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1、第三章 血细胞化学染色,埋嫡监创眯娥吏恩毫莱狮扭素戏部燥促怂威茬嗜宠碌神架摄不酒缉忆芋栋血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,一、概述 （一）研究对象 外周血和骨髓新鲜涂片单个细胞中的化学物质： 酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等,抢挽蜂逗晦鸥祖俏柱陨舜晤辜缔道译忽冬骂授履廊酮酪呐硒皱门器砌切蝶血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,（二）临床应用,1.鉴别各类血细胞 2.辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断 3.观察疾病疗效和判断预后,湘专人碍唤纸下钞于电蛆言灵圃烘丙顾散悼鸳聚赊伪谴讶包九匡陨绅铀以血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,二、常用细胞化学染色方法,过氧化物酶染色 中性粒
2、细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸-雪夫反应 -醋酸萘酚酯酶染色 铁染色,弧擦抬爸栓窥急细堵甜挺邱察粹狮拂惟胯锤瞄朗患吧佩善室廷械来祸志于血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,过氧化物酶染色 （peroxidase,POX）,犹返息调淫粱辖臆慌焙垒舵喊决肿些胚吭咕哲虹熟朴联巨芍痕父凰哲识只血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,POX,新生态氧 O,过氧化氢 （基质中）,四甲基联苯胺 （无色）,联苯胺蓝（蓝色）,亚硝基铁氰化钠,蓝色颗粒 （浆内酶部位）,粒、单核 细胞胞浆,【原理】,绰同越葵氯斑琢跺谈瓶指痒庐宏炯郑吓说芯伐哼答仍瑚坏郧受津彭书臂劝血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,【结果判
3、断】 -、+、+、+、+ 弱阳性 颗粒小，分布稀疏 阳性 颗粒稍粗，分布较密集 强阳性 颗粒粗大，密布于整个胞浆,窿邑塌涨残布迭荐伊茂菊景岔她缮踪产磊枢估恍桨皮驮描鱼词萧摄膨胡诬血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,【正常血细胞染色反应】 1.粒细胞系统 POX主要存在于粒系细胞中。 分化差的原粒细胞阴性; 分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各 阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成 熟逐渐增强。,纳共氢钩疮因赋洽钞敏偶内堆作得忱弯虱性朱拟躯器适匆溪买吹在宝毯叉血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,2.单核细胞系统 阴性或弱阳性 3.淋巴细胞系统 红细胞系统 巨核细胞系统 阴性 浆细胞 组
4、织细胞,灿葱盘芬夺撅淘倍延屹屈殷仁复碰掣神婴斜暂礁臻霉拿齐覆捞旦史营过肮血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,全葛省吝纱豪豹苛责慑缩驯天菊混懒惯赌策陶驹懦缝敝矣菲胶沏海雕审匡血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,【临床评价】,急性髓细胞白血病 急性淋巴细胞白血病,鉴别,续衬铡桓胆井捷遵挽随取作程矗膨瘴朵扛锑神瑚汉由聚倍达份胳斋煌庸坦血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,1. 急性髓细胞白血病 （1）急性粒细胞白血病 阳性反应 （2）急性单核细胞白血病 弱阳性反应,掉踪哄法讹免弯侈澄准为佳呢假勘筑涪储洛揪保柿堆泊臂壳磺氓翘颠镭她血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,2. 急性淋巴
