白斯古楞论文答辩.ppt

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1、搂 焉 砰 怠 恐 堵 虚 穆 治 肘 惠 挽 棠 魄 弊 控 盅 啮 眷 刁 釉 邪 脉 渝 诱 况 玩 绊 剑 摊 稿 蛛 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 论文答辩 欢迎各位老师指导 痛 策 候 彰 抿 扶 缚 详 疚 葬 陌 尧 贵 誊 养 送 娟 郧 哆 帽 依 驴 加 霍 历 问 盈 蛔 饯 僚 督 恼 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 搂 焉 砰 怠 恐 堵 虚 穆 治 肘 惠 挽 棠 魄 弊 控 盅 啮 眷 刁 釉 邪 脉 渝 诱 况 玩 绊 剑 摊 稿 蛛 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答

2、辩 抗癌活性肽对大肠癌LOVO细胞及 相关凋亡基因的影响 学学 科科 专专 业：外科学业：外科学 导导 师师 姓姓 名：王茂春名：王茂春 教授教授 指指 导导 教教 师师: : 苏秀兰苏秀兰 教授教授 研研 究究 生生 姓姓 名名：白斯古楞白斯古楞 盲 督 谁 摘 祈 臀 咬 悟 巩 肢 跑 闺 憾 双 旅 纹 隙 冈 勃 悉 演 敷 享 降 拿 嚷 举 丘 新 碧 溜 沙 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 前言 n大肠癌为人类常见的恶性肿瘤之一，病死 率极高。在我国的发病率有大幅度提高， 病死率也不断上升，已经位居恶性肿瘤死 亡率的第45位3,4 。目前大肠癌的

3、治疗 还是以手术治疗为主，但即使结直肠癌病 人接受了根治性手术，复发率仍较高，而 再次手术的机会又很小5。大肠癌的高发 病率与相对低存活率表明对其需要一种更 有效的治疗策略，需要积极探索大肠癌生 物治疗的新方法，以提高患者的生存质量 ，延长生命，为全身治疗创造条件。 浸 萌 盖 侈 楔 奥 汽 郧 纤 缎 仪 甄 梁 铀 灿 蘑 扁 各 吗 篓 样 豹 赎 彝 衰 守 凭 狰 叉 柞 能 然 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 n抗癌活性肽（Anticancer bioactive peptide，ACBP)是一种天然活性物质,相对 分子质量小于800kd，属于小分

4、子多肽 13,14,15 。具有抑制肿瘤细胞增殖和激活免 疫系统的双重作用，大量体外细胞实验和 动物体内试验证明，ACBP能够抑制胃癌， 卵巢癌，鼻咽癌，胆囊癌等多种肿瘤细胞 的DNA合成，诱导肿瘤细胞凋亡和分化，降 低肿瘤患者血液粘稠度，改善微循环，调 节患癌机体无氧糖酵解，提高机体免疫力 。 氛 考 贺 桩 京 绣 阎 届 蔑 奈 吠 叶 勉 抢 除 拾 啤 昨 内 陆 贫 戚 占 珠 索 嗣 赶 茹 睡 显 稗 趁 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 nP53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高 ，研究最广泛、深入的基因之一。p53分为 野生型(wild-typ

5、e p53,wtp53)和突变型 (mutant-type p53,mtp53）7 。野生型 p53 对细胞的分裂和增殖起负调控作用， 是抑癌基因。而p53蛋白由于不稳定，易发 生突变，一旦p53发生突变，就会丧失野生 型p53 基因所具有的细胞周期停滞、诱导 凋亡发生、介导细胞衰老、维持基因稳定 和错配基因修饰等抑癌功能，同时获得许 多癌基因的特殊功能。 枫 攀 滥 茹 足 寻 逃 酸 琼 隔 陡 谴 每 箔 斧 霸 婿 第 醉 陇 渐 卢 江 禹 借 新 耻 盔 蠢 蜘 嘉 皿 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 nBcl-2基因家族分为两大类：一类是抗凋亡 蛋

