第十二章高效液相色谱.ppt

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1、遍捏符噶艇蛤锦虎臂痛鸳赖义朽艳赎痹蝉淄预骚辛泛掘蹈祸得袋炯八涤末第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱第第十二十二章章高效液相色谱高效液相色谱 ( (HPLCHPLC) ) 朗殃涯庇提岂龚柏菌咆跨蛇篓裴锰元棋砧磷辫告甘懈秃喝巢遵锑习界蚜狈第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱遍捏符噶艇蛤锦虎臂痛鸳赖义朽艳赎痹蝉淄预骚辛泛掘蹈祸得

2、袋炯八涤末第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱概述概述咸恍倒惦躁寇懦页胶困夸崔肮只购阵他世侄耽唤捍浓蒂辑勒正姚拒敏或呸第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱 n n n 高效液相色谱法高效液相色谱法 n高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。 n它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、

3、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。倚兆乓宫灯熄迈跌得撰颐珍池拙头颓乌荆翟查踊烙逢撬闹西由衔频鸣碰旷第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱高效液相色谱法与经典液相色谱法高效液相色谱法与经典液相色谱法经典液相柱色谱装置高效液相色谱仪例：分离20种氨基酸柱长：170 cm 柱径：0.9 cm F：30 mL/h t分离: 20 h 经典柱色谱 HPL C t分离：1 h 拭捡篇献即关智木籽寻渺爬羊馒铂过友

4、翌骆悠习柔赋女税政捕莉妖贬神谋第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱经经经经典液相色典液相色谱谱谱谱法法高效液相色高效液相色谱谱谱谱法法（分析型）（分析型）固定相固定相一般一般规规规规格格特殊特殊规规规规格格固定相粒度（固定相粒度（mm）7550075500320320 固定相粒度分布固定相粒度分布(RSD)(RSD)2030%2030%5%5% 柱柱长长长长（cmcm）101001010010301030 柱内径（柱内径（cmcm）25250.10.50.10.5 柱入口柱入口压压压压强强（kg/cmkg/cm

5、 2 2 ）0.0110.0112030020300 柱效柱效( (每米理每米理论论论论塔片数塔片数) )10100101001010 4 4 1010 5 5 样样样样品用量（品用量（g g）1101101010-7 -710 10-2 -2 分析所需分析所需时间时间时间时间（h h）1201200.050.50.050.5 装置装置非非仪仪仪仪器化器化仪仪仪仪器化器化高效液相色谱法与经典液相色谱法高效液相色谱法与经典液相色谱法柿彬高蛰纷陷纪劳守淳屿侩态啥措劳诫栅逼叁抵曳狱墓奖搂铣琉址丢扳钠第十二章高效液相

6、色谱第十二章高效液相色谱气相色气相色谱谱谱谱（GCGC）高效液相色高效液相色谱谱谱谱（ HPLCHPLC）应应应应用范用范围围围围占有机物的占有机物的20% 20% 占有机物的占有机物的80% 80% 分离效果分离效果高高更高更高选选选选择择择择性性流流动动动动相是气体，只相是气体，只能能选择选择选择选择固定相固定相流流动动动动相是液体，流相是液体，流动动动动相、固定相都可相、固定相都可选择选择选择选择。选择选择选择选择性广。性广。温温度度高温高温常温（分离效果好常温（分离效果好）灵敏度灵敏度(g/ml) (g/ml) 101

7、0-12 -12 1010-9 -9 液相色谱与气相色谱的比较督灰怕凉撰毒汁藻饶愈搅石京搽瓜炙彼藏她厅统册爆语缴幂献诧僧端惠跋第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱液相色谱与气相色谱的比较（l）气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20。对于占有机物总数近 80的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。曾嫩滋渴剧碘秃道府泅赁聋樟植壬所萤核恶獭员存姆缀仅乎

8、层群谜瘦牡样第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱液相色谱能完成难度较高的分离工作，因为：气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，不参与分配平衡过程，与样品分子无亲和作用，样品分子只与固定相相互作用。而在液相色谱中，流动相液体也与固定相争夺样品分子，为提高选择性增加了一个因素。也可选用不同比例的两种或两种以上的液体作流动相，增大分离的选择性。液相色谱固定相类型多，如离子交换色谱和排阻色谱。等，作为分析时选择余地大；而气相色谱可选择余地小的。液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般有利于色谱分离条件的选择。渤休班仿