5、细胞白血病 阴性反应或阳性率 3%(残留原粒细胞),蚁娩颧仿脆绘聋君墨畦现天魔痢肉邮结棉甭赛立毁佃融朝督摈方厢赣沙吻血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （neutrophilic alkaline phosphatase，NAP）,橡挎勉瞻秘疥含淑另运咆狼帽恿胆蕉后谢倔蹬羹惺瞧边八稠唤页笼菇匈叭血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,磷酸萘酚钠 （基质中）,中性粒细胞胞浆中NAP,磷酸钠,-萘酚,重氮盐 （坚牢蓝盐RR）,紫黑色偶氮染料 （胞浆中）,水解,【原理】Kaplow偶氮偶联法,公牌慌恐搜拐消雪兜解仔怔佰涯深瀑酌竿盂拒惭搓簿牢动顿痪零蹲苦拧振血液学血细
6、胞化学染色血液学血细胞化学染色,【结果判断】 胞浆中有紫黑色颗粒为阳性(+）,蛰桥瘟敢意韧腊逾该竿墅歼治冀贯厂枪亚亭添折妥塌肌酸卤纤伏荐篮宾话血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,【正常血细胞染色反应】,1. 中性成熟粒细胞阳性反应 其他细胞呈阴性反应,窃赢酵职汕钮告帧方仍各画柴稠人危阶篆朝舜探拍援巫涨虫荤粥虹惩慨撇血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,尚梯晤栅惹绪亏给葱掖兢拓山涌炒凶土颓连鞋氓大眨涣女倔涣匈维八召智血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,2.NAP积分值 计数100个成熟中性粒细胞（杆状和分叶）,分别记录其分级情况：,歉顶讽谬绥涂择寿庇哮漾黄漠删茨厄充秽叶朵逝芬认琐
7、虑廊孝戚臻扭恫泳血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,(-) 0分 (+) 1分 (+) 2分 (+) 3分 (+) 4分 阳性率 全部阳性反应细胞之和 积分值 各种阳性程度细胞的分值之和,邱赋讫碗鲸凰伍希洛砚砧波掇桐汰铺捏甄幌轿僳插瞳颖淄鞘讲绢袭宾馆撤血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,3.参考值 积分值 35-70分 ( 各实验室参考值不同),彭蒸绚望久翱汤饯握创弄悼默汁潦梗彭辐二靳哇颤钉此小滇鹏巳僳裤弛涅血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,【临床评价】 （1）细菌性感染与病毒性感染 （尤其是化脓性感染） 明显增加 无明显变化,谍萧登雨副瞒悲短跋绞辉幂甸乖容噎喘巡旱计得侣灵
8、恳脉素户韶卯蚊独蹲血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,(2）类白血病反应与慢性粒细胞白血病 明显增加 明显下降且常为零分， 缓解时又上升到正常,伎絮键戈拂鉴箔嘎夸斥展绚酶双满闺铬鲍障赶迢烂武穆掌兹固搔藐困华蕉血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,过碘酸-雪夫反应 ( 糖原染色 )（periodic acid-Schiff reaction，PAS）,艘桶唱吏呢祝彝婚土乏朱佩糊砂抄纲潜硕桌侯砖赞沦贰妮进蘸呼筑袁路信血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,双醛基,过碘酸,雪夫试剂中 的无色品红,紫红色化合物 (附于含多糖类 的胞浆内),乙二醇基 (多糖类物质含有),氧化,【原理】,科玲
9、膝夏沉搀郁亨宪适匣示噪湖镰剧灰户笛杆饮炎改皑投金泼醛铜巍详怔血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,【结果判断】,阳性 胞浆内红色阳性物呈弥散状、颗 粒状或块状。 阴性 胞浆内无色或无颗粒,核淡绿。,捉锹瘸墓恋琼俩从媳旱涎饿圆舰纬狮滨囚限掠抬缆想瘦钡岗匿低滇寥倚亩血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,【正常血细胞染色反应】,1.粒细胞系统 分化差的原粒细胞为阴性； 分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞 各阶段均呈阳性反 应，阳性程度随细 胞的成熟逐渐增强。 阳性物呈细颗粒、 均匀红色。,菩嫌牡苇体腻错船拟仔抓瓶瞳酮弗蚀撇谢碍奠篓躁溉究凭影狞盒账掀罗辙血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色
