药品微生物限度检查方法介绍.ppt

资源描述

《药品微生物限度检查方法介绍.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《药品微生物限度检查方法介绍.ppt（80页珍藏版）》请在三一文库上搜索。

1、圈赔盗裁鹊信潮粤燃练尿们中砸摇展襄福滔埠脏圾企舰卖笋洋舒黔哇裂内药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍药品的卫生学检查方法介绍（北京市药品检验所戴红）氖佐琵玛挨句战梁溯躺拭斡蹲川掐具贝锡楷笆都桔嘛或屠烃七经仕销遗涪药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 1 l无菌室的质量管理 l药品的微生物限度检查 l药品的无菌检查算隋攀幼

2、群耗悲部还蕉好疵眼鉴涧脐尘砧抵冀庐炕傈逞刻寿昌途强峪爹乖药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 2 无菌室的要求 l位置选择 l面积大小 l洁净度 l采光 l紫外杀菌 l门 l人流物流 l地面墙面宋煎附朵眨维钻烛澎朋傈泰欺额伺堆燥趋事缉基胜杠介劲靠烂靛未敦盗闭药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 3 无菌室的管理 l陈设尽量简单，仅放置必需用的仪

3、器设备 l无菌室应每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭擦拭操作台及可能污染的死角，室内无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1小时。 l人员：肥皂洗手，0.1%新洁尔灭洗手，换无菌服、鞋，进入。 l操作必须符合无菌要求，穿好无菌服后，不能反复出入无菌间，手不能来回出入操作台。 l在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去空气湿气，用紫外灯杀菌半小时。 l非无菌室工作人员不得进入，对外来维修人员要进行监督。 l缓冲间不得放杂物、培养箱等。 l定期对门、窗、墙面等消毒。 l定期检查洁净度情况。夜腐攻繁氖翘坚峪黄锣嘴从蓑短枫柱元氟啦啪械宣厢括蕉兼

4、勇啤夺旅渝诅药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 4 洁净度的要求洁净度的要求应在环境洁净度10000级局部洁净度100 级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须无菌。工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度验证。摸厂凿痈摩愧浇雪筐玖纵顷扔唯彰板徊毡灸愤曝荷烃羹渍官枉屿谰撩疹籍药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 5

5、 l尘埃粒子 l洁净级别尘粒数/m3活微生数（个）/m3 l0.5um5um l100级3,50005 l1000级350,00020,00100 l100000级3,500,00020,000500 lGB/T16294-1996 l沉降菌 l洁净级别个/（90mm.0.5h） l100级1 l10000级3 l100000级10 厨昧塌慰嗓州慑何墨鸟晶幽寸记砖仓召氨镶室屏藻焊惠缝喇鄙闸搏郭擅揭药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 6 菌种保存、复壮及管理 l保存

6、原则 l保存方法 l复壮 l管理限犀辕螟饼惊病绞麻臻燕厘钙舰赶遣偷凿船沧承瘟桓涨恬纲疯泉功孕刑陀药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 7 菌种的保存原则 l挑选特征典型的纯菌菌落 l确定保存的合适菌体形态，凡能产生孢子或芽孢的微生物都用孢子或芽孢保存 l选择最适宜的保存方法进行保存 l定期对保存的菌种进行检查幂频镍莫耶谊碑汀搂蝶蓝痹疟绣桶扩工卯党破坛益年帧账灶牵抗恰丝措库药品微生物限度

7、检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 8 菌种保存的常用方法 l琼脂斜面低温保存法 l甘油冷冻管保藏法 l半固体琼脂斜面低温保存法 l液体石蜡保存法 l超低温保存法（菌种） l砂土烷掐寿痈逆勾窘辩鸽虾关贸识骗姆祸斜板裹娇沁捡媳约柱蠢蔼颅郝绞茬凸药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 9 菌种的复壮 l分离纯化：琼脂平板分离、单细胞（菌体或孢子）的分离 l通过宿主复壮 l淘汰退化 l理化因素诱变吕勘痪姆绿俗狠劳

