第二章预处理及固液分离技术.ppt

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1、润 因 丁 矗 雁 突 莲 辈 腰 巩 钟 朋 诱 泛 酵 凉 酶 倍 歹 丙 蜀 镑 昂 谨 牢 肘 慧 拽 浸 字 叙 搪 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第二章 预处理及固 液分离技术 2012.02 何 喜 岔 缠 栈 芦 袍 役 购 绎 逆 烛 蝴 蝇 陨 殿 递 室 卯 掩 溃 微 厄 配 绰 居 醉 岩 镊 元 赠 把 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 主要内容 预处理的本质(固-液分离) 发酵液的相对纯化方法 絮凝的基本原理和影响因素 细

2、胞破碎的方法 影响离心分离的因素、方法及设备 蹬 软 练 扛 氏 鸭 璃 曼 驱 阅 晨 忽 约 不 钠 僻 秆 蹋 尖 刘 据 晨 掇 烘 现 妥 怪 琼 碘 赢 订 秃 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 预处理的目的 改变发酵液的物理性质,改善流体性能,提高 过滤速率。 使目的产物转相便于后处理(多数是液相)。 去除发酵液中的部分杂质,便于后续操作。 发酵液的预处理 l目的产品在发酵液中浓度很低 l与许多杂质(溶解的和悬浮的)夹在一起, l发酵液属于非牛顿型流体 需进行预处理 由于 臻 橱 缴 属 泞 八 锅 凸 本 铭

3、 庶 演 增 于 辖 毯 皂 科 橇 苛 羽 钡 飘 瞥 哲 瘩 顷 赛 帐 笆 纽 扯 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 通过微生物发酵或动植物培养得到的原料液应 首先将其中的菌体或细胞与培养液分离。 如果目标产物为胞外代谢物则直接对培养 液进行分离纯化; 如果目标产物为胞内代谢产物,要对细胞 进行处理,释放目标产物,然后除去细胞 碎片,再进行目标物质的纯化。 (在合适的培养基pH、温度和通气搅拌 或经厌氧条件下进行生长并合成生物活 性物质) (包括菌体、胞 外代谢产物或胞 内酶或核酸等) 缔 瞩 致 旦 粮 老 柞 糖

4、涟 罢 操 鸦 鞋 罢 规 宋 胺 倚 暂 伍 富 存 亮 耪 感 绥 账 劣 朽 仇 阶 裔 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 一、预处理特性的改变方法 取决于可分离物质的性质,主要考虑目的物质的 分子大小、热稳定性、pH的适应性。 加热:最简单最经济的预处理方法(常用) 加热能使液体粘度降低,过滤速度加快。 该方法只适合于对热较稳定的生化物质,加热 的温度和时间须严加选择。 绘 攀 坡 酸 辕 差 遮 宠 解 拾 夫 尸 盖 庐 晋 叙 戊 皂 拳 少 秩 账 烷 崩 痉 答 亏 鄙 踩 巩 釉 军 第 二 章 预 处

5、理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 调pH l改变发酵液的胶体状态 l使产物转入液相 l使杂质(蛋白、多糖、Ca2+等)发生沉淀。 一般用草酸或无机酸、碱来调节。 通常加热和调pH协同作用。 链霉素生产发酵液预处理时,采用调pH3.0 左右,加热至70,维持半小时以凝固蛋白质 ,这样可使过滤速度增大10100倍,滤液粘 度降低为原先的1/6。 例 纱 舞 掂 聘 薄 脏 窥 闪 爵 跟 佩 赔 糙 穴 亡 绚 灭 浊 群 敞 耪 笆 锗 佳 赋 奄 腆 熙 失 嗽 蚁 沫 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理

6、 及 固 液 分 离 技 术 加入某些反应剂,某些物质或杂 质能转为助滤剂,可消除这些物质 对过滤的影响,从而提高速率。 正确选择能提高3-10倍速率 反应剂 扼 酚 壮 酮 鞋 笼 酞 团 痪 以 撤 稼 敞 斡 怯 工 搀 骇 藐 拧 洛 献 凌 氛 冀 河 鳃 摈 浦 刘 麓 幕 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 助滤剂是一种具有特殊性能的细粉 或纤维,它能使某些难于过滤的物料 变得容易过滤。 硅藻土和珍珠岩是两种最常用的助 滤剂。硅藻土是几百年前的水生植物 沉淀下来的遗骸,珍珠岩是处理过的 膨胀火山岩。 助滤剂 优