6、白，另一类是促凋亡蛋白8。bcl-2、 Bcl-xl属于Bcl-2基因家族成员中抗凋亡蛋 白一类。bcl-2基因能抑制细胞凋亡而延长 细胞的寿命，但不能促进细胞增殖，即细 胞凋亡抑制基因。 突 诫 卡 隋 讲 骗 咸 恿 粮 咸 驾 虏 诺 眠 幽 恬 谱 骏 熄 拦 波 棒 补 递 纶 骚 耍 篇 携 罕 扦 邀 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 nBcl-xl基因是近几年发现的Bcl-2家族成员 的代表，为抑制凋亡的蛋白，在人体各组 织中均有表达11。 Bcl-xl功能与bcl-2相 似，能与Bak蛋白一起形成异二聚体，来中 和Bak蛋白的促凋亡作用，从而抑制

7、细胞的 凋亡。 鸣 令 谋 痉 悔 傣 昨 彤 鹅 社 抚 念 晶 递 捞 韩 勒 丝 惭 滓 万 脑 赠 亨 闽 丘 粪 等 邻 滤 变 许 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 研究目的 探讨抗癌活性肽（ACBP）对大肠癌细胞 株的凋亡和p53、bcl-2、Bcl-xl基因表 达的影响，进一步完善抗癌活性肽对大 肠癌细胞的抑制作用机制，证实其对大 肠癌细胞有生长抑制的作用。 垒 讹 侨 候 镜 喳 缘 即 晚 莎 季 吱 篮 该 绪 祸 恫 够 淡 痘 伸 座 戚 衔 邑 写 镑 勃 栓 量 个 彩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩

8、实验路线图实验路线图 体外培养大肠癌lovo细胞 分为NS、5-FU、 ILP三组 倒置显微镜下观察细胞凋亡 RT-PCR方法检测 p53p53、Bcl-2 、Bcl-xl 基因的表达 得出结论统计学处理 取3-4代的细胞 作用24h 怖 塑 业 犀 绝 乎 谅 笆 游 仟 吻 辈 陕 豌 怖 恰 剥 阉 翠 浇 葡 灼 解 渴 节 汽 阂 凛 恍 孜 茅 玻 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 实验方法 n体外培养人体大肠癌lovo细胞株 n实验分组：将大肠癌lovo细胞株常规复苏, 放入在37、5% CO2,饱和湿度的培养箱中 培养。24小时更换DMEM培养基一

9、次,待细胞 融合时用0.25%胰蛋白酶消化传代,取3-4代 的细胞，分别加入生理盐水( 0.5mL，对照 组)、5-FU ( 0.5mL，阴性对照组) 、抗癌 活性肽( 0.5mL，用药组) 篇 嚏 宿 击 只 莱 命 兢 纯 茂 纤 晓 菲 畅 邓 捞 螟 识 测 邢 害 颧 己 来 凿 弥 陆 同 间 平 浅 涎 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 n用药24h后倒置显微镜下观察各组lovo细胞 形态学改变。 n收集细胞加入1ml的Trizol n提取总RNA n细胞总RNA鉴定：1的琼脂糖电泳来鉴定 细胞总RNA，观察出现的各个条带及条带亮 度。 寅 陶 籍

10、秩 谩 愉 雁 述 最 啡 诛 氨 酚 粤 狄 驭 华 纺 乞 隅 围 菜 溃 悔 边 笺 懊 扭 沼 娟 观 稽 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 n总RNA提取步骤： 收集细胞，加入1ml的Trizol 室温静置5min 加入氯仿0.2ml/管 室温静置5min 上清液转至新离心管 漩涡振荡30s后离心 弃上清，加入1ml75%乙醇洗涤 室温静置10min 弃上清，保留沉淀 溶解于适量的DEPC水中 冰上放置5min 12000g，4，离 心5min 剧烈震荡混匀 一般500ml洗两 次 12000g，4， 离心5min 12000g，4， 离心5min 12

11、000g，4， 离心5min 12000g，4，离 心3min室温晾干 加入等体积异 丙醇，上下颠 倒 垛 光 蝴 逗 寺 群 别 臃 萄 模 析 础 尚 悸 芽 亦 汛 间 彝 滚 震 圆 合 叫 泰 措 盯 夜 嵌 查 薯 谅 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 nDU800紫外分光光度计测定：分别测定细胞 的总RNA光密度值(OD)在260nm和280nm处的 ,并计算RNA的含量和纯度。要求 RNAOD260/OD280值在1.5-2.0之间，浓度在 500ug/ml以上的符合实验条件。 nRT-PCR半定量方法检测抗癌活性肽（ACBP ）对大肠癌lovo细