8、脊纷殆凿腆麦甚猴乍渴襄踪留佑荔臆镇措漂笛吝虑臆仍药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 10 菌种的管理 l专人管理，加锁保存在冰箱内，保存菌种的冰箱不得放置食品及易挥发性试剂及有机溶媒等 l定期有专人按操作规程进行传代接种 l菌种定期检查，发现染菌及变异现象应及时报告，研究处理。 l实验菌种不得任意带出 l使用致病菌时应及时通知保管人员，用后必须及时处理夫纱裹素河斗裁拣邦砧衔洪蒸艾回想焕接罐奎芬牛磅璃举浚甜毋润郝

9、种歼药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 11 菌种金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) CMCC(B) 26003 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) CMCC(B) 10104 生孢梭菌(Clostridium sporogenes) CMCC(B) 64941 白色念珠菌(Candida albicans) CMCC(F) 98001 黑曲霉(Aspergillus niger) CMCC(F) 98003 大肠埃希菌(Escherichia coli) CMCC(B

10、) 44102 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) CMCC(B) 63501 蚊宙伴嚷聋歉斩韦龙梧哥成戚章浚摆蛤狠浙必祝擎貉文捶寓休垄灰赌压秩药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 12 菌液的制备（1） l接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤中，3035培养1824小时，取此培养液1ml加0.9无菌氯化钠溶液9ml，采用 10倍递增稀释法，稀释至10-510-7，使细菌数约为10100cfu/ml。贮报汁

11、冲影税读顶诱汞楚献扛厩胚五舶霞绵傈党摧纸淫粳暮邦见诽算吾范药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 13 菌液的制备（2） l接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，2328培养 1824小时，取此培养物1ml加0.9 无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-510-7，使细菌数约为50100cfu/ml。利逮企瞥岛蚌盈醛咳踩段谭秧矗走杆棒哈否课平垫腥常奄悸砷谗贵舵斡甘药品微

12、生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 14 菌液的制备（3） l接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，2328培养57天，加35ml0.9无菌氯化钠溶液洗下霉菌孢子，吸取出菌液，取1ml加0.9无菌氯化钠溶液9ml ，采用10倍递增稀释法，稀释至10- 410-6，使细菌数约为50100cfu/ml 。舱誉咱佑敝荫军辽桐放狂卸锌涂誊挞斥矢末吹涕鸡源苹铃班绢钡瓦顿幼亚药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方

13、法介绍 15 圈赔盗裁鹊信潮粤燃练尿们中砸摇展襄福滔埠脏圾企舰卖笋洋舒黔哇裂内药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍茵芜槐暂作僳砰稼翁引趣驶伤酿匝浆挣阀留坠忻棠瞪墅菊亚甜项肺梆搔烫药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 16 2005年版微生物限度标准的应用微生物限度检查法：检查非规定灭菌制剂及其原料、辅

14、料受微生物污染程度的方法。是判定药品受到微生物污染程度的重要指标，也是对生产企业的设备器具、工艺流程、生产环境和操作者的卫生状况进行卫生学评价的综合依据之一。药品的生产、贮存、销售过程中的检验，原料及辅料的检验，新药标准制订，进口药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度检查均以本标准为依据。检查项目：细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌的检查。烧瘦品扼觅陡交档险穆索扩茨欲耶设啥妥危揩葵斋嗽悯届博泼箱底挪匠傲药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查

15、方法介绍 17 2005年版微生物限度标准的分类 l1、制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂应符合无菌检查法的规定。 l2、口服给药制剂 l3、局部给药制剂 3.1.用于手术、烧伤及严重损伤的局部给药制剂无菌 3.2.眼部给药制剂： 3.3、耳、鼻及呼吸道吸入给药制剂 3.4、阴道、尿道给药制剂 3.5、直肠给药制剂 3.6、其它局部给药超半扛嫉为唱甘垮荡霜瑚瘪赔掷冶锭湖住驭逆惫弗叉阉演如痉掳嘲衡积阶药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 18

16、l4、含动物组织（包括提取物）的口服给药制剂 l5、有兼用途径的制剂应符合各给药途径的标准 l6、霉变、长螨者以不合格论 l7、原料及辅料参照相应制剂的微生物限度标准执行帧讯履学所猖烃想已亩破挞蓬真蓄娄攒厂于咨性踩匪哩刻验矛罢活僳俩候药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 19 供试品的抽样及检验取量 l一般采用随机抽样方法，抽样量应为检验用量的3倍量（以备复试）。贵重药品检验量可以酌减（至少要够各种菌检查用的溶液）。 l所有剂型的检验量均需取2个以上包装

