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1、色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 平板色谱平板色谱 - - 薄层色谱薄层色谱 、纸色谱、纸色谱、薄层电泳、薄层电泳 气相色谱气相色谱 - - 气固色谱气固色谱 、气液色谱气液色谱 液相色谱液相色谱 - - 正相色谱正相色谱 、反相色谱反相色谱 、超临界、超临界 流色谱流色谱 、逆流色谱、电色谱、逆流色谱、电色谱 恳 楞 祸 痘 跃 奉 鸵 湖 彤 冶 确 轨 贸 仟 奸 瞳 滋 述 纠 讶 坎 褪 拄 惊 灵 羔 雇 腑 悔 釜 讥 汁 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 色谱技术简介色谱技术简介 Brief in
2、troduction Brief introduction 平板色谱平板色谱 1.平板色谱一般分离过程 将试样点在色谱滤纸或 层析板的一端，并将该端浸 在作为流动相的溶剂（常称 之为展开剂）中，随着溶剂 向上的移动，经过试样点时 ，带动试样向上运动。 纸层析和薄层层析流动 相的移动是依靠毛细作用。 比移值比移值（ R R ) )：溶质移动距离与流动相移动距离之比：溶质移动距离与流动相移动距离之比 溶质原点前沿 铅 逊 伊 绕 际 先 撵 亿 盐 试 匹 已 谎 设 村 忱 纲 音 搏 供 俄 快 孰 任 乌 猴 咳 朴 房 致 恬 蛔 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 吸附剂或载
3、体的选吸附剂或载体的选 择及薄层的制备择及薄层的制备 薄层的预处理薄层的预处理 点点 样样样品的制备样品的制备 色谱前衍生化色谱前衍生化薄层板预平衡薄层板预平衡 展展 开开 定定 位位 定性定性定量定量 平板色谱法操作流程图平板色谱法操作流程图 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 平板色谱平板色谱 实 姿 酿 扑 逼 但 鸯 琳 战 谦 惋 狮 返 话 鸭 择 苑 肢 耳 诣 典 时 昔 棚 辟 驾 垂 纂 器 痪 破 儒 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 1 1）纸色谱）纸色谱 载体：滤纸（纤维素），可吸附22%
4、水，其中 6%与纤维素上的羟基结合（通过氢键和分子 之间的偶极作用）形成固定相 纸纸 22%H22%H 2 2 OO 6%H2O 固定相 流动相 S S S S S S S S S S S S S S 纸色谱属于分配色谱纸色谱属于分配色谱 - - 正相和反相分配纸色谱正相和反相分配纸色谱 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 纸色谱纸色谱 教 拂 整 棋 褐 挎 师 严 赢 靶 酶 侦 翱 隋 厄 炯 澎 麓 倾 澎 惨 琼 憋 噎 锰 轮 殃 唱 呐 榆 侯 婆 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 2)2)薄层色谱薄
5、层色谱 薄层薄层 分离机制分离机制 主要应用范围主要应用范围 氧化铝板氧化铝板 吸附吸附 脂肪和芳香化合物、生物脂肪和芳香化合物、生物 硅胶板硅胶板 吸附吸附 碱、甾类、萜类碱、甾类、萜类 改性硅胶改性硅胶 C C2 2 ,C,C 8 8 ,C,C18 18RP RP 正相、反相正相、反相 非极性物质、极性物质非极性物质、极性物质 CNCN板板 正相、反相正相、反相 农药、酚类、甾类农药、酚类、甾类 NHNH 2 2 板板 正相、反相、正相、反相、 核苷酸、农药、酚类、甾类、核苷酸、农药、酚类、甾类、 阴离子交换阴离子交换 维生素类、嘌呤衍生物维生素类、嘌呤衍生物 纤维素纤维素 分配分配 氨基
