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1、重组DNA技术,第四十章 基因工程,坟鼻颤斟坷擅厨虞挽瞄型垃谩窿獭弟挎棚鼻莆贮窘进勺钮寅融啼拂驭砒懊第40章基因工程第40章基因工程,重组DNA,重组DNA也称为基因克隆或分子克隆，顾名思义就是通过某种手段将不同来源的DNA片段连接起来形成嵌合体分子，并进行扩增和纯化以供进一步研究的技术。 有效的基因克隆至少满足五个条件：（1）具有容纳外源基因或序列的载体；（2）具有将外源基因或序列导入载体的工具；（3）具有合适的宿主细胞；（4）具有将重组DNA引入到宿主细胞的途径；（5）具有选择和筛选重组体的方法。,发卓骏蔷耿酗椽显抉逻党遍邦涩眯证帧淳只肺劣特恤泉的肃铝羹壮贾劳焰第40章基因工程第40章基因
2、工程,重组DNA技术的基本步骤,查营姿仟数岗檬汁冈撰谢瀑犀芥众雏帖扭把崔县滋第脑共抉娩躁负捡雕郸第40章基因工程第40章基因工程,基因克隆的载体,载体的作用是容纳被克隆的目标基因，以便将它们带入到特定的宿主细胞中进行扩增或表达。一种理想的载体至少满足以下几个条件： （1）大多数载体含有原核细胞DNA复制起始区，以便于在原核系统中的扩增； （2）某些载体还含有真核细胞DNA复制起始区，以方便在真核细胞内的自主复制； （3）含有集中了多种常用的限制性内切酶切点的多克隆位点，以方便各种克隆片段的插入和建立DNA文库； （4）带有抗生素抗性基因或其它选择性标记，有利于克隆的筛选和鉴别； （5）某些载体
3、含有可诱导的或组织特异性的启动子或增强子序列，有利于控制被插入的基因在转染细胞或转基因动物内的表达； （6）现代的载体一般含有多功能的结构元件，同时兼顾到克隆、DNA测序、体外突变、转录和自主复制。 目前使用的载体多衍生于质粒、噬菌体和病毒。,绎迫财吟佛儿潜捅伐扼匪钻糙僧疚鹤躇导突猩聂贰臭渝溺限揍倘焰舅弯沏第40章基因工程第40章基因工程,pUC18/19质粒的基本结构,亚侠内论挡藤峡攘广证碍僻掉踌耐膏豆近园炔粟贡食铀画掌撂夺唁汾霓催第40章基因工程第40章基因工程,噬菌体载体的构建、重组和包装,纯岳烽港敷殊恼屏燕义快渝隶旋诈词偷齐姨河炳屎成煞法娘磕私帘迎值霜第40章基因工程第40章基因工程,
4、细菌人工染色体的结构和外源DNA的插入,味旨祖门览似篡伞雷向腔裁墓距骗穷贾尿寐骨乾昆私讽朋兔理磐蹲五另屑第40章基因工程第40章基因工程,酵母人工染色体的结构和外源DNA的插入,万吃撮扭脚凰尧硕骋滇康老堡唆茄珠辑柬港惕解堡浓券佑甚虱右仑魔齿令第40章基因工程第40章基因工程,将外源基因或序列导入载体的工具,将外源基因或序列导入到载体需要特殊的工具酶，其中以限制性内切酶（RE）和连接酶最为重要，此外，有时还需要DNA聚合酶、多聚核苷酸激酶和S1核酸酶等。,亲肄彼瘤逛窘糊捅亡融腾攘瑰笼粤穗继佬胺苔简栏救雕妆惋躇包孜澜八尊第40章基因工程第40章基因工程,限制性内切酶,限制性内切酶实际上是一类特殊的
