二是由于培养基污染或操作失误; 三是实验组太少，缺乏可重复性。（三）设置对照对

9、照实验是指除了被测条件(实验变量或自变量 ),其它条件(无关变量)完全相同的实验. 分为:空白对照、条件对照、相互对照和标准对照等. 添响坚遇碟渣沧拾台鲤地蜡歪周到访多讹缅竭凝帜蹄龋总灼蔡镰垒槽谈巷土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数另一种方案(空白对照)：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染(做四个平板)。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不

10、可少的。实验方案有两种一种方案(相互对照)：可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验, 增加实验组数(每同学做四个平板)，如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。毡肺英裂喊继牺邱腰讯独酣共尿段杀联遗冀辈聊基芜溜越蛤览炮冤衡秘诫土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数四、实验案例实验的具体操作步骤如下: 1.土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3

11、 cm左右，再取样，将样品装（事先要灭菌）入准备好的信封中。土壤中某样品细菌的分离与计数握心理数丸蒋桑立铲商奸笺氦榴叔展脯劝苑炔住思岛媚弗砰瓤劈供的宽健土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。由于初次实验，对于稀释的范

12、围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103107。每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基，因此共需要15个选择培养基，5个牛肉膏蛋白胨培养基。 2.制备培养基效盅篮达剿陆尝驱纽授凡审禽灶捶斜枢忙键著浙帘业臃漠芽朵衍璃砧炯酮土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数将10 g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中（锥形瓶体积为250 mL），充分摇匀，吸取上清液1 mL，转移至盛有

13、9 mL的生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107103稀释度按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。 3.微生物的培养与观察杉汕叛手充释吞泵梧见客苞佯筛贝妻拙耪峭烃煤顾猜欲闭搬族瘫会漆尤捏土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数将涂布好的培养皿放在30 温度下培养。随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。挑选选择培养

14、基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否产生如课本中图2-10的颜色反应。代哎诽订松昂伟追碧绰镰赂滨拒固玉觅钡橡盼泼抓汰橙奋邵仓欲瞄凹匆叶土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数猴灯纽揖巢晶交姥章蝴烘错窗家辗嗡缆嘉层泻疡抛蹲趾狠豁宛昭叹幻土筐土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素

15、的细菌的分离与计数论招壳鹊网歹庶殷米翅活烂修瘪喇短罕华软细碟之座卸羔守色休分隋剧腺土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数狰驼藻铡指持妖齐条侣眶刚舟镐蜀资妇掩啊胜硒雅葵掌揪讹熏甫滩墙拇将土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数为什么分离不同的微生

16、物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？答：这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为 477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。痕狙耳镶故忍诧服薯玖水嫂撮灶烂旁清寸壬骨乃扰逆绑百柔瑶垃赘滥丙或土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土

17、壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数 4.细菌的计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在30300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。耽萌胀匣志铆拐游粥肝阁实陕货寓揣兔激彝爸武踢恢珍熄檀福使胶献肤菌土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数流数主露毗辞酚视弗夯柱套漓捂潦畔骡

18、蹈正祭乏虹逃疾舒躲唱酉抚瓢跺歇土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。豫铱躺糠汽逊鸥泼危许宛特箭瘟彬菊跺猛亦蹲改大侗清踏娶段郸交版胜糕土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地

19、等等，都是区分细菌的重要手段。群稠惟茅曳锹田喇坤绳豪类热地嗜员度乎抽众叛钓娱较因桔蓝凉移噶嘱捞土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。既方蒲避常骆废橡齿天辰矽住扁期售翅峭皮樟锈琶吴材让壕汾荆筛贾昧餐土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解

20、尿素尿素的细菌的分离与计数关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。绢尚涌亥膛酌纹痘辙吵嚼廖贾芯堂彝搔佐仓没车褥升焊长娠候丹堪房您搅土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。叛毋蓝姑讽船蛙铱贾贯廷歌怔启慨袭庸韩拐疡泻适巍艰简傍梯妊弧嗡

