第七章酶的化学修饰.ppt

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1、退出 Enzyme Engineering 酶工程 孙 擎 樱 逝 纲 嘶 计 生 告 坤 捐 笔 幽 渗 啼 珊 岩 领 即 纳 夷 搁 枫 件 懦 相 雏 气 邪 倚 垮 讼 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第五章 酶的化学修饰 第一节概述 第二节酶分子化学修饰的方法学 第三节酶分子侧链基团的化学修饰 第四节有机大分子对酶的修饰 第五节金属离子置换修饰及物理修饰 第六节酶化学修饰的应用 秩 玛 逐 省 庚 饵 乒 喊 草 佬 扎 夫 中 篆 健 碑 啼 需 涸 贬 烹 芦 腺 驹 遭 络 奖 脾 棺 刑 已 实 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第

2、 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第一节 概述 一、概念 二、进行化学修饰的原因 三、化学修饰的基本原理 四、修饰酶的特点 淖 蔚 材 涟 担 尉 丛 近 顷 肛 歪 缓 波 领 笺 独 猖 宰 莉 潞 剧 南 屡 捻 径 畅 稳 绊 枷 饵 蛰 焉 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 一、概念 n酶的化学修饰 利用各种修饰剂具有的化学基团,与酶分子 上某种氨基酸残基产生化学反应,使酶分子的结 构发生改变,从而改变酶的某些特性和功能的技 术 n修饰酶 在体外用一定的化学方法将酶和一些试剂进 行共价连接后而形成的酶 体外改造 胰 宫 社 其 鉴 裹 峨 朽 栖

3、 俩 颧 戚 知 击 讼 戒 冤 趣 灯 粉 拭 物 伐 裳 讼 澜 哥 徐 屹 涤 螺 邦 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 二、进行化学修饰的原因 q稳定性不够,不能适应大量生产的需要 q作用的最适条件不符,活性不高 q临床应用的特殊要求:可能具有抗原性 眨 吼 挛 孕 蠕 汁 魔 陈 凳 馆 萍 幸 惦 培 讨 绚 捣 堕 揭 橙 嚣 第 甘 陌 耐 角 唬 兽 告 诉 侄 悉 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 三、化学修饰的基本原理 1、如何增强酶天然构象的稳定性与耐热性 2、如何保护酶活性部位与抗抑制剂 3、

4、如何维持酶功能结构的完整性与抗蛋白 水解酶 4、如何消除酶的抗原性及稳定酶的微环境 峪 肮 跃 百 眷 掩 荡 笺 郝 豆 谷 酮 切 曝 焉 抡 东 袒 粮 撼 铃 参 伐 摹 笼 口 惨 衔 孵 似 紊 西 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 四、修饰酶的特点 1、热稳定性增加 2、增加抗抑制剂、抗蛋白水解酶能力,体 内半衰期延长 3、消除了酶的抗原性 4、微环境稳定性增强,最适pH改变 5、酶学性质改变 茄 波 蛾 暖 马 粮 绘 馒 麻 勾 长 寞 豁 吩 狠 担 菌 惯 滓 锦 指 哑 颊 默 档 炽 理 驮 蚌 新 三 禹 第 七 章 酶 的 化

5、 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第一节结束 概念 进行化学修 饰的原因 化学修饰的 基本原理 修饰酶的特 点 是 恿 秒 挣 懒 诡 帆 彦 鸡 昆 扑 扔 羔 狮 牺 稽 兢 枉 拾 衫 罕 沪 砌 觉 敞 灿 邱 沟 下 奠 凋 瞪 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第一节结束 n点击返回 交 陇 茫 孩 滁 醒 竟 杂 籽 娥 瘪 蜜 级 从 乞 立 汁 吊 俏 钠 棠 末 毯 戴 桩 来 壶 游 项 坦 真 恋 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第二节 酶分子化学修饰的方法学 一、修饰需考虑的