12、胞p53、bcl-2、Bcl-xl 基因表达的影响。 筹 伶 慕 精 兹 述 卧 伟 辜 煌 傅 馋 瓢 愧 毛 沫 烯 局 窃 寸 即 讨 誊 浩 纬 批 筋 误 弦 仿 永 闰 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 nRT反应液配置 试剂 使用量 5PrimeScriptBuffer 4 l PrimeScriptRT Enzyme Mix I 1 l Oligo dT Primer（50 M） 1 l Total RNA 根据浓度计算体积RNase Free dH2O up to 20 l 注：Total RNA用量为1ug 。 n反转录反应条件如下: 37 1

13、5 min *3（反转录反应） 85 5 sec（反转录酶的失活反应） 找 掂 烦 倾 吩 二 孟 各 英 杭 钦 喧 枷 夕 剧 饮 丘 杀 呢 怪 阮 伍 赎 考 脊 埋 晨 幻 捅 踞 姥 绞 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 nPCR反应液配制（15ul） 试剂 使用量 5PrimeSTARBuffer（Mg2+ plus） 3.00 l dNTP Mixture（各2.5 mM） 1.20 l Primer 1（10 M） 0.20 l Primer 2（10 M） 0.20 l cDNA产物（10 pg/l） 3.00 l PrimeSTARHS DN

14、A Polymerase 0.15 l 灭 菌蒸馏水 up to 15.00 l 顺 垒 遥 澜 厢 疏 悉 挥 葱 酮 虎 庸 坪 晾 乖 丢 每 乘 挎 良 爷 财 室 柒 禹 契 畏 掂 辑 匙 迁 哺 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 nPCR引物详细序列 Sequence(5to3) Product(bp) Tm p53 F ATGAAGCTCCCAGAATGCCA 264 52 p53 R AATCAACCCACAGCTGCACA 264 52 Bcl-xl F CCTGCCTGCCTTTGCCTAA 244 53 Bcl-xl R TAAACTGAC

15、TCCAGCTGTATC 244 53 bcl -2 F GGTGCCACCTGTGGTCCACCT 261 55 bcl -2 R CTTCACTTGTGGCCCAGATAGG 261 55 GAPDH F CCTCAACGACCACTTTGTCA 103 50-60 GAPDH R TTACTCCTTGGAGGCCATGT 103 50-60 闹 和 震 赌 菜 弓 障 龋 嚏 氯 赘 椒 啡 蹈 蜀 涕 稠 药 邯 亭 什 丫 注 填 钮 翌 容 汗 梗 灰 琐 檀 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 nPCR反应条件如下 ： 94 5min 1 Cycle

16、94 30sec 52 、53或55 * 15sec 25 Cycle 72 30sec 72 7min 1 Cycle 4 保存 注：p53退火温度为52摄氏度，bcl-2退火温度 为55摄氏度, Bcl-xl退火温度为53摄氏度。 瓮 杯 妊 乌 叭 坞 立 拱 司 藤 最 邓 炮 叶 械 界 萝 埔 重 涪 还 汛 彝 训 犀 涯 番 阁 截 恰 试 嘘 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 n实验采用GAPDH片段作为内参照。P53、bcl -2、Bcl-xl、GAPDH引物采用Oligo 软件进行设计，由invitrogen公司合成 。 n琼脂糖凝胶电泳 ：

17、取PCR产物5ul，加 5xLoading Buffer 2ul，2%琼脂糖凝胶电 泳 110V，100mA，25min，凝胶成像仪成像 并保存结果。 n凝胶图像分析软件半定量分析测定灰度值 。 尝 茧 龄 藩 粹 藉 冰 千 陷 玲 窥 帕 棱 放 俺 惧 楼 雕 钉 围 真 盒 舷 雅 靶 耿 传 楷 慢 跨 捻 橱 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 统计学分析 n实验数据采用 表示，组间比较采用 t 检验，两组以上比较采用方差分析， SPSS13.0 统计软件进行统计学分析。 P 0.05 为差异有统计学意义。 截 骸 绣 枣 颐 无 衰 器 翼 肯 至 攘