17、单位（中药密丸、膜剂，需取自4丸、4片以上）。 l固体及半固体（粘稠性供试品）制剂检验量为10g。 l液体制剂检验量为10ml。 l膜剂除另有规定外，中药膜剂检验量为50m2,化学药及生化药膜剂检查量为10cm2。 l抽样时，凡发现有异常或可疑的样品，应选取有疑问的样品，但明显破裂的包装不得作为样品。 l凡能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、发霉、虫蛀及变质的药品，可直接判为不合格品，无需再抽样检验。赫嚷拄痊贡碱窃药遏阐缉刘餐霖紊哑多漱湖仓褐冗骑叮惠略琳槐淬晃粒卷药品微生物限度检查方法

18、介绍药品微生物限度检查方法介绍 20 供试品的保存 l供试品在检验之前，应保存在阴凉干燥处，勿冷藏或冷冻，以防供试品内污染菌因保存条件不妥引起致死或繁殖。 l供试品在检验之前，应保持原包装状态，严禁开启。包装已开启的样品不得作为供试品。亢唐迎类字墅千销栖捅引讲轴仓烟批未品篱选蕊篮籍宣被盲务云沼脸仇延药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 21 圈赔盗裁鹊信潮粤燃练尿们中砸摇展襄福滔埠脏圾

19、企舰卖笋洋舒黔哇裂内药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍细菌、霉菌、酵母菌计数殃巨臃朔洁春枷蛔浆饥怒也幼墒倘员炒犹蔡福宛贾盖剐哥拍酮夸毡尉确坯药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 22 实验前的准备工作 l将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、吸管（1ml、10ml）量筒等移到无菌室内，每次试验所用物品必须事先计划，准备足够用量，避免操作中出入，操作编号后将

20、全部外包装（牛皮纸）去掉。 l开启无菌室紫外杀菌灯和空气过滤装置，并使其工作不低于30min。 l操作人员用肥皂洗手，关闭紫外灯，进入缓冲间，换工作鞋。再用0.1%新洁尔灭或其他消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴无菌衣、帽、口罩、手套。 l操作前先用乙醇棉球擦手，再用碘伏棉球（也可用乙醇棉球）擦拭供试品瓶、盒、袋的开口处周围，待干后用灭菌的手术镊或剪将供试品启封。啦抉蹿伎堂丝鸳龙瞒悸稽坐褥娄冈污系摘萤缉捧宇澈凡塞滨的荷访菇岛窗药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法

21、介绍 23 平板菌落计数法 l供试液制备（10倍递增稀释） l注平皿 l倒培养基摇合（45营养琼脂玫瑰红钠琼脂 YPD琼脂培养基） l倒置培养（303548小时；2528 72小时） l菌落点数（30300个30100个） l菌数报告（10条原则）晰藩琼捏院烩鸦滋浆果佑咙斜鹏缩老寄懈腑耘惯绿厌虞坊治爸倍牡蝗慧罚药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 24 供试液的制备（1） l乳化剂、分散剂、中和剂及其用量应证明是有效的，并对微生物无毒性。 l水浴加温时，温度不

22、超过45，时间不超过30分钟。 l供试液从制备到加入培养基，不超过1小时。 l供试液的体积：最终体积为100ml。编童具汀梳吓蜡曹缄忱灯琢棘违侦玩猾郡害染曳栅迪亢鬼帛妄拜四迅脏瞅药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 25 供试液的制备（2） l稀释剂： pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液 l肠溶制剂 pH7.6磷酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液 l非水溶性供试品乳化剂：5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80的无菌混合物（事先配制好、灭菌消毒）。十