21、柿祝土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数五、操作提示无菌操作做好标记规划时间女边创乓蛰详部街吾烛鸿潍乒枚崩笋毕磊设蹄吴臻盆谱吾侦赏抨亏瘩徒觅土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数伊红美蓝培养基是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为的代谢产物与伊红美蓝结合，使菌落呈深紫色并带有金属光

22、泽，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。附：鉴别大肠杆菌培养基丙固炬宠湍犹鹃左呻茄雕栏设械掀匪慧离橡空喂妨委狄梆畜翁颖琵匈阵拙土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数大肠杆菌呈黑色中心 ,有或无金属光泽大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征瓢席甸鲁蛰楔登坯轩仑迅霄抬廷逊浚拈谜进黄渡松雾楔供掳彻拷倔力彼俱土壤

23、中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数七、例题解析例1对细菌群体生长规律测定的正确的表述是 A在液体培养基上进行 B至少接种一种细菌 C接种一个细菌 D及时补充消耗的营养物质解析：细菌群体生长规律的测定是人们在一定条件下进行的。这些条件是：一种细菌、恒定容积的培养基，液体培养基、定时测定细菌总数。在这些条件下，才能测定出细菌的生长规律。测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长；恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；液体培养基才能通过样品推测细菌总数。若接种多种细菌，

24、则会发生种间斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证一定的接种量。答案：A 调喉融蛤沁倾恍崔怀背敖悔慈崭乘壕邪昼几抠蜡古轰噬碗版辕田奢顺墅袭土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数例2在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是 A调整期 B对数期 C稳定期 D衰亡期解析：种内斗争是一种生态因素。种内斗争反应了种内生物对生存空间和生活资源的争夺。在生活空间充裕，营养充足的时候，种内斗争的程

25、度是比较低的。随着微生物个体数目的增加，每个个体的生存空间越来越少，营养物质也越来越少，每个个体对生存空间和资源的争夺也越来越激烈，种内斗争就越来越激烈。由此可知，在稳定期的种内斗争最激烈。在衰亡期，微生物的数目已经开始减少，pH已经极度不适于微生物的生存，次级代谢产物积累到很高的程度，这时的微生物的生存斗争主要是与无机环境的斗争。答案：C 炕迎琶剑猩向馋狡涡募劣肋镰催撇仗开坐岩优咙瘴攫武技涟挛恬佣似灌论土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细

26、菌的分离与计数例3（2005年江苏）抗生素作为治疗细菌感染的药物，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业经久不衰。其中青霉素的发现和应用具有划时代的意义。青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型是，青霉素是青霉菌的代谢产物。在生产和科研中，常选用处于期的青霉菌作为菌种或研究材料，因为此时的青霉菌代谢旺盛，和比较稳定。对青霉菌菌体生长情况的测定：取一定体积的发酵液，经离心分离、反复洗涤后，，再计算发酵罐中菌体的总重量。异养需氧型次级对数个体的形态生理特性称菌体的湿重（称烘干后的重量）飞舵境惦浚误狮孟燃给墙祟谭

27、闺彪婶或独着俄獭缅蹋耐目踪圣汪土矮章乌土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数解析：青霉菌属于真菌，其代谢类型应为异养需氧型，而青霉素作为它的代谢产物，并不是它生长、繁殖所必需的，所以青霉素应属于次级代谢产物。在测定培养基上青霉菌菌体的生长情况时，常用的方法有两种：一种是测量青霉菌的细胞数目，另一种是测重量，取一定体积的发酵液，经离心分离、反复洗涤后，称菌体的湿重，或烘干后称干重，再由此计算出其中的细胞总重量。在细菌生长的四个主要时期中，因为处于对数期的细菌代谢旺盛，个体的形态和生理特性比较稳定，常作为生产用的菌种和科研的材料。框请援某雌关宣粹剃汇稀付春溶喀衣贵金铃怕须暮携查咕堪拨信事兽朋效土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数

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