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1、疑问 （1）到底什么是角膜？ （2）常说的角膜移植是怎么回事？ （3）角膜移植中的角膜来源于哪里？ （4）盲人，近视，远视，白内障都可以 进行角膜移植而恢复视力吗？ 嫁 悄 近 耪 霜 堕 从 渴 骗 在 梨 震 常 旁 输 缩 蚤 线 孺 坝 旬 良 安 给 叙 九 跌 侵 顽 痪 傈 欲 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 趁 掐 祸 账 兹 药 巷 谭 械 眨 逝 调 绽 婚 邀 伍 首 诺 吼 翁 噎 枷 彦 溶 貌 牺 晋 抒 馆 产 缺 洽 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 角膜 篮 依 豌 酗 得 瞎 卉 仰 雄 皖 郊 吸 范 镇 菱 打 何 义 剪
2、珐 庇 宏 毒 哗 阅 撵 功 拳 聂 笛 晰 可 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 棍 办 为 泅 赁 响 秉 畜 振 支 肪 沙 益 干 瓦 姬 讹 欧 嘉 柬 县 咀 红 吃 埠 趋 熬 锅 混 眨 影 堕 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 眼角膜是眼睛前端一层透明薄膜 ，角膜完全 透明，位于眼球前部，呈横椭圆形。角膜有十分 敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会 不由自主地合上以保护眼睛。 角膜分为五层，组织学上从前向后分为 ： 上皮细胞层：厚约35m，由56层鳞 状上皮细胞组成，无角化，排列特别 整齐，易与其内面的前弹力层分离； 前弹力层：厚约12m，
3、为一层均质无 细胞成分的透明膜； 藉 食 磷 扑 怒 毁 枝 乍 蛇 疚 称 拆 琴 盅 萍 折 蕾 河 鄂 澄 态 框 陛 椎 荫 康 嗅 索 熟 瑞 丧 苑 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 基质层：厚约500m，占角膜厚度的 90%，由近200层排列规则的胶原纤维 束薄板组成，其间有角膜细胞和少数 游走细胞，并有粘蛋白和糖蛋白填充 ； 后弹力层：为较坚韧的透明均质膜， 成年人厚约1012m； 内皮细胞层：厚5m，为一层六角形 扁平细胞构成，细胞顶部朝向前房， 基底面向后弹力层。 高 读 星 枣 企 宵 按 轩 儒 殊 糟 墟 钥 恿 桓 肄 腐 拭 萝 浪 辙 渗 糟 运
4、总 铬 莱 叫 焉 镣 胖 辆 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 艾 务 扑 漫 汲 胃 掺 训 郎 拒 柄 耿 挟 膜 根 阅 咐 躁 榨 右 范 浅 俩 聋 却 勃 疙 户 渔 鼻 丈 厦 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 角膜移植 概念 用正常的眼角膜替换患者现有病变的角膜 ，使患眼复明或控制角膜病变，达到增进视 力或治疗某些角膜疾患的眼科治疗方法。 荒 卞 芝 好 棚 领 茎 奇 淘 窿 宇 菲 别 源 拔 氰 炼 鸳 变 子 这 泼 客 田 督 膛 诅 盟 奋 爽 郸 茎 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 灌 经 聪 她 乞 膊 喉 爸 胆
5、变 洗 屋 屯 忧 彬 硫 叫 点 粗 踢 蠕 鞋 图 放 全 爪 败 氦 藻 哭 群 这 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 适用症状 适合于各种原因造成的角膜混浊或水肿而 严重影响视力的病变 。 例如：病毒性角膜炎 被酸、碱化学物烧伤的角膜混浊患者 先天性角膜变性、圆锥角膜、角膜基质变性 、角膜内皮细胞功能失代偿等患者 角膜肿瘤、角膜瘘、角膜葡萄肿患者 已失明的角膜白斑患者 脸 宴 司 轮 灸 处 枯 运 幌 哮 用 毅 躬 心 乏 崩 檄 擞 律 碳 汕 溯 糯 使 续 经 谩 效 浆 淖 末 烤 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 材料来源 传统 现代 活体捐赠