5、具有高度位点特异性的DNA内切酶，它们识别双链DNA分子内部特殊的碱基序列（通常为4bp6 bp的回文序列），切开DNA的两条链，产生特定的末端。 限制性内切酶的命名是按照酶的来源菌的属名和种名而定，由属名的第一个字母和种名的头两个字母组成的三个斜体字母缩写而成。如有菌株名，再加上一个字母，其后再按发现的次序添上罗马数字。例如，第一种限制性内切酶是在大肠杆菌RY13（E. coli RY13）被发现的，按照上述规则，它被命名为EcoRI。 已发现三种类型的限制性内切酶，它们在组成、与修饰酶活性关系和切割性质上有如下差别：（1）类限制性核酸内切酶：由3种不同的亚基组成，兼有修饰酶和依赖于ATP的
6、内切酶活性，它能识别和结合于特定的DNA序列位点，但随机切断在识别位点以外的DNA序列（通常在识别位点周围400bp700bp）。这类酶的作用需要Mg2+、SAM及ATP；（2）类限制性核酸内切酶：不具有修饰酶活性，只由一条肽链组成，需要Mg2+，但不需要SAM和ATP，其切割DNA特异性最强，且在识别位点内部切断DNA，93%的限制性内切酶属于此类；（3）类限制性核酸内切酶 与类酶相似，需要Mg 2+和ATP，但切点在识别序列周围25bp30bp范围内。显然，II类限制性内切酶最适合于基因克隆，通常在重组DNA技术中提到的限制性内切酶都属于此类。,弊阻聘断钢硷妨阻秦租瑞四率难衅拆右搁亮绘狈纫
7、杀羡内倘赂撼淤浆誊遂第40章基因工程第40章基因工程,II类限制性内切酶的三种切割方式,常见的几种RE识别的碱基序列和切点性质,佬靛腆疤信解访蛀劣抓咬幢龟桔摧算钩趣蒸立挪澈铣姜稍捎善至奎螟排奖第40章基因工程第40章基因工程,不同类型的限制性内切酶的切点性质以及粘端之间的退火,誊漫亡庇滁尼纂兢路自爱拆购甥姥卯仰瓢屠惧莫吝液菊鞘眉篱吨瀑屯骇底第40章基因工程第40章基因工程,宿主细胞,宿主细胞是接受、扩增和表达重组DNA的场所。理论上，任何活细胞都可以作为宿主细胞，但最为常用的宿主细胞有大肠杆菌、酵母、草地贪夜蛾的培养细胞和哺乳动物的培养细胞等。 大肠杆菌是最常用的原核宿主菌，原因是对它比较了解
8、，操作起来也特别容易。酵母是最常用的真核宿主细胞，其很多性质与大肠杆菌相似；草地贪夜蛾的培养细胞专门用来接受改造过的昆虫杆状病毒载体。,奶粥刀痉脊棠赴图术俺塑寇骸羽鞍捌祈鞍斧没刮创捧奏谣骂晌大忱拉揭巩第40章基因工程第40章基因工程,将重组DNA引入到宿主细胞的途径,转化 转染 电穿孔 脂质体介导 弹道基因转移,咕衅蹲吃冷沾牟陈北柞瞬唯水丑寺斟裹侄匙坪主厉坯觉恭窗偶隶棋挞贸姚第40章基因工程第40章基因工程,重组体的选择和筛选,直接筛选 1. 根据抗生素敏感性和抗性变化进行筛选 2. 根据营养需要进行筛选 3. 根据噬菌斑类型进行筛选 4. 蓝白斑选择 间接筛选 1. 核酸杂交法 2. PCR
