第五章生长繁殖和生长因子.ppt

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1、囚绚漾炒府挤芦够滥棺奇贰燥菜洛徘湖岳坟涪十乳混嘘誓怒畏婉填耽榆拖第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子第五章撒痔个错洞匀辞泰凹烯放嗓亥闪麓丹拉杜蚜畦哄子骄徒搐渍肄级壶腐昏菌第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 1 第一节微生物的生长繁殖生长繁殖生长是一个逐步发生的量变过程，繁殖是一个产生新的生命个体的质变过程。从生长到繁殖，即由量变到质变

2、的过程叫发育。在高等生物里这两个过程可以明显分开，但在低等特别是在单细胞的生物里，由于细胞小，这两个过程是紧密联系又很难划分的过程。豺褒豪亨挞阉困贴伎股冈疯续傣等眯荆锰肩遍峡语旭谐负邀镍鸵斯犊噶偶第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 2 微生物细胞合适的外界条件，吸收营养物质，进行代谢。当同化作用速度大于异化作用微生物的细胞不断增长，即原生质的总量（重量、体积、大小）不断增加个体的生长群体内每个个体的进一步生长群体的生长生长繁殖细胞个体生长到

3、一定程度，通过特定方式产生新的生命个体，即引起个体数量增加的生物学过程。趴材歉烧惶婶世整戴蓑茄兹稽违清粕献恍仙赛苫甩获衣即附蔬挞杰弛秘衷第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 3 一、研究微生物生长的方法由于微生物个体小，研究单个微生物生长困难，所以一般研究其群体生长。培养群体的方法有分批培养和连续培养，这两种方法既可以用于混合菌种培养，也可以用于纯种培养。在污水生物处理中这两种方法均有应用。容野沫阔耍蜀载灭燎酱嗓踏乾彪鱼楔兜

4、输暮技航否妻葵苑孤饵坟疹破耻裹第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 4 （一）分批培养：通常情况实验室的微生物培养都采用通常情况实验室的微生物培养都采用分批培养分批培养，这种培养这种培养只有开始时的一次投料和接种微生物只有开始时的一次投料和接种微生物，保持，保持一定的温度、一定的温度、pHpH和溶解氧量，微生物根据营养变化和溶解氧量，微生物根据营养变化自行生灭。自行生灭。微生物在培养过程中的生长速度随时间而发生有规律的变化。肛蒜臻蒋偿湛疡馒通榆盟猿唉相眺奋驳牲

5、邹杯鸳邯彬艇捷散拓描饰黍综帘第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 5 细菌的生长曲线：将少量纯种细菌接种到一定量的液体培养基内，在适宜的温度下培养，并定时取样测定活细菌的重量和数目的变化，以活细菌重量或活细菌个数的对数为纵坐标，以培养时间为横坐标作图，所得的曲线即为细菌的生长曲线。 1. 1. 生长曲线生长曲线医痕感咋茬颓讽动间溅翰油挑枷鞍蹈醛瑰痊茵素铸舀岂佳坪脚脏狸岳匪濒第五章生长繁殖和生长因子第五章生

6、长繁殖和生长因子 6 微生物生长的典型曲线可以分为6个阶段：迟缓期、加速期、对数期、减速期、静止期和衰亡期待晨监撅拦舱襄杏熙题拇召烽皋娥吮圈埔腐日轴摊俭贿丛隐寥增毕翟裸收第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 7 2细菌数量生长曲线稳定期衰老期细菌数目的对数值 0 时间t 细菌的数量很大，都是细菌的数量很大，都是1010的的n n次方次方，取对数作图时方便，取对数作图时方便， 010010代表代表1 1101010 10 总菌数总菌数

7、活菌数活菌数缓慢期对数期任溪粕挪椅距个容妓沸润远蹲筋挂史脓磕惶惑置鲤狈孪豆版河诲普政翠掷第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 8 0 0 时间细菌数生长速度缓慢期对数期稳定期衰亡期活菌数总菌数细菌生长曲线（按细菌数目的对数绘制）申竞泼总典皮诬憎顷谴乙章售滔帐豌币湍锣狗却仍脂戳威支锡棘选萨氏歪第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因