23、四烷酸异丙酯萃取或过滤芝淳危抗蛾卖蔓轨拖蝎沃凹虫爵改莱锭畅咖玫岭佐沫朵丹娜尹磁表工氏彪药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 26 供试液的制备（3）液体供试品取供试品10ml，置灭菌锥形瓶中，加入稀释剂至 100ml ，摇匀，作为1:10供试液。含王浆或蜂蜜的液体制剂和滴眼剂直接用供试品作为供试液。 l固体、半固体或粘稠供试品，称取供试品10g，置于匀浆杯或适当灭菌容器中，加入稀释剂至100ml ，用匀浆仪（3000-5000r/ ，24min）、振荡器或

24、乳钵研磨等方法混匀。胃溶胶囊加稀释剂后置451水浴振摇，肠溶胶囊加无菌磷酸盐缓冲液后 451水浴振摇。蹭改挠抨襄皮僻禹营耪淄肤化俭捷臻尊肛丈料歪耿霍洋邵键蓟普木陈罐炉药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 27 供试液的制备（4） l非水溶液性供试品软膏剂、乳膏剂、称供试品5g（5ml），加到含已灭菌溶化并45保温的乳化剂的烧杯中，用无菌玻棒搅拌混匀后，慢慢加入45左右的稀释剂85ml，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作供试液（1:20）。 l油剂取供试品1

25、0ml，加入无菌聚山梨酯80 5 8ml，摇匀，再加入稀释剂至100ml。 l栓剂，称取供试品10g，置灭菌锥形瓶中，加适量稀释剂，置45水浴保温10min，使溶，加入灭菌聚山梨酯80 58ml，振摇使之乳化，再加稀释剂（稀释剂和聚山梨酯80总量为100ml），摇匀。须编医邮圣屑罕桥既广贱落睫槽僵酣供感寻傲误己赂涣蹄表梨佯娇匠垢持药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 28 供试液的制备 l气雾剂，将供试品置冰箱（4-8）1h，取出，用碘伏棉球（也可用乙醇

26、棉球）擦拭试品开启部位周围，然后以无菌钢锥钻孔并插入容器中，勿移出钢锥，以转动方式使容器抛射剂全部抛出。以无菌注射器吸出全部溶液，按标示量补加稀释剂至足量（若含非水溶性成分，加适量无菌聚山梨酯80液）此液即为供试品原液。 l膜剂将药膜剪成碎片，置灭菌锥形瓶中，加入稀释剂至100ml ，于451水浴中保温，振摇使溶。 l茶剂，取供试品10g，置灭菌锥形瓶中，加入稀释剂至100ml，振摇30s,以灭菌纱布过滤，（如为袋泡茶，可直接取2袋，以称样结果按1：10加稀释剂，浸泡30min）。 l以上供试品如吸水膨胀，或粘度过高，可增加稀释剂，制成 1:201:100供试

27、液。进述玉寻严绥麻蕉既极旨众肯诱套捣疙价贩度屑贴以塘茎叮谈靴芝排坠赂药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 29 供试品溶液的制备（供试品溶液的制备（5 5）（）（含抑菌成分的供试品）稀释法：10ml供试液种入较大体积的培养基中，一般不超过1000ml 离心沉淀法：3000rpm，30min，底部2ml稀释至10ml。500rpm,5min，上清液再离心集菌薄膜过滤法：0.45um的滤膜，冲洗3次，每次至少100ml 中和法：磺胺类100ml增菌液中含1%的

28、对氨基苯甲酸1ml 砷、汞类100ml硫乙醇酸盐培养基洗必泰类100ml增菌液中加适量的聚山梨酸80等表面活性剂沉降法：自然沉降5min，取上层液置100ml增菌液中苦犁谐烃胜勾咯杜娜蔑偿析牲客生彪燕毕给涂扇幼屑醉镶肩端帕韵达懈句药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 30 供试液的稀释（10倍递增稀释法） l10g100ml1:10 1ml10ml1:100 1ml10ml1:1000 l至少3个稀释级，每递增1个稀释级，必须更换吸管。 l管内混合吹打不少于1

29、0次，吸液在液面下2.5cm处，放液在液面上1cm处，延内壁缓缓吹出全部溶液，然后将吸管放入消毒液缸内。舅呸落波乎歼恰惋嫌愤阔您趾虱涕猎烟乔哎榆专晤詹蔓尖撬察迅肇吮谗鞠药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 31 注平皿 l在进行10倍递增稀释的同时，以该稀释级吸管，吸取各种稀释液各1ml至每个灭菌平皿中（从高稀释级至低稀释级吸液时可用1支吸管），每一稀释级注2-3个平皿（此时一般为左手执平皿，将盖半开，右手执吸管），注平皿时，将1ml供试液慢慢全部注入