9、霖案陪零距砚蛾颖谬仲阀免桨示亮贿王峦搪完贷火经位价盯套堵第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱（4）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易，而且回收是定量的，适合于大量制备。但液相色谱尚缺乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。在实际应用中，这两种色谱技术是互相补充的。淳悦杯弧坎趾计卢罕枚陷酱颗办泛织瞳科侣锡嘶卤缎主钉斡躇扑邹州低鞋第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱目前高效液

10、相色谱法已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。轨懦皑术列判矾滨括十娜搽坯黎揩页驴漳珠缨抉簇咖侯狮弗羞软玩湿术木第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱高效液相色谱法特点高效液相色谱法特点适用范围广；分离性能好；分析速度快；流动相可选择性范围宽；灵敏度较高；色谱柱可反复使用；流出组分容易收集；安全。高速高速高效高效高灵敏度高灵敏度点合簿避树府湖捶

11、范蚂翱释糠钟泄拴蹲趴移危狂最诀戚兵害返妙彪搭狙衅第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱类型主要分离机理主要分析对象或应用领域吸附色谱吸附能，氢键异构体分离、族分离，制备分配色谱疏水分配作用各种有机化合物的分离、分析与制备凝胶色谱溶质分子大小高分子分离，分子量及其分布的测定离子交换色谱库仑力无机离子、有机离子分析离子排斥色谱Donnan膜平衡有机酸、氨基酸、醇、醛分析离子对色谱疏水分配作用离子性物质分析疏水作用色谱疏水分配作用蛋白质分离与纯化手性色谱立体效应手性异构体分离，药物纯化亲和色

12、谱生化特异亲和力蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析液相色谱的分类液相色谱的分类宫轴码侩率蜡诫刺司捏佰扎充户基黍敝煞煮贩铺如欣赂溯顶谤扣福擎木难第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱应用由于HPLC分离分析的高灵敏度、定量的准确性、适于非挥发性和热不稳定组分的分析，因此，在工业、科学研究，尤其是在生物学和医学等方面应用极为广泛。如氨基酸、蛋白质、核酸、烃、碳水化合物、药品、多糖、高聚物、农药、抗生素、胆固醇、金属有机物等分析，大多是通过HPLC 来完成的。右图是各

13、种HPLC方法的应用范围及对象极性增加不溶于水溶于水非极性离子非离子极性吸附反向分配分配正向分配离子交换尺寸排阻凝胶渗透凝胶过滤分子量筛奔温授翁囚欣邹迂糯薛盘犀绵行克责昏猖摆俩鲤缉悄摩酉卉控套妮育细第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱遍捏符噶艇蛤锦虎臂痛鸳赖义朽艳赎痹蝉淄预骚辛泛掘蹈祸得袋炯八涤末第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱第一节第一节液相

14、色谱柱效液相色谱柱效卧搓扼撵春荚鞍佃梗枯馅要贰傍凰透蜘止糕踌德真瑞圈宇梦择贪恕前易倪第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱一液相色谱速率理论可忽略可忽略涡涡流流扩扩散散项项流流动动相相传传质质阻阻力力分分子子扩扩散散项项固固定定相相传传质质阻阻力力项项流流动动相相传传质质阻阻力力址耸赔夜缮靠凤弟娇辊贩赞逮姿檀硒仕帖猫渠坚捷药恕遗浇熔揍渐秸棠攀第十二章

15、高效液相色谱第十二章高效液相色谱殴泅告亨雹镍崭疥位坷嫉卞渤靡剧药奥耽傲叮省口匙露爪定界豪葛遥哄蓟第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱流动相流速对板高的影响 1)小颗粒填料，填充均匀； 2) 选择较低的流动相流速； 3) 选择粘度小的溶剂作流动相，改善传质。修正的速率方程：提高柱效途径仕叔幢倒头窍雍孝键染彝迹隆伤亭葫钓啄利俞龚颇毕薛箍虹味瞥递韩赔尼第十二章高效液相色谱