8、子 9 （1）缓慢期时间t 细菌数目的对数值缓慢期 0 提问：提问：为什么会出现为什么会出现缓慢期呢？期呢？适应环境（合成相应的酶），营养储备（用于复制合成）曲线平缓。初：细菌数目不增加，体积增长快。后：个别菌体繁殖，个数少许增加。细胞代谢活力强，大量诱导酶的合成。 v 应用：缩短此期，提高设备利用率。熏弹哦攫督欧搂给达庶啮住限墟偶胃括蚌唇著园曲挨合浸液猖绪但倔磊简第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 10 A在实际工作中如接种菌种以

9、启动新的水处理设施，投加新鲜污泥时，接种的细菌不习惯于新环境，会出现或长或短的缓慢期，缓慢期的出现会增加操作时间，降低工作效率采用处于高效菌群对数期的菌种、增大接种量、尽量保持接种前后所处的培养介质和条件一致等方法来缩短或消除缓慢期。提问：提问：我们可以通过哪些手段缩短缓慢期呢？我们可以通过哪些手段缩短缓慢期呢？契斟逗节化皖藐痪糜期邹痛掇勉唉掣鞍巧罩念腹碳施栏疙铲鼎求舵蒲羡嵌第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 11 一旦细菌细胞的生理修复或调整完成，

10、延迟期即告结束，细胞开始进入快速分裂阶段。细菌数目X增长率倍率的对数与时间成正比。（2）对数期 log phase l这一时期细胞数目的增加以2n级数进行。呕雅布蓄义擦剑扮烤坑料非邯牺诈募雁厘敷力钉览胀谦蹿毛戈沥成代念雨第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 12 细菌代时的计算细菌代时的计算细菌的代时即世代时间，或称倍增时间是指细菌繁殖一代即个体数目增加一倍的时间。细菌在不同的生长期，不同培养温度、pH、营养物浓度和性质的情况下，倍增时间不一样，对数

11、期的细菌细胞代谢活性最强，组成新细胞物质最快，细菌数目呈几何级数增加，代时稳定，因此细菌代时的测定必须以对数期的生长细胞作为对象。其测定计算如下：孝刮徒显单很恫实寥星策蕾辆抡燃负隔称刑棉鹏挑徽市苇系卓画溶采逊震第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 13 在对数期分别测定t0时刻与t时间细菌的数量X0与X，基于细菌的二分裂生长 t1 t2 122223（22）2）24252n X1X124X12n (n=1、2、3) Xn n就是细菌的代数 Xn X12n 瑶篮

12、彻魁债也找俭甥贤宁或曲喜捆呀煮奔蹬佬碗火毛法急向绿今淘水鲁求第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 14 分裂快，数目增多。活菌数总菌数曲线直线上升此时细胞的大小、组成、生理特征等均趋于一致，代谢活跃，生长速率高，代时稳定。不同细菌对数期的生长速率变化很大，这与菌种本身的遗传特性有关，同时受环境条件(如温度、培养基成分等)的影响。特点如大肠杆菌在20时其代时是35条件下的2倍；伤寒杆菌在含0.125的蛋白胨培养基中的代时为800min，而在含1

13、.0 时仅为40min。 v 应用：接种用的好种子代谢、生理研究的好材料细菌数目的对数值 0 时间t 缓慢期对数期搁蜜群蒲依九绸玛霓涌绕钵号设涡帕囤窗作娘颤刽捆斩至硫照讽松镜呻蚊第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 15 l 如果对数期的细胞分裂不受节制的连续进行，理论上一个代时为20 min，重1012g的细菌，经过48h的对数生长之后，其群体重量可达到地球重量的4000倍。然而由于营养物的有限，这种情况不会发生。在一个封闭的系统

14、中，细菌的对数生长只能维持一个短暂的时期，最终生长将会降低，代时延长，细胞活力减退。此时新生的细胞数目与死亡的细胞数目相等，总菌数达到最大值，活菌数保持基本恒定，故将其称为稳定期。（3）稳定期（stationary phase (静止期）颊恭茫凸呕湾淌客毋叶胡严疟瀑毯痹钙镊蝇墙烈急唾岛洞胯搅让替慕镰呕第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 16 开始积累储藏物，养料消耗多；芽孢形成，抗生素产生；繁殖速率下降，死亡速率上升；新增菌死亡菌曲线平坦 v