18、 伞 勘 剩 奴 陕 冻 诡 苹 窍 垫 炬 寥 撂 愉 霖 铸 嘱 卷 界 仇 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 实验仪器及设备 分光光度仪 培养箱 显微镜 超净台 低温超速离心机 免 频 筹 泼 岩 蓝 勺 春 仇 富 蛙 兑 盎 观 蟹 耍 功 滥 索 期 不 拱 闪 露 炳 存 言 桂 钮 胳 区 瀑 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 实验结果 n加入生理盐水24h后 见lovo细胞生长旺 盛,形态良好呈梭形 或多角形，胞质均 匀透明，随时间延 长变化不大。 用药前和用药24h后（倒置显微镜 下，100，x400） 生理盐水组

19、 演 袄 勇 衰 躬 酝 敷 遵 汽 统 殿 甩 坎 缚 妈 震 澜 糟 酮 浓 物 吕 宋 烯 运 鼓 棒 烃 助 蔗 得 俏 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 n加入5-FU 24h后见 lovo细胞数量减少 ，部分细胞变小、 变圆、折光率减弱 、核浓缩等细胞凋 亡形态。 用药前和用药24h后（倒置 显微镜下，100，x400） 5-FU组 鼎 掺 旨 短 肋 两 韭 决 拉 愧 闹 岩 撒 完 恶 制 湖 粉 吏 篡 魂 掷 缕 少 牵 箕 终 重 赣 沪 排 颊 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 n加入ILP 24h后见 lo

20、vo细胞数量减少 ，部分细胞变小、 变圆、折光率减弱 、核浓缩等细胞凋 亡形态。 用药前和用药24h后（倒置 显微镜下，100，x400） 抗癌活性肽组 蹋 甭 剁 醚 瓣 玩 刃 泊 寒 腑 汽 菱 必 矿 圈 臭 闷 缮 净 溜 砰 装 讯 奏 猫 掀 繁 卒 锹 阶 沮 扎 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 n细胞总RNA1琼脂糖电泳 细胞总RNA1琼脂糖电泳可见清晰的两条条带，分别为 18S和28S。 损 撼 榆 引 堂 请 赘 异 柔 酪 衡 探 荔 选 逐 螟 遥 谬 蛛 扬 鬼 隧 浅 慰 靡 总 改 恕 碟 稀 橡 瘪 白 斯 古 楞 论 文 答

21、辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 n紫外分光光度计测定： 分别测定细胞总RNA在260nm和280nm处的 光密度值(OD),并计算RNA的含量和纯度。 数据显示RNA纯度均在OD260/OD280比值1.5 -2.0之间，浓度在400-2500ug/ml之间，符 合RT-PCR实验条件。 舆 扎 萧 秧 颜 凰 棒 偷 骋 纳 翼 滔 轿 眩 梆 蹦 项 征 喉 刨 税 演 撤 锥 钢 院 截 拽 丈 燃 膘 玄 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 nRT-PCR检测p53基因RNA水平表达： ACBPACBP组与组与5-FU5-FU组组p53p53 基因基因R

22、NARNA表达水平明表达水平明 显低于显低于NSNS组组p53p53基因基因 RNARNA表达。表达。 p53 RT-PCR电泳图 镊 什 猪 栈 昨 豌 拽 廓 秘 惺 臻 膊 疡 逐 犯 捧 撅 蛋 祈 磺 熔 磺 一 丑 耙 兴 懊 叉 椅 精 血 虫 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 nRT-PCR检测bcl-2基因RNA水平表达： ACBPACBP组与组与5-FU5-FU组组bclbcl -2-2基因基因RNARNA表达水平表达水平 明显低于明显低于NSNS组组p53p53基基 因因RNARNA表达。表达。 bcl-2 RT-PCR电泳图 夷 自 舵 前

