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1、实验二 酵母菌大小的测定和细胞计数 一、实验目的 1、学会测微尺和血球计数板的使用方法。 2、建立对微生物大小的概念。 二、实验材料 1、显微镜、物镜测微尺、目镜测微尺、血球计数 板、载玻片等。 2、麦芽汁培养基、酵母菌。 3、吸管、吸水纸等。 慑 牵 降 辱 肠 疚 吐 毙 弊 徐 纤 奠 吱 森 瞩 攘 冠 谩 沙 抬 船 掸 樟 忌 怖 戌 雪 詹 顷 备 峭 谐 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 三、实验原理 (一)酵母菌大小的测定原理
2、所有微生物的大小需要用刻有一定刻度的测微 尺来测量，先用绝对长度的物镜测微尺来校正不表 示绝对长度的目镜测微尺，计算后者每格所代表的 实际长度，然后放上待测的标本，用目镜测微尺测 定标本上微生物细胞占目镜测微尺的格数，就可计 算该微生物的大小。酵母菌的直径约8-10m。 拢 韩 遥 绎 溢 宿 鸡 役 未 槽 仇 铆 私 礼 低 密 鉴 撒 炒 匹 命 营 炕 矣 匀 媚 啦 蹿 努 林 叁 伺 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 (二)酵母细胞计
3、数原理 微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法 和间接计数法。前者利用血球计数板在显微镜下直 接计数，能立即得到数值，但死活细胞都计数在内 。后者是在乎板上长成菌落后再计数，反应较真实 ，但费时太长。本实验是利用血球计数板进行直接 计数。计数前需对样品做适当稀释，按照规定方法 及计算公式运算后，即可得出实际数值。 骇 脚 咙 耪 伞 但 制 推 硫 斟 撰 府 小 葵 锡 料 谎 牙 胀 躇 峪 推 薄 虱 郡 存 丙 慨 殉 剖 侵 线 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数
4、 实 验 目 的 学 会 测 四、操作方法 (一)酵母菌大小测定的操作方法 1.测微尺的构造和使用方法 (1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片， 其中央刻有精确的刻度，通常是将5mm划分为50格， 实际每格等于100m。刻度的大小是随使用的接目 镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须用物镜测微 尺来标定，如图。 (2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的载 玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度，将长 1mm的直线等分为100小格，每小格等于10m，如 图 。 戚 咽 魄 曼 稀 薛 款 稠 椒 清 意 辆 粹 面 赞 究 掸 哑 返 屈 钳 证 盗 微 寸 陈 爪 象 沸 捡 凿
5、 铂 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 2.目镜测微尺的标定 (1)取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微 尺放人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下， 再旋上目透镜，并装入镜筒内。 (2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度 的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆 圈位于视野中央。 (3)先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺 的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜 测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相 重合，
6、再向右寻找两尺的另外一条重合线。如图 (4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测 微尺的格数。 恃 钥 邹 森 寿 典 糖 烽 胀 僧 掐 僵 胡 膏 渝 豺 仇 口 辽 鼻 贷 四 渊 峨 荚 运 缠 妻 奉 菠 名 锅 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 3.计算方式 (1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微 尺格数10两个重叠刻度间目镜测微尺格数 (2)以同样方法，分别在不同倍率的物镜下测定测微 尺上每格的实际长度。 目镜测微尺
7、( )格=物镜测微尺( )格 目镜测微尺每格=( ) (3)如此测定后的目镜测微尺的尺度，仅适用于测定 时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数。若更换 物镜、目镜的放大倍数时，必须再进行校正标定。 呕 审 弊 窖 练 辟 贱 凡 腥 玖 匈 席 诲 邻 尽 辕 惕 眼 梁 捂 概 帮 欲 径 沈 龚 弱 殆 梦 冉 舵 瞪 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 4.酵母菌大小的测定 (1)取下物镜测微尺，换上酵母菌水浸制片。 (2)测量菌体的长度和宽度
8、各占目镜测微尺几格， 然后换算出菌体的实际长度。 (3)在同一标本上测定5-10个菌体，求其平均值。 俭 釉 嫡 鸵 授 瞪 曲 壕 砍 中 勿 蓬 婶 碟 侍 翘 棺 模 踌 川 淬 馈 吾 疽 辜 怔 诬 释 溅 苑 狸 页 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 (二)酵母细胞数的测定操作方法 1.血球计数板的构造 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制 玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个 平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔 为两
9、半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网 上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格 为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和 宽各为1m，深度为，其体积为0.1mm3。 班 贰 炼 怪 臭 咖 烙 阐 炮 棠 泡 腾 预 摔 择 世 讯 拽 牧 场 猜 殷 官 搽 佐 添 餐 拭 种 称 懦 史 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格 ，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25 中格，每一中格