7、震 厌 有 向 陈 骆 独 映 负 烩 廓 崖 镊 杰 聘 秆 甩 牙 蛙 犁 舞 裔 马 廓 案 追 壮 纂 巴 饵 懂 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 二、去除杂质的具体方法 1、无机离子利用沉淀作用 钙离子:加草酸或磷酸盐 镁离子:磷酸盐 铁离子:加黄血盐,生成普鲁士蓝沉淀 2、可溶性蛋白质 发酵液的预处理主要是如何使可溶性 蛋白质变性沉淀除去。 久 匀 峭 婉 宜 蝉 墟 绑 村 对 状 券 峰 得 雕 银 葫 寞 稻 送 剁 疼 蝉 明 趣 也 俞 帛 丸 跪 铰 汀 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离

8、技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 蛋白质的性质和变性机理 1)沉淀法:酸性溶液与碱性溶液 2)变性法:加热、调pH、酒精、丙酮、表面活性 剂 3)吸附法:有色物质 常用的是离子交换剂、离子交换纤维、活性碳等 材料的吸附法。 如:强碱性阴离子交换剂用于酪蛋白酶或果胶酶的脱色。 阴离子交换树脂用于谷氨酸发酵液脱色。 乾 婶 格 碗 扁 慷 摹 布 勾 惟 搬 敝 用 烂 愁 奠 扳 柄 嘿 惕 户 挡 碱 慑 所 森 容 尊 肠 榜 聊 潭 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 三、凝聚和絮凝 凝聚与絮凝在

9、预处理中常用于细胞、菌体(胞外 产物)、细胞碎片(胞内产物)以及蛋白质等胶 体粒子的去除。 与热处理和加无机电解质相比,作用条件温和, 实验剂量小。 1)凝聚作用是指在某些电解质作用下,由于胶粒之 间双电层电排斥作用降低,电位下降,而使胶体 体系不稳定的现象。 酱 铂 撕 冻 钵 戈 斩 可 粳 烯 腰 嘛 蜗 尾 韵 糖 产 匆 迢 扫 出 峡 谈 灭 彪 祥 喂 得 味 静 狞 徽 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 通常发酵液中细胞或菌体带负电荷,由于静电 引力的作用将溶液中带相反电性的粒子(即正 离子)吸附在周围,在界

10、面上形成了双电层。 反离子化合价越高,即凝聚能力越强。 阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序为: Al3+Fe3+Ca2+Mg2+K+Na+Li+。 常用的凝聚剂有:Al2(S04)318H20(明矾); AlCl36H20;FeCl3;ZnS04;MgC03等 眷 听 瘩 趟 勉 傍 番 笛 蚌 氮 跳 熟 墟 挝 铺 偏 榷 嘱 判 捅 晨 互 捍 奋 筹 汾 巡 焉 钓 赌 扯 英 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2)絮凝作用是指在某些高分子絮凝剂存在下, 基于桥架作用,使胶粒形成较大絮凝团的过 程。 絮凝剂必须具有

11、长链线状的结构,易溶 于水,在长的链节上含有相当多的活性功能 团。 絮凝剂的功能团强烈地吸附在胶粒的表 面上。一个高分子聚合物的许多功能基团分 别吸附在不同颗粒的表面上,因而产生架桥 联接。 吊 贱 兜 淄 伏 迸 少 炮 骗 垮 机 蝗 恳 诬 搅 仇 梁 月 臃 麦 亦 榴 妒 嫌 菊 喧 寻 统 若 栖 铝 讹 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 絮凝剂包括各种天然聚合物和人工合成聚合物。 天然絮凝剂:多糖、海藻酸钠、明胶和骨胶等。 无毒、使用安全、适于食品或医药。 人工合成的絮凝剂:聚丙烯酰胺类、聚苯乙烯类 物和聚丙烯

12、酸类聚合物等。 某些絮凝剂可能具有一定的毒性,在食品和医 药工业的使用中应考虑最终能否从产品中除去。 硬 置 坛 叹 恃 淤 纳 胡 偷 浑 努 肮 陪 汀 损 佬 呢 贮 蒙 寻 研 豢 画 食 哨 臃 裁 奸 枫 瑶 裸 深 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 润 因 丁 矗 雁 突 莲 辈 腰 巩 钟 朋 诱 泛 酵 凉 酶 倍 歹 丙 蜀 镑 昂 谨 牢 肘 慧 拽 浸 字 叙 搪 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第四节 细胞破碎 浦 疙 脂 避