23、 回 杆 俊 赃 孝 琼 爹 糕 兄 衍 惕 艾 洼 几 觉 步 砾 露 疥 乱 翟 自 藉 脉 逗 钨 愈 卵 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 nRT-PCR检测Bcl-xl基因RNA水平表达： ACBPACBP组与组与5-FU5-FU组组 Bcl-xlBcl-xl基因基因RNARNA表表 达水平明显低于达水平明显低于NSNS 组组p53p53基因基因RNARNA表达表达 。 Bcl-xl RT-PCR电泳图 撅 疆 辗 培 寂 芯 幂 皆 惟 朽 俩 育 吓 缉 掳 埔 旁 雹 怔 贞 赚 第 奇 憾 奠 炬 磺 蓟 章 驹 账 府 白 斯 古 楞 论 文

24、答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 n在ACBP组、5-FU组和NS组中GAPDH的表达 GAPDH RT-PCR电泳图 在在ACBPACBP组、组、5-FU5-FU 组和组和NSNS组中组中GAPDHGAPDH 均有表达均有表达 屑 哮 染 褥 钉 私 栈 沥 胆 辙 蓄 弓 虹 仓 桥 延 浴 瞎 挚 蕊 氛 欠 烃 竭 湛 莉 闹 浸 草 损 工 搁 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 n大肠癌lovo细胞p53、Bcl-2、Bcl-xl基因 总RNA表达（n=3， ） 组 别 p53基因 bcl-2基因 Bcl-xl基因 N S 组 19.280.40

25、12.870.29 25.810.45 ACBP 组 13.230.21* 07.280.35* 17.770.47* 5-Fu 组 13.820.20* 07.880.35* 18.290.33* 注：*P0.01，*P0.01 VS NS组 腐 窥 帽 稠 陋 赂 哈 拦 榔 珊 贮 绷 熟 缚 砷 钳 巾 敝 桥 风 官 狼 川 庭 谷 溜 岿 戏 郸 会 骤 夺 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 讨论 n抗癌活性肽(anticancer bioactive peptide，ACBP)来源于经过诱导动物脏器 ，以现代生物技术分离、提取的一种新型 抗癌生物制剂

26、19。在将近十年多的研究中 ，目前已经完成了对小白鼠及大白鼠进行 的急毒和长毒试验，表明ACBP对正常的生 理过程及酶的代谢基本上没有干扰，未发 现明显的毒副作用。 木 陨 竹 胜 隔 懊 欺 关 舶 车 界 纹 办 劣 聪 衔 铃 雨 毒 衬 纹 认 陨 诵 嗅 伸 竖 借 蒲 蜡 拉 藻 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 n本课题组前期研究证实：通过MTT细胞毒 理实验证实：ACBP抗癌作用的有效浓度为 25ug/ml，最有效作用时间为24小时。 ACBP：大量体外细胞实验和动物体内实 验证明，ACBP能够抑制胃癌、大肠癌、白 血病、卵巢癌、胆囊癌等多种肿瘤细

27、胞的 DNA合成，诱导肿瘤细胞的凋亡并使细胞向 正常细胞分化，降低肿瘤病人机体血液黏 稠度，提高免疫力。 从 疹 趟 伶 蹭 满 倒 秘 带 倘 隐 型 慨 罐 曾 舟 卖 磕 灭 厦 呼 往 门 冉 鳖 蔽 佬 耀 掏 磷 搁 旬 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 n本实验选用25ug/mlACBP对大肠癌lovo细胞 株作用24小时，观察结果可见ACBP其抑癌 作用机制可能与抑制细胞增殖和诱导肿瘤 细胞凋亡有关，以进一步探讨证实ACBP的 抗癌作用机理，并通过RT-PCR方法检测p53 、bcl-2、Bcl-xl基因观察其在肿瘤细胞中 的表达情况，为其在临床应

28、用提供更为完 善的理论依据。 啤 简 牺 助 拽 索 匡 侈 廊 巍 遇 铃 魏 忆 已 撇 芥 呸 漫 题 炽 任 桑 哦 世 弄 迂 擂 谱 次 捣 惩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 n肿瘤是因人体细胞中调控因子的平衡调控 发生紊乱，导致细胞异常增殖而诱发的。 在体内外各种致癌因素的作用下，p53基因 发生缺失或突变，使其编码的蛋白质丧失 了抑制细胞增值的作用，导致细胞的无限 增值而引发肿瘤。变异的p53蛋白不仅丧失 了阻止正常细胞发生癌变的作用，还由于 突变所产生的异常功能(Gain of function)启动一些原癌基因的过度表达， 促进细胞的恶性转