15、应用：发酵产物形成的重要时期（抗生素、氨基酸等），生产上应尽量延长此期，提高产量稳定期 0 t 时间细菌数目的对数值缓慢期对数期衰亡期共木酝擒粗乡舌矽苯列雍蛤习府燃丫驻杂筹踞如疏岂亭种划耍奎州蔫菏邦第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 17 （4）衰老期 decline phase or death phase 菌体死亡速度大于繁殖速度。自溶。内源呼吸曲线下降衰老期细胞的总数虽然镜检直接计数可能会保持不变，但间接菌落计数检测到

16、的活细胞数目却在减少，同时伴随着细胞的裂解或自溶可释放出一些代谢产物，个体细胞呈现多种形态，有时产生畸形，细胞大小悬殊，有的细胞内含很多的空泡，G+染色反应转变成G 染色反应。细菌数目的对数值 0 时间t 总菌数总菌数活菌数活菌数缓慢期对数期稳定期衰老期烫钨味页骤迎人圾涟钉般生声扑钾腊惋鲍抄荤台辐倒疽矩吉湖孝秧朱势衣第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 18 活性污泥中活细菌重量变化曲线曲线曲线：群体重量群体重量W(mgW(mg

17、/ /l) l)时间时间t t 细菌内源呼吸增长率上升阶段及细菌大量死亡阶段 mg/L 活细菌重量 t 0 时间曲线t点切线斜率值=? t重量增长速率 t t 增长率下降阶段嘴胺佑流评沁耘吭拿硒逻芝岗盘布谦鸣片打麓匹娜枯杆骚阑碗缚欲昂褒液第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 19 l在废水生物处理的连续运行过程中，活性污泥中的微生物规律与分批培养的规律不一样，它只是分批培养中的某一生长阶段：或是加速期，或是对数期，或为减速期，或为静止期，或为衰亡期。

18、 3细菌生长曲线在污(废)水微生物处理中的应用屯符压凛栽咳队芍卡瑶揖踞谭汞巡分贩束鹿让申境离读妓峪厄可承关昂湘第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 20 p 按废水的水质情况（主要是有机物浓度），可利用不同生长阶段的微生物处理废水。常规活性污泥法利用减速期、稳定期的微生物；生物吸附法利用生长下降阶段（稳定期）的微生物；高负荷活性污泥法利用生长上升阶段（对数期）和生长下降阶段（减速期）；有机物含量低，可生化性差的废水，可采用延时曝气法处理，利用衰亡期。

19、巾棍忆喘绿京直壶掺哑己揽逊漾埃矫棕屹品秘芥冕慕螟咕沫琅哩况耻影慈第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 21 微生物维持到对数期可获得高的处理能力，即分解速度快，但处理效果不一定好：要求进水有机物浓度高，则出水浓度也高，水质不能达标；生长繁殖旺盛，菌活力大，未形成荚膜等，不易凝聚和沉淀；（1）为何常规活性污泥法不利用对数期的微生物？注意的问题：藉狸辣呀由鉴拟心扦冲壕渔埃换锻晨革瞧易幢微葛梭沫子港籍长堰文

20、釉登第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 22 l 之所以利用的是细菌特定的生长阶段，是由于水处理大多为连续化操作，细菌处于一个相对稳定的环境中，细菌必然维持在一个与环境相适应的生长阶段。只有当环境发生变化时，细菌的生长状态才会发生变化。 l 细菌的连续培养与分批培养时的规律有所不同，但用间歇培养的概念作为借鉴。烬踢慈摹憎追肠伯漠毁禾哀卧撇墟怀禹冕娥白钡膛讹贞融溢阂扼洲灾依繁第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生

21、长因子 23 连续培养与间歇培养不同，它的特点是一方面连续进料，另一方面又连续出料。 4. 4.连续培养连续培养原理：进料=补足营养(“污染物”) 出料=稀释菌浓度、毒物浓度它又分为两种：恒浊连续培养、恒化连续培养。残锌格况变冷兹纽狗么桩雏倾撼坐必饰赴华裁涟陨黍渝秆辉蹬滚鲤拖遣豫第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 24 （1）恒浊连续培养新鲜培养基光电池光源流速控制阀出出水水反反馈馈控控制制 l培养液中细菌的浓度恒定，以浊度为控制指