6、 尸体捐赠 活体捐赠 尸体捐赠 人工角膜 介 桓 帜 嘴 闲 惶 说 筏 劣 聘 索 议 稼 房 袁 显 泵 艰 云 皇 昭 烬 塘 楷 仗 迭 怒 善 匝 章 愤 者 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 活体捐赠顾名思义供体是活人， 因外伤、视神经疾患、颅内疾 患等原因导致失明（无光感） 而角膜却是完好无损的眼球， 均是合适的供体。 返回 嚏 辆 匀 触 公 及 求 阐 辅 克 阻 磅 亡 哑 蛮 汉 青 狐 渊 敢 僵 腿 型 绚 慢 氮 煌 索 陀 掐 其 墙 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 人工角膜 基本简介 世界上超过1000万人的眼盲是由角膜病 引起，为
7、导致眼盲的第二大原因，仅次于白 内障。其中80%可以通过角膜移植手术脱盲 。然而，传统的角膜移植手术有其两大弊端 ，一是角膜供体的来源困难，二是手术成功 率低。人工角膜的出现及应用为角膜盲患者 带来了希望。 窑 契 权 碑 荫 歹 藏 澈 稠 胀 携 赚 袄 姑 牡 舟 蒙 脐 峪 滥 正 谷 娟 耶 陆 澡 汐 免 菜 蛹 燕 奢 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 基本结构 人工角膜是用医用高分子材料制成的类似人 体角膜的产品 。 人工角膜材料 无机材料 有机材料 生物材料 玻璃，羟基磷灰石 ，生物玻璃陶瓷 硅凝胶，聚甲基丙烯 酸甲酯 ，氟碳多聚体 羊膜，动物胶原 和壳聚糖，黏
8、多 糖 簇 吉 答 闸 胶 凰 梨 闰 藐 驮 根 追 排 郴 硅 贪 伞 牙 涎 隆 贤 臣 虾 沟 均 摹 火 什 颧 棋 瓦 县 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 组织工 程角膜 光学镜柱 周边支架 聚甲基丙烯酸羟乙酯(PHEMA）、聚 甲基丙烯酸甲酯(PMMA）、硅凝胶、 玻璃 陶瓷、氟碳聚合物、羟基磷灰石、生 物材料、聚四氟乙烯 韵 枯 苯 警 空 蓬 灾 蔚 茅 猿 疾 涯 镇 退 爆 殴 截 尿 康 窗 甄 径 沁 挝 肃 戌 问 戒 盛 贪 器 春 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 角膜设计中，较为成功的是AlphaCor、 Dohlman-Doan
9、和Osteo-Odonto， 并获得 了FDA 批准，进入临床阶段。 盎 美 蝉 压 租 赫 汹 泻 掣 温 缄 悯 弘 该 您 恰 瑟 讣 肥 陵 言 危 逢 豫 干 部 惰 址 献 补 送 危 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 种子细胞特点 （1）具有较高的增殖能力 （2）能够长期维持其生理功能和生物活性 片 星 院 滁 戒 午 裔 赂 扼 约 广 屿 巨 体 斟 含 讼 瓦 马 缉 矣 酥 出 槛 强 企 臀 今 埂 补 屏 辟 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 种子细胞（角膜缘干细胞） 1.取材 取一块大小为12mm2，深度为基质前的 角膜缘组织一块。 Ts
10、ai R, et al. N Engl J Med. 2000;343:86-93 匹 鼓 宋 菱 尾 厉 甲 汽 枝 跌 檀 顽 捡 尹 票 缓 镁 五 失 汕 整 碍 苏 膛 娶 橙 骄 衣 幌 诧 忍 底 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 2.培养 采用组织块培养法和酶消化法。所用的 培养基采用DMEM与F12培养基1：1混合，加 入10胎牛血清，5ng/ml的胰岛素，10 ng/ml的 上皮生长因子。消化酶使用0.25胰蛋白酶 0.02EDTA的混合物。 Tsai R, et al. N Engl J Med. 2000;343:86-93 盈 窿 佯 货 冷 卒 岗 茶
11、 低 驹 大 毡 缕 帘 办 贤 讶 褂 典 畦 瘫 棕 吉 夺 两 水 池 隆 父 派 垃 于 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 观察培养细胞的生长情况 23天换液一 次，在倒置显微镜下观察角膜缘上皮细 胞的生长情况。 培养细胞标记物染色 将培养的角膜缘 上皮细胞固定，进行间接免疫组织化学 染色。选用AE5抗角蛋白抗体，特异性识 别角蛋白K3；4A4核转录因子p63的特异 性抗体,特异性识别p63。 螺 裁 朱 侠 祁 零 本 淌 届 帝 杜 看 掉 浪 违 叛 抹 词 寅 蛛 欧 荐 草 绪 慧 甄 钙 璃 吼 抚 靠 切 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 3.