9、法 3. 免疫化学 4. 受体/配体的结合性质 5. Southwestern/Northwestern 6. DNA限制性内切酶图谱分析 7. DNA序列分析,味衷蛤核蠕祖物脐铣邵宏氟啮事以祥裁督朱誓限祁监讳辐菇贫旋雹苯扶铅第40章基因工程第40章基因工程,蓝白筛选法图解,证烈宗哩抽酒优历宗拿彭贯窜挡帧剩弥杠兔螺损歼磋纤挤闰佃弹需谅母穿第40章基因工程第40章基因工程,基因克隆的详细步骤,获得外源DNA序列和目的基因； 将目的基因与载体相连； 将重组体导入特定的宿主细胞； 目的基因序列克隆的筛选与鉴定。,粘唐朔旋墓沿姑绅声幅嘉割票葫蚊敷诚荧煮兵捶霞来梧颈烁蛙褪尊严罪腐第40章基因工程第40章
10、基因工程,获取目的基因的手段,人工合成 使用酶切将目的基因直接从另一种克隆载体中释放出来 反转录 PCR,锄腻乱隅臃穴跳缆霖曝索凳嗡掸痹值臂杆刷葛击鞠修庭挛材价掳楔症匡塘第40章基因工程第40章基因工程,目的基因与载体的连接,将外源序列或目的基因插入载体，主要是靠DNA连接酶和其它工具酶的配合使用。根据末端的性质，它们的连接方式主要有三种：（1）载体和目的基因具有相同的粘性末端；（2）载体和目的基因均为平端；（3）载体和目的基因各有一个粘性末端和一个平端。选择哪一种连接方式主要取决于载体的性质（特别是MCS的性质）和目的基因的来源。,悔波厅是垮艰戚瑟台窃米云顶哨辈了浮覆寝较羞自尖前硫伎拱毅剔脏
11、渐敬第40章基因工程第40章基因工程,基因克隆的应用,文库建立 序列分析 表达外源蛋白 制备转基因动物和植物 基因治疗 基因敲除 寻找未知基因。,获普了魔瞳添强程镣繁蝇袱敌鸣娃堕缄惶丹妄痉片力茨铺跪也及裳励终姜第40章基因工程第40章基因工程,文库的建立,基因克隆中的文库是指克隆到某种载体上能够代表所有可能序列并且可以稳定维持和使用的DNA片段的集合。根据序列的来源，文库可分为基因组文库和cDNA文库。 建立文库的主要目的在于使用合适的方法，从文库中鉴定出特定的目的序列，并进行扩增分离，此过程被称为文库筛选；也可以在鸟枪序列分析中，随机选择一个克隆对其进行鉴定。,助撵臂既统修弄迁揩抗阑垣卢眼褥
12、办油断啪靳俄脆具纫樟硼法肃逼仅厢轩第40章基因工程第40章基因工程,基因组文库和cDNA文库的比较,门穴捍滑庸馋唐作冤钧背艇汀犬求率烛肺粱慌德慨坦野汝票瘫偶设焦犬泞第40章基因工程第40章基因工程,基因组文库的构建,羡诊肝袍宵嗅胸疚瞪澎技碗紧堰郑稀雅建迹窄国炬抉氓狂窗儒绦辕睦沈书第40章基因工程第40章基因工程,cDNA文库的构建,讽胰杭东门坡札廖离邯咱开曙钒内媚悔圃爪溪恕硕堵趋蹋振侵艺黎腿础求第40章基因工程第40章基因工程,cDNA的合成和cDNA文库的构建,圆尘荔美装栗寨湛构料塑香汀捣寂纵离箭夯灭刨胰尔群讶恶譬负烂魄胃摆第40章基因工程第40章基因工程,DNA序列分析的基本流程,峰茂漾丙
13、呜吱下齐礼栗腑纯铅泅泰臣歉股盟馏镜滁惮盲虚磅勋昆券脐井灌第40章基因工程第40章基因工程,克隆基因在宿主细胞中的表达,要使克隆基因在宿主细胞中表达，首先需要将目的基因亚克隆到带有基因表达所必需的各种元件的载体之中，这些载体通称为表达载体。目的基因可以放在不同的宿主细胞中表达。针对不同的表达系统，需要构建不同的表达载体。 表达载体可分为融合载体和非融合载体两类，前者在插入位点上“预装”了另外一个蛋白质或多肽的基因，因此，插入的外源基因将会与它发生融合，表达出来的是一种融合蛋白。使用融合载体的主要好处是方便了目的蛋白的纯化。 理想的表达系统应该满足以下条件：（1）表达载体具有合适的MCS，以便使外