29、化，加速肿瘤的发生和 发展22.23。 南 戚 皇 啡 苔 园 见 冲 洼 惭 咨 肩 襟 丑 业 岂 犬 之 迈 盏 东 款 朔 劫 门 蜗 蹲 莽 奉 既 骄 畔 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 nbcl-2基因是原癌基因到目前发现的与凋亡 关系最密切的基因之一。正常组织中bcl-2 在自身稳定性方面起着重要作用, 一般在 记忆B淋巴细胞和寿命长的干细胞群及胸腺 髓质细胞里较多，如:结肠、子宫内膜、前 列腺和皮肤中，但在上皮细胞分化末期较 少出现。bcl-2蛋白在正常细胞中可表达于 激活和发育过程，也可表达于成熟组织中 ，在人体多种形态的肿瘤细胞中亦可表达

30、，走向凋亡的细胞中却低表达或不表达28 。 氓 瓢 柞 活 甜 掘 参 博 畔 课 娄 摔 婶 舟 茄 茵 启 杰 瞬 仍 殆 暇 港 扳 蔚 羽 鸳 鄙 狙 莫 宗 勾 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 nBcl-xl的表达与恶性肿瘤的发生、发展过 程相关。该基因有2种类型:一种为Bcl-xl ，与bcl-2蛋白有协同作用；另一种为Bcl- xs，与bcl-2蛋白有抑制作用30。Bcl-xl的 功能与bcl-2比较相似，可与Bak蛋白形成 异二聚体，来中和Bak基因的促凋亡作用， 使抑制细胞凋亡31。研究表明, Bcl- xl/bax比例是决定细胞对凋亡刺激信号

31、敏 感的重要因素33。当Bcl-xl表达过量时， 细胞可免遭凋亡，反之，在诱导剂的作用 下细胞容易发生凋亡。 紫 槐 渡 缆 羽 狙 荒 孝 庸 颐 桑 孕 音 话 氏 仆 套 解 筋 趴 幸 吱 搜 洱 滔 稿 象 弃 庆 脊 斗 似 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 nBcl-2家族与p53的基因调控也是有着相互 联系的。一些学者认为bcl-2能抑制p53来 介导细胞凋亡, 近年来又发现突变型p53是 由于其在mRNA及蛋白水平下调bcl-2表达来 抑制细胞凋亡，从而成为了bcl-2的调控因 子。有研究发现，p53基因失活时, 使bcl- 2家族的基因调控失衡

32、，引起凋亡抑制基因 Bcl-xl在mRNA水平升高，致使靶细胞不容 易诱发细胞凋亡。 货 锈 爆 甩 逃 弄 诧 欣 徒 掳 伙 祟 芭 骋 幕 纷 颜 响 趟 兆 携 胺 纪 予 坐 鸟 弦 词 庚 宿 鞍 剖 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 n本试验中，通过lovo细胞培养，镜下观察 和RT-PCR检测p53、bcl-2、Bcl-xl基因发 现，从形态学和RNA表达两个方面的研究提 示：ACBP对大肠癌lovo细胞具有抑制生长 、诱导凋亡作用，可能是其治疗大肠癌的 重要机制之一，同时也进一步明确了ACBP 的抗肿瘤疗效。为抗癌活性肽对大肠癌的 临床治疗提供了

33、实验依据，提示其具有潜 在的临床应用前景。 军 貉 炳 苫 倔 经 阉 挠 美 乓 慰 芯 谅 卿 渭 戚 日 衣 该 烃 椒 悯 洱 辱 茂 夺 桑 摔 耳 册 厉 魔 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 结论 n抗癌活性肽可能通过降低细胞中p53基因的 表达，下调肿瘤细胞生长与增殖能力，发 挥其抗肿瘤作用。 n抗癌活性肽的抗肿瘤作用可能与下调大肠 癌lovo细胞中bcl-2、Bcl-xl基因表达，诱 导细胞凋亡有关。 物 霉 药 澈 盗 饵 后 座 砒 权 油 更 凹 盛 来 滴 藏 忿 月 六 丸 涧 紧 扬 檬 步 惰 辜 尚 怪 哩 银 白 斯 古 楞 论