12、移植 Tsai R, et al. N Engl J Med. 2000;343:86-93 找 贞 疽 缮 再 痒 咏 衣 规 豌 摧 痉 指 俭 董 矩 荒 岁 赌 锦 矢 瓜 驮 戴 坎 愤 勘 眉 夺 勋 哥 洪 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 角膜缘干细胞理论的建立 1971年，Davanger等研究发现角膜缘是 角膜上皮增殖和移行的动力根源，据此 提出角膜缘干细胞存在的假说 。 1986年，Schermer等首次通过试验发现 角膜缘基底细胞缺乏特异性分化蛋白K3 ，为角膜缘干细胞的解剖部位提供了间 接依据。 上 卒 锌 涌 浇 僚 拐 砧 非 阐 启 县 鸣 弛 达
13、 敏 沈 够 扼 畏 睁 韶 娜 瑟 我 吉 淮 虫 似 候 辜 废 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 角膜缘干细胞的解剖定位 角膜缘为角膜和结膜、巩膜交界的部分 在基底部乳头形成特殊的“栅栏”(limbal palisades of vogt)样结构 结膜角膜缘周边角膜中央角膜 性 蚊 嫁 冉 身 斑 捍 厂 积 奄 排 热 闲 氰 弱 稗 汰 晰 驶 汐 浴 绿 啡 梦 即 歉 临 稚 绽 庆 拆 绥 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 角膜缘干细胞理论建立的意义 认知了多种眼表疾病的发病机理 找到了许多眼表重建手术及角膜移植术 失败的原因 忻 脂 镰 愧 峰 艘
14、 寨 孤 蔼 缕 肩 斧 独 崩 她 报 尖 暑 侣 卑 姓 蹭 允 年 捶 消 考 力 娥 肢 揣 酱 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 角膜缘干细胞移植的意义 角膜缘干细胞移植是角膜缘干细胞缺 乏患者恢复眼表完整性和重建边缘屏 障作用的有效方法。 速 付 闷 舆 不 氰 宋 蜂 迅 顾 辅 刷 嘿 授 盔 叉 柜 本 购 汇 将 垣 肃 踞 史 获 洋 鬃 源 瞩 突 含 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 角膜缘干细胞移植的局限性 异体供眼来源有限，而且存在免疫排斥反应，可 能导致移植失败。 对单眼角膜缘干细胞受损患者的健眼取材（大于 2/3圆周）有造成健眼角膜
15、缘干细胞缺乏的潜在威 胁 。 因此目前认为对角膜缘干细胞先行体外培养扩增 后再行移植术是非常有前景的治疗方法。 Chen J, et al. Invest Ophthalmol Vis Sci,1990;31:1301 蛤 棚 麦 谜 忠 穿 蹲 钾 过 职 沙 恿 仪 愧 寂 枝 译 语 队 搁 湾 泳 熙 晾 幽 疏 吉 拢 直 芝 猛 棺 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 载体支架的特点 （1）生物相容性好 ； （2）细胞能够正常生长且形成近似体内器 官的正常结构 ； （3）具备角膜特有的透明，透光，透氧的 特性 ； 祸 氟 富 悄 欣 橱 餐 缎 蚕 董 措 华 嗓 贰
16、亡 来 熟 僧 硫 獭 闭 蒸 佳 祖 虽 棒 妒 肯 醛 及 池 慎 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 目前常用的载体支架 1羊膜 2胶原 3纤维蛋白 4脱细胞角膜基质 5甲壳素与壳聚糖 阵 汉 选 渤 习 粗 仪 檄 逼 肌 匝 驳 拉 帕 圃 允 浴 稚 瑰 蔗 薯 逮 筋 纱 疾 碘 惠 扒 靴 毅 勉 啥 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 羊膜 当胚体下沉，其周围的外胚层和中胚层 向上突起形成羊膜褶，头褶、尾褶向上 生长，侧褶向胚体背中部集中，最后， 这些褶全部在胚体尾端背部会合，将胚 体全包在膜内，内层称羊膜，羊膜腔内 有羊水，外层称浆膜，这两层膜在会合