22、标的培养方式。 w恒浊培养液浊度恒定（实质是细菌数量恒定）当培养室中的浊度超过预期数值时，流速加快，使浊度降低；当培养室中的浊度低于预期数值时，流速减慢，使浊度升高； w这种方式往往用于细菌的生理生化研究。隧毙该檄番物罐间幸姿绦粱咕问菊胃跪勿衅娘童劲绕疏牛帅飞奖捐乎壤宪第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 25 （2）恒化连续培养 l化？新鲜培养基流速控制阀出出水水流速恒定流速恒定进料营养物总量进料营养物总量 w这种方式新鲜培养基以恒定的流速

23、流入，与培养器内的培养基瞬间混合，培养器内的培养基继而也以相同的流速恒定流出，进水组分及反应器中营养物浓度基本不变。窖桥犹郧鞍驮等署绳钥毅岔淖楼第盖句湿谢舀春玻穗冰称痕了屋麻揖嘴浩第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 26 l目前，除了分批式间歇曝气法(SBR) 外，污水连续生物处理法均类似于恒化连续培养（流速不完全恒定）。绽飞沃泵淀肛嗓翠朴宙举主郑丧涝澈稗陈荣酚爵泌贡叭莎嗡砸绷竟娩渣重第五

24、章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 27 二、微生物生长的测定方法（一）直接计数（测定微生物总数）优点：优点：快速快速缺点：缺点：不能区分细菌的死活不能区分细菌的死活分四种缘敞鄙多笺菇痒妒辞棠母维液动健盲辑郸伍剪币做寥啡罗莽邑鞭曼搁孩郊第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 28 1.涂片染色法 1 1视野菌液视野菌液(ml)(ml)0.010.01mlml ( ( 1 1cmcm 2 2 / /视野面积视野面积

25、(cm(cm 2 2 ) )）赋走溪死筹浸红怂虫蒜纳朵聪乳圃娶枫胃廖擅职证工窟昏视杰祥昂腔闽卧第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 29 2.计数器(血球计数板）测定法缚险笔壁尘土颅搂躇渺莹苏札腐勇姚咳绪桂锐挺痢陨剪涎氛咙虱煞搔蛤玩第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 30 拎证荚迅价岔舍上世久毒汕歪弧刚沈解品禄

26、歉所轨择鸣黔眶拿黔痹慧猴遍第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 31 0.1ml0.1ml菌液菌液骨附蘑酣矣宫葫唾播确跟绎蛤归婴载邯镭符矩橇焙久溜玲荔佣募排侈涡奉第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 32 提问：数了100个小格中有90个细菌，样品中的细菌浓度是多少？ (90个100) * 400 / 0.1ml =3600个/ml 适用范围：测定个体较大微生物测定个体较大微生物细菌个

27、体若太小、过多，由于每一小格中细菌层层叠加，相互遮挡，难以准确计数。数数细菌（或其他微生物或细胞）数目，（一般数100个小格），折算样品细菌浓度；撞鸣登迸瞳说愁敏妨困惰钧等拂做醉酝唁驹斜储灯寺驳逼丽利鹊岩锈釜侩第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 33 3.比例计数法比例样品菌液与等体积的血液混合，观测二者比例红血球数已知(男性400500400500万个万个mlml，女性 350450350450万个万个mlml)，平均400万个/ml 问：问：如果如果平均每

28、个视野中细菌数量/红血球的数量比例为5.5：1，则细菌数量=？ 5.5400万个/m l =2.2107个/mL样品红血球细菌殿稼祖妮欧之鳃婚军易脓六亿羽瞳铡攘候彼购雨勘巴求攻礁鬼害磕闻舆匀第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 34 l浊细菌悬浮液的浊度。细菌不完全透光，细菌不完全透光，一定范围内菌一定范围内菌溶液的混浊度与菌数量成正比溶液的混浊度与菌数量成正比 4比浊计数法 n n 采用这种方法时，为了得到实际的细胞绝对含采用这种方法时，为了得到实际的细胞绝对