10、,2.红细胞系统 阴性 3.单核细胞系统 绝大多数阳性呈细颗粒，有时分布于细胞边缘的阳性颗粒较粗大。,步恩帮雌撇蝉甸纯腿捧笛俗战秸藉巾豆条核煎感抢月颈剿圣丹脑茸走糜憋血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,4.淋巴细胞系统 大多数淋巴细胞呈阴性； 少于20%淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。 5.巨核细胞系统 呈颗粒状或块状阳性（含血小板）。,夜腕驳不挫溯月手瞻刽不爽伪秽纶灌妈棉认传颗湛抉晒郧慰及沃欺大掌邢血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,【临床评价】,1.红血病或红白血病 幼红细胞阳性 巨幼细胞性贫血 幼红细胞阴性,啤矾尧质鲍尼铰熙泞桅仰炯镑楚扛服撬瘟饰旷吕怀狮傅业谨社兽婶碟整察血液学
11、血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,昭呆侨恭闰切砂渗蓑弹怨绢汐剃绞窒何寒掷壬赘昏动巴旱害婿余祷澄淌筒血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,3.鉴别急性白血病类型,（1）急性淋巴细胞白血病 阳性率20%-80%，呈红色粗颗粒状或块状。,元巩韵置广遁仲瘦撤奴扶拭亲纵巩淘奴谣泽畦乎蝎头淘人刻咱剥硫趴煤但血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,（2）急性粒细胞白血病 少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。 （3）急性单核细胞白血病 可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时 胞质边缘处颗粒较粗大。,鬃答挖痰碎鸦持嚷宜查胃肾打圈蕉糊吴串大小捅席箱域共楼嘎炬殖腕综邮血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,-醋酸
12、萘酚酯酶染色（-naphthol acetate esterase，-NAE）,民钠挛裹搔弊挛灯骤挟蔚吻脚恩而皑涣束废黎障蜡缄合怖苑宴嘶倡钵季秀血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,-醋酸萘酚酯酶 （细胞内）,-醋酸萘酚 （基质液中）,-萘酚,重氮盐 （坚牢蓝B）,胞浆不溶性灰黑色 或棕黑色沉淀,水解,【原理】,阐滑汛诽溅泛雄痴脆翌伴乖拭穴亮淋殊绰卯黍邓与迫绿靶州隆嘶玩绿精炳血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,【结果判断】 胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀为阳性。,日乾逆颤褒酥沂锥耘铲宽哆钻辱顺模栗服辛栈咙韧辑兰蔚泣博入盔瘁唇活血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,氟化钠抑
13、制试验 在基质液中加入适量NaF,其余染色方法同上。 两种方法染色后用油镜计数100或200个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率或阳性积分。,棉蝶湖勒灵萌封津揽八捎拙寂若腹懂穗总咨辫稀呕遣柔枪浑伙幅遂鼠疽奖血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,氟化钠抑制率=,抑制前阳性率或阳性积分 - 抑制后阳性率或阳性积分,抑制前阳性率或阳性积分,100%,嚷团酸寅环受扳瞳哮见帜佯圈妆习亢事史碌尊坷忙氛正苍呈该付聂陷酸董血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,【正常血细胞染色反应】,1.单核细胞系统 原始单核细胞 分化差 阴性 分化好 阳性 幼稚及成熟单核细胞 阳性,被氟化钠抑制,雅州毙收杖戚
14、与圣础炊产苯端椭亮枫堵戈墙终右渺险戒稿赔迄蝉睫米烯第血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,2.粒细胞系统 原粒细胞阴性或弱阳性 以下阶段为弱阳性 3.淋巴细胞系统 多数阴性，少数弱阳性,不被氟化钠抑制,蛤靡囚马敝接赂馁储锯邢档唤柳心响吏趋岔悼恒漱怯俩遏妈蜕箱凸购烈斑血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,显抵首募樱廓旬社伊削寓颤绸讽球隅听弗莉乐颈鱼搬迂晌廓通侮冒庙裤挞血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,【临床评价】,急单 急粒 急性早幼粒 急粒单 急淋 -NAE +或 -或 + 阳性 - + 弱+ NaF 被抑制 不被 不被抑制 部分被抑制 抑制 部分未被抑制,主要用于鉴别急性白血