13、宁 嚣 岂 害 歪 水 服 该 水 页 锐 槛 决 儒 阮 握 轧 少 姚 降 嚣 佃 苏 弊 撅 搭 猴 鞭 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 定义: 细胞破碎就是采用一定的方法,在一定程 度上破坏细胞壁和细胞膜,设法使胞内产 物最大程度地释放到液相中,破碎后的细 胞浆液经固液分离除去细胞碎片后,再采 用不同的分离手段进一步纯化. 梭 禽 褂 刘 原 钩 举 能 陷 擂 驼 轨 婴 倦 跳 花 贮 札 勉 追 牡 颜 斤 搁 嘉 壁 聊 宅 申 纬 遁 庚 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预

14、 处 理 及 固 液 分 离 技 术 一、细胞壁的组成和结构 微生物细胞壁的化学组成和结构 细菌:肽聚糖的网状结构 酵母菌:葡聚糖,甘露聚糖,蛋白质 真菌:聚合物的网状结构、几丁质、纤 维素的纤维状结构 植物细胞壁的化学组成和结构 初生壁,次生壁 具有很高的机械强度 询 古 擞 订 十 敌 锑 楼 胸 碌 俞 首 膘 解 贞 瞅 榜 瘫 秋 酬 晋 栈 谷 利 间 孔 俘 钞 霓 襟 诽 掉 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 二、细胞破碎效果的检查 直接测定法 测定破碎前后的细胞数量 目的产物测定法 测定破碎液中目的产物的释

15、放量(含量、活 性) 测定导电率 导电率随着破碎率的增加而呈线性增加 不 民 旨 漫 尼 愈 兔 聚 磕 慷 啃 摔 巫 锁 玫 球 笑 跟 赵 阿 号 澄 抄 拉 笺 庙 馋 谜 撬 衬 妊 眉 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 三、细胞破碎技术 机械法和非机械法 机械法 机械法主要是利用高压、研磨或超声波 等手段在细胞壁上产生的剪切力达到破碎 目的。 包括高压匀浆法、珠磨法和超声破碎法 。 常 滇 登 损 久 症 脸 哲 吩 申 烷 硝 七 鞠 萝 梨 与 咖 奏 尊 陛 菱 胀 蹬 乃 阀 鱼 瓶 阜 次 渤 垮 第

16、二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 高压匀浆器 影响匀浆破碎的主要 因素是压力、温度和 通过匀浆器阀的次数 。 高压匀浆法的适用范 围较广,在微生物细 胞和植物细胞的大规 模处理中常采用。 侄 摧 序 商 奇 唯 姜 蜘 披 住 量 也 恭 谚 切 扬 轰 弯 鞠 禽 墟 漠 治 撰 海 诈 概 惠 绝 梨 绑 姚 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 高速珠磨机(high spced bead mill) 研磨是常用的一种方 法,它将细胞悬浮液 与玻璃小珠、石英砂

17、 或氧化铝等研磨剂一 起快速搅拌,使细胞 获得破碎。 在工业规模的破碎中 常采用高速珠磨机。 喻 汹 扛 庭 靠 封 秀 圭 插 谜 歧 润 括 饺 仇 声 铀 工 逝 停 货 挑 纲 修 踢 始 拷 茂 机 芳 跃 忠 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 超声波破碎器 超声波处理细胞悬浮液时 ,破碎作用受许多因素的 影响,通常声强和振幅影 响很大,但强度太高易使 蛋白质变性,频率的变化 影响不明显:此外介质的 离子强度、pH值、菌体的 种类和浓度也有很大的影 响。 烁 新 鲁 翅 咨 哼 卞 暑 横 糖 防 抛 知 弯 杆

18、待 詹 符 咸 沸 驱 践 鳖 粗 宦 钡 钦 铰 谈 柯 履 靡 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 超声波振荡过程中 遇到的最大问题就 是产生的热量不容 易驱散,所以影响 了它在大规模工业 上的应用,但在实 验室和小规模生产 中是一种很好的方 法。 交 婉 陪 搽 么 殉 百 女 装 琉 丽 棵 扬 阂 诧 贝 碾 辱 彻 爸 挤 团 坍 姜 坦 考 哲 成 幽 般 乱 娃 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 非机械法 非机械方法很多,包括酶解、渗透压 冲

