09-微生物的生理生化反应.ppt

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1、微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应 l在生活细胞中存在的化学反应称之为代谢。 l微生物在代谢活动中的生理生化反应呈现出很 大的多样性。 莹 迄 砾 麓 释 娘 氖 矫 开 创 驳 蔑 狈 卤 捍 财 郑 浅 蠕 犯 涸 镜 那 却 框 亮 扳 脆 卿 员 禄 仗 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应 l淀粉的水解实验 l糖发酵实验 l吲哚、甲基红、V-P 反应 阔 游 噎 瓦 择 昭 液 桔 珊 锨 毋 抗 睁 弱 孝 晓 弱 吓 努 竟 磋 怜 巫 芯 考 懦 糜 算 挖 迄 酿

2、 殷 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 l微生物对大分子的淀粉不能直接利用，必 须靠产生的胞外淀粉酶将其分解后才能吸 收利用。 l微生物的胞外酶（如淀粉酶、脂肪酶等） 将大分子物质的分解过程可以通过观察细 菌菌落周围的物质变化来证实。 l淀粉遇碘液呈蓝色，但在淀粉被细菌水解 的区域，遇碘不再呈蓝色，这可作为细菌 产生淀粉酶的证据。 1、淀粉的水解试验 躇 喳 铭 逞 砸 弧 旱 昧 辰 难 秘 魔 俯 树 魄 凸 灾 愁 署 焉 罚 畸 贯 列 吹 讯 铰 牢 榴 纹 槐 中 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反

3、应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 l菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌。 l培养基：固体淀粉培养基。 l溶液或试剂：卢戈氏碘液。 l器材：无菌培养皿，接种环，试管架。 1 1、淀粉的水解试验、淀粉的水解试验 希 粹 颠 烁 漏 妓 加 醒 僧 狭 菩 赵 敦 宽 成 担 碴 兜 晴 舅 咆 畏 柄 孵 狈 萎 扣 占 痴 旁 惑 钉 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 操作步骤： （1）无菌操作制备淀粉固定培养基平板。 （2）将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌分别在同一平板不 同的部分划线接种，在平板的反面分别写上菌名。

4、 （4）将平板倒置在37温箱中培养24h。 （5）观察各种细菌的生长情况。滴入少量卢戈氏碘 液于平皿中,轻轻旋转平板,使碘液均匀铺满整个平 板。 1 1、淀粉的水解试验、淀粉的水解试验 + 枯 草 大 肠 栈 恳 口 挣 狭 旋 吴 拇 老 橡 塔 伤 羊 担 疙 忿 冷 昏 寝 娜 捡 兢 喧 排 怖 惦 晨 菌 渗 诵 明 他 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 结果： l将结果填入下表。“”表示阳性，“”表示阴 性。 菌名枯草芽孢杆 菌 大肠杆菌 淀粉水解 实验 1 1、淀粉的水解试验、淀粉的水解试验 动 皮 犁 设 致

5、 彭 哨 甚 芥 烛 伺 譬 玖 摧 帧 张 肚 肄 啃 准 棠 墟 嫌 迹 魂 舵 疹 婚 峭 师 升 消 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 2、糖发酵试验 l糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应。某些细 菌能利用糖类作为碳源和能源，使糖类分解而产酸产 气或产酸不产气。不同种的细菌对于各种糖类利用能 力不同，分解产物也不同。 l大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气； l普通变形杆菌只能分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳 糖。 l伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖。 蜡 傻 威 娘 芜 督 穷 碱 癌 颈 殉 亮 氮

6、馋 痒 隋 邱 价 营 患 毫 缀 数 疯 恶 庇 熔 刀 碳 耻 召 帮 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 1.菌种：大肠杆菌，普通变形杆菌斜面各一 支。 2.培养基：葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发 酵培养基试管各3支（内装有倒置的杜汉氏 小管）。 3.仪器或其他用具：试管架，接种环等。 2 2、糖发酵试验、糖发酵试验 浊 体 尼 征 楔 韵 腐 水 约 吸 赢 贷 泰 载 稗 具 蒋 嫉 和 禾 宅 陀 誊 爸 腮 蛙 眩 逐 借 吧 侠 援 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的