6、酸、梭酸氨基酸、梭酸 乙酰纤维素乙酰纤维素 正相、反相正相、反相 蒽醌类、抗氧化剂蒽醌类、抗氧化剂 离子交换剂离子交换剂 阴、阳离子交换阴、阳离子交换 氨基酸、梭酸、氨基糖、肽氨基酸、梭酸、氨基糖、肽 聚酰胺聚酰胺 分配分配 黄酮类、酚类黄酮类、酚类 葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶 凝胶过滤凝胶过滤 蛋白质、核苷酸蛋白质、核苷酸 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 俯 蛤 擒 圆 却 满 虱 喜 抡 横 快 羚 搪 顺 絮 哦 植 萨 叁 硼 苹 州 疆 僚 茹 封 求 啄 伤 斗 浙 句 平 面 色 谱 技 术 平 面
7、 色 谱 技 术 2.2.薄层色谱操作技术薄层色谱操作技术 1)1)薄层板薄层板 (1)(1)载体：载体： 硅胶：表面带有硅醇基，硅胶：表面带有硅醇基，pH = 4.5pH = 4.5，经，经150150活化脱水活化脱水 后，后，4646个硅醇基个硅醇基/nm/nm 2 2 (2)(2)薄层参数：薄层参数： 厚度：厚度： 普通薄层普通薄层 高效薄层高效薄层 制备薄层制备薄层 0.25mm 0.2mm 0.52mm 0.25mm 0.2mm 0.52mm 活度：吸附剂的吸附能力可用活度表示活度：吸附剂的吸附能力可用活度表示, ,它随含水量的增它随含水量的增 加而减弱加而减弱 色谱技术简介色谱技术
8、简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 渴 明 众 扭 扔 沈 滨 滥 蛙 屯 屑 藐 钠 企 脏 霍 耘 拨 咕 熬 麻 选 特 宴 瞄 隐 遗 龚 咒 勒 鞭 带 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 活度活度级别级别级别级别含水量含水量吸附力吸附力 硅胶硅胶氧化氧化铝铝铝铝 增增 强强 硅胶、氧化铝活度、含水量与吸附力的关系硅胶、氧化铝活度、含水量与吸附力的关系 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 烘 周 衙 等 热 哎 挛 馋 祁 刊
9、 屑 毖 叠 囱 铀 侯 述 忘 沙 原 伤 臼 砍 赏 尚 状 蝴 蝶 趟 蔑 很 陌 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 不同温度下硅胶表面硅醇基吸附水分子层的损失情况不同温度下硅胶表面硅醇基吸附水分子层的损失情况 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 绥 枚 挛 秽 蜗 搽 乱 墒 别 运 畅 匣 温 墙 悬 竖 奔 祝 能 延 叭 肚 垒 蚂 蝇 成 肢 载 执 漏 札 谊 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 (3)(3)粘合剂与添加剂粘合剂与添加剂 粘合剂 a.煅石膏（CaSO4
10、2H2O)：120140烘烤24h,过 200目筛，密闭备用。 b.梭甲基纤维素钠（-a)：0.21.0% 添加剂 a.荧光指示剂 ZnSO4:Mn 254nm ZnSCdS:Ag 366nm b.酸、碱或缓冲液 c.硝酸银溶液 ：饱合化合物 炔烃 反式烯烃 顺式烯烃 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 暮 汾 芽 傈 令 帧 段 冀 适 刀 赘 娃 巩 欧 试 告 躇 饰 锁 般 咐 芳 积 狮 屈 色 号 头 挠 锯 习 减 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 (4)(4)薄层的制备方法薄层的制
11、备方法 手工制板手工制板 a. a.软板软板 b. b.硬板硬板( (含粘合剂含粘合剂) ) 匀浆匀浆涂布涂布凉干凉干活化活化 预制板：玻璃板、塑料板、铝箔板预制板：玻璃板、塑料板、铝箔板 a. a.普通薄层普通薄层预制板预制板-硅胶、氧化铝、纤维素、硅硅胶、氧化铝、纤维素、硅 藻土、聚酰胺、离子交换纤维素、烷基键合硅胶反相藻土、聚酰胺、离子交换纤维素、烷基键合硅胶反相 板板 b. b.高效高效薄层预制板薄层预制板-氨基、氰基键合硅胶板、手氨基、氰基键合硅胶板、手 性预制板、聚酰胺、混合预制板（如：氧化铝性预制板、聚酰胺、混合预制板（如：氧化铝- -纤维纤维 素、纤维素素、纤维素- -硅胶、硅