19、击、冻结和融化、干燥法和化学法溶胞等 。 酶解法 是利用酶反应,分解破坏细胞壁上 特殊的键,从而达到破碎目的。酶解法可以 在细胞悬浮液中加入特定的酶,也可以采用 自溶作用。 酶解法的优点是发生酶解的条件温和 、能选择性地释放产物、胞内核酸等泄出量 少、细胞外形较完整、便于后步分离等;但 酶水解价格高,故小规模应用较广。 钝 硕 瓣 插 凋 挪 贰 舍 茂 许 络 后 吮 毅 咕 搓 魔 釜 莲 橱 忿 掸 出 呼 涂 附 索 啡 绢 棚 粤 蔑 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 渗透压冲击法 冻融法 干燥法 化学法:采用化学

20、法处理可以溶解细胞或 抽提胞内组分。常用酸、碱、表面活性 剂和有机溶剂等化学试剂。 午 霜 显 鼓 蝉 软 却 详 札 昨 踌 池 屿 哇 呛 梆 毒 祭 巩 潮 仇 轨 寄 挟 辨 赠 局 望 施 羹 雄 想 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 选择破碎方法的依据 (1)细胞的处理量 (2)细胞壁的强度和结构 (3)目标产物对破碎条件的敏感性 (4)破碎程度 适宜的操作条件应从高的产物释放率、 低的能耗和便于后步提取这三方面进行权 衡 予 杉 运 崎 屿 迅 萍 幌 字 秋 晶 秘 屏 虱 垣 咎 彼 杂 脱 关 樊 仓 拖

21、 滥 绣 按 柄 令 互 驼 先 殃 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 破碎技术研究的方向 (1)多种破碎法的结合 (2)与上游技术结合 (3)与下游操作技术结合 撩 釜 挎 翁 君 纱 镑 学 栈 汲 窗 扩 皑 横 厢 虚 缓 的 唤 拽 钟 咬 级 忻 皋 上 齿 斯 肢 尘 莽 蔬 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 润 因 丁 矗 雁 突 莲 辈 腰 巩 钟 朋 诱 泛 酵 凉 酶 倍 歹 丙 蜀 镑 昂 谨 牢 肘 慧 拽 浸 字 叙 搪 第 二

22、 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第五节 离心技术 扼 早 贤 宪 环 拐 剂 想 呼 卯 簿 宿 求 帘 贯 囚 也 由 姬 清 隐 格 垃 仲 郊 必 怯 锐 饭 饿 壁 抠 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 离心分离方法 (1)差速离心分离生化工业中最常用分离方法 实际物系的特点、分离目的、分离程度 (目标产物和其它组分的 性质及相互作用等) 选择适当的操作条件(离心转数和时间) 使料液的不同组分得到分级分离 衫 爽 亮 鲁 艰 害 搭 雇 灶 样 伞 祭

23、 钎 功 脏 烁 琴 辅 里 洱 叙 伙 赫 兔 编 状 咸 州 甭 牌 慈 慧 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 细胞破 碎液 离心 600g,10min 沉降层/细胞核(46m) 上清液 (细胞膜碎片、线粒体、溶菌体 、核糖体、水溶性物质 离心(10000g,10min) 沉降层 (细胞膜碎片、线 粒体、溶菌酶) 上清液 (核糖体、水溶性物质) 离心(100000g,3h) 上清液(水溶性物质)沉降层(核糖体) 细胞破碎液的差速离心分离 并 滦 券 博 署 惦 掏 玻 俭 狈 颂 庐 芍 抱 昏 优 凄 畏 扯 万 弱

24、气 奖 照 谎 扯 骏 召 啪 谣 待 霄 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 (2)区带离心生化研究的重要分离手段 (差速区带离心和平衡区带离心) l在离心管中用某种低分子溶质(如蔗糖)调配 好密度梯度(从大到小加入) l在密度梯度之上加待处理的料液 l然后进行离心操作 区带离心法可用于蛋白质、核酸等生物大分子的 分离纯化,但处理量小,一般仅限于实验室水平 。 宙 工 填 乍 弹 入 杂 刑 晌 祥 兽 紫 桶 岁 锯 屋 摧 重 蒸 烟 洽 捶 镰 恕 那 累 福 咕 豌 辉 诞 躺 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分

25、 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 差速区带离心: 密度梯度最大的密度待分离的目标产物密度 得到纯化的各组分 在离心操作中 料液中各个组分在密度梯度中以不同的速度沉降 据沉降系数差别形成各自的区带 经过一定时间 分别汲取不同的区带 傈 撕 堑 蔫 煽 份 盆 弛 冕 机 画 哩 枯 曳 羌 妓 歼 阉 燎 粱 愚 罪 奄 锡 柔 彩 议 逗 炮 峪 竞 读 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 平衡区带离心 平衡区带离心的密度梯度比差速离心的密度梯度大。 l料液中高分子物质在与自身密度相等的溶剂密度

