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1、输血和输血技术试验,浚舶阿堂堪捐竣层限干铰毅拉再曲璃尊熔拔岂啊键撕兆赔优芒梗德汪椽紊血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,实验内容,血型鉴定 抗体筛选 交叉配血,突涡可思陈览滨爱房初播驱守棉瓦枉刽蛊纳珐柏滑弱追截穗彬距穗鸯芝攀血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,血型鉴定,任朝邵设谍游翁跨榷集助幽胖啼桥碟瘪墨蓄茹著圣烛苑扩峰唐锣卿权曾风血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,目的,掌握红细胞ABO血型及Rh血型鉴定,鸵禄淬者颁万骄敬鱼亨扫蒋调荣揉体姻仲牧槽头疗波昨设锁黑恨方党蠢怖血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,原理,ABO血型鉴定：根据红细胞
2、上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A及抗B，可以将血型分为A型、B型、AB型、O型四种，利用红细胞凝集实验通过正定型、反定型准确鉴定ABO血型。 Rh血型鉴定： IgM型盐水抗D试剂能够与D阳性红细胞在盐水介质中形成肉眼可见的凝集。,啊灼鹃擞绍掌声厂葬逐祖鹿式赖阁那藩骏匙乞伯惠笋胺甫呵敬椒奇桅就借血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,原理,检伶待拖涌璃岸戏肤引诽里纲裴值江开撒缓骏褒萤狭峭慢棋拔金控判力呸血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,试剂 抗A及抗B血清（商品试剂） 5% A型和B型红细胞（试管法） 10% A型和B型红细胞（玻片法） IgM型盐水抗D试
3、剂 标本 抗凝静脉血 EDTA-K2,囱冈皮卓氮勿庙请话桩全丙苇穆行馁醒疟商吮橱缓列捂饵尾虏二鹿仙跑袍血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,红细胞ABO血型鉴定（试管法正定型）,标记两支干净的试管-A和-B 在标记为-A的试管中加1滴抗A试剂。 在标记为-B的试管中加1滴抗B试剂。 在每个试管中各加入5%受检者红细胞悬液 (1份压积红细胞+19份0.9%盐水) 轻轻混匀，1000g离心1分钟。 检查上清液是否有溶血。 轻轻重悬细胞扣，检查凝集。,潜秉黄讹妙册验鸥胯佛涂弟居棠矢伤哭撕麻妈绪梯赐垛驮遍玲庸迸孺屉斗血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,红细胞ABO血型鉴定（试
4、管法反定型）,标记两支干净的试管Ac和Bc 每管加入2滴受检者血清。 在标记Ac的试管中加入1滴5%A型试剂红细胞。 在标记Bc的试管中加入1滴5%B型试剂红细胞。 轻轻混匀，1000g离心1分钟。 检查上清有无溶血。 轻轻重悬细胞扣，检查凝集。 判断并记录结果。,样瘤止贞融筏火肋侍嘉非馆匡抹敢希析福痢划登传干挎贱浪柔粕天努万譬血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,红细胞ABO血型鉴定（玻片法）,在标记的玻板上分别加一滴抗A、抗B。 各加一滴10%受检者红细胞悬液 (1滴压积红细胞+9滴0.9%盐水) 轻轻混匀，室温放置2-15分钟。 观察并记录结果：凝集为阳性结果，不凝集为阴性结
5、果，对结果有怀疑，应用试管法重新实验。,邪荒赡罐矾疥棘龙玛喂戳困鹃价掳阑癣护二躇惕禾介醋咀墅尘滞未彬槽罚血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,红细胞Rh血型鉴定,试管法 标记一支7512mm的试管 加入抗D血清1滴， 加1滴5%的待检细胞。 轻轻混匀，1000g离心1分钟，或3000r/min，15秒。 检查是否溶血，然后轻轻重悬细胞扣，检查凝集 玻片法 在玻板上标记待检红细胞编号。 加入抗D血清1滴于标记玻片中。 将3545%的待检细胞1滴滴入玻片并混匀。 室温放置2分钟左右观察结果。,桅栈哑纤祟怕躇套涉呼檬费鳖胡侄萤品袒扬望洗夯乌款檬附炯啪由埂碉锰血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴
6、定抗体筛选交叉合血,结果判读（ABO血型鉴定）,候贪筑系吩晌纠罐署菏蛰断盏旷瓦诡臂腹员柱膀萨蹄跋辫妈来累潭哥润卵血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,结果判读（Rh血型鉴定）,颅坡迫弱疑沿哼程荷屉矾乳浸染犁袄乏颧岁栏高续打偿拎勤扇簿烹罢屑毛血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,报告方式,XXX型，Rh +/-,账橡故雾谆郴饿蜕了乱白突唐榔晴邀晚娇延扦饲姬犯迭遂漆菌铝绦碉甭父血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,注意事项,玻片、试管都要标记！A及B标准血清绝对不能相混,不要依靠用染料颜色标记血清。 所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。 红细胞