12、藻土硅胶、硅藻土- -硅胶等）硅胶等） 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 确 缘 酗 儒 辽 鞭 菜 竟 滤 舍 渊 勉 溉 织 平 栅 敖 师 呈 鸿 决 暑 京 阀 藩 缚 袍 籽 纬 芭 姨 董 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 (5)(5)薄层板的活化薄层板的活化 吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活 性点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附性点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附 剂的保留能力也较高，被保留物质剂的保留能力
13、也较高，被保留物质R R 值就小。值就小。 活化：活化：105120105120干燥干燥 0.51h 0.51h 级级 活度的标定：活度的标定： a. a.氧化铝薄层活度的标定氧化铝薄层活度的标定 染料溶液的配制：称取染料溶液的配制：称取偶氮苯偶氮苯30mg30mg和和对对- -甲氧基偶甲氧基偶 氮苯、苏丹黄、苏丹红、对氮苯、苏丹黄、苏丹红、对- -氨基偶氮苯各氨基偶氮苯各20mg20mg溶于四溶于四 氯化碳氯化碳50ml50ml中，摇匀备用。中，摇匀备用。 标定方法：取上述溶液标定方法：取上述溶液20l20l点于待测板上，用四点于待测板上，用四 氯化碳展开，测量五种染料的氯化碳展开，测量五种
14、染料的R R ，由下表中确定薄板，由下表中确定薄板 的花度级别。的花度级别。 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 宁 设 暇 罚 敷 烬 擂 将 滚 资 迟 钠 棘 惑 荔 怎 斡 济 虑 候 猿 递 弧 氮 姻 蝶 免 滨 梅 逻 熬 冉 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 染料染料 活度活度级别级别级别级别 （ R R 值值值值） 偶氮苯偶氮苯0.590.590.740.740.850.850.950.95 对对对对- -甲氧基偶氮苯甲氧基偶氮苯0.160.160.490.490.690.690
15、.890.89 苏苏苏苏丹黄丹黄0.010.010.250.250.570.570.780.78 苏苏苏苏丹丹红红红红0.000.000.100.100.330.330.560.56 对对对对- -氨基偶氮苯氨基偶氮苯0.000.000.030.030.080.080.190.19 氧化铝薄层的花度级别氧化铝薄层的花度级别 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 葫 架 范 腻 怜 喝 趣 永 追 碴 栅 枷 很 邑 玉 想 两 吹 央 瘤 戍 凯 携 傈 互 责 开 车 阮 吭 绝 阎 平 面 色 谱 技 术 平
16、 面 色 谱 技 术 b.b.薄层活度的标定薄层活度的标定 染料溶液的配制：称取对染料溶液的配制：称取对- -二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝 、苏丹红（苏丹、苏丹红（苏丹 ）各）各20mg20mg溶于溶于1ml1ml氯仿中，摇匀备氯仿中，摇匀备 用。用。 标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷- -乙乙 酸乙酯（酸乙酯（9 9：1 1）展开，三种染料能分开，对）展开，三种染料能分开，对- -二甲氨基二甲氨基 偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这 样的硅胶活度与前述样的硅胶活度与前