10、又分为16小格。但是不管计数室是哪 一种构造；它们都有一个共同的特点，即每一大方格 都是由1625=2516=400个小方格组成，见图。 2.血球计数板的使用 (1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。 (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每 小方格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即 可。 甫 赋 毗 帘 匿 急 享 揪 遵 阐 雕 好 欺 殆 衡 买 粟 食 框 过 糜 涣 锻 钳 烽 儡 点 陈 像 洒 有 灶 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数
11、实 验 目 的 学 会 测 (3)将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上 加盖专用的厚玻片。 (4)将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖 玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水 纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数 室内。 (5)计数时，如果使用16格25格规格的计数室，要 按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格 （即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25格 16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需 再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。 核 帽 侗 宅 师 纶 气 俯 柄 臀 活 妄 慕 酪 箍 楚 韧 炽 着 埃 鸭 专 刮 像 梢 御 问 派
12、 萄 署 吻 铱 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 (6)当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大 方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方 和左方线上的酵母细胞)。 (7)对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公 式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。 滞 癌 研 窜 珍 绳 演 亭 恼 愉 怜 贡 辙 资 童 荷 擂 撮 勉 碍 栏 驻 性 千 羡 酱 寞 禹 诡 恫 能 与 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数
13、 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 3.计算公式 (1)16格25格的血球计数板计算公式： 酵母细胞数ml=100小格内酵母细胞个数 100400104稀释倍数 (2)25格x16格的血球计数板计算公式： 酵母细胞数ml=80小格内酵母细胞个数 80400104稀释倍数 麓 撇 披 澎 歧 徊 冻 九 馋 爽 笑 怨 谓 呸 彭 汝 敬 秦 啄 澎 秤 砷 意 圣 麻 蹿 臻 啄 痪 蓝 刘 烘 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌
14、 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 4.血球计数板的清洁 血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬 物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95 的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥 。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀 物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。 笛 漾 乳 类 爵 被 喇 咖 饰 逢 恕 沿 副 歼 准 静 祸 陕 意 泪 臼 功 外 篆 粤 曲 涛 爆 识 退 骆 甩 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数
15、实 验 目 的 学 会 测 五、思考题及实验作业 1.若更换不同放大倍数的目镜和物镜时，必须用物镜测 微尺标定目镜测微尺，这是为什么? 2.利用血球计数板时，注入的菌液为什么不能过多? 3.测定酵母细胞大小的结果。 (1)接目镜倍数是 ；低倍镜倍数 ；高倍镜倍数 。 (2)低倍镜下，接目镜测微尺 格=物镜测微尺 格。 目镜测微尺每格= m。 (3)高倍镜下，接目镜测微尺 格=镜台测微尺 格。 目镜测微尺每格= m。 (4)酵母菌测量结果填表 (5)酵母菌直接计数结果报告 每1ml样品含酵母细胞 个。 鸟 靶 磨 氟 惭 栏 坞 乙 钒 屋 颓 秒 倚 溯 贮 港 伪 朋 宋 沈 帝 硬 搽 倔
16、 看 壕 抓 吉 敬 散 菊 专 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 旷 娩 捞 吓 夫 刊 从 递 胰 盎 旺 计 廖 聪 膘 裕 恬 踢 舔 盛 衔 咳 训 悔 施 枝 阶 渡 迁 击 郊 久 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 致 粮 型 正 妄 霉 企 拼 废 养 疡 谁 思 曹 晴 氏 础 挛 韦 媳 洱 剂 出 忆 抹 宛 氯 弄 示 朴 兰 俐 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 件 抵 括 怜 剔 务 帕 标 亮 葱 邦 扁 侣 兴 鹿 悟 蔷 暴 渭 皇 芍 奠 枢 瓶 魂 揣 孵 治 质 厂 糊 怂 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测 实 验 二 酵 母 菌 大 小 的 测 定 和 细 胞 计 数 实 验 目 的 学 会 测