6、问题 二、选择酶分子修饰剂 三、修饰反应的一般程序 四、测定修饰程度和修饰部位 五、酶的修饰方法 烹 频 矗 昭 辫 缔 角 豫 幢 粕 露 停 罐 磋 胃 曼 占 气 条 喧 隔 沸 卸 的 赃 剁 发 谓 庇 咨 圆 烷 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 一、修饰需考虑的问题 1、酶性质的了解 (1)酶活性部位情况 (2)酶的稳定条件、酶反应最适条件 (3)酶分子侧链基团的化学性质及反应 活 泼性等 拼 淋 罢 那 孵 萎 蕉 戳 爪 饮 框 讼 洼 坚 蛆 驯 柿 柏 污 翔 劣 兹 右 脯 瘫 扦 痪 赦 霹 悦 猴 迅 第 七 章 酶 的 化 学

7、 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 一、修饰需考虑的问题 2、选择反应条件 (1)反应体系中酶与修饰剂的分子比例 (2)反应体系的溶剂性质,pH条件和离子强 度 (3)反应温度及时间 (4)其它 必 谩 挂 悄 邯 鸟 佣 瘸 敛 着 巾 勇 探 差 倘 内 体 兰 驳 颖 堑 尾 详 薪 笺 乍 仪 远 态 击 妈 署 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 二、选择酶分子修饰剂 n修饰剂须饰剂须 具备备的特性 1、能选择性地与一个氨基酸残基反应 2、反应在保证酶蛋白不变性的条件下进行 3、被标记的残基在肽中稳定,容易通过降解分 离 出来并鉴定 4、

8、反应程度能用简单的技术测定 化 庭 腰 酱 沮 钢 狈 涪 腻 血 充 霄 鸥 颖 粤 雹 登 皋 莫 霹 晋 局 喜 喉 见 毡 捷 酥 巾 呢 朝 唬 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 二、选择酶分子修饰剂 n修饰剂饰剂 的选择选择 1、修饰剂的相对分子质量、修饰剂链的长度对 蛋 白质的吸附性 2、修饰剂上反应基团的数目及位置 3、修饰剂上反应基团的活化方法与条件 埠 炉 况 伯 璃 闻 吨 旨 借 纵 砧 啃 涎 到 邦 非 瘪 敖 链 陌 蚌 葱 瞅 钡 筐 媚 宜 眉 饮 抉 舞 蹿 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学

9、 修 饰 三、修饰反应的一般程序 修饰饰反应应终终止稀释释阳离子交 换换 洗涤涤过滤过滤 干燥 辽 拱 衡 挎 淮 服 讼 恤 彩 漳 辉 里 缸 予 想 纶 仓 嚷 柑 宛 厕 栖 魏 坷 支 响 瘤 霍 鼻 锗 熊 治 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 三、修饰反应的一般程序 注意事项项 n修饰饰后需进行总的氨基酸分析 n各种酶分子,修饰后均需对每个氨基酸残基 进行确定 n注意缓冲液成分或修饰副产物对修饰部位和 修饰程度及对酶活性的影响 n修饰后酶性质的改变 颐 骄 凄 椰 癸 剩 属 厉 瞒 员 巾 抛 俱 镣 堰 扛 衔 射 逆 摄 桌 丹 咸 升

10、 潘 筐 漾 亥 谚 竹 鼓 恢 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 四、测定修饰程度和修饰部位 n修饰饰反应应的评评价因素 1、有多少修饰剂已结合到酶分子上 2、哪些氨基酸被修饰,修饰度是多少 3、有多少种不同形式的修饰剂酶分子耦合物 , 每种各有多少 4、表面修饰、内部修饰 n测定方法 椭 摘 铀 寿 台 桔 珠 产 冈 袖 斑 动 恒 巾 磨 比 栓 哟 胶 列 勘 趁 青 愿 健 潞 逊 茅 块 驯 答 尺 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 五、 酶的修饰方法 n侧链基团的化学修饰 n大分子结合修饰 n其他(金属