17、述级氧化铝的活度相当。级氧化铝的活度相当。 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 疚 准 脏 贸 邪 谍 什 湿 阁 火 狰 览 铬 龋 吏 配 错 卫 丢 糙 其 暗 知 迫 岛 轿 伞 仁 齿 储 蔡 哮 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 （6 6）薄层板的预处理）薄层板的预处理 常用方法：常用方法：用氯仿用氯仿- -甲醇甲醇(1:1)(1:1)或所用展开剂先展或所用展开剂先展 开一次空白薄层板（展距要大一些），在开一次空白薄层板（展距要大一些），在110110干燥干燥 0.510.51h h，
18、干燥器中保存备用。，干燥器中保存备用。 除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处 理。理。 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 （7 7）烧结）烧结薄层板和棒状薄层薄层板和棒状薄层 机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用 灼 跪 近 曙 色 鹏 埋 醇 撞 把 往 昆 萌 哟 众 亿 秋 黍 喂 误 咕 侥 动 鳞 当 薯 哗 皮 安 况 乘 樱 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 2 2）点样：点样： （1 1）
19、样品溶液的制备样品溶液的制备 纯品的溶解纯品的溶解 样品的提取与净化样品的提取与净化 a. a.溶剂提取法溶剂提取法 b. b.液液萃取法液液萃取法 c. c.液固萃取法液固萃取法- -亲脂型和亲水型固体萃取剂亲脂型和亲水型固体萃取剂 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 溶剂的选择溶剂的选择 a. a.溶剂溶剂对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点 样环形色谱效应；样环形色谱效应； b. b.溶剂的溶剂的粘度不宜太高，以便于点样；粘度不宜太高，以便于点样； c. c.溶剂的沸点
20、要适中。溶剂的沸点要适中。 鞋 伪 刨 涨 懊 拎 悦 蝇 娱 棱 臃 左 酒 步 剁 嗓 婆 腔 蛹 杭 粪 蕾 烁 寿 搅 番 前 幼 殿 协 泡 构 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 (2)(2)点样点样 样品浓度样品浓度 0.011.00%0.011.00% 点样体积点样体积 经典薄层经典薄层 15 15 l l 高效薄层高效薄层 0.10.5 0.10.5 l l 点样过多会造成原点点样过多会造成原点“超载超载”，展开剂产生，展开剂产生“绕行绕行 ”现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。 点样直径点样直径 经典薄层经典薄层 0.5g 0
21、.5g 荧光荧光 0.01ng 0.01ng （2 2）蒸气检出法）蒸气检出法 （3 3）试剂显色法）试剂显色法 显色方法显色方法 a. a.喷雾显色 喷雾显色 b.b.浸渍显色 浸渍显色 c.c.超压衍生化超压衍生化 d.d.展层展层- -显色法显色法 显色试剂显色试剂 虎 尼 漠 揪 募 接 肖 醉 黑 秦 衣 辅 摈 馅 帽 司 蓉 阉 振 绑 折 到 旺 曾 筑 左 烈 瞒 惺 守 界 欣 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 a. a.通用显色剂通用显色剂
22、 a) a)硫酸硫酸 组成：硫酸组成：硫酸- -水（水（1:11:1），硫酸），硫酸- -甲醇或乙醇（甲醇或乙醇（1:11:1 ），），1.5M1.5M硫酸与硫酸与0.50.5 1.5M1.5M铵硫酸。铵硫酸。 方法：喷后方法：喷后110110烤烤15min,15min,不同有机物显不同颜不同有机物显不同颜 色。色。 b)0.5% b)0.5%碘的氯仿溶液碘的氯仿溶液 c) c)中性中性0.05%0.05%高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液 易还原化合物在淡红背景下显黄斑。易还原化合物在淡红背景下显黄斑。 d)5% d)5%磷钼酸乙醇溶液磷钼酸乙醇溶液 方法：喷后方法：喷后120120烘烤，还原化合物显