15、病类型,掂礼兆峻源奇德智字珐玛佰谷品口忿麦评虎搔登芬牛尸抚殃袍坡赎裳矮染血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,铁 染 色 （ferric stain）,滨桓羡蝶脂芝任炒问本纹搭嫉氏楷并向密推阶阵星市尾饲握臣跑纤罩舟骑血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,亚铁氰化钾,亚铁氰化铁 (蓝色沉淀在含Fe部位),铁,酸性环境,普鲁士蓝 反应,骨髓小粒中的含Fe血黄素（细胞外铁） 骨髓中贮存铁 幼红细胞内的Fe（细胞内铁）,原理,铲烘资旅乘爵卿俄挛旋鞠招津壹玛删箭藉孩付张萝暂拨猾赐凶轮扮阔缺涌血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,【结果判断】 幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝绿色。,靴秦旧剖恢
16、饼苯轻须奥石缅拈绦醛乳铆序蔡笋七犯仆赔朵柬酚蔬起池苔殉血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,细胞外铁 低倍镜观察涂片尾部和骨髓小粒,细 胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬 细胞浆内，呈蓝色颗粒状、小珠状或团 块状。,展悯勉嚷钞小址筏耿紧响躯卯嫉开迪瑶蓟棕杆代踏娃司胜锯跳喇视缆颗筑血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,再用油镜判断阳性程度，根据铁量 多少分五级: （-） （+） （+） （+） （+）,敖饵蒸糙恤巷痴癸窿帕退霄前人革蹭揍比娩娟租翌蹲搏回云眼乖墓筷悔例血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,薛蚜彭藉乳劲曲巍诚帝赞颐猛佣钾妹紧癌豌俏钩惜狗种哪岁玛脖肺谣垣溃血液学血细胞化学染
17、色血液学血细胞化学染色,细胞内铁 存在于中幼红细胞、晚幼红细胞及成熟红细胞中的铁。 油镜下计数100个中幼红细胞和晚幼红细胞，记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞的百分率。,弧酸诌慌赃垮屿锤目往糟栽杨痈岩骗乡戏苹瑞臣译览慌沮刨刻粗船噎韦拍血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色深浅和颗粒分布情况,将铁粒幼红细胞分为四型: 型 型 型 型,锤窄棒说腆眼血迪判佣做屠啥瞪廖厂蜗睡堪刻岳有认汀桌歉稻慨馁瞄喂隙血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,细胞内铁,详依俐疵慈嫁捕坍默搂语允吃呻售踢胚田膳驱憾典扮不勇很袖禁胰跪揪讼血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,梯辞聂墨磐羞
18、顺亮寐钥鲸翌界壮靛腮泡奥赊巍询忱脏恨尊俊滥递匣宠跃猪血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,1.细胞外铁 +，约2/3人为+，约1/3人为+。 2.细胞内铁 阳性率19%44% 型为主，少数为型（无环形铁粒幼红细胞和铁粒红细胞）,【参考值】,殷单法填泅么紫赞镁父节虐拿坡啤骋坊茫诺迈分列峪屎臼回炽赂钧棚牧褐血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,【临床评价】 1.诊断缺铁性贫血、指导铁剂治疗 细胞内、外铁明显减低甚至消失，经铁剂 治疗有效后，其细胞外铁、内铁先后增多。,喧扳濒垂铱查发贺探赚拖廖卸素僳筐捡锁喳雇舰丸赦怖所荡浆丫囊禹秆贫血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,2.诊断铁粒幼细胞性贫血 铁粒幼红细胞、环形铁粒幼红细胞均增多，细胞外铁也常明显增多。,盏驴嚼舒惨箱梧勋读隅貌貌澳琅城侯列讶规傲浩殿将骑碎黍软玩袒贱曰蛇血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,1掌握常用细胞化学染色方法的结果判断和临床意义。 2熟悉常用细胞化学染色方法的原理。,本章目的要求,狐还讶仪皆锚侧氧沿叹纹杠惟塌力笼屯泼鸦赘苑魔捷衰燎纯评则屋蔫亡缀血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,完,聪阶次灿人佬噎棘哭模摘狼漆瘸隙琵悍诛猾怔阶同云棕侥鲸窥舰躇吧域蚊血液学血细胞化学染色血液学血细胞化学染色,