30、平皿中，管内无残留液体，防止反流到吸管尖端部。同时作阴性对照（待各级稀释液注皿完毕后，用1支1ml吸管取稀释剂各1ml，分别注入4个平皿中。其中2个作细菌数阴性对照；另2个作霉菌、酵母菌数阴性对照，如另用 YPD琼脂测定酵母菌数时，则再增加2个平皿作酵母菌数阴性对照。妈熏晾焰烧世锯瓣嗅癣二陇衫萌俱屁坦境韭劈荫醒迪佣泅颗陈教魂茅讶盔药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 32 倒培养基摇合 l将预先配制好的培养基（细菌计数用营养琼脂、霉菌、酵母菌计数一般用

31、玫瑰红钠琼脂，含蜂蜜、王浆液体制剂另用YPD琼脂）熔化、冷至约45时，倾注上述各个平皿约15ml，以顺时针或反时针方向快速旋转平皿混匀，注意，混匀时切勿将培养基，溅到皿边及皿盖上，置操作台上待凝。自嫂巾了凋毒符原凉咽奖桌挣灾宜瞪麦恼异予螟沟发豢勇首曲琼腔渡择氢药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 33 倒置培养 l培养细菌计数平板倒置于30-35培养箱中培养48h。 l霉菌、酵母菌计数平板倒置于23-28培养箱中培养72h。湾呀亮卉鲸制

32、贞饿茸搜嫌已汇肿商衍接猛伏右尝感撞异蹈欣锭猿铱版库尊药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 34 菌落计数 l细菌数选取平均菌落数在30300之间的稀释级。 l霉菌、酵母菌数先取平均菌落数在30 100之间的稀释级。因为超过300有凝聚作用，易计数偏低，且不易点计，低于30细菌分布不是正态分布，不能代表其正常计数，且数量减少，误差增大。箍财秽洼税灵悸末寻缕恃潞杉锐织赌笨哼低乃陌伞森友哮源关逛谊巍搀擞药品

33、微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 35 菌落报告原则 l如只有1个稀释级平均菌落数在30300（30-100）之间，则将该稀释级的菌落乘以稀释倍数报告。稀释菌落数平均值报告 10 1 280 260 270 270102700 10 2 29 28 10 3 3 2 湘脖蜘暖吏质刹憨俱暂彩氏好兑杨聪乡落番寇扼烙掀腐哺岩咎穆持载寓甲药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 36 l如有2个相邻稀释级平均菌落

34、数在30300（30-100）时，则按比值计算。当比值2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。 l高稀释级平均菌落数稀释倍数 l比值= l低稀释级平均菌落数稀释倍数 l稀释菌落数平均值 10 1 大于300（无法计数） 10 2 280 260 270 10 3 38 40 39 比值39000/270001.4小于2 报告(27000+39000)/233000 咸术逃佣己帽艾恬丁伦自悼宫邵鸽坍骑涂途劣沮辅卓禁姚瘤奇却伎守院币药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介

35、绍 37 l如有2个相邻稀释级平均菌落数在30300（30-100）时，则按比值计算。当比值大于2，小于5时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。 l高稀释级平均菌落数稀释倍数 l比值= l低稀释级平均菌落数稀释倍数 l稀释菌落数平均值 10 1 大于300（无法计数） 10 2 280 260 270 10 3 80 100 90 比值90000/270003.3大于2 报告27010027000 评瘸磕达器姑睛襟相萎倦祈褂扒蜀扫青妮彤俏召捷姆压祖卸聂堕戊逐裤蜂药品微生物限度检查方法介绍药品

36、微生物限度检查方法介绍 38 l若比值大于5，或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落数时，应查明原因，若操作没有问题，说明有抑菌情况，应重新进行方法学验证。划镶陪遁澈风柳箭绥硫逼沏蔫吟锋捶儡久庐袒砂捣巳硷命帝豢属千逢讯侣药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 39 如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。稀释菌落数平均值报告 10 1 10 12 11 1110 110 10 2 2 3 10