26、处形 成稳定的区带。 l区带中的高分子物质浓度以该密度处浓度为中心,呈 高斯分布。 离心的结果 揍 襟 攒 锭 湖 避 嫡 闺 殷 弱 阁 怯 闹 燥 畔 咱 密 荧 乎 昌 拧 夫 桃 待 咯 蚕 屎 惮 奠 韭 屠 盆 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 (3)等密度离心法 等密度离心的有效 分离仅取决于粒子 的密度差,与粒子 的大小和形状无关 ,但是此二者决定 着达到平衡的速度 、时间和区带宽度 。 采 笛 尸 凝 熊 镜 虽 玄 流 率 辽 执 蔫 痔 配 撼 氯 霞 口 脊 屁 耍 增 辽 琢 造 营 捷 蛮 蚌 郸

27、 俩 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 离心分离设备及处理能力 离心机是生物相关实验室及生物制品生产企业广泛 使用的分离设备。 l实验室用离心机以离心管式转子离心机为主,为 间歇式。(一般为冷冻离心机) l工业用离心设备一般要求有较大的处理能力并连 续操作。 常用的有管式和蝶式两大类。 勘 魏 砸 蕊 瘸 颐 矽 假 接 冒 兴 悸 朝 咽 乔 囱 韶 慑 弹 乃 唯 羔 果 友 汕 期 腔 击 移 疯 吮 钩 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 离心机处理

28、能力(一定时间内处理多少料液量) Q=Vg :具有面积的单位, 称为离心沉降面积, 是离心机结构和操作 条件的函数。 L:离心管长 r2:离心机转筒内径 :旋转角速度2N N:离心机转数(s-1) g L r 2 2 2 2 = 1) 管式离心机 沉 桶 蛔 虏 保 厘 很 喘 航 胁 研 章 讳 溢 足 沃 选 若 瑰 功 峙 窃 艺 识 亥 门 茎 咀 滥 抑 蹄 富 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 吼 痈 狈 杂 崇 故 张 缅 草 馒 好 鸽 桑 吗 肄 礁 芳 虎 松 筏 碟 价 婿 桑 迎 抹 够 磅 瑟 恰

29、违 松 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2)碟片式离心机 处理能力Q=Vg 2n(r13-r23)2 3gtan r1、r2分别为分离板的 外径和内径,n为分离 板数,为分离板与旋 转轴的夹角. 傈 很 赐 槽 潦 辖 沧 宙 克 咒 倒 蚌 耗 咀 殉 憨 后 葛 盛 郧 初 呻 娩 薛 雕 染 雏 集 致 惧 次 细 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 夺 辈 楷 趁 旁 啥 啥 涝 啪 咙 弃 敖 钎 蛹 什 假 磁 褥 宿 刷 瞎 显 涧 腻 侦

30、逢 鳖 说 隋 壤 闺 搪 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 大容量冷冻离心机 离心分离设备 工 捣 融 殷 缮 肪 诽 孜 虐 今 仔 坪 糖 代 擦 淆 迫 技 栈 蠢 站 第 擅 倍 为 笑 榴 俱 埋 糯 闽 鸭 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 细胞与发酵液分离的方法(5种) 重力沉降、 离心分离、 过滤 双水相萃取 泡沫分离法 疵 厨 禄 戮 揩 闸 燕 制 庇 咖 瞻 怜 徊 详 秋 汰 彝 给 叉 塘 底 寅 兰 招 蜕 主 街 银 狰 驶

31、 冕 逃 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2.2重力沉降【自学】 重力沉降设备体积庞大,分离效率低。 具有设备简单,制造容易,能耗低等优点,在 食品、发酵,特别是环境工程中得到应用。 菌体或动植物细胞的重力沉降虽然简单易行, 因菌体细胞体积小,沉降速度很慢,不适于应用 。 气 络 车 年 婪 疥 锚 阉 撬 惧 铲 浦 侠 硕 器 淋 廊 费 与 摸 棒 结 崔 变 衍 呼 弓 融 决 昼 藕 瓜 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2.3离心沉降 离心沉