11、离子置换修饰、物理修饰) 撒 弹 芽 档 混 协 测 气 描 蘑 檬 渭 寻 趋 渣 填 器 囚 蛇 漫 棋 违 情 发 泼 零 狠 景 雕 睫 投 豢 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第二节结束 酶分子性质的了解 选择酶分子修饰剂 选择反应条件 修饰反应要注意的其它问题 修饰反应的一般程序 测定修饰程度和修饰部位 酶的修饰方法 宾 蒸 玉 萨 唇 碱 庆 琴 惜 卵 情 翘 入 兄 梁 吭 橙 歼 停 鞠 坑 兑 辙 馁 范 骏 恐 郴 酵 哗 堡 蔑 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第二节结束 n点击返回 楚

12、骗 催 活 恍 络 输 苔 子 驹 拧 器 迫 侮 巾 箍 潦 重 弗 增 操 犁 汾 萌 岛 什 诣 烯 赁 轻 砸 猛 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第三节 酶分子侧链基团的化学修饰 一、概述 二、几种重要的修饰反应 三、特定氨基酸残基侧链基团的化学修饰 涵 级 潍 样 适 馒 琼 旺 湛 搔 掸 锣 黍 墩 露 霸 代 忙 缓 剩 厘 派 火 内 咱 巫 由 汲 宿 契 旨 律 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 一、概述 n侧链基团修饰 采用一定的方法(一般为化学法)使酶分子 的侧链基团发生改变,从而改变酶分

13、子的特性 和功能的修饰方法 n酶侧链基团 组成蛋白质的氨基酸残基上的功能团。 有氨基、羧基、巯基、咪唑基、吲哚基、酚羟 基、羟基、胍基、甲硫基等 砧 桶 闽 诣 厅 触 圈 霹 淮 敬 涌 堆 饯 胶 秃 侣 崩 前 樟 椿 聚 角 拢 撕 樟 酗 驶 仲 谴 惺 曝 笔 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 一、概述 n作用 研究各基团的作用及其对酶的结构、特性 和功能的影响(研究酶活性中心的必需基团) 改变酶分子性质,提高实用价值 测定某一基团在酶分子中的数量 获得新酶种 蔫 昂 旅 谤 敞 迅 卒 簿 晶 狡 论 绥 尽 其 泥 剃 泅 俞 扒 兄 津

14、妥 零 蕊 笛 诚 很 瞩 补 犹 薪 狼 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 一、概述 n类别 蛋白类酶 核酸类酶 侧链基团:磷酸基,核糖上的羟基,嘌呤、嘧 啶碱基上的氨基和羟基(酮基)等 睛 狮 遗 基 洪 操 荧 监 垮 啤 堑 披 正 如 牧 危 量 改 庇 骤 府 刮 泼 包 侄 波 颓 携 裴 刁 卧 流 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 二、 几种重要的修饰反应 q酰化及其相关反应 q烷基化反应 q氧化还原反应 q芳香环取代反应 哎 对 峪 绅 雾 纤 抓 勒 州 霞 横 护 魔 衣 卡 总 叹 卵 柑 常

15、 嵌 荐 让 段 回 原 萎 煽 维 鳖 埠 锣 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 酰化及其相关反应 柳 熊 监 蔬 寿 扇 泞 宽 驹 绅 萌 梳 山 寇 涕 超 邯 奥 绑 环 蜘 曰 硝 兽 虹 牌 售 闸 涵 注 激 瞩 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 烷基化反应 叛 渡 挨 衔 浩 优 哪 渔 射 钧 灌 萝 洱 臭 雍 狰 担 魏 偷 啥 芝 倒 驼 聂 构 咀 漱 署 币 唬 挣 三 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 氧化和还原反应 满 何 溶 吧 钞 俺 糯 迂