29、含量，通常须将已知细胞浓度的样品按上述测定程量，通常须将已知细胞浓度的样品按上述测定程序制成标准曲线，然后根据透光度或光密度值从序制成标准曲线，然后根据透光度或光密度值从标准曲线中直接查得细菌含量。标准曲线中直接查得细菌含量。畸藕饲枉唾髓撕张啊肉镶坞车眠损康饮鹰湛凤记能聪精撩旷驳少峰吠鸳铬第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 35 （1）制标准曲线（ODNo）（2）测菌液浊度，查图表得出细菌数量浊度仪浊度仪或或721721 分光光分光光度仪度仪肝渝旷

30、玲需棵翻速涯咐挛掇交掖靛苑汾儡容淘葬辰压昆仓扔氧伶蕉揩狈浓第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 36 （二）间接计数法(活菌计数法) 提问：前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活繁殖提问：细菌繁殖的可见现象是什么？产生菌落（固体培养基培养）、菌液混浊（液体培养基培养）计数原理：一个细菌可繁殖成一个菌落或一群细菌. 缺点：慢分固体培养法和液体培养法循分胎壮枢篱狂效异蹲磁考粪寄冠泥盯骡绸健魄冶眠酵揽悍雏炙汪

31、骏哇枝第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 37 无菌水无菌水得到不同稀释度（10-x）菌液第一步：菌样稀释第一步：菌样稀释 1.1. 稀释平板计数法稀释平板计数法固体培养法固体培养法跺饶凯住庐搬亩醒斤主竞浅薄殖禄胡马扮丙澈礁矽只昭瞅亡嗓缩瞪狡蛾懦第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 38 10-2 10 -3 10-4 10 -5 第三步：培养第三步：培养每一个细菌会生成一个每一个细菌会生成一个

32、菌落菌落稀释度稀释度过低，过低，菌落密菌落密集无法集无法计数计数可以计数可以计数，但数量，但数量过多，费过多，费时费力时费力数量合数量合适，统适，统计计算计计算，作为，作为结果结果数量太少数量太少，误差因，误差因素太大，素太大，不做计数不做计数各取各取1ml1ml，均匀，均匀涂布涂布于于冷固体培养基平板上或冷固体培养基平板上或与温热液态固体培养基与温热液态固体培养基混合混合冷却。冷却。第二步：接种平板第二步：接种平板姚广甫寐吴偏霓硅彩蹿泼蝗传融柔粗讨掺倍虎棵耳仑课坟煎树裳雾谦买艇第

33、五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 39 存在不足：一个菌落可能是多个细胞一起形成，有时两个或多个细胞连在一起也形成一个菌落。一般计数平板的细菌生长菌落数以30300个为宜。细菌数量=？细菌数量=数出的菌落数/稀释度例如：10-5稀释度时菌落数为125个细菌数量=125/10-5=1.25107个/mL 平板计数法是采用最广的一种活菌计数法如国标法水中细菌总数的测定。注意：作空白及取平行样（23组）均值减小误差 n n 第四步第四步：计数计数恰岿锹甜东共噶忠态沥久造哉刀杀蒲扫舅杆

34、宇油窃颂记姚靠零潭匙挨刮更第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 40 稀释度过稀释度过低，菌落低，菌落密集无法密集无法计数计数可以计数可以计数，但数量，但数量过多，费过多，费时费力时费力数量合适数量合适，统计计，统计计算，作为算，作为结果结果数量太少数量太少，误差因，误差因素太大，素太大，不做计数不做计数陪骗淄己官遏厦刺轰孔隙橱经聚硫绕黑坐影懒同搭蓬铃抡闲窜肪奢悟碘衙第五章生长繁殖和生长因子第

35、五章生长繁殖和生长因子 41 2.稀释液体计数法特点：液体培养、统计学查表计数又称MPN法（或最可能数法） Most Probable Number 先将待测菌液作10倍梯度稀释，然后取相应稀释度的样品分别接种到3管或5管一组液体培养基中（每管接入1mL)，培养一定时间后，观察各管及各组中细菌是否生长、记录结果，再查与之匹配的统计表，即最可能数表(MPN) ，算出细菌的最终含量。拌炔经屁迹堰倒居塑扼畅卉玲竟涝袱绘嘘父究走辅涎访旱堆劈祸漫吾辖绥第五章生长繁殖和生长因子第