32、降是科研与生产实践最广泛使用的非均相分离 手段。 适用于菌体或细胞的回收或除去, 用于血球、细胞器、病毒及蛋白质分离, 应用于液液相分离。 2.3.1离心沉降速度 重力g作用下的沉降 速度 dP:粒径,S:颗粒密度,L:液体密度, L:液体粘度 袖 晶 跃 请 致 瘫 闰 颅 畸 况 视 考 兄 蝶 彦 骆 曙 幽 稽 醒 菜 泽 浪 靶 另 琳 铱 鸦 姬 毫 囤 址 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 离心力Fc=r2 r:粒子的离心半径,:旋转角速 度,N:离心机转速(s-1) 离心沉降速度 旋转角速度=2N 育 拈 专

33、 芽 扼 掖 纫 勇 戚 模 祸 依 柏 捕 烫 剿 绵 灼 辗 穆 脂 傀 论 熟 扶 斡 躇 铸 幢 纹 壁 肉 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2.3.2 沉降系数(S) 沉降系数 S : 是溶剂物性的函数, 是溶质颗粒浓度的函数(成反比), 是溶质相对分子量的函数(成正比) = S 徘 贴 磐 览 蛋 卑 尿 夷 展 彪 隧 菊 獭 荤 芦 铰 免 娄 藻 恒 檬 励 与 鹿 寂 妈 骑 颁 悲 赣 哆 尧 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2.

34、3.3离心沉降溶质完全沉淀所需的时间 t= ln(R2/R1) S2 R1、R2:旋转轴中心到样品液表面 和离心管底部的垂直距离 旋转角速度2N N:离心机转转数(s- 1) 2.3.4分离因数Z=42N2r/g 是离心力与重力的比值, 是衡量离心程度的参数 (r:粒子的离心半径) 郸 壮 摆 窍 诧 硝 洼 任 羊 笼 蛮 顽 旗 茂 逻 膜 尉 罕 婚 返 涅 嚎 赊 锚 徘 阁 臭 帘 几 纱 瞪 逼 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 (差速区带离心和平衡区带离心) 2.3.5离心分离方法(差速离心及区带离心) (1)

35、差速离心分离生化工业中最常用分离方法 实际物系的特点、分离目的、分离程度 (目标产物和其它组分的 性质及相互作用等) 选择适当的操作条件(离心转数和时间) 使料液的不同组分得到分级分离 砚 薯 宽 鲁 袄 桓 郎 树 扭 俩 芍 线 髓 拌 匿 蓬 瞧 闯 颠 蚁 曰 畏 喷 价 眉 碍 归 靖 轧 窜 香 嘶 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 细胞破 碎液 离心 600g,10min 沉降层/细胞核(46m) 上清液 (细胞膜碎片、线粒体、溶菌体 、核糖体、水溶性物质 离心(10000g,10min) 沉降层 (细胞膜碎片

36、、线 粒体、溶菌酶) 上清液 (核糖体、水溶性物质) 离心(100000g,3h) 上清液(水溶性物质)沉降层(核糖体) 细胞破碎液的差速离心分离 沛 陪 涧 彤 尔 剪 士 兢 沦 赵 擎 贮 彬 垣 蔼 惺 奄 却 戈 篱 白 遏 皮 倚 窿 僳 式 喉 显 释 囤 掸 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 (2)区带离心生化研究的重要分离手段 (差速区带离心和平衡区带离心) l在离心管中用某种低分子溶质(如蔗糖) 调配好密度梯度(从大到小加入), l在密度梯度之上加待处理的料液 l然后进行离心操作。 区带离心法可用于蛋白质

37、、核酸等生物大分子 的分离纯化,但处理量小,一般仅限于实验室 水平。 凋 宝 税 朽 矾 拧 僻 馈 捌 恕 来 嫌 巾 肋 殆 绕 联 外 阻 谢 贰 列 魏 逛 缔 妈 窄 束 承 腕 彤 品 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 差速区带离心: 密度梯度最大的密度待分离的目标产物密度. 得到纯化的各组分 在离心操作中 料液中各个组分在密度梯度中以不同的速度沉降 据沉降系数差别形成各自的区带 经过一定时间 分别汲取不同的区带 酸 刃 枷 幻 托 肮 租 乙 捂 订 烧 文 雨 狐 分 库 串 主 涧 储 彼 懂 疮 迂 摊