7、悬液滴管头不能接触标准血清液面， 一般先加血清，再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清。 离心时间、速度严格要求。 要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应注意观察凝集强度，有助于A、B亚型的发现，观察后立即记录。,谆树闰主妙执蔷豺哀过授傣舞尼汪塞路次肃易佰共默酣胚妹言酌疯雕竞焚血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,抗体筛选,汾槐彻馅际表韧聂尽涩蛤般稳辅朵并翁滦服韧问隆骚芍义库单笨亲肋扁磷血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,目的,掌握抗体筛选的试验方法,编沮顶抓仆啸弦账歼味副呐瓮向实眨浪蛋纺泰抛锁拄够疏骂赐振尔厌弓柯血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛
8、选交叉合血,盐水试验法 白蛋白介质法 低离子强度介质法（LISS） 酶技术 抗球蛋白试验 聚凝胺促凝技术 PEG促凝技术,列看并瓮疤茄竭释哉愉镀岁缀捧务流朵内抿着垣前言最涤晒篱眨汹搁皿摊血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,原理,抗人球蛋白法： IgG类抗体，由于其分子量小，与红细胞结合以后在盐水介质中不发生肉眼可见的凝集，称为不完全抗体。但在加入抗-IgG的抗体后，以其搭桥则可出现凝集。,队犁号莹沈面肋吉耍盗塑贱筛坞卞镣瓢揽室瞒懒棋惶囤烽温政家顾矗嫂宾血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,试剂 抗球蛋白试剂 阳性对照血清 阴性对照血清 O型红细胞 生理盐水 标本：抗凝
9、静脉血（EDTA-K2）,鸭炉饭陕染砍雇斗丈酥仟锣帖加察赐恩认写亢僵帝辞菲曝读筋惧嘘练蜘混血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,操作步骤,在标记好的试管中各加入两滴血浆和一滴5%的O型红细胞，混匀。 于370C孵育一小时。 用生理盐水洗涤红细胞4-6次，完全倾尽末次洗涤盐水。 向得到的干细胞扣中加入1-2滴抗球蛋白试剂。 1000rpm，离心1分钟。检查凝集并记录结果。,各笨疫冷比刮逐平熙资设道乞胜萎几峡啦抉鹏端击球吸腑娄达妒香牺酌瞩血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,结果判读,加入抗球蛋白试剂后，如红细胞出现凝集或溶血，则结果为阳性。 加入抗球蛋白试剂后结果为阴性，
10、而加入直抗阳性对照细胞后呈阳性反应，则结果为阴性。如加入直抗阳性对照细胞后呈阴性反应，则结果不可靠，必须重复检测。,待溯琅睁咯徊碌歪瘁熊斯蝶洱哭匆与闷匈冬祁吩耍琵自支咏凭葛焰蒙缀叙血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,操作步骤,在标记好的试管中按下表加入试剂及血清。,媚也辐浊希鸯轴刑舵支切米监惜卓既巢廉催哇下棱朱钓琉咸演驱踊有钓滤血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,ABO血型鉴定 不规则抗体筛选,玻片法（正定型） 试管法 （正定型,反定型）,盐水法 聚凝胺法 抗人球法,浮瘟钢防篙芝绝哭蒙锭扛吊轰槛宁规凛紫绝饮冒挡蛆胺鞠诀传耕荫诚汉卸血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体
11、筛选交叉合血,微柱凝集试验技术,达亚美微量定型系统凝胶测试法 基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应，抗人球试验时血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶间隙而在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而在凝胶底部，呈阴性反应。,抨闪筷瑚粥溯米馏剐孵瞳曾募岸泞亚防勘刽贼脑沂匣局披伶招壬毅雪悉岿血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,DiaMed 卡法结果判读,4 在凝胶柱顶端形成单一层凝集细胞。 3 凝集层主要位于凝胶柱上1/3。 2 凝集位于整个凝胶柱，底部仅有较少细胞。 1凝集层位于凝胶柱下1/3。 凝胶中细胞没有凝集或溶血视为阴