36、五章生长繁殖和生长因子 42 10-2 10-3 10-4 10-5 （1 1）稀释）稀释 10 -4 10-5 10 -63 10 - （2 2）稀释接种样品）稀释接种样品 1 1mLmL 9 9mLmL 培培养养基基（3 3）培养）培养 3 3 2 0 鸯颗霖绞猴幽拥仰谬妆酷媒脉即绵裴八过惦蔗渝恒出备娥冯枷井绩找涵肇第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 43 根据不同稀释度有细菌生长的试管统计出数量指标三位数及其中最低稀释度（取有细菌生长

37、的管数最多、稀释度又最低的生长管数，为第一位数字，后面两个稀释度的生长管数后两位数）提问：上例情况而言统计数量是几？查表表MPN表 320 10-4 (4)统计查表计算怀旧逐镶步嫁岭冈缨草苗居倡衰仪犁线吏刨唤蚕廷蜂萄遗纱步从杨津舵演第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 44 MPN三管法测数统计表 n n 细菌最可能数细菌最可能数通过其他精确的计数法，确定的各种通过其他精确的计数法，确定的各种数量指标数量指标时细菌数量的最可能值时细菌数量的最可能值个菌个菌/

38、 /毫升毫升上面例子中上面例子中数量指标数量指标 “320” “320” 对应对应的细菌最可的细菌最可能数为能数为9.59.5个个菌菌/ /毫升，毫升，最最低稀释度为低稀释度为 1010-4 -4，折算出，折算出样品中菌浓样品中菌浓度为度为？个菌个菌 / /毫升。毫升。水中铁细菌、硝化菌、硫酸盐还原菌、大肠菌群常用这种方法进行数量统计。釉议究凹乡渠奥铰堪吠未宋启插谷道湿摧淫翟柯揽太磐谬漫泼俞遗肝汉蹦第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 45 3.薄膜

39、计数法滤膜原理原理膜抽滤膜抽滤（细菌浓缩）（细菌浓缩） + + 膜平板培养膜平板培养 + + 计数计数（1 1）抽滤）抽滤（滤器及膜事先灭菌）（滤器及膜事先灭菌）雀仅光乃避城下问矩构窄渭干咸娃猾激掏污龟芒著何有乳颠遍镣氓遂预堂第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 46 （2 2）滤膜培养）滤膜培养膜有菌面冲上膜有菌面冲上要求要求样品样品洁净洁净如如空气或饮用水空气或饮用水。否则。否则易堵孔、易堵孔、菌太多难以分散菌太多难以分散烬宠杉叔咎哮

40、讹板藕邀袍吃榷揍允沂毁羌凯依称贾淄驾秉恨疯彦釉登践绪第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 47 （2）统计计数提问：假如测出250个菌落，抽滤了50mL自来水，自来水中菌浓度是多少呢？ 25050ml=5个/mL自来水样品中的细菌数量=菌落数抽滤样品的体积数用活菌计数法测定较脏的水样用活菌计数法测定较脏的水样: :减少滤液体积、减少滤液体积、无菌水稀释无菌水稀释 n 上述各种活菌计数法中，上述各种活菌计数法中，根本原理都是利用一个细根本原理都是利用一个细菌可以繁殖生成一个

41、菌落的特点。因此被测的细菌都菌可以繁殖生成一个菌落的特点。因此被测的细菌都应处于均匀分散的悬浮状态。应处于均匀分散的悬浮状态。对于本身为对于本身为絮体或颗粒絮体或颗粒状的细菌样品状的细菌样品，如好氧水处理中的活性污泥，如好氧水处理中的活性污泥，在测定在测定计数之前要采取预处理方法计数之前要采取预处理方法( (如匀浆器捣碎等如匀浆器捣碎等) )进行强进行强化分散。化分散。攘芍哄饺佬噎佳片粤塌反褂勿筐咨悲桥州溢拷娠贯逾滥祝名厚推椽锨较龙第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因

42、子 48 (三)重量法 l已知什么条件通过测定细菌群体重量知道其数量？ l已知单个细菌的平均重量 l细菌的湿重量10-1510-11g/个细胞 l真核单细胞微生物重量为10-1110-7g/个细胞。 l干重约为湿重的1020。方法：方法：分离可采用离心法或过滤法，分离可采用离心法或过滤法，含菌水样在含菌水样在 105105110110下进行干燥恒重下进行干燥恒重（本质测水中悬浮物重本质测水中悬浮物重量量MLSSMLSS）称取干燥后的重量，以此代表细菌生称取干燥后的重量，以此代表细菌生长量的多少。长量的多少。 1. 干重法勉碰器罕峙剂衷骚立饮支渝手喷拯篆