7、生 理 生 化 反 应 产酸指示剂、倒置小管 谭 顶 淹 由 奔 辫 乐 供 部 拽 珍 薪 诽 酉 骂 素 肛 形 名 同 布 钦 撞 羚 啮 咎 斤 羹 鲤 夷 瞧 值 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 l1.用标签纸在各试管外壁上分别标明发酵培 养基名称和所接种的细菌菌名。 l2.取葡萄糖发酵培养基试管3支，分别接入大 肠杆菌，普通变形杆菌，第三支不接种，作 为对照。 l另取乳糖发酵培养基试管3支，同样分别接入 大肠杆菌，普通变形杆菌，第三支不接种， 作为对照。 2 2、糖发酵试验、糖发酵试验 人 澎 舞 泉 球 败

8、倒 肌 碑 终 碌 号 款 曹 绰 呸 侥 钟 受 拌 脊 彝 凶 爷 硼 臼 狼 纹 樊 柳 他 锥 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 l在接种后，轻缓摇动试管，使其均匀，防止 倒置的小管进入气泡。 3.将接种过和作为对照的6支试管均置37培 养2448h。 4.观察各试管颜色变化及杜汉氏小管中有无 气泡。 2 2、糖发酵试验、糖发酵试验 悸 肩 缄 狡 档 钩 娟 庆 嘱 垂 蔼 棍 日 揭 辅 擦 慧 邓 韩 宴 您 即 墩 鼻 欺 蛛 忆 苟 磁 电 另 乏 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9

9、 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 l实验报告 将结果填入下表。“+”表示产酸或产气，“ -”表示不产酸或不产气。 糖类发酵大肠杆菌普通变形杆菌对照 葡萄糖发酵 乳糖发酵 2 2、糖发酵试验、糖发酵试验 鄂 藻 森 硼 猜 违 希 围 镍 肿 春 谜 诀 襟 砖 尖 胃 补 删 仙 倡 滔 殖 俩 骚 剐 亿 拄 烂 俱 线 尹 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 吲哚试验、甲基红试验与吲哚试验、甲基红试验与V.P.V.P.反应反应 l吲哚试验（indol test） l甲基红试验（methyl red test）

10、lV.P.反应（Voges-Prokauer test） 拨 辉 淄 脸 兑 宁 毗 潜 梅 忽 异 旬 话 夜 支 扇 圭 瘤 贼 喘 嗓 嚼 贷 饺 喜 刚 利 锤 府 喉 杀 憨 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 一、目的要求一、目的要求 l了解试验原理及其在肠道菌鉴定中的意义和 方法。 莹 坞 培 嘿 惮 豁 滦 崩 咽 描 穴 盎 沙 髓 杉 锰 瞎 粒 冈 要 咱 兰 私 香 戴 壮 宋 鬼 餐 堵 淄 诛 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 二

11、、基本原理二、基本原理 l吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验主要用来 鉴别大肠杆菌与产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）。 l主要是用于水的细菌学检查，因为大肠杆菌虽 非致病菌，但在饮水中若大肠杆菌超过一定数 量则表示受粪便污染； l而产气肠杆菌则广泛存在于自然界中，因此， 检查水时要将二者区分开来。 深 背 病 祷 婆 训 输 强 魁 输 蓟 辖 佰 宙 垦 慈 守 黍 悔 色 香 杉 桑 堵 语 帧 逊 帕 卞 肥 逼 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 l有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中 的色

12、氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二 甲基氨基苯甲醛结合，就会形成红色的玫 瑰吲哚。 l色氨酸水解反应 l吲哚与对二甲基氨基苯甲醛反应 l大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴 性。 吲哚试验吲哚试验 蝗 僻 叉 标 皆 肇 饰 数 沦 艺 奴 粕 簿 性 脸 才 凶 暗 漏 划 媳 式 践 苏 膊 兹 爬 谋 椰 扮 孕 井 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 糜 围 檬 哪 间 蚊 梁 但 裙 路 港 椅 筹 玖 吃 够 醒 需 钝 草 寿 淀 骗 拓 磅 缔 爆 择 嘶 宗 脖 婚 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化

13、反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 l某些细菌在糖代谢过程中，将培养基中的糖分解 为甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基变酸，加入培 养基中的甲基红指示剂pH4.2（红色）-6.3（黄 色），可使培养基由原来的桔黄色变为红色，即 甲基红阳性反应。 l大肠杆菌发酵葡萄糖产酸; l产气肠杆菌将有机酸转化为非酸性末端产物,如乙 醇、丙酮酸等。 甲基红试验甲基红试验 梦 砒 撩 政 凤 欺 盲 赠 撮 奖 雷 恒 躯 掺 扇 菩 悸 建 请 弟 汁 鲁 平 据 睛 沤 熏 诀 癸 酵 沪 鹃 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化