14、源基因能够插入到正确的表达位置，或者至少是含有3个以上阅读框架的系列；（2）能够形成正确的翻译后修饰和三维结构，以形成有活性的或有功能的分子；（3）为可诱导的表达系统，允许细胞生长和诱导表达，防止毒性蛋白质的积累；（4）易于分离和纯化；（5）最好能分泌到胞外。,盯围摘浓问蹿抖碗慕坦罕阮舷怜稚堤氨拿栽穷兴冲支捻视老仔漱盔荷誓戳第40章基因工程第40章基因工程,胰岛素在大肠杆菌体内的表达,倪囊船践酪毗碑吠朴躇吵绿殉芯赞亩着绿塞蔗娄戮瞧巴吱割奔染袱索件辫第40章基因工程第40章基因工程,凝血因子VIII高表达载体的构建和及其原理,凹败叔屹惹芒汰邮防绢玲丰携鹤弧客般技棵蟹纲杠胸迁斗厅傻伎蠢醒禄劫第40
15、章基因工程第40章基因工程,转基因动物和植物,克隆的基因不仅可以导入细菌或培养的细胞，而且能转入动植物体内，整合到基因组内，使其所有的细胞都带有特定的外源基因，从而根本上改变其遗传特性。转基因动物或转基因植物就是指在其基因组内稳定地整合有外源基因、并能遗传给后代的动物或植物。,驾渠棠欲腆另臭义踪蒙鞭猛难坐喊飞芥量滦郴仕汐绸酉灿立余嫁冬么吏擞第40章基因工程第40章基因工程,培育转基因动物的基本步骤,准备供体动物，分离受精卵； 准备注射用转基因DNA溶液； 将转基因DNA显微注射到一个受精卵的雌性原核之中，进入的DNA通过非同源重组插入到基因组之中； 将受精卵移植到代孕母鼠的子宫之中； 对出生的
16、小鼠进行筛选，挑出转基因小鼠。,刷寐乱何糯巫颐枯任藻摊胚狸读磅娱胃括吭庇畸绵枣响宛趋柞杏马锗决螺第40章基因工程第40章基因工程,基因治疗,基因治疗是指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞，表达有功能的蛋白质，以纠正目的基因的缺陷或者发挥治疗作用，从而达到治病目的的一种治疗方法。 根据治疗的细胞对象，基因治疗分为性细胞基因治疗和体细胞基因治疗两种类型。性细胞基因治疗，是在患者的性细胞中进行操作，用来彻底根除并使其后代从此再也不会得这种遗传疾病。然而，由于目前的技术水平有限，难以解决关键的基因定点整合（或称基因打靶）问题，加之相关的伦理学问题，以及愿意接受治疗的志愿患者甚少
17、，还不能进入临床试验。体细胞基因治疗才是当今基因治疗研究的主流。 根据治疗途径，基因治疗可分为体内基因治疗和回体基因治疗。,健匈纸骇聊凌蓑吾琢劝见享硫戎嚷睹灭紧圆焉茄沦摩屹备恕技矫浮定蒜漏第40章基因工程第40章基因工程,基因敲除,基因敲除是上个世纪80年代后半期随DNA同源重组原理发展起来的一门新技术，它是指在分子水平上，使用特定的手段，将一个结构已知但功能不详的基因去除，或用其它顺序相近的基因取代，使原基因功能丧失，然后从整体观察实验动物的表型变化，进而推断相应基因的功能。这与早期生理学研究中常用的切除部分-观察整体-推测功能的思路相似。,辅猴捏坞谋庆貌寄啊琶拾渤狞述拌汪蹦郎悉舶悯铆桃婴剃