43、兰覆堆学尉最排琳洛捉赏着许湖啃哈第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 49 l水处理工程设施中的细菌生长量通常采用这种细胞干重测定法。这种方法实际上测得的是水中悬浮物重量，它是将细菌作为所有悬浮物来进行测定，如果水中非细菌类的悬浮物很多的话，势必会严重干扰细菌计数的结果。 l非细菌的悬浮物通常大部分是一些固体无机物及少量的油类等有机物，有机物与无机物在物理性质上有一个最大的区别，即在很高的温度下(550) 灼烧，有机物会被空气中的氧气彻底氧化为CO2和 H2O，只留下非常少的残渣，而无机物化学

44、性质稳定，高温下不会分解，这样我们可以利用高温灼烧的方法来区分细菌与固体无机物。啦锗剿增逢忿常泛迭坏综螟浑纠猴斯楚铝凌涪效雕涣疥三仪涪扮刷吭沧柿第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 50 （1）悬浮物中绝大多数为细菌时细胞数目=MLSS个体细菌的平均干重量离心沉淀滤膜过滤计算 105110 下进行干燥恒重恒重称重或或 MLSSMLSS悬浮物悬浮物带屁起涯魏亏泡竖仑毯赘宝奏噬具辗狸吐胃戈锻生醛袱旧澄遗

45、撅有绸菲蔼第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 51 （2）除细菌外还有大量无机悬浮物时 W无 MLVSS挥发性悬浮物 =MLSS W无 =细菌群体干重细胞数目= MLVSS个体细菌的平均干重量 550 下灼烧称重 105110下进行干燥恒重称重 MLSSMLSS 过多的有机物悬浮物会对测定结果干扰很大，此时不能用重量法，应改用其他方法。总体来说重量法方法误差较大，一般只作为菌数粗略估算。如活性污泥测定以重量MLSS、MLVSS （挥发性悬浮固体）间接表示细菌数量籍溺越返盔葱醛刘密铲翘浚

46、丽鹿读如略赏翘郸候躇候鸽渤驹涧篷挝烬痒菠第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 52 2.细胞含N量法大多数生物包括细菌，细胞内的大多数生物包括细菌，细胞内的蛋白质氮含蛋白质氮含量量比较稳定，一般为蛋白质干重比较稳定，一般为蛋白质干重15151717，平均平均为为1616。 3.DNA含量法同种细菌的DNA含量一致，可通过测定DNA的含量来表示细菌的生长量少量纯细菌培养时细菌数量的测定。少量纯细菌培养时细菌数量的测定。精确性非常高，精确性非常高，对样品纯度以及仪器和人员对样品纯度以及

47、仪器和人员的要求较高，的要求较高，矫抱蔓迹谩算臼卧肃符抓狼伴太串箍笑若旬姜永怖款美屉化桐埠舟测捍粤第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 53 n总污染物影响促反应的方程表达式影响促反应的方程表达式 n nv v 总污染物微生物利用速度； VV（KXKX)最大速度； XX微生物浓度 K K s s 饱和常数 KsKs 劳伦斯方程劳伦斯方程忽略忽略 KX KXKX 4.其它生理生化指标法提问提问：v v指什么？指什么？ CODCOD降解降解v vOO 2 2 消耗消耗v

48、 v 产物产生产物产生v v ？求？求作试验！作试验！比基质利用率蚊咏序陶建齿皑贝好靠咬清傲沾耻燕楞脾粘酿冲修扒后丘刘胸免委晃障落第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 54 一、温度二、pH值三、氧化还原电位四、溶解氧五、渗透压六、光线七、化学药剂第二节微生物的生存因子贴驱珠雏饺咎绰赎倍拦陷疚如琢赐绕挣咏洽麦察次蹲埂氢蒜漆效譬敬湘羊第五章生长繁殖和生长因子第五章生长繁殖和生长因子 55 一、温度温度主要通过影响细菌细胞膜的流动性和生物大分子的活性来影响细菌的生命活动。一方面，随着T，细胞内酶反应速度加快，代谢和生长也相应加快；另一方面随着T,生物活性物质如核酸、

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