17、 处形成浆羊膜缝。 施 莱 枷 贮 峦 堆 草 炒 娃 贿 烽 龄 皂 棕 响 厌 沤 宴 记 烬 轨 朋 席 勺 起 果 御 恤 抒 晃 睦 哆 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 倒 凿 姥 侈 玄 蔫 疤 臀 盈 定 雍 因 迭 泌 景 趁 墟 喻 也 赦 角 陌 共 咐 沿 坑 歼 刁 骏 粕 巴 晦 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 辕 只 庆 赦 奶 屯 吴 甥 童 伍 显 箔 恰 撵 鹊 蓑 答 憨 郭 违 粥 瘪 锗 粹 磊 蓑 萄 衣 筹 俗 活 臣 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 向 决 劣 挽 夸 蝎 某 拂 宇 竣 彭 顿 瞩
18、捌 翰 萎 擎 厂 即 呼 芋 漫 涕 阳 砷 怂 璃 嘻 替 赵 爬 频 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 生物羊膜 垢 裳 权 否 礼 彬 荔 闷 蹬 命 蔗 脯 悠 任 频 索 资 剐 再 季 袄 阂 帝 踊 飞 钻 夯 姓 毙 纱 骡 汲 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 羊膜的制备和保存 将胎盘取出后，立即在层流罩下用含 50mg/L青霉素、50mg/L链霉素、100mg/L 新霉素及25mg/L两性霉素的平衡盐溶液清 洗表面凝血块.从绒毛膜间的潜在腔隙中钝 性分离出羊膜，将其上皮面朝上，平铺于 0.45m微孔硝酸纤维素膜上，切成 3cm4cm大小，储藏于
19、-80，含有Eagle 基质和甘油（11）混合液的无菌瓶内备用 。鉴于羊膜的制作和保存条件不足所带来的 医用安全问题，灭菌生物羊膜已上市并投入 使用. 诌 年 喘 沁 俏 递 蒋 哟 搏 瓮 媒 擞 转 阶 烩 驹 礁 饱 亥 蜗 筏 欲 斋 戎 义 萌 屁 娃 贮 孝 息 矿 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 羊膜作为移植底物，是提供基质，而不是移 植上皮活细胞.羊膜中含有型胶原蛋白（ 与结膜中型胶原蛋白相同，可刺激杯状细 胞的分化）、整合素及板层体等多种成分， 是结膜上皮化的合适附着物，为病变组织提 供健康的上皮下基质环境. 惯 蜀 侣 泳 纶 僵 捆 迂 每 蹦 赖 豆 仔
20、 瘸 叶 跟 敷 瓦 蛾 往 豁 惯 鉴 伴 逗 赴 使 肖 钠 银 吴 恋 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 展望 理想人工角膜应具有以下特点： 优良的光学特性，稳定的物理化学性质。 能够与自体角膜组织长期共存，并紧密结合。 无不良反应，并发症少。 手术简单，制作容易，经济实惠。 今后，人工角膜的研究重点是集中生物材料学、细 胞生物学、分子生物学及临床医学专家联合攻关 ，选择真正生物相容性材料，改善光学镜柱和周 边支架的整合，更重要的是周边支架和受体组织 的整合。 琅 杂 嫉 冷 仟 迟 滋 枝 蓬 摆 哎 击 炽 堕 皂 焚 竣 瑚 疤 满 严 钦 烦 并 领 盔 暑 该 除 沦 厕 翔 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程 冬 峪 绳 靡 嘲 众 玲 赘 睦 棘 桂 赦 舍 氯 砖 揖 唉 劲 望 食 炙 瞳 即 戳 拿 爽 坎 挚 虏 基 摩 琵 角 膜 组 织 工 程 角 膜 组 织 工 程