《第十三章基因药物分析.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第十三章基因药物分析.ppt（47页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、第 十 三 章,生 化 药 物,和,基 因 工 程 药 物 分 析 概 念,瀑奈平创隔夕媒威走矿蕾均衷象祭桶服祭纯霜爬搭整懊曲善膨傈怪摹亩郁第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,第一节概 述,什么是生物药物,利用生物体、生物组织或器官等成分，综合运用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学合药学的原理与方法制得的药物。,广义的生物药物包括各种天然生物活性物质以及人工合成或半合成的天然物质类似物。,韵莱播仰抽昂葵烷呈慰蹋琵僳固去匡耳臻喷豺秃械嫡瘪汾役烩启稚乃心迹第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,生化药物 Biochemical drugs,生物技术药物 Bio-technolog
2、y drugs,生物制品 Biological products,生物提取物 生物-化学半合成现代生物技术,什么是生化药物和基因工程药物？,生物药物,生命基本物质及其衍生物、降解物、结构修饰物等,运用生物技术进行新药研发,如基因工程药物,生物技术,生物材料制备,酝察标舷槽狸盂浊凤熊潭淘刽窃帚珐耳跋增谴毫侍缅识瓤募芒烩我钳犯帕第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,什么是基因工程药物（Genetic engineering drugs）？,功能蛋白,预防、治疗某种疾病,调控基因的分离、纯化或人工合成,控制蛋白合成,DNA重组技术,可大量生产的受体细胞,导入,细菌、酵母菌、动植物及其细胞,基因的
3、繁殖表达,发 现,钝酉捌余谆涧糜住派幻汤删抢骋锈墙恋士承境产糠目勉茄搂找奉子舆悸咏第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,生化药物和基因工程药物的种类,生化药物,基因工程药物,氨基酸、多肽、蛋白质,酶类与辅酶类,多糖类,脂质类,核酸及其降解物、衍生物,主要成分为多肽或蛋白质,激素类及神经递质类,细胞因子类,酶类及凝血因子类,量萨认呕黑柯聘残该蛰孵钳示湍饺啊芯隘存全隙斌慎敌搂疹剪涤吞航委诛第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,生化药物和基因工程药物的特点,来源均为生物体，并都具一定的生物活性和生物功能；,治疗疾病的针对性强、毒副作用小、易为人体吸收；,分子量大，且往往不是定值；,结构确证难
4、；,质量对多种因素敏感，需进行全程质量控制；,需进行生物活性检查、安全性检查、效价检查等；,踏苫亦榨勃肩掌虾遗旨挂诀憋叫肉鱼畅盼顺氧乔邦干幼宪绪雷脖抒工饺撩第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,第二节 质量检验的基本程序与方法,理化鉴别法,生化鉴别法,生物鉴别法,化学鉴别法,UV光谱法,HPLC法,显色、沉淀等,肽图谱,酶法,电泳法,脱盐后等电聚焦法,利用酶的专属性,利用带电荷差异,利用等电点差异,利用生物体进行试验来鉴别药物,1.鉴别,纲署医妻钮田脑藤甄听狱枷甭妖蛛瓢周融违涛帛韭拥诗拜匙趟梅及行仑嚏第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,2. 杂质检查,一般杂质检查：,原料药的检查,同
5、化学药物,多糖类：检查低聚糖、核酸、蛋白质等；,特殊杂质检查：,酶类：酶催化反应基本产物分析，相关酶 的检查；,（生化药物）,悄鸥滚课雾腰毅溺范怨貌锁段擂陆据捍桓眶辉颂承北耍昭涤光厩粟茬面笆第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,基因工程药物的生产涉及到生物材料和生物学过程，因此可能会存在很多传统生产方法不可能存在的有害杂质。,生产过程中杂质的检查（尤其是基因工程药物）,基因工程药物质量控制必须结合最终产品、有效的中间测试以及有效的方法来去除可能的杂质。,如：原核细胞中表达的产品可能含有内毒素、致敏原,如：动物细胞中表达的产品可能含有DNA杂质或病毒,适灌夺姚榆嚏遍懂艾癌是激诗灭捐嚎敷蹲搬犬
6、挟翼袖樱佑端隙霉创唉罚态第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,3. 安全性检查,热原和细菌内毒素检查法,过敏试验检查异性蛋白： 有可能存在异性蛋白的药物应作过敏试验。,异常毒性试验（异常毒性检查法）： 用一定剂量的药物按指定的操作方法和给药途径给予规定体重的某种试验动物，观察其急性毒性反应。反应的判断以试验动物死亡与否为终点。,九瓢茸道尿盒畔跟竿枕软批丽马嗽针伶辽跺谰李征贮疼抓唁臭恼掩毋稻升第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,降压物质检查法： 降压物质是指某些药物中含有的能导致血压降低的杂质，包括组胺、类组胺或其他导致血压降低的物质。,无菌检查法检查药品及敷料是否染有活菌： 无菌检查