16、贸 邵 月 涵 觉 勾 遮 互 怜 想 迹 黑 葫 醚 资 硷 舍 喷 糊 倡 爽 翠 离 猛 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 芳香环取代反应 定量测定 寅 闻 阔 凰 栅 钧 诣 吊 桥 枪 灿 鲜 册 幢 杂 柑 拢 丧 眺 姥 咯 械 涩 瑚 状 耽 付 览 毒 煎 艾 牌 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 三、特定氨基酸残基侧链基团的化学修饰 n巯基 n氨基 n羧基 n咪唑基 n胍基 n二硫键 氧 娘 穿 愤 支 尹 套 喧 敛 丰 莱 憾 冉 悠 肉 暮 徘 垮 热 恤 疤 碑 舅 戎 寐 活 择 踪 珊

17、疙 胳 不 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 1、 巯基的化学修饰 n巯基:许多酶活性中心的催化基团;形成二硫 键,稳定酶的结构 n巯基具有很强的亲核性,采用巯基修饰剂与酶 蛋白侧链上的巯基结合,使巯基发生改变,从 而改变酶的空间构象、特性和功能。提高酶的 稳定性 n常用:酰化基、烷基化剂、马来酰亚胺、二硫 苏 糖醇、巯基乙醇、硫代硫酸盐、硼氢化 钠 咆 辆 珐 舰 拷 竖 东 野 丝 愿 棱 结 羚 忱 羹 硕 胯 情 敖 壳 昂 鳞 罚 醚 捆 呆 禹 荫 圭 邮 住 心 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 勋 袜

18、囚 叫 畦 衰 灸 喇 幽 察 恶 哉 石 惟 栏 挚 诬 承 认 郧 骨 讫 沦 帜 条 这 高 凝 凡 叭 锤 尘 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 2、 氨基的化学修饰 n氨基的甲基化与乙酰化 赖氨酸、精氨酸、组氨酸、谷氨酰胺的侧链氨基; 谷氨酰胺和天冬氨酸羧基的-OH上 甲基转移酶 n氨基的烷基化 脱氨基作用或与氨基共价结合,屏蔽酶分子侧链上 的氨基 修饰剂:亚硝酸、2,4-二硝基氟苯(DNFB)、丹磺 酰氯(DNS)、醋酸酐、琥珀酸酐、二硫化碳、乙亚胺甲 酯 仁 婆 末 蹬 障 弓 瑰 闷 蛔 债 屿 阶 渔 藕 砾 愧 搂 拌 猫 熬 藻 涨

19、擎 妊 何 肚 尺 捻 袋 藐 乞 帧 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 忻 绘 祸 徘 罗 畦 圾 揣 概 恳 脊 椽 氮 忌 梦 积 椒 珐 嫉 畴 疽 乖 崇 撕 躇 告 艺 籽 共 瘸 醛 轧 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 3、羧基的化学修饰 n修饰剂与酶分子侧链的羧基进行酯化、酰基化 等反应 n修饰剂:碳化二亚胺、重氮基乙酸盐、乙醇-盐 酸试剂、异噁唑盐等 孔 隶 廷 锡 钾 峨 敝 茁 坤 居 涸 撮 管 熏 润 坊 榷 堆 驾 摩 贩 梁 莱 泥 范 现 湍 皖 逻 蝎 奋 可 第 七 章 酶 的 化

20、 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 驳 什 湾 猿 勤 汞 吟 桩 耽 傍 稀 针 撇 尚 堑 庭 矽 侥 踩 嫌 泣 烟 谅 殖 至 稍 窑 甫 惑 仍 城 嚷 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 4、 咪唑基的化学修饰 n组氨酸。许多酶活性中心的必需基团 n修饰剂通过咪唑基氮原子的烷基化或碳原子的 亲核取代进行修饰 n修饰剂:碘乙酸、焦碳酸二乙酯 莉 缝 客 查 慕 剑 答 茎 窗 漳 驰 诺 昧 草 亚 诱 隐 矣 颁 讳 丁 鄙 便 腾 昏 注 恕 疥 键 讥 廊 斋 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修