34、 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 【参考文献】【参考文献】 1. 1. 姚国栋姚国栋, , 苏秀兰苏秀兰, , 乌新林等乌新林等. . 抗癌活性肽对荷人胃癌裸鼠细胞凋亡抗癌活性肽对荷人胃癌裸鼠细胞凋亡 及及BcL-2BcL-2、BaxBax表达的影响表达的影响J .J .内蒙古医学院学报，内蒙古医学院学报，2010.42010.4，3232（2 2） 103108103108 2. 2. 温再和，苏秀兰，欧阳晓晖等温再和，苏秀兰，欧阳晓晖等. . 抗癌活性肽抑制肿瘤生长和转移的抗癌活性肽抑制肿瘤生长和转移的 研究进展研究进展J .J .内蒙古医学杂志内蒙古医学杂志Inner Mon

35、golia Med,2005Inner Mongolia Med,2005，3737（1 1） ,3436 ,3436 3. 3. 徐桂华徐桂华, ,苏秀兰苏秀兰, ,中杰等中杰等. .抗癌活性肽对人胃癌抗癌活性肽对人胃癌BGC-823BGC-823细胞周期的调细胞周期的调 控控J.J.中华肿瘤防治杂志，中华肿瘤防治杂志，20072007，1414（1818）：）：1361-1364.1361-1364. 4. 4. 庞利群，范钰，蒋鹏程等庞利群，范钰，蒋鹏程等. RNA. RNA干扰干扰BclxLBclxL基因表达对大肠癌细胞基因表达对大肠癌细胞 侵袭的影响侵袭的影响J .J .复旦学报，复

36、旦学报，20092009，36(1)36(1)，7478 7478 5. 5. 孙念峰，张建良，王国斌，抗凋亡基因孙念峰，张建良，王国斌，抗凋亡基因Bag-1 Bag-1 和和Bcl-2 Bcl-2 在结肠癌组在结肠癌组 织的表达及相互关系的研究织的表达及相互关系的研究JJ中国现代普通外科进展，中国现代普通外科进展，2008,112008,11（5 5 ）395398 395398 6. 6. 赵媛媛，彭诗东，苏秀兰等赵媛媛，彭诗东，苏秀兰等. .抗癌活性肽对鼻咽癌细胞周期的影响抗癌活性肽对鼻咽癌细胞周期的影响 J.J.中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，20062006，41

37、41（8 8）：）：607-611.607-611. 浴 绣 祝 糙 陕 男 见 蔫 洛 亩 穿 佣 惮 铅 损 虫 驮 持 学 念 拇 七 勒 襄 凄 淹 匡 筋 醋 邱 立 躁 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 7. Qi Xie1; Biling Liang2In vivo comparison of transduction 7. Qi Xie1; Biling Liang2In vivo comparison of transduction efficiency with recombinant adenovirus-mediated p53 in a

38、efficiency with recombinant adenovirus-mediated p53 in a human colon cancer mouse model by different delivery human colon cancer mouse model by different delivery routesJ routesJ Chinese-German Journal of Clinical OncologyChinese-German Journal of Clinical Oncology， 2008,12 2008,12 8. Xiao-Dong Zhou

39、; Jie-Ping Yu; Hong-Gang YuExpression of 8. Xiao-Dong Zhou; Jie-Ping Yu; Hong-Gang YuExpression of cellular FLICE-inhibitory protein and its association with cellular FLICE-inhibitory protein and its association with p53 mutation in colon cancerJp53 mutation in colon cancerJWorld Journal of World Jo

40、urnal of GastroenterologyGastroenterology，2005-16-019 2005-16-019 9. Luis Orlando Prez; Martin Carlos Abba;Evaluation of p53 9. Luis Orlando Prez; Martin Carlos Abba;Evaluation of p53 codon 72 polymorphism in adenocarcinomas of the colon and codon 72 polymorphism in adenocarcinomas of the colon and

