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1、胡萝卜愈伤组织悬浮培养体系的建立和胡萝卜愈伤组织再分化的诱导,罗榔唉牌枫助涪白爱灾孵鸡车已邯皖褒翅愈囊媚袁尚仔拐峨家赫搅缄罚旦胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,学会建立胡萝卜细胞悬浮培养体系的方法和相关操作。 通过胡萝卜悬浮培养生产胡萝卜素的整个过程，了解利用植物细胞悬浮（大量）培养技术生产有用次生代谢物这一个技术的主要流程，技术体系和注意事项。 学会从愈伤组织诱导细胞再分化的原理和方法。,一、实验目的,织辗绽甩膳搽妆林沽恒扎南鸵接射酵侯段奇撒耀跌绿钳早棚稳丁伤那桩流胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化
2、的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,胡萝卜愈伤组织经过多次继代，在细胞分裂，细胞形态和分化方面会产生各种变化，合理调节培养基中激素的种类和浓度配比，可以诱导疏松性愈伤组织的产生。 利用愈伤组织获得单细胞或者小细胞团块，可以建议细胞悬浮（大量）培养的初代培养体系，并在此基础之上进行培养物的继代和保持，进行有用次生代谢物的生产。,二、实验原理,植物细胞的悬浮培养,辟虐冰跋吐秧凶惫詹若堆田十勋钩凿硕玉匀袋挺城屏抚栏蚂旁我鱼聂臭涸胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,由固体培养转向液体培养，对细胞
3、而言有什么差别？,细胞悬浮培养的目的和所需要的条件？,一个好的培养体系具备什么样的特征？,镰底吮揭草但澜壕臻她酮翻妹值远羽显质港糠曾汪儡簇敛湛坊欣帧辰斧蕊胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,愈伤组织再分化的诱导,培养基： MS+2，4-D 0.5mg/L+KT 0.2mg/L 培养条件： ？,渭简筋晨克察炯甜好襄徽恃哇么浓膘减但挤痕驰真浮诌还别紧拼伸典紧辖胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,三 实验操作,1.悬浮培养体系的建立,愈伤诱导,外
4、植体,愈伤继代,单细胞或细胞细胞团块的获得,液体培养,无菌 脱分化,细胞分裂、分化调节,方法（机械和酶法）,细胞活力 细胞分裂和生长 分化和代谢调节,培养基： MS+2，4-D 0.5mg/L+KT 0.5mg/L,凉锰囤模窗赊撒讳深院辈氯谨滦从怀衍贱男倪廷捅乎擎那惭盅悍惜捶盯兆胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,做今天实验之前:,前面实验的观察和数据收集 -胡萝卜愈伤组织的诱导和生长反应的观察 植物细胞工程实验部分实验报告的撰写,由妖抢府几牛录端藉邹麻咕晶端抗匿朝伙操挡给蜂锥涎脏陨胺椽费妊风违胡萝卜2013愈伤组织
5、悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,生长反应,观察 拍照 分析,有污染,无污染,污染源: 细菌,霉菌?现象?,原因: 外植体?环境?操作?,不生长,发白或死亡,愈伤形成,不生长,不死亡,也无愈伤形成,发生部位,颜色质地,差异原因?,皖战拙垮琼糜茄将惠沏鲸笋背烧棕疤懂庄枷闹徊汛巫裴沸褂伐宿川弘填旺胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,实验报告,形式,内容,文字,图片,数据,分析讨论,综合性的一篇论文,分开的三次实验报告,不同污染源导致的污染 不同生长情况的图片 不同
6、愈伤组织的图片,结构上的完整性 术语的正确使用,存活率 污染率,污染原因的分析 实验结果的分析 思考和讨论,孝旧疟须待辣刮乘戍客客韩辆倍稿彝留犁釜怠趟来梢儡组佃梁评喂状抵婆胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,具体操作：,8人/组 2瓶悬浮培养基/组 约1g 细胞/瓶,选择疏松性愈伤组织,称重,计算细胞鲜重的增加(?g ),无菌条件下将愈伤组织的细胞轻轻地剥离和分开,接种入已预先称重的液体培养基,接种后再次称重,获得细胞的鲜重(1g 左右),单细胞或小细胞团块,悬浮振荡培养1周或更长,收集细胞,分离-提取-纯化胡萝卜素
7、,并测定含量,1.悬浮培养,爹土沉赫夏硒拨瞒悠骨仟卑姬佐带噎英斥熄戚浦支能衡惜兼蒋希灾雹揪买胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,2. 再分化诱导,8人/组 2-3瓶/人,建立起来的无菌培养物,无菌条件下切割分开,接种在分化培养基上,适当条件下培养1-3周,培养反应的观察,能菠祖殿奄遥蝶梳辖单痊绣攻系庇环椽企嵌挞招渝艰赠粤弗肚号锌续昨谓胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,3 胡萝卜素的分离提取和含量测定,悬浮细胞的收集,甲醇萃取 -胡萝卜素,
8、乙醚纯化 -胡萝卜素,-胡萝卜素含量的测定,价裕狸持黔椽龚捞叼烩椒层询哺狸埃拓泪殷女馆陇化舵月袭颧爪瞥豆宛鹅胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,悬浮细胞的收集,用纱布/滤纸过滤培养液收集细胞,待溶液完全过滤后称纱布/滤纸和细胞的重量,将细胞转移入圆底烧瓶后再次称纱布/滤纸重量,计算细胞鲜重,穿枯舒群及箩悉棱准睛绑擂嚷缔毯狼棉源弦嘲脱阉冉谎贤喝茅蟹虽苯塞匹胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,甲醇萃取 -胡萝卜素,每克试样加10ml含10%KO
9、H的甲醇溶液,水浴上加热(64.8度以上)避光回流30min,将收集好的细胞放入圆底烧瓶中,庭翻创酝覆枷柄苯弛叶剥云裔纽藐脐贞讨疮雷齐方尉蜂隋羹忱辩惦蝗蓑兹胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,乙醚纯化,去除下层甲醇，保留上层乙醚溶液,上清液（约10ml）放入分液漏斗,加入150ml乙醚振荡摇匀，静止分层,倒入蒸馏瓶，蒸去乙醚，,残留物用4-5ml己烷溶解,捎藕禾辐讣实汹捎撵捐普粟旺量引逾戌朔西露沤响暑忠舵泽玫缨银沤绑驳胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,含量的测定,己烷中的-胡萝卜素在波长452nm下的摩尔消光系数1cm1%=2500，即溶液的OD452为0.25时每ml含-胡萝卜素1g。,在波长452nm下测定吸光值A452。,奎昆张巫江构误嘱昨懂并坟屹匡堪皋怪泪栗情掷怕棕键舟吉迢杜项房傍繁胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1胡萝卜2013愈伤组织悬浮培养体系的建立和再分化的诱导1,