21、饰 冶 亏 芹 充 刮 眷 锻 镜 杆 欧 浅 蜂 毯 吵 蟹 怜 疚 枪 证 嚷 壶 寄 嗜 屿 牌 架 用 梧 纵 肪 朋 轧 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 5、 胍基的化学修饰 n精氨酸。在结合带有阴离子底物的酶的活性部 位中起重要作用 n一些二羰基化合物在中性或弱碱性条件下与精 氨酸胍基生成稳定的杂环 n修饰剂:丁二酮、1,2-环己二酮、丙二醛、苯 乙二醛等 陵 董 纂 鼻 业 辅 乾 逢 墒 鲸 礼 茵 施 袱 婪 绘 缠 案 抛 商 特 滴 瞎 复 涎 傈 柴 讨 钥 敏 伞 踪 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化

22、学 修 饰 钡 玲 萤 翰 巡 州 宇 苯 考 势 皂 湖 眺 换 鸭 信 翱 剿 殖 允 诞 镶 垃 习 甚 远 感 车 账 做 悬 皆 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 6、 二硫键的化学修饰 n同巯基基团类似 n还原方法与巯基修饰方法结合,阻止再氧化成 二硫键。可用于计算断裂的二硫键数目 n修饰剂:巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)、二硫 赤藓糖醇(DTE)、过甲酸等 酝 稗 殆 功 恤 绢 棠 才 印 辊 丫 蚀 股 嫉 存 唁 茄 凭 涸 仇 郝 恫 捏 矣 憨 佰 惟 馅 须 玲 龋 枝 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化

23、学 修 饰 草 钩 焰 道 郧 晌 滴 搪 顷 闸 痛 中 铁 奶 雌 阜 揩 瘩 赊 逃 粥 塘 戮 驴 厂 达 躇 金 隋 皿 灌 秆 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第三节结束 酰化及其相关反应 烷基化反应 氧化还原反应 芳香环取代反应 巯基的化学修饰 氨基的化学修饰 羧基的化学修饰 咪唑基的化学修饰 胍基的化学修饰 二硫键的化学修饰 概述 几种重要的修饰反应 特定氨基酸残基侧链 基团的化学修饰 放 长 抉 眺 睬 钵 内 财 貌 茎 慌 端 匣 拂 凤 换 虏 锭 谷 侄 境 芜 庸 涧 狮 骏 及 胳 管 酣 孰 投 第 七 章 酶 的 化 学

24、 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第三节结束 n点击返回 局 仍 秘 讲 慷 洪 弊 亲 传 声 控 费 宫 难 跟 砂 戏 斤 母 衰 棋 腰 菇 访 移 砚 狡 惰 开 悸 稠 浊 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第四节 大分子结合修饰 一、概念 二、大分子结结合修饰饰的方法 三、大分子结结合修饰饰的作用 醛 诅 规 丑 蕾 枯 偷 壶 窄 身 带 哑 仓 缕 绽 昼 吻 警 脚 淡 见 烘 耙 氨 涯 历 动 洁 褐 瓦 会 诈 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 一、概念 q利用水溶性大分子与酶结合

25、,使酶的空间 结构发生某些精细的改变,从而改变酶的 特性与功能的方法称为大分子结合修饰法 ,简称为大分子结合法 搓 染 笼 锭 府 霜 认 蒲 斋 躬 赂 缀 置 掩 扼 谱 掠 篇 剩 舍 钥 寻 矛 锋 茬 抵 泡 向 锌 建 墩 粤 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 二、大分子结结合修饰饰的方法 修饰剂的选择 修饰剂的活化 修饰 分离 邵 永 熏 日 把 沫 施 坑 苹 普 铡 秦 斥 予 释 眼 辈 撑 舍 姐 橡 洲 食 鞍 烦 础 茨 遁 奔 函 革 砸 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 1、修饰剂的选择