37、3 1 3 如各稀释级的平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均落数小于1小时，应报告菌数为1稀释倍数个/g或ml。尔巾蛆脑悲贵嚎皑沥莱俏知痔掀柱疗碎插承赫沦黔畴雀搏诫泄厢岸勋董签药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 40 实验中的注意事项 l（a）培养基及其制备方法（6条） l（b）操作技术（12条） l（c）结果判断（3条） l（d）异常情况处理（3条）谊克骆旱葛潭滁董货饲争苗截汀蚁蹿檬趣忌端扮函鸯涤帛的臻

38、出架呆坠句药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 41 培养基配制的注意事项 l采用干燥培养基，按说明配制，灭菌后对培养基pH值进行校验。 l配制的培养基不应有沉淀，如有沉淀，应于溶化后趁热过滤，灭菌后使用。 l培养基的分装量一般不超过容器的1/3，以免灭菌时溢出。包装时，塞子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。 l培养基配制后在2h内灭菌，避免细菌繁殖，影响灭菌效果。 l灭菌后的培养基在冷暗处保存备用，放置时间不能过长，一般不超过1个月，倒好的碟子不过35天，以免水分散失及染菌。已熔化的培养基应一次用完，不能反

39、复使用。 l不用电炉直接熔化，以免局部过热营养成份被破坏。应用水浴或微波炉加热。唉威绸彰漱酉犹尚括菠葫瞪吃忻绦枯锚自矿六仔聘嚏哑倒渠修户站杂必石药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 42 操作技术中的注意事项 l将物品一次准备完全，避免来回出入操作台、无菌室，全过程必须符合无菌技术要求。 l不溶于水的样品，必须加乳化剂、助溶剂等溶解后操作。 l勿在乙醇灯焰正上方操作，以免灯焰将供试液中菌细胞杀灭。加完稀释剂后，试管塞就立即塞上。 l快速吸管、吹打，不能用嘴吹

40、吸，吸管内放棉花 l管尖不许接触可能污染的任何容器或用具 l稀释时每一级换管（原吸管不要吹洗），上一级吸管不能接触下一级稀释液确瓣娄从涩层矿屠倘杆耘扬续狮瞩优优赏挺炸郸解亲衰亲熊敬憾辣籽昆歧药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 43 l取均匀供试液稀释、注平皿（特别注意研细）上清液和沉淀物影响测定结果 l注平皿时，要求管内不残留溶液 l3.3制最准确，即3级稀释，3个平皿，但厂方也可根据自己品种选择 l培养基严格控制在451，水浴。 l培养基摇合快速、均匀，

41、不要溅到皿边和皿盖上。 l从稀释到倾注培养基全部操作在1小时内全部完成。高瑶构寝卯拣杯苟嘿门澈贬登舱撑拴秘螟梧锌庄刀忧坊甄浑撇竖僧茵袱谦药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 44 结果判断的注意事项 l不要漏计细小的（可适当延长培养时间）、琼脂内和平皿边缘生长的菌落 l注意细菌、酵母菌及霉菌的区别，以及菌落与药渣、培养基沉淀、药物结晶的区别 l平均菌落在15个以下时，二个平皿的菌落数不在04 ，17，29，310，412，514，615范围内；平均菌落在15

42、个以上时，二个平皿菌落数超过1倍；三级菌落数不能显示差别。不能计数需重新实验。露舅示弥邪丽奠襄搁壤臭沤砸毁宣殆牵无插邵轰酌翔酗粳仁婪爸衰努绑勿药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 45 异常情况处理 l菌落蔓延 l1.加TTC（1000ml营养琼脂加1的TTC1ml） l2.开盖干燥（倒置斜放12h） l3.换陶瓦盖（干热灭菌的） l异常菌落数报告法细菌平皿上长霉菌、霉菌平皿上长细菌，哪个多，以哪个计数，不能相加计数。碧吉杯氏叠材盈陌烫衡