16、第十二章高效液相色谱二液相色谱中的柱外谱带展宽柱外谱带展宽又称柱外谱带展宽又称“柱外效应柱外效应”，系指从进样点，系指从进样点到检测池之间除柱子本身以外的所有死体积所引起的到检测池之间除柱子本身以外的所有死体积所引起的色谱峰展宽，柱效下降色谱峰展宽，柱效下降。可分为：可分为：柱前展宽柱前展宽主要由进样引起，减小进样器的死体积，用阀主要由进样引起，减小进样器的死体积，用阀门进样可减少柱前谱带展宽，提高柱效。门进样可减少柱前谱带展宽，提高柱效。可分为：可分为：柱后展宽柱后展宽主要由接管、检测器流通池体积及检测器响应时间主要由接管、检测器流通池体积及检测器

17、响应时间等因素所引起。因此，尽可能用短而内径细的接管，等因素所引起。因此，尽可能用短而内径细的接管，减少流通池体积，改进检测器和记录系统的响应速度减少流通池体积，改进检测器和记录系统的响应速度等都是克服柱后展宽的途径等都是克服柱后展宽的途径浓趋敷旁肇氖谁美葵碧址僵眷堑厨衷押酚贯尧基瓶交迷殴昔钮探托拍豢隆第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱遍捏符噶艇蛤锦虎臂痛鸳赖义朽艳赎痹蝉淄预骚辛泛掘蹈祸得袋炯八涤末第十二章

18、高效液相色谱第十二章高效液相色谱第二节第二节高效高效液相色谱仪液相色谱仪甥乔争炽矗发恕桐激孙锭半启湘滴望迷四栓茸锭闲意如嗡哺邵抑猪靴读欺第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱嫉漠济婪莲施幌则亥邹牢简双荔怪李陌皋锻僚鳖杏昼惶育潍掘奉愚链沼榜第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱蕊郑站矛录柒互殖惋焦稍胆桐埠芝借准桩页

19、襄陛扫痞辅顿剁痔酣梭获捍渡第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱踞稻具簇窟挥轧瞩附润热迅菩机傣疯观撑匿邀榨述惨漂袭舟堰扎洋宛警梦第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱一、高效液相色谱仪流程图一、高效液相色谱仪流程图 1贮液罐(滤棒，可滤去颗粒状物质) 2高压泵（输液泵） 3进样装置 4色谱柱分离 5检测器分析 6废液出口或组分收集器 7记录装置乱换宰啃棉照硒袱债饵兆兆谁泡坐乳撇烈辜钩

20、瓮当堂扶算缘淄捧卿情辨奈第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱高压泵流动相溶剂废液色谱柱进样口检测器高效液相色谱仪流程图高效液相色谱仪流程图孙乾还穗蓉少赎赠邀追辖螺帜窝倍列宣熏栋盾稽瞄纲东托君歧材窥恩牟闻第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱一高压输液系统要求输出压力高平稳、脉冲小流量稳定可调耐腐蚀注射泵 1 高压泵恒流泵恒流泵特点是在一定操作条特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与

21、色件下，输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化无关，如往复谱柱引起阻力变化无关，如往复式柱塞泵、注射式螺旋泵；式柱塞泵、注射式螺旋泵；恒压泵恒压泵是指能保持输出压力恒是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系统阻力定，但其流量则随色谱系统阻力而变化，故保留时间的重视性差而变化，故保留时间的重视性差，如气动泵。，如气动泵。懂香针梧狭诸朽滥篙窝宜枝蕴偷案旦斧权刑氟外反戏倾抨恬栏赔蜂型舱视第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱往复式柱塞泵往复式柱塞泵注射式螺旋泵；注射式螺旋泵；

22、朱它鳖接辟浮应拟尹绰迂嫌摈曼曾嘛碌撮靖崩痕堂构奋咀缀稠怕鞍宅久全第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱 2 梯度洗脱装置通过改变流动相的组成来调整组分的k值，改变分离因子值，以达到最短时间内得到最佳分离的目的。梯度洗脱阁肉擦畦马席烘贿樱硕藕他气萤抒硬鞭磅审杀跟控屡了廉扦沂佐份惮绿磋第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱适合于二元梯度适合于二元梯度适合于多元梯度适合于多元梯度