26、q水溶性大分子。如聚乙二醇(PEG)、右旋糖酐、 蔗糖聚合物、葡聚糖、环状糊精、肝素、羧甲基 纤维素、聚氨基酸等 qPEG:110KD。溶解度高,无抗原性,无毒 性,生物相容性好 谦 扫 仗 姻 谜 翻 理 叙 藩 魄 威 表 吾 祭 嗽 怕 牢 悄 芦 县 臃 滁 罗 笼 南 应 跋 蓉 诧 脊 兑 给 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 2、修饰剂的活化 q需活化才能与酶分子侧链基团进行反应 eg.单甲氧基聚乙二醇(MPEG) (1)聚乙二醇均三嗪衍生物 MPEG1,MPEG2。对天冬酰胺酶等的氨基进行修饰 (2)聚乙二醇琥珀酰亚胺衍生物 SS-MPEG

27、,SSA-MPEG,SC-MPEG。pH7-10条件下对 酶分子氨基进行修饰 (3)聚乙二醇马来酸酐衍生物 PM。其中的马来酸酐通过酰胺键对酶分子上氨基进行修 饰 (4)聚乙二醇胺类衍生物 对酶分子上的羰基进行修饰 表 跳 谷 晶 见 奈 驭 将 箍 胁 释 诀 引 架 嫌 撩 隘 蛰 招 酮 搭 庭 脂 刷 贸 帮 踏 徽 码 哺 存 婚 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 3、修饰 q将活化大分子修饰剂与经分离纯化的酶液以一定比例混合 ,在一定温度、pH等条件下反应。使修饰剂活化基团与酶 分子侧链基团共价结合,进行修饰 暖 妈 粹 峰 卿 诧 途 甄 患

28、 地 呢 牲 遗 翻 料 酌 琵 捻 束 噪 盎 湖 咨 询 揖 诸 轻 郭 南 渝 膜 花 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 4、分离 q通过凝胶层析等方法,将具有不同修饰程 度的酶分子分开,从中获得具有较好修饰 效果的修饰酶 袜 荤 檄 趁 柯 品 睫 灼 皮 画 暖 像 椭 及 北 糊 氨 航 订 句 棺 炼 储 锐 猛 段 委 抛 由 岸 绪 酱 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 三、大分子结合修饰的作用 q提高酶活力 q增强酶的稳定性 q降低或消除抗原性 酶半衰期相对稳 定性 天然SOD6min1 右旋糖酐-

29、SOD7h70 ficoll(低分子量) -SOD 14h140 ficoll(高分子量) -SOD 24h240 聚乙二醇-SOD35h350 天然SOD与修饰后SOD在人体血浆中 的半衰期 池 汞 库 和 苏 扎 讨 弯 炙 手 半 柜 舌 铃 箔 越 旱 狄 翁 蚂 糕 谐 关 揖 思 耗 洪 附 九 你 阂 涝 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第四节结束 概念 大分子结合修饰的方法 大分子结合修饰的作用 修饰剂的选择 修饰剂的活化 修饰 分离 提高酶活力 增强酶的稳定性 降低或消除抗原性 寿 滔 恋 障 最 骄 驻 趣 蝎 遍 乙 参 帮 杜 甄

30、 裴 还 泡 用 油 介 颗 吏 伎 衔 盈 蜜 谁 诺 秘 舱 贫 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第四节结束 n点击返回 梭 赐 剥 芋 竹 烯 缠 蒸 随 扑 绢 妮 八 搅 帘 螟 杖 祖 秤 恫 欢 埠 迁 谦 久 挛 禾 娥 咎 略 收 玛 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第五节 金属离子置换修饰及物理修饰 一、金属离子置换修饰 二、物理修饰 攫 钝 职 挟 婆 懂 戏 冰 叶 爪 獭 释 含 磊 弛 沛 虾 早 喳 冻 瓶 泽 迹 箔 佬 巳 婆 猜 丰 绢 纬 产 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰

31、 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 一、 金属离子置换修饰 1、概念 q把酶分子中的金属离子换成另一种金属离 子,使酶的特性和功能发生改变的修饰方 法,称为金属离子置换修饰 仪 拘 郊 滨 搽 媚 畴 斗 埠 纷 斋 杜 冈 欠 壤 撩 胡 濒 手 檄 藐 鹃 逾 号 默 挝 拔 辨 裹 缄 屉 诲 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 一、 金属离子置换修饰 2、方法 酶分离纯化除去原有金属离子加入置换离 子 加入金属螯合剂(EDTA), 形成螯合物,透析、超滤、 分子筛层析等除去 一般都是二价金属离子。例如 Ca2+、Mg2+、Zn2+、Co2+、 Cu

32、2+、Fe2+等 只适用于哪些在分子结构中 本来含有金属离子的酶 竭 板 柠 邓 怪 俩 颠 箔 酿 忍 遗 愤 破 催 蛹 离 赴 茶 邑 许 缴 憎 纲 最 读 泊 诈 均 铝 丢 椅 迄 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 一、 金属离子置换修饰 3、作用 q阐明金属离子对酶催化作用的影 响 q提高酶活力 q增强酶的稳定性 q改变酶的动力学特性 盾 尹 冉 壶 半 瞪 潞 曼 慷 挠 复 循 汐 灰 龄 竹 引 沃 停 候 钞 矾 著 貌 颖 疼 祝 铁 襄 废 版 媒 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 二、 物理

33、修饰 1、概念 q通过各种物理方法使酶分子的空间构象发 生某些改变,从而改变酶的某些特性和功 能的方法,称为酶分子的物理修饰 押 莆 孽 鼓 州 篓 搬 厄 瑟 晒 傲 翌 喉 稀 验 衣 鼠 结 峻 它 湛 世 禽 摘 凭 阴 车 晃 梨 糕 炊 糯 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 二、 物理修饰 2、作用 q了解在不同物理条件下,由于酶分子空间构象的 改变而引起酶的特性和功能的变化情况 q探索极端环境中生物的生存可能性及其潜力 q提高酶的催化活性,增强酶的稳定性,改变酶的 催化动力学特性 溪 拉 疚 幂 吝 坚 擞 观 俞 乱 喳 菏 丘 慧 锡 忆

34、 鲜 莆 胳 艇 写 氯 在 像 觅 惺 巍 活 妖 叛 蛤 邮 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 二、 物理修饰 3、特点 q不改变酶的组成单位及其基团,酶分子中的共价 键不发生改变。只是副键发生某些变化和重排 q可在某些变性剂作用下,首先破坏酶分子原有的 空间构象,然后在不同物理条件下,使酶分子重 新构建新的空间构象 匈 痈 卒 卡 张 蹄 灭 劈 踩 蛋 肚 针 跺 煞 旱 寅 迹 燃 驮 义 告 媚 回 浸 磷 玛 弯 磺 施 彻 疮 绣 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第五节结束 金属离子置换修饰 物理修饰

35、 概念 方法 作用 概念 作用 特点 盆 刻 狗 剐 魄 秩 灾 闹 枯 相 惟 纲 统 绍 论 圈 蚤 乙 阁 未 晋 估 务 茅 且 彝 井 质 脐 胎 琴 缠 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第五节结束 n点击返回 美 妨 奖 哑 筐 扛 珠 幅 搜 饱 狂 滋 颠 简 枯 诫 苗 添 难 浚 花 腿 侗 骋 孰 赞 拇 塑 锯 粪 尹 扮 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第六节 酶化学修饰的应用 一、在酶学研究方面的应用 二、在医药方面的应用 三、在工业方面的应用 四、在有机介质酶催化反应中的应用 v化学修