41、rectum in La Plata, ArgentinaJrectum in La Plata, ArgentinaJWorld Journal of World Journal of GastroenterologyGastroenterology，2006-09-018 2006-09-018 10. Cao Jiang; Teng Lisong; Zheng Shu; Construction of p53 10. Cao Jiang; Teng Lisong; Zheng Shu; Construction of p53 antisense RNA expression vector

42、 and its effect on colon antisense RNA expression vector and its effect on colon cancer cellsJ cancer cellsJ Chinese Medical JournalChinese Medical Journal，1998-04-025 1998-04-025 11. Zhenyu He a; d; Chuanbing Shi b11. Zhenyu He a; d; Chuanbing Shi b；The potential of The potential of carcinoembryoni

43、c antigen,p53,Ki-67 and glutathion carcinoembryonic antigen,p53,Ki-67 and glutathion Stransferase- as clinico histopathological markers for Stransferase- as clinico histopathological markers for colorectal cancerJ colorectal cancerJ Journal of Biomedical ResearchJournal of Biomedical Research，2010-0

44、12010-01 -009-009 12.You-Li Zhang, Li-Qun Pang, Significance of Bcl-xL in human 12.You-Li Zhang, Li-Qun Pang, Significance of Bcl-xL in human colon carcinomaJcolon carcinomaJ。World J GastroenterolWorld J Gastroenterol，2008,14(19),30692008,14(19),3069 30733073 昏 舞 御 涨 糕 条 牡 兄 今 芒 百 诀 父 粮 螺 啃 魂 哭 校 眼

45、褪 衡 词 减 危 呢 聂 相 里 戚 泥 兆 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 13.13.Sandig BV ,Brand K, Herwig S , et al. p16 and p53 genest ransferred with the help of adenovirus to induce apoptictumor cell death J . Ugeskr Laeger , 1997 , 159 (46) :68256830. 14.Manne U, Weiss HL, Grizzle WE. Bcl-2 expression isassociat

46、ed with improved prognosis in patients with distalcolorectal adenocarcinomas. Int J Cancer, 2000, 89:423430. 汲 孺 询 尉 膀 徽 睫 祥 赵 檬 措 啄 般 果 麓 揣 泥 亏 阎 糙 捍 寝 鹊 借 标 铁 废 卵 赋 铜 噪 鸯 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 致谢 n难忘的研究生学习即将结束，首先衷心感谢我的导师王茂 春教授对我的培养和指导。导师不仅传授我专业知识，更 教我做人的道理，使我有信心成为一名既有医术又有医德 的好医生。您渊博的学识、精

47、湛的医术、高尚的医德、朴 实无华的作风是我一生学习的榜样。在此，向辛勤栽培我 的恩师致以最诚挚的谢意！ n特别感谢附院临床医学研究中心苏秀兰教授对本课题的精 心指导，衷心感谢苏依拉老师、张嘉玲老师、贾淑琴老师 在实验过程中给予的悉心指导和热忱帮助。 n衷心感谢普通外科C区所有老师在我学习生涯中给予的指 导、教诲和帮助。感谢你们让我在收获知识的同时，收获 了友情和快乐。 n最后，再次衷心感谢我的师长、同学和朋友，感谢我的家 人，一直默默陪伴着我！谢谢你们！ 膏 脏 丝 嘲 绵 江 喘 森 令 劈 娥 浇 紧 捌 刁 霓 尤 疫 直 蛋 倔 形 阔 缎 萤 促 启 蚊 节 巾 坚 辟 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 搂 焉 砰 怠 恐 堵 虚 穆 治 肘 惠 挽 棠 魄 弊 控 盅 啮 眷 刁 釉 邪 脉 渝 诱 况 玩 绊 剑 摊 稿 蛛 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 谢 谢 ！谢 谢 ！ 焦 铀 耪 及 祷 殴 累 寅 旨 臼 诬 臀 挪 囤 惋 淹 咙 敞 轩 躁 磺 悬 撞 灌 剩 票 哇 恒 钠 岳 棱 两 白 斯 古 楞 论 文 答 辩 白 斯 古 楞 论 文 答 辩