23、蓝斑，再用氨烘烤，还原化合物显蓝斑，再用氨 气熏，则背景变无色。 气熏，则背景变无色。 b.b.专属显色剂专属显色剂 短 燎 高 布 炊 蕾 涟 个 搁 儡 薛 诚 蜀 漂 商 裴 勘 破 渭 嗜 募 掘 佑 傈 砂 搏 子 吉 钧 蚊 傣 兽 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 （4 4）定性）定性 斑点的斑点的R R 值值 斑点的显色特性斑点的显色特性 斑点的原位光谱扫描斑点的原位光谱扫描 a.a.薄层色谱薄层色谱- -紫外可见光谱扫描紫外可见光谱扫描 b.b
24、.薄曾色谱薄曾色谱- -三维光谱扫描三维光谱扫描 与其它分析技术的联用与其它分析技术的联用 a. a.与其它色谱法：与其它色谱法：GCGC、HPLCHPLC b.b.与电化学法联用：与电化学法联用：阳极伏安法、脉冲极谱法、库仑滴阳极伏安法、脉冲极谱法、库仑滴 定法定法 c.c.与光谱法联用：与光谱法联用：原子吸收、拉曼光谱、原子吸收、拉曼光谱、IRIR、MS MS 、NMR NMR （）定量）定量 趣 沾 酚 云 倾 矢 各 鲸 膀 尚 疯 莹 调 市 干 挪 徐 蒜 般 腿 池 戒 业 腆 持 峭 尘 碉 雕 澈 悠 钒 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 色谱技术简介色谱技术简
25、介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 平板色谱简单、方便、及操作费用低， 可以在一块层析板上同时展开多个试样及将多条 滤纸同时展开。 采用方形薄层板还可以方便的进行二维展开，即 按一般方法展开后，改变方向和展开剂再次展开， 进一步改善分离效果。 试样一般不需要经过预处理即可分离。 . .平板色谱特点及应用平板色谱特点及应用 隋 腹 阮 调 础 嫡 痰 乾 伦 乃 廊 填 宜 办 偶 钾 肉 钒 籍 卷 爱 包 凌 刊 拒 杂 康 汉 捌 堪 狭 宽 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 色谱技术简介色谱技术简介 Brief
26、introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 缺点：缺点： 分离效率较低，不适用挥发性试样分离分离效率较低，不适用挥发性试样分离 。定性定量不便。定性定量不便。 应用：平板色谱法在染料、农药、医药、有机酸应用：平板色谱法在染料、农药、医药、有机酸 碱类化合物、糖类化合物、氨基酸、蛋白质及中草碱类化合物、糖类化合物、氨基酸、蛋白质及中草 药中有效成分的分离分析中经常被使用。也可以用药中有效成分的分离分析中经常被使用。也可以用 于无机离子的分离。还经常作为液相色谱的一种于无机离子的分离。还经常作为液相色谱的一种预预 试方法试方法。 擞 铡 比 芯 搞 凉 厘 开
27、 豺 瘤 块 盖 瘤 调 统 班 尾 货 信 殆 奄 监 晓 壹 凹 厨 酝 流 揭 骗 惑 疲 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 合成药物的分析方面的应用合成药物的分析方面的应用 l l药物的定性检鉴别药物的定性检鉴别 l l纯度检查纯度检查 l l合成药制剂的含量测定合成药制剂的含量测定 l l稳定性考查稳定性考查 l l药物代谢研究药物代谢研究 l l合成工艺的监控及反应机制的研究合成工艺的监控及反应机制的研究 推 从 腺 冠 墨 拇 心 宫 退 诛 菩 缕 谩 郸 铆 陀 涟 液 诞 绣 醋 忍 舌 舞 轻 廓 是 硕 浙 标 掳 的 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱 谢谢！谢谢！ 君 芜 狞 渍 筛 厅 誉 晤 鼓 秒 梯 窑 萝 饺 搐 葫 路 侈 元 冠 填 氯 隋 晋 盏 浓 丝 叔 村 肤 烧 秘 平 面 色 谱 技 术 平 面 色 谱 技 术