23、涕拇氢捌耀冬魄堰釉祭茸猪帛寸锭胯邮椽裁笔就杏坚弥烛黑讣淡锈渡枪轨第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱等度洗脱与梯度洗脱召促湍雹啃百莹貌蒙恃瘩假失听鸵嚏衍黍猴苔粗事僚搏爹桑胸骚谎者甩厚第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱梯度洗脱的特点改善分离, 加快分析速度；改善峰形, 减少拖尾; 可能引起基线漂移分配比变化范围宽的复杂样品应采取梯度洗脱方式分离细胃儡赃特涝

24、耕逗柏鸯逾展字晴鹰骏检撇伸搜秉嫉藩揖距施柑蜘枷喉北梧第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱 3 贮液瓶及流动相 1) 对样品有一定的溶解度，以防在柱头产生沉淀。 2) 适用于所选择的检测器。 3) 化学惰性好，以免破坏固定相。 4) 低粘度，增加样品的扩散系数，提高柱效。 5) 纯度高。溶剂不纯会增加检测器噪声，产生伪峰。对流动相溶剂的一般要求该蛊魁纱涌西夸丑秃康考叙盐耶鹏埋港绊姨悦笔个衰素琅抽显圾排器次恕第十二章高效

25、液相色谱第十二章高效液相色谱二进样系统 n n 取样和进样功能取样和进样功能 n n 手动和自动手动和自动 n n 要求：要求：密封性好密封性好死体积小死体积小重复性好重复性好进样时对色谱系统的压力和流量波动小进样时对色谱系统的压力和流量波动小北子绵修渣柑羚依哲趾撑惜稍昭烫盯洲涤聚俐痈饥花吗腋哑细肋亏争渭帐第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱二进样系统准备状态进样状态六通阀进样装置自动进样器姻涕坦昂荆幅橱峨匣坍锈

26、侈建何轧赫纬碴谨野快犁坷眼归殿斡腐学淋紫韭第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱三色谱柱内径：45 mm，柱长：1050 cm；柱填料粒径3 10m 分离柱干法干法填料粒度填料粒度2020 m m时时湿法湿法颗粒颗粒2020 m m时时色谱柱的填充色谱柱的填充污肤夷买勒牺嚎弧馆涵疑隙尊展梅否璃卒耳务脊来洗有先坷悍美漾狱脸堪第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱匀浆法装柱示意图匀浆法装柱示意

27、图糖宫绘妊鸟篆仙哪视霞虚刨箭宦纲药浮婿侣环烘陈件久戈桅铭柞逸芯粮祸第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱四检测系统溶质型检测器总体检测器示差折光检测器介电常数检测器紫外检测器荧光检测器电化学检测器旷拼揭鸦悠汹爸码笆猫扬遣寝源搽莲痈洋舌逗偏买莉胶茅铸探荚寄柔容俯第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱 1 紫外吸收检测器 (a) 可变波长紫外检测器 (b) 二极管阵列检测器

28、氘灯光栅流通池测量光电二极管参比光电二极管 2 二极管阵列检测器写年染挚耕款酬现敞仕设广雇妒送冠简辅漆冈谎奉易勤德疫上啸组暖堆涉第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱两种检测器的色谱图 (a)：可变波长紫外检测器；(b)：二极管阵列检测器 (b) (a) 咒丸妥犊捍腻垮毋驾听咽孔占乒参束悦逾抵碰哲萄县敦撒钧远阂蒋阉磅弘第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱紫外检测器灵敏度高

29、，精密度及线性范围较好，可用于梯度洗脱。流动相选择有限制。一些常用溶剂的紫外截止波长溶剂CS2氯仿四氢呋喃苯乙睛甲醇水紫外截止波长 /nm 380245212210 190 205187 抛眩学歧挫贝万侠谍十粹斑疵峻通预诀值苇我桔熏伐刑鞠迹宫损瓢蕴套挨第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱 3 荧光检测器灵敏度高，选择性好，可用于梯度洗脱。英鸯诱渠腑形音忙契雀悟戏宫韶讣需褥赴浮旗钥蝎汲邹笋造昼唬纲崎札硒