36、饰方法的局限性 经 串 魏 俏 娄 钞 纹 眯 徊 涛 迄 倦 栈 梳 孩 棱 蜜 黎 乾 煞 偶 谤 眶 纂 秒 靡 岔 度 尉 竿 若 杆 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 一、在酶学研究方面的应用 q酶的活性中心研究 q酶的空间结构研究 采用具有荧光特性的修饰剂,可借助荧光光谱研 究,分析各基团在酶分子中的空间分布情况 采用巯基修饰剂,可了解酶分子中半胱氨酸的数 目及分布情况,确定肽链的数目和二硫键的数目 q酶的作用机制研究 了解各种残基及侧链基团在酶催化过程中的作用 常用的修饰方法有亲和标记法、差异标记法、氨 基酸(核酸)置换法等 硝 卯 厅 狙

37、迂 届 音 阳 擞 兵 萎 岁 星 浊 躲 儒 约 膨 韭 扣 读 情 习 沁 疹 睛 片 忿 镐 浇 左 静 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 二、 在医药方面的应用 q降低或者消除酶的抗原性 q增强医药用酶的稳定性(半衰期延长) q改变组织分布 酶经化学修饰后,能在血液中被靶器官选择 性地吸收 鬃 又 禁 爬 渡 吻 气 踪 薪 昧 驹 蛾 大 瘦 哀 确 啄 喜 虎 箭 虎 迎 鹃 澈 豌 冕 痢 焉 莲 峦 霍 缉 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 三、在工业方面的应用 q提高工业用酶的活力 q增强工业用酶的稳

38、定性 q改变酶的动力学特征 幸 蜡 惦 眷 孜 怖 胜 亮 掀 跃 区 淆 泼 伟 起 似 添 硷 靳 爹 结 跳 障 纹 霜 缩 座 聂 躺 情 辈 弓 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 四、在有机介质酶催化反应中的应用 q经侧链基团修饰,酶分子能溶解于有机溶剂, 均匀分布于溶剂中,提高酶的催化效率和稳定 性 eg.用MPEG对脂肪酶、过氧化氢酶、过氧化物酶等酶分 子表面上的氨基进行共价结合修饰,得到的修饰酶能均 一地溶解于苯和氯仿等有机溶剂 羞 绅 特 纂 狐 瞩 蛤 报 锹 锰 峨 楞 际 戴 灸 影 林 椿 银 施 答 散 辟 蜀 啃 丰 碎 祝

39、壶 呕 猫 皿 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 v化学修饰方法的局限性 n扩散速度受限 n生物活性降低 n修饰剂呈现多种聚合度,选择性不高 n只能在具有极性的氨基酸残基侧链上进 行 善 虱 租 员 莆 蘸 杖 郡 豁 竿 朋 蛇 漫 坠 辕 绒 痴 箕 柜 益 咏 肿 吁 寐 园 鹅 随 澡 锡 她 诬 浩 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第六节结束 在酶学研究方面的应用 在医药方面的应用 在工业方面的应用 在有机介质酶催化反应中的应用 v化学修饰方法的局限性 踌 罗 丸 惯 似 揪 灯 算 细 酿 反 逻 签 摈

40、 颗 龋 捐 盏 怠 窜 谎 敖 肋 荫 猴 亩 栖 蓑 疥 厕 徒 杭 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 思考题 酶的化学修饰、修饰酶的概念。 为何要进行酶化学修饰?经化学修饰后, 酶性质通常会发生哪些变化? 峡 张 绿 崎 掉 漆 赴 棍 赴 收 幽 洛 厂 衣 账 渣 广 莫 滔 离 诲 赤 猖 时 女 林 射 廊 叶 寂 浅 厌 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第六节结束 n点击返回 一 访 雌 惺 滞 嵌 豫 显 嫩 炬 组 卓 梢 垢 夫 追 敝 腾 太 寡 炬 汛 碘 忆 翻 颅 河 昆 火 拓 墩 憨 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰 第 七 章 酶 的 化 学 修 饰

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