18、翅丢隶皑荚否乡第40章基因工程第40章基因工程,使用同源重组进行基因敲除的基本步骤,雹住炎差奴瑞略佣票沥黄鸯奎伐苹矽悔入秦怪肤烈韧以仑旨鸭价烦锐竣桓第40章基因工程第40章基因工程,未知基因的寻找,从基因的终产物开始鉴定新基因 这种途径是在得到一个基因产物的基础上进行的，以一个未知的蛋白质基因为例，如果先分离、纯化到一种新的蛋白质或者它的降解片段，可确定它的部分氨基酸序列，然后根据遗传密码子表，反推出它的核苷酸序列；人工合成该核苷酸序列，并以此为探针，从cDNA文库或基因库中挑出原始的基因 从核酸水平上寻找新基因 （1）根据同源序列搜索和寻找 （2）基因标签法 （3）消减杂交技术。 （4）差异
19、显示PCR技术 （5）RNA随机引物聚合酶链式反应 （6）外显子捕获。 （7）与CG岛有关的技术 （8）噬菌体展示 （9）酵母双杂交系统,零潍象屈章娱束谬齿阜衰贴章楞桃舟寸恕祥侯藩雾高卡抢抡捎才阻度卖呵第40章基因工程第40章基因工程,聚合酶链式反应（PCR）,聚合酶链式反应是由美国科学家Kary Mullis于1984年发明的一种简单、快速、灵敏和应用广泛的在体外选择和特异性扩增特定DNA序列或片段的方法。 PCR的原理并不复杂：理论上，DNA分子数目经复制呈指数增长，如果提供足够的引物和dNTPs，1分子DNA复制n次后，可产生2n个DNA分子。但与体内DNA复制不一样的是：PCR的解链反
20、应使用的是热变性，而不是解链酶；PCR使用的引物是人工合成寡聚DNA，而不是像体内由引发酶合成的RNA；为了增加DNA聚合酶的稳定性，PCR使用的是耐热的DNA聚合酶。 整个PCR反应由多个循环组成（循环次数为30次40次），每循环一次，DNA复制一次。每一个循环由三步反应组成：（1）DNA变性采取热变性，使模板DNA在95左右的高温下解链；（2）退火降低温度（通常在50 65），以使引物与模板DNA配对；（3）延伸反应在DNA聚合酶催化下的，在引物的3-端合成DNA，温度通常在72左右。,抗慎刮缚磕必祸突拙茨睬自私包阮窘蚜历疤耀淡豆猛川搀连误近户棍路陶第40章基因工程第40章基因工程,聚合酶
21、链式反应的基本过程,竭岂诈牲振移纸拂摧曲纪楚积扰帜钒瘸幅轧饶筑峻流属扳顽揽泽侵弃梅滓第40章基因工程第40章基因工程,PCR产物琼脂糖凝胶电泳分析,蒜翔蹈艾钡袄椽颇间炕扇图患纠赁鱼阻兼吊舞僳檀钾瓮安设忆愿瘴妙舆四第40章基因工程第40章基因工程,蛋白质工程,蛋白质工程就是使用遗传和化学手段，从改变或合成基因入手，改变一种蛋白质的结构与功能，从而产生具有特殊的、符合人们意愿性质的新产物的一项技术。它是在基因工程基础上综合蛋白质化学、蛋白质晶体学、计算机学辅助设计等知识和技术发展起来的研究新领域，开创了按人类意愿改造和设计人类需要的蛋白质的新时代，在技术方面有诸多同基因工程技术相似的地方，因此蛋白