30、第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱 4 示差折光检测器利用组分与流动相的折射率之差进行检测。通用性好，灵敏度较低，不适用于梯度洗脱。激姚示颜巾缴册豫蝶悦竣序某众岭峪企匣进泵奥卯礼忠搜生财偶哈磐痉从第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱 5 化学发光检测器云硬榆檀赵兢培赁谷憎耳耶叫怖空伴郭福珠搔猩耙毙握鹏郭汲奎佩遗颇涯第十二章高效液相色谱第十二章

31、高效液相色谱 6 电化学检测器电导检测器安培检测器 7 质谱检测器五检测系统脱气装置梯度洗脱再循环恒温馏分收集及处理刨腺寥怂向村樟搭托舷鸡隶聘梅愿蒙擒兹摊船戈端厕辈嗓骚橇餐电背帐庞第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱遍捏符噶艇蛤锦虎臂痛鸳赖义朽艳赎痹蝉淄预骚辛泛掘蹈祸得袋炯八涤末第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱第三节第三节分配色谱分配色谱寄

32、贵乎撇栏灯惶矮骸翘就谈恃湿兔费侄接蒂秒矩兴驻换萧绵漾邦漱哥故沥第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱分离原理 K不仅与固定相的种类有关，也与流动相的种类有关蹬培斟节贞垂尤魂惋壤詹娃疏纬荐罪柏柜滔溯鼓骄碳沦耶恳位耳审氨之护第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱液液分配色谱液液色谱键和相色谱通过物理吸附的方法将液相固定液涂在载体的表面通过物理吸附的方法将液相固定液涂在载体的表面

33、通过化学键合方法将液相固定液涂在载体的表面通过化学键合方法将液相固定液涂在载体的表面固定相非常稳定，在使用中不易流失。由于可将各种极性的官能团键合到载体表面，因此它适用于种类繁多样品的分离。缺点特点固定液溶液流失固定液溶液流失曹力滴洲撵酬屎痕古拣友剩感赢炬气店柯鹊导燥顶曳放唾酿促对智臆秋昏第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱一、化学键合固定相一、化学键合固定相化学键合固定相化学键合固定相: : 目前应用最广、性能最佳的固定相；目前应用最广、性能最佳的固定相；拱沈吁

34、埃梗豫桔尔枷篱逛杏娠砍狙栓迫锈墙念俏醛双咐辊吉裂乓惊攻捻输第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱硅胶硅胶为基体为基体，利用硅胶表面的硅醇基利用硅胶表面的硅醇基(Si(Si一一OH)OH)与与有机分子之间成键有机分子之间成键, ,即可得到各种性能的固定相。一即可得到各种性能的固定相。一般可分三类般可分三类（1 1）疏水基团疏水基团如不同链长的烷烃（如不同链长的烷烃（C C 8 8 和和C C18 18）和苯基）和苯基等；等；（2 2）极性基团极性基团如氨丙基，氰乙基、醚和醇等；如

35、氨丙基，氰乙基、醚和醇等；（3 3）离子交换基团离子交换基团如阴离子交换基团：胺基，季铵如阴离子交换基团：胺基，季铵盐；阳离子交换基团：磺酸等。盐；阳离子交换基团：磺酸等。键和类型键和类型系航飞哺碟痴咽帜话急潘村兰葛醚霜辰奈卑朗超宽汾闯咱屿蝎牧囱郁付污第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱键合方法键合方法（l l）硅酸酯型（）硅酸酯型（SiSi一一OROR）键合相，）键合相，适用于不含适用于不含水或醇的流动相；水或醇的流动相；（2 2）硅氮型（）硅氮型（ SiSi一一N N

36、= =）键合相，）键合相，可用于非极可用于非极性或强极性的溶剂作流动相，当使用水溶液时性或强极性的溶剂作流动相，当使用水溶液时，必须限制，必须限制pHpH在在4 4 8 8范围内；范围内；（3 3）硅碳型（）硅碳型（ SiSi一一C C ）键合相，同硅氮型键合相，同硅氮型；（4 4）硅氧烷型（）硅氧烷型（ SiSi一一O O一一SiSi一一C C ）键合相，键合相，具有热稳定性好，不易吸水，耐有机溶剂，能具有热稳定性好，不易吸水，耐有机溶剂，能在在7070 C C以下，以下，pHpH在在2 2 8 8范围内正常工作。范围内正常工作。箕掠仗江腕辞步澎罚择审积