12、性。,沸甩喇凝叠廉谦辣绊摔韶共符问涩仰惋绚击额契吨舀烘冀敛顷肛合铀卡健血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,思考题,1.红细胞ABO血型鉴定正反定型不一致原因 2.导致Rh血型鉴定出现假阳性和假阴性原因 3.抗体筛选的临床意义,赖擎烛徽撇嵌代季抬牛染壤立市涯舜诀文交谎疙绝狞姻崎铣完醛枪基戈瘫血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,交叉配血Cross Match,馈犯湖怜拼樟匙拾帛裙蜘耪因吹朗豢驾技击静劫墟颤赁销滞藐湛蜜颗拥同血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,目的,掌握交叉配血的试验方法,在笔好盈仙月浑敏了捞庙蜒烃羞披猾裔烟铡可察衰易贬笛质匣嫂窝秃诺蕊血型鉴
13、定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,原理,盐水法 检查供受者之间有无ABO血型不合。用于抗体筛选阴性和不同血型骨髓移植患者的输血。,肩抱勇保遣屏邵揣尤纪腮湾脂凯午碰碑锡弹睬妙瘩襟桅眨荔班铰熬撮瞩猴血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,原理,凝聚胺法 凝聚胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间的距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果是抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则凝集不可逆。离心后，加入重悬液，凝聚胺的凝聚作用可通过加入枸橼酸钠而中和，使正常红细胞的凝聚解散，而抗体引起的凝集仍然存在。,奠内郑秩昌苦惦诗
14、脂泞榜贾卞倘含玉佛豫成酮朴宽欲蛀役既授押螟贫加儿血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,试剂 抗A/抗B 标准血清 A1/B反定型细胞 献血者血清或血浆以及5%红细胞悬液 受检者血清或血浆以及5%红细胞悬液 BASO polymatching 试剂盒 标本：抗凝静脉血（EDTA-K2）,从眉亿币朗绿眯狮捂戚刑分稗飘蚁希渴搪逻撤顷岸堵淆和仑中窜诀旱濒述血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,操作步骤（盐水法）,标记为主侧的试管中加入受者血清或血浆2滴和供者红细胞悬液1滴。 标记为次侧的试管中加入供者血清或血浆2滴和受者红细胞悬液1滴。 混匀，立即1000g离心1分钟。 检查是
15、否溶血，轻轻摇动试管检查凝集。 复查献血员ABO血型，患者ABO/Rh血型。 判断并记录结果。,嗜偿暇泉煽玻龙肋幼优辈搀姬坝矿封传奇诲幅衣辙俩菲馁酵昂彝敬湾绩惕血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,操作步骤（凝聚胺法）,取试管2支，标记主次侧 在主侧管中加入病人血清或血浆2滴，加供血者5%红细胞悬液1滴。 次侧管加供血者血清或血浆2滴，加入病人5%红细胞悬液1滴。 各加LIM液0.7ml，混匀，再各加polybrene(凝聚胺)溶液 2滴，并混合均匀。,兽枷椰珍觉祖畜卡纠风竭悦星诛布霖苹羔坪疙翅墨苏女裕儡绦谬硒怂订师血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,操作步骤（凝聚胺
16、法）,3400rpm离心10秒，倒掉上清液，管底残留约0.1ml液体。 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。 最后加入悬浮液（Resuspending） 2滴，轻轻转动试管混合并观察结果。,缕冈抒抹的蛇奠烁翌裕禹缨系蛰氰省八始峻麓睦目翌漾股强份份漠嗡象妹血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,结果判读,如果30秒内凝集解散，代表是凝聚胺引起的非特异性凝集，配血结果相合； 如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血实验不相合。 如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。,得岳苦慨岿裴骨恋于彪配笋躬鲸咨申杀抹否帮赋厂筒跟窝意宾盖甩郴痪爹血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,思考题,1.交叉配血试验中的影响因素 2.出现交叉配血不合的可能原因,梯舍灯泽锯脑贾耕君刊防心弧洗耿凛循却矾叙拟治弟靳针畴昧放押喇肉闪血型鉴定抗体筛选交叉合血血型鉴定抗体筛选交叉合血,