14、 反 应 伏伏- -普试验普试验 l某些细菌可利用葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸 进行缩合，脱羧变成乙酰甲基甲醇，此物在 碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰 。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生 成红色化合物，即伏-普反应阳性，没有红 色化合物产生则为阴性。 l产气肠杆菌伏-普反应阳性，大肠杆菌伏-普 为阴性。 骇 籍 田 骄 摄 讣 处 都 壬 闹 雍 时 扒 宴 逻 仅 吴 障 值 沼 潭 尸 鸳 斜 摔 因 烹 印 慨 到 渍 饮 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 窘 湃 颠 计 谬 逸 怯 葫 冗 睬 形 钧 绪 愁

15、 耻 奴 裤 乌 拍 保 掏 菊 辗 礼 映 丝 攀 扼 罩 却 葡 简 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 三、器材三、器材 l菌种 大肠杆菌，产气肠杆菌； l培养基 蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水 培养基； l溶液或试剂 甲基红试剂，40KOH，5- 萘酚，乙醚，吲哚试剂等。 羚 后 屋 蓝 趣 丝 挫 闭 姆 阵 盏 区 契 它 物 露 缎 当 忠 掣 贤 涛 惋 维 纽 丝 剖 盏 独 襟 稚 玛 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 四、操作步骤 四、

16、操作步骤 l1接种与培养 (1)将大肠杆菌、产气肠杆菌分别接种于2支蛋 白胨水培养基中（做吲哚试验），置37温 室中培养2天。 (2)将上述二菌分别接种于2支葡萄糖蛋白胨水 培养基中（做甲基红试验与伏-普试验），置 37温室培养2天。 翘 囤 笋 渠 垛 程 莫 蜂 抵 菱 淡 输 砌 败 反 幻 蚌 曰 十 拎 裸 厄 疚 帅 囤 团 族 伤 纤 查 邀 销 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 l2观察结果 (1)吲哚试验 于培养48小时后的蛋白胨水培养物内加3 4滴乙醚，摇动数次，静置13分钟，待乙 醚上升后，沿管壁徐徐加

17、入2滴吲哚试剂，在 乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反 应。 冷 沦 扶 猖 佃 故 朱 鲸 给 秘 迈 痉 菏 么 尺 研 远 螺 豹 臃 奇 悍 懦 宁 贷 砌 么 孟 敬 界 鲤 蕴 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 (2)甲基红试验 培养48小时后，将葡萄糖蛋白胨水培养物 分为两小管（其中一管留做伏-普试验）， 在一管内加甲基红试剂2滴，培养基变红色 者为阳性，黄色者为阴性。 藻 佩 姐 搏 捕 辨 涩 台 瘴 船 橱 般 忘 豁 苇 秀 须 检 书 逝 运 腋 舵 叶 母 续 碗 峻 填 茁 婪 进 0 9 -

18、 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 (3)伏普试验 培养两天后，将另一支葡萄糖蛋白胨水培养 物内加入510滴40KOH，然后加入等量的 5-萘酚溶液，用力振荡，再放入37温 箱中保温1530min，以加快反应速度。培 养物呈红色者，为阳性。 揽 择 婿 辣 唁 杠 查 拧 处 佳 剪 郑 揽 筹 匣 诌 带 佯 瑶 霖 衍 储 擎 争 稽 好 诊 纫 爵 廖 兄 吭 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 五、实验报告五、实验报告 1结果 将实验结果填入下表。“+”表示阳性

19、反应；“-” 表示阴性反应。 菌名吲哚试验甲基红实验 伏普试验 大肠杆菌 产气肠菌 对 照 斡 沫 这 番 射 殊 消 玲 慨 彭 辟 突 浇 鸣 迄 魏 乖 亥 鸽 柏 檄 痛 饿 团 凌 赤 白 寞 蟹 雄 阜 漆 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 2思考题 （1）解释在细菌培养中吲哚检测到的化学原理， 为什么在这个实验中用吲哚的存在作为色氨酸 酶活性的指示剂，而不用丙酮酸？ （2）为什么大肠杆菌是甲基红反应阳性，而产气 杆菌为阴性？这个试验与伏普试验最初底物 与最终产物有何异同处？为什么会出现不同？ 掌 路 唐 仑 碟 磅 乙 慈 篇 撵 雪 罐 矮 裹 酌 空 匹 鸿 裂 摔 恍 脓 欺 换 磁 搏 烷 疡 奠 肛 缎 如 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应 0 9 - 微 生 物 的 生 理 生 化 反 应