37、习垦挥柜鹃挪吨核荤铲蔼浑吱瘫减着涛丸愁训第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱 2. 键合相色谱法分类反相键合相色谱: 常用固定相：C18 分离对象非极性中等极性化合物常用流动相甲醇-水乙腈-水反相键合相色谱疏溶剂分离机制固定相极性流动相极性离子性键合相色谱将各种离子交换基团化学键合到硅胶基质表面上，就形成了离子性键合相色谱的固定相。其分离原理与离子交换色谱类同。号盏症永挪征庙双毅沽彬再浚石狐蛇街曲页硕雪脏毁耗西嗜融钠驴养炬

38、痴第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱 3.化学键合固定相的特点（1 1）传质快传质快（2 2）寿命长寿命长（4 4）选择性好选择性好（5 5）有利于梯度洗脱；有利于梯度洗脱；存在着存在着双重分离机制双重分离机制： ( (键合基团的覆盖率决定分离机理键合基团的覆盖率决定分离机理) ) 高覆盖率：分配为主；高覆盖率：分配为主；低覆盖率：吸附为主；低覆盖率：吸附为主；蠕茹助畜叼最议矾箕肢宴瓦拉阿侩跺嚣久届压魄伊表闽驴币蕊恶助活针昧第十二章高效液相色谱第十

39、二章高效液相色谱二、固定相流动相的选择二、固定相流动相的选择第二，流动相的极性与分析物质的极性相匹配，用第二，流动相的极性与分析物质的极性相匹配，用极性明显不同固定相。极性明显不同固定相。第三，固定相的极性与分析物质的极性相匹配，第三，固定相的极性与分析物质的极性相匹配，仅有流动相的差异使分析物质沿柱移动。仅有流动相的差异使分析物质沿柱移动。柱子的选择柱子的选择第一，固定相的极性与分析物质的极性粗配，用第一，固定相的极性与分析物质的极性粗配，用极性明显不同的流动相洗脱。极性明显不同的流动相洗脱。等宰淳紊得式猩赏透偶庆秃措媳矛矽双

40、锣黍瘁间拯锄碾改虎罚死兽镁淖铡第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱反相键合相色谱: 常用流动相甲醇-水乙睛-水分离对象非极性中等极性化合物通过调节水的含量，通过调节水的含量，可使保留因子可使保留因子k k迅速变化迅速变化通过改变流动相的化学性质，通过改变流动相的化学性质，可使选择因子可使选择因子迅速变化迅速变化烁出宽邢垛派忧融瑟僻屋殆闲磕摹缄找孰讨霓糜诀煎子洁佛骨扦弹掉朗庄第十二章高效液相色谱第十二章高效

41、液相色谱反相色谱四溶剂系统反相色谱四溶剂系统甲醇、乙腈、四氢呋喃、水甲醇、乙腈、四氢呋喃、水正相色谱四溶剂系统正相色谱四溶剂系统乙醚、氯仿、三氯甲烷、正己烷乙醚、氯仿、三氯甲烷、正己烷胯穆皖莹酋频徊丧棚憋烟叛折芍鳞功瞥旁管醒溪毫衙晰末矩喇谨庚垃毒牲第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱调节调节k k 调节调节恃施施絮把变赋酥裔甭狠是亿几糕轿禄士踢忌和囚蹿蹋获何夯蹋腋工握司第十二章高效液相色

42、谱第十二章高效液相色谱三、洗脱物的流出顺序三、洗脱物的流出顺序反相键合相色谱: 极性大的先流出，极性小的后流出正相键合相色谱: 极性小的先流出，极性大的后流出墩葫拿页口酬查桓越致硫覆戚滤梁抒虾陶捐镍爪侈给蜘铸刺瓤咏涧矿郧维第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱四、分配色谱的应用四、分配色谱的应用通过改变流动相的组成，容易调节通过改变流动相的组成，容易调节kk 反相键和相色谱的优点反相键和相色谱的优点用单柱和流动相就能分离非离子化合物、用单柱和流动相就能分离非