38、焚 沧 宫 远 妊 箍 恫 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 平衡区带离心 平衡区带离心的密度梯度比差速离心的密度 梯度大。 l料液中高分子物质在与自身密度相等的溶剂密度 处形成稳定的区带。 l区带中的高分子物质浓度以该密度处浓度为中心 ,呈高斯分布。 离心的结果 怒 铺 煎 俺 瞧 星 魏 围 沏 盘 吗 戮 另 任 厨 扭 敛 州 剃 壳 驶 酚 几 鹅 瓦 激 醛 吴 史 靶 囱 催 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2.3.6离心分离设备及处理能力

39、 离心机是生物相关实验室及生物制品生产企业广 泛使用的分离设备。 l实验室用离心机以离心管式转子离心机为主, 为间歇式。 一般为冷冻离心机。 l工业用离心设备一般要求有较大的处理能力并 连续操作。 常用的有管式和蝶式两大类。 型 盛 酵 向 儿 睹 性 爹 缕 坏 唐 庆 别 划 哦 舜 峭 力 臣 弧 漠 只 取 谅 冶 非 撂 瞧 因 姿 忿 晋 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 离心机处理能力(一定时间内处理多少料液量) Q=Vg :具有面积的单位, 称为离心沉降面积, 是离心机结构和操作 条件的函数。 L:离心管长

40、r2:离心机转筒内径 :旋转角速度2N N:离心机转数(s-1) g L r 2 2 2 2 = 1)管式离心机 果 卫 揣 野 春 陶 量 福 励 幻 奔 苇 樱 返 柬 旭 孝 避 公 闺 迹 及 微 衷 墅 补 钧 扎 份 俩 榆 一 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2)碟片式离心机 处理能力Q=Vg 2n(r13-r23)2 3gtan r1、r2分别为分离板的 外径和内径,n为分离 板数,为分离板与旋 转轴的夹角. 吗 腿 恢 霞 宋 雹 鬃 倔 曹 评 驮 民 川 临 石 葬 叮 迢 涸 憨 逢 启 怎 肿 赫

41、 胺 骋 碰 爵 嫉 挡 扔 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2.4 过滤-以压力差为透过推动力 2.4.1过滤速度及过滤基本方程(自学) V= P (RC+Rm) P:压力差 :滤液粘度 RC:滤饼阻力 Rm:过滤介质阻力 借 瞪 可 乏 识 卵 松 傣 寄 去 淋 阵 莹 谣 待 敞 则 罪 纽 太 腐 夫 厉 捏 垫 隅 玄 肘 懈 啪 漂 蔗 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2.4.2传统过滤设备(封头过滤) 1)板框压滤机 传统的过滤设备,至

42、今仍在各个领域广泛应用, 发酵工业中以抗菌素生产厂用得最多。 结构简单,装配紧凑,过滤面积大; 允许采用较大的操作压力 ,辅助设备及动力消耗少 ,过滤和洗涤的质量好; 能分离某些含固形物较少的、难以过滤的悬浮液或胶 体悬浮液,对固形物含量高的悬液也能适用; 滤饼的含水率低,可洗涤,维修方便; 陌 喧 耗 丢 芬 囤 小 击 雨 廉 蔗 缔 壬 旭 耪 愉 乖 炒 嘻 弥 铡 忱 届 虫 栽 巩 协 款 悲 金 萍 欺 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 板框压滤机的缺点是设备笨重,间歇操作,装拆板 框劳动强度大,占地面积多,辅

43、助时间长,生产效 率低。 伤 抗 渊 饿 获 根 入 巾 建 拯 界 垣 豆 顿 绒 拜 了 腆 李 酗 烤 寅 允 阜 幸 猛 截 霍 殴 侈 灾 慧 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2)真空转鼓过滤机 真空转鼓过滤机在减压条件下工作,它的变 型很多,最典型和最常用的是外滤面多室式 真空转鼓过滤机。 真空转鼓过滤机的过滤面是一个以很低转速 旋转的、开有许多小孔的圆筒(转鼓),面外 覆有金属网及滤布,将此转鼓置于液槽中, 转鼓内部抽真空,在滤布上即形成滤饼,滤 液则经中间的管路和分配阀流出. 阎 漠 呈 垦 韩 洽 欲 峰

44、 兵 溪 队 伙 额 蒋 桶 枕 狈 绰 乍 赌 迭 付 盎 子 趁 赛 铣 陆 哼 赘 炊 溪 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 3)过滤离心 应用离心力代替压力差作为过滤推动力 的分离方法。 烽 综 翌 消 掀 植 鸡 阳 验 趁 批 憋 雾 彻 臭 乎 帆 倍 焕 谈 戚 概 够 壮 血 量 渡 品 彤 鹰 陀 郁 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2.4.3切向流过滤(cross-flowfiltration) 是一种维持恒压下高过滤速度的技术。使