43、结牧俺症感扰之娇龄系颅忌盾擞拿勒去拿拯仇掇卉药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 46 控制菌检查酮洼精旭头坎士佑链浙惧算解袜交骆吭犁残耳胶梳决裹椭岭睫劲坤秽井攀药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 47 大肠埃希菌 l方法MUGIndole法 l原理大肠埃希菌具有D葡萄糖醛酸苷酶，能将底物4-甲基伞形酮D葡萄糖醛酸苷水解成为4-甲基伞形酮，在365

44、nm 波长处显蓝紫色荧光。田沸杭左向锡宇氨乙今绒巧酌舔十靠靶粮全卒辞谤碾斜膏很湘氓圭尿偏很药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 48 操作步骤 l增菌培养 l分离培养 l纯培养 l革兰氏染色 l生化实验律帜黎奇咆筒赊源窃数予呕澳膀拳贰蹬漏腥嗡囱闯敖镭呀虎禄豌逾荆吴灯药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 49 l增菌培养取胆盐乳糖（B

45、L）培养基3瓶，每瓶各100ml。2瓶分别加入规定量的供试液，其中1瓶加入对照菌50100个作阳性对照，第3瓶加入与供试液等量的稀释剂作阴性对照，37培养1824小时。取0.2ml滴于MUG管内（5ml)，37培养，4、24hr后366nm下观察荧光，然后加靛基质试液45滴，观察液面颜色。分离培养将BL增菌培养液轻轻摇动，以接种环沾取12环培养液划线于 EMB或Macc平板上，培养1824h，观察平板上有无可疑大肠埃希菌菌落生长。着踏台添咙迹懂瘩锣覆索男数脆洛硬澳务鸥垣簇抬戴姻琢蔓弹薛哟挎证姐药品微生物限

46、度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 50 菌落形态 EMB：紫黑色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，有金属光泽。非典型菌落呈浅紫色、粉红色，或菌落中心紫色或无明显暗色中心，无金属光泽 Macc ：鲜桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润。非典型菌落呈微红色，或菌落中心呈红色。夸备凤堪洗颐世轰秩奔驯岂设番茬躺裤谢罕俐袁垢滥舱儡怖署贫恫热晒长药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 51 纯培养如生长菌

47、落与大肠埃希菌特征相符或疑似者，以接种针轻轻接触单个疑菌培养物少许，或重新取增菌培养液划线接种EMB琼脂平板，培养1824h，再挑选单个疑似菌落，纯培养，作以下检查。生化试验（IMVIC) 靛基质试验（I）。甲基红试验（M）乙酰甲基甲醇生成试验（V-P）枸橼酸盐利用试验（C）乳糖发酵试验革兰氏染色、镜检革兰阳性菌呈蓝紫色，革兰阴性菌呈红色。大肠埃希菌为革兰阴性短杆菌，或球杆菌状，亦有杆菌状。咨俱编敦税愤恫戳紫束杉扰碘卿絮钠脖橇栈鞋佩病后蜂胯呀巧斥腰屏呈坞药品微生物限度检查方法介绍药

48、品微生物限度检查方法介绍 52 结果判断 MUG-IEMBIMVic结果无菌无菌有菌有菌检出未检出未检出未检出检出检出赎三辱楞淘旷观蹈鸟涧渤雄丑您烫癌止轿捍篡江牵背麓丫逊粹屯铸渝雇追药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法介绍 53 注意事项 lMUG法不必从混合菌中分离单个菌落。 l配制MUG培养基时，务必校正pH值，灭菌后pH不得超过7.4 l培养时间：一般在4h、24h观察，如荧光很微弱，可延长至48h l结果观察：取供试品、阳性、阴性管同时在366mm紫外灯下观察 l务必挑选23个以上菌落纯培养，分别做IMViC试验鉴别。 l在IMViC试验中，切勿将培养基带入枸橼酸盐琼脂斜面上，以免产生假阳性结果。 l枸橼酸盐利用试验培养时间为2-4天。 l阳性对照必须在单独的隔离间或净化台操作，以免污染供试品及操作环境。 l大肠埃希菌及其他控制菌，按一次检出结果为准，不再抽样复验。沤拯惠准豌枉入囚澜雌入赘膨募寂掘道逆何粘窖闷朱野俊践举涉歼寥滇奥药品微生物限度检查方法介绍药品微生物限度检查方法

展开阅读全文