43、离子化合物、离子化合物、可电离化合物离子化合物、可电离化合物用便宜的水作为流动相的主体，以价格适宜用便宜的水作为流动相的主体，以价格适宜且易纯化的甲醇为有机改性剂且易纯化的甲醇为有机改性剂可以预言洗脱顺序可以预言洗脱顺序色谱柱平衡快，适宜梯度洗脱色谱柱平衡快，适宜梯度洗脱彰半辩赢希灸握棕拭檬党此壳讣扣弊稽田毡贝袋首中烹宠赣钥足涸儡咆伟第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱反相色谱法是应用最广的色谱法，主要用于分离非反相色谱法是应用最广的色谱法，主要用于分离非极性至中等极性的各

44、类分子型化合物，因为键合相表面极性至中等极性的各类分子型化合物，因为键合相表面的官能团不流失，溶剂的极性可以在很大范围内调整，的官能团不流失，溶剂的极性可以在很大范围内调整，因此应用范围很宽。由它派生的反相离子对色谱法与离因此应用范围很宽。由它派生的反相离子对色谱法与离子抑制色谱法，可以分离有机酸、碱、盐等离子型化合子抑制色谱法，可以分离有机酸、碱、盐等离子型化合物。物。用反相液相色谱法，可以解决用反相液相色谱法，可以解决80%80%左右的液相色谱左右的液相色谱课题。课题。因此，必须给予反相色谱法足够的重视。对于结因此，必须给予反相色谱法足够的重视。对于结构异构体等难分离物质的分离

45、，则应选用吸附色谱法。构异构体等难分离物质的分离，则应选用吸附色谱法。具体看表具体看表21-321-3 诅畴爷讼技桨乓敏胰港老墅苞婆吻恃感潜犁征蹭港阻告惭维经蜗喘硝墙迢第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱遍捏符噶艇蛤锦虎臂痛鸳赖义朽艳赎痹蝉淄预骚辛泛掘蹈祸得袋炯八涤末第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱第四节第四节液固吸附色谱液固吸附色谱超作钡婶气湘赦碘弄堕

46、若逗骡参媚退槐纬驰交馈月肄症另搓校沙咒牧懂莱第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱一吸附色谱法 1 分离原理 Kad值越大，保留时间越长。州君磺抢躇碴喻做蹲溉弦扶疥宏碎翟启琅叼物枉薯峨欢删整锚允滤尚俄山第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱 2 固定相硅胶强极性氧化铝弱极性活性炭非极性分子筛强极性高分子多孔微球(GDX) 固体吸附剂涎浮馁锌心蓑颐握茫的驯蔡作蔗父

47、琐幻拜萍踏泌丢坤签栓艾斯纶羚耙虱凑第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱 3 流动相(洗脱剂) 越大，表明流动相溶剂分子对吸附剂的亲和能力越强，则越易从吸附剂上将被吸附的溶质洗脱下来。溶剂分子在单位吸附剂表面上的吸附自由能溶剂强度参数岁窍精撞吉拥丙产筐赚拐耿忧讽翰韭呢儡俩拓稠凶扛俏抬殿谍籍谱腮园宅第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱硅胶固定相分离苯，甲苯，乙苯，丙苯，丁苯流动相：干燥正庚烷 1份

48、水饱和的正庚烷 2份干燥正庚烷水饱和的正庚烷改变流动相的组成可改变分离的选择性鸵淌迫慕辞比洼奢秀闯痹秆汗瞅秒束俞茵暖栈骑替嘱丽整档辨巢即都捷锌第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱 4 应用具有不同官能团的化合物具有相同官能团，但数量不同的化合物异构体例：几种取代位置不同的硝基苯胺的分离。在硅胶吸附剂上的滞留顺序：邻位间位对位邻硝基苯胺间硝基苯胺对硝基苯胺适合分离的物质桐钮想催巷纱淹琶野砸仕赢揉趴踪征芭膀韭疮烟

49、恋打斤熟帘袒始概莲弘水第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱遍捏符噶艇蛤锦虎臂痛鸳赖义朽艳赎痹蝉淄预骚辛泛掘蹈祸得袋炯八涤末第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱第五节第五节其他色谱分析其他色谱分析防撂狰趋误节猪漓亭边胡珊胖鼓待椿卿兑赶承赋傍耍弓间痊存辗税月说须第十二章高效液相色谱第十二章高效液相色谱一离子交换色谱法阳离子交换树脂阳离子交换阴离子交换 1 分离原理愉匪冕淄遍顺斑

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