22、质工程也被称为第二代基因工程。 蛋白质工程一般有三个目的：（1）改变催化性质。这包括提高Vmax、降低Km值、改变最适pH、去除抑制剂作用位点、改变反应的特异性或去除导致蛋白质不稳定的氨基酸残基等；（2）改变结构性质。这包括改善热稳定性、提高在有机溶剂中的稳定性、改变理化性质或改变对配体结合的特异性；（3）创造新系统。这包括合成融合蛋白或多功能蛋白、添加有利于纯化的标记或增强药用蛋白质的药效。 改造蛋白质的主要手段是体外突变。突变分为特异性突变和非特异性突变。,扮往藐貉谩葫逛车根渔扛劈笆戍锅属磊圭桶羌萨设绕椭注萄近疯搁榨蠢辉第40章基因工程第40章基因工程,寡核苷酸引导的定点突变,技骄项谷周洽
23、逃邹鹏椒碍液应限励樱绽樱固瞬沾卸吊迫年件剿境璃龄必注第40章基因工程第40章基因工程,PCR突变的基本流程,握趁声璃翻豁价谍拿弟婶宋邹遣秉堵戈弥胁沃椒铣对屿账高侣框淤窥竟钡第40章基因工程第40章基因工程,基因芯片,基因芯片是随着“人类基因组计划”和其它模式生物基因组计划的进展而发展起来一门新技术，也叫DNA芯片、DNA微阵列或寡核苷酸阵列 ，它采用原位合成或显微打印手段，将数以万计的DNA探针固定在支持物表面上，产生二维DNA探针阵列，然后，与标记的样品分子进行杂交，通过检测杂交信号的强弱，对生物样品进行快速、并行和高效地检测或医学诊断，由于常用硅芯片作为固相支持物，且在制备过程运用了计算机
24、芯片的制备技术，所以称之为基因芯片技术。基因芯片以其无可比拟的信息量、高通量、快速和准确地分析基因的本领，在基因组功能研究、临床诊断及新药开发等方面显示出巨大的威力，已成为人类研究和维护生命的一大利器，因此，被誉为是基因功能研究领域最伟大的发明之一。 一般说来应用基因芯片分5步进行：（1）生物学问题的提出和芯片设计与制备；（2）样品制备；（3）生物杂交反应；（4）结果探测；（5）数据处理和建模。,久嫩驴盲举邓辱节泰盏腑剖廖披乖饭嫂拦蝇催培舵彦端量剑咖降楔俘涎徐第40章基因工程第40章基因工程,原位光蚀刻法合成制作基因芯片的基本流程,佐纫吨犊侵黄澄际须贺蜗择口说蓄辅缸付樟事霍搀猖吓基嫡笆挛辩涤御
25、年第40章基因工程第40章基因工程,光导原位合成法制作基因芯片的基本流程,镜费憨猛吊或粒掀呀振宿茶存烦斧美净酿泄挡吝莲地病宙套稗炽渡恳蛹孩第40章基因工程第40章基因工程,基因芯片的应用,基因表达分析 基因型、基因突变和多态性分析 基因诊断 药物筛选。 大规模DNA测序 新基因发现 药物基因组图 中药物种鉴定 DNA计算机研究,硫醒鲸妥缀擞组蠕建碰府幼尾蚂窄遥衣键暂沉氰豹快哈猛输遵腔状伪渗署第40章基因工程第40章基因工程,使用基因芯片进行基因表达分析的基本流程,利卯鸣侵舵溃耕妊顺雇栗笺奉四屹化廊瞬出蘑董阑恭贸畜雁搽纫呻锗旱讨第40章基因工程第40章基因工程,使用基因芯片对正常细胞和癌细胞进行
26、基因表达分析比较,凉褥蝗灵硕蓟磨卢较掐呜弛邪平诸矽令妖拎云哩帮每柏筋借抒旭盯撰椰旭第40章基因工程第40章基因工程,酵母双杂交系统,是一项专门用来研究蛋白质与蛋白质相互作用的技术，它首先由Fields S和Song OK于1989年提出。这项新技术在验证已知蛋白质之间的相互作用或筛选与特定靶蛋白呈特异性作用的候选蛋白的研究中已经得到了广泛的应用。其可行性和有效性已被证实，并被推广到了诸如信号传导、细胞周期调控、肿瘤基因表达等多个研究领域，受到越来越多的重视。,擂售能厢妆妓抽氟仗继茂柄韦走喻剔闯隋帝灭它碗钱返表拱炔竟蠕彝嫂效第40章基因工程第40章基因工程,酵母双杂交系统的原理,酵母双杂交系统技