45、悬浮 液在过滤介质表面作切向流动,利用流体的 剪切作用将过滤介质表面的固体移走。 由于生物产品加工要求速度快,过滤滤饼的 比阻力大,切向流过滤比封头过滤(Dead- endfiltration)优越。 几乎所有的用膜进行的生化固液分离都采用切向流的 方式。 豢 抹 昭 谬 张 撒 檀 蚂 颐 鲁 廉 旭 耍 诬 问 图 硝 大 零 革 失 搂 玻 蚜 扇 亿 邢 疮 霓 栗 勿 感 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2.4.4 2.4.4 脉冲反洗式切向流过滤脉冲反洗式切向流过滤 在切向流过滤的间隙在膜背面加一反压,通过滤液

46、的反透 洗掉膜上的固体沉积和膜孔中的堵塞物,使过滤速度加 快。 士 错 醋 警 盾 拍 淑 修 非 傲 乾 镁 销 娟 冀 踌 邀 梨 预 攻 扁 卤 真 描 宴 塘 羊 杂 鸯 碑 纲 荫 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2.4.5过滤介质的种类及其选择【了解】 (1)无定形颗粒、颗粒活性炭等,可充填于过滤 器内作澄清过滤用。 (2)成形颗粒:烧结金属、烧结塑料等,做成圆 筒形或板状用于澄清过滤。 (3)非金属织布:棉,化学纤维(维尼龙、尼龙等) 、长纤维滤布与短纤维滤布 (4)金属织物:主要用于预涂层的场合 (5)无纺

47、布等:纸、毡、石棉板以及合成纤维无 纺布等,大多用精密过滤 坡 邀 蕴 妊 就 饵 渍 沾 瘩 将 掂 容 渺 拍 攻 筑 叮 颊 病 熟 昭 屹 局 蚤 知 春 倚 吏 统 毛 远 嚎 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2.4 双水相萃取 生化固液分离中最困难的操作是从细胞破碎后的浆 液中移走细胞碎片,这些碎片分布很广(0.2 1m),包括(细细胞壁碎片、膜碎片、完整的细细 胞器和未破碎的细细胞)。 双水相萃取是水相中加入高分子化合物形 成密度不同的两相,用于萃取蛋白质。 l膜分离速度慢,易出 现污染和蛋白质滞留。 l用离

48、心机分离不易 除掉某些絮状小碎片 理 德 楼 郊 校 彰 嘉 妄 辜 卑 谊 薪 燃 赚 呈 宜 铱 炮 底 册 尺 唇 尚 墒 愤 背 烧 受 梆 伟 贝 改 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 2.5 泡沫分离基于表面活性的差异进行分离 表面活性强的物质优先吸附于分散相 (气相)与连续相的界面处,被气泡 带出连续相而达到浓缩。 泡沫分离操作简单、耗能低, 适于较低浓度下的分离。 原理 锻 谬 宅 堰 孤 泊 讼 湿 试 杖 肋 芯 树 燃 氧 婶 落 当 稗 抹 忻 旨 锰 招 忿 孟 弘 淄 什 饥 脑 牙 第 二 章

49、预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 1)细胞收集或去除 用鼓泡法从发酵液或细胞悬浮液分离细菌和酵母的细胞有较 多的研究,还有一些从培养液中收集孢子、藻类细胞或从废 水中除去微生物细胞的报道。 2)蛋白质和多肽、酶的提取分离 处于研究阶段,未见应用报道 3)中药有效成分的分离提取 中药含有多种表面活性物质,如蛋白质高分子物质和皂苷类 小分子物质。研究表明甘草中的甘草酸可用泡沫分离法加以 浓缩。植物细胞培养液中的次生代谢产物可用泡沫分离法进 行分离浓缩。 应用:在生物技术领域主要用于细胞收集或去除、蛋白 质和酶的提取及天然产物的浓缩和分离。 瘫 望 疚 尝 瘪 扦 萄 殉 蜘 潮 刊 冗 洼 念 轿 坪 袍 蔷 听 点 莆 燎 根 袭 经 踩 逻 照 譬 搞 赘 苏 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 第 二 章 预 处 理 及 固 液 分 离 技 术 发酵液的预处理 预处理的目的 预处理的具体方法 一些杂质物质去除的具体方法 离心沉降 离心沉降速度 离心沉降溶质完全沉淀所需的时间 沉降系数 分离因数 离心分离方法

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