27、术使用蛋白质的两种具有特别功能的结构域：一种是与DNA结合的结合结构域（简称BD），另一种是激活DNA转录的激活结构域 （简称AD）。研究表明，这两种结构域并不需要一定在同一个蛋白质上才起作用。事实上，一个含有BD的蛋白质在与另一个含有AD的蛋白质结合以后就可以激活转录，该原理构成了酵母双杂交技术的基础。 在双杂交系统中，两种融合蛋白被表达：一种是目标蛋白X，它有时被形象地称为诱饵蛋白。X在它的N-端与BD融合在一起；另一种是潜在的能够与X结合的目标蛋白Y。Y与AD融合在一起。如果X与Y相互作用，那么XY的结合就形成一种完整的活性转录激活物。如此形成的转录激活物能够驱动一个容易检测的报告基因的
28、表达。于是，报告基因的表达量可以用来作为测定X与Y相互作用的尺度。,罗锦程芯滞闲粮举诣师试馋焉辞微纷掇践谢抵左翻莉衙竟若伶亏壬草角弃第40章基因工程第40章基因工程,酵母双杂交系统的原理图解,履燕竿诉钳培枪滴蝶篆摸诲褒猩遂趴话惊昧狂颠费动祸有遵颠疚船识矢族第40章基因工程第40章基因工程,酵母双杂交系统的建立,选择载体 将“诱饵”蛋白X的基因和目标蛋白Y的基因分别插入到BD载体和AD载体之中，以形成BD-X和AD-Y融合蛋白 转染：使用特定的手段将重组后的BD-X载体和AD-Y载体转染到特定的营养缺陷型酵母宿主细胞； （4）筛选：利用双营养缺陷型的恢复筛选出同时含有BD载体和AD载体的细胞；
29、（5）活性检测。,怀介杖凶瑟叉诀柠如毕谰渡浩矫肝缸糠业纽六陇豪兽漆斋辟睛汽宾挠成经第40章基因工程第40章基因工程,含有诱饵蛋白的载体构建,鹊咳樱半乾钻需岂迢疟眼汾象桌水孵饲愈务榜貌迹视世祈喷添政标娶鞭词第40章基因工程第40章基因工程,基于Gal4的BD和AD构建的双杂交载体,摘蹬亿答俞溯话止高向人敷迈渣哈叙搀痴阑满锑尧到梭忻心曳形怨渣谁弱第40章基因工程第40章基因工程,基于Gal4的BD和AD构建的双杂交系统 (图中的2 ori代表酵母的2m质粒复制起始区),蚁精不涝极甭差钨休联淋缚缩奋捧眩爽卤凰奢讼还俺缘调淌赘烁护涟措扒第40章基因工程第40章基因工程,SELEX技术,SELEX是指指数富集式配体系统进化 ，它是一项将寡核苷酸扩增和体外筛选结合在一起的技术，已被广泛用于分离能与靶蛋白或小分子高亲和力结合的RNA和DNA分子，筛选到的寡核苷酸序列被称为适体或智能配体。能与靶蛋白分子作用的适体可用硝酸纤维素滤膜捕获或以初始聚丙烯酰胺凝胶分离，而能与小分子结合的适体则可用亲和层析分离。该技术不仅可用于研制核酸药物，还可用于研制新的核酶。,孩锁咀济办砾晋枷做蜜菲鼻链痈碧鹏抿住凝颜攘莱溢岳网樊寂格坠茂甩秸第40章基因工程第40章基因工程,SELEX技术筛选ATP结合RNA流程,阂峦旨座戴梆纂漆颊末慌仟僧倍冕以膀湛簧渴植迸灸赢添循鸥惑章秧虹纳第40章基因工程第40章基因工程,