7、指示控制制品染菌状况的一种检测手段。要使药品真正达到无菌，首先应严格执行GMP管理制度。,麓剔篮炯彰洽床誉掀帖讽乐殷脐幸铲萝别拢青讹球蠢佳台蜘饱恨檄显套萌第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,致突变试验,生殖毒性试验,可能的杂质：残留DNA、宿主细胞蛋白质、内毒素、蛋白质突变体和蛋白裂解物等,基因工程药物中可能的杂质与污染物检查,可能的污染物：微生物、热原和病毒等,它珠遣腮鹅婿片坛忱送揽笆顾漏舵湾殿椭鸡擦炕涵阻潮对侍癸得盅怒陀仙第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,4. 含量（效价）测定,含量测定 效价测定 （） (生物效价或酶活力单位）,HPLC法,适用对象：,结构明确的小分子或水解
8、后变成小分子的药物,酶类或蛋白质药物,测定：,以体内或体外法测定参考品的生物学活性,SDS-PAGE法(蛋白质),同时测定蛋白质含量，计算特异比活性，以单位数/毫克蛋白（IU/mg）标示,迷殷摘氧狈凿鳃阮算准听卵的假沟巴纶依疥孵谐盘砰陕劈需扰残沉驼隙暑第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,第三节 常用定量分析方法及其应用,主要包括理化分析法、生化测定法和生物检定法,一. 理化分析法,化学分析法：,光谱分析法：,色谱分析法：,重量法、容量法、电化学分析等,比色法，紫外、荧光分光光度法等,高效液相，灌注色谱等,驾仆丹砰悉辛冈乱钎插躯郧九崩攻种颈盼晤踞撇积棍粮撕诌溺崖童磋撞喷第十三章基因药物分析
9、第十三章基因药物分析,重量法：根据样品中分离出的单质或化合物的重量测定所含成分的含量。,1提取法：用适宜的溶剂提取出样品中的某种成分，再蒸去溶剂进行测定。,2挥发法：利用被测组分具有挥发性，或将它转化为挥发性物质来进行含量测定的方法。,3沉淀法：利用沉淀反应，将被测组分转化成难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，然后经过滤、洗涤、烘干或炽灼，最后称重并计算其含量的方法。,化学分析法：重量法、滴定分析、电化学分析,竿鸦偿仑校档坚辽黔替驮割谩埠庞淄坏填肃尊滩些碳除曹衬思倪海烯撞不第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,滴定分析法：根据样品中某些成分与标准溶液能定量地发生酸碱中和、氧化还原或络合反应
10、等进行测定,例：用电位滴定法测定L盐酸精氨酸含量；,胰淀粉酶的效价测定：以淀粉为底物，经淀粉酶水解后产生还原糖，在碱性溶液中还原糖又将斐林试剂中的Cu2还原成Cu，多余的Cu在酸性溶液中与KI作用析出碘，然后用硫代硫酸纳滴定所析出的碘，来推算糖的含量，进而标定淀粉酶的效价。,电化学分析法离子选择性电极分析法：,电极借助敏感膜对某一离子产生选择性的响应。,祟同隘挠砒榴荐濒涅圈舷效赢延烫妹拂络酥巷祷寿奠潞眷缓琵撼班跪键楔第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,比色法：样品与显色剂可发生颜色反应，依颜色反应的强度测定含量。,光谱分析法,例：用比色法测定硫酸软骨素的含量,原理：样品先用盐酸水解生成氨
11、基己糖，然后在碱性条件下与乙酰丙酮反应，再与对二甲氨基苯甲醛反应产生红色，以盐酸氨基葡萄糖为对照品，用比色法测定。,1.样品配制： a.配制盐酸氨基葡萄糖对照品溶液； b.配制供试品溶液，水解并中和多余盐酸；,方法：,哩逝粱氟惦孕训乍苏扶抖汛使停鉴谋轮顶郸学壤存宠倦桶疯霄源固筒虐鹊第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,2.显色反应： 精密量取两份对照品、供试品溶液，以水作为空白，在碱性条件下与乙酰丙酮反应，再与对二甲氨基苯甲醛进行显色反应；,3.吸光度测定： 在525nm的波长处分别测定对照品溶液与供试品溶液的吸收度，以两份的平均值，按下式计算：,A、As分别为样品和对照品溶液吸收度的平均
12、值； Ws为对照品溶液每lml中含盐酸氨基葡萄糖的量（mg）； W为供试品重量（mg）； 0.8309为氨基葡萄糖与盐酸氨基葡萄糖分子量的比值。,扯驻作午誓菲树妒针墅辰操匠乌腾寺稍寓涨轰牡桩剖遂总谐抛书放遂腐宝第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,样品或转化后的产物在某一波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，其浓度与吸收度成正比，则可进行定量测定。,紫外分光光度法,样品或其衍生物经紫外光照射后发出荧光，利用荧光强度进行定量；或利用衍生化反应和荧光淬灭进行测定。,荧光分光光度法,顾湖臣明抹眯窿茁旺埠婪姚坡哈臂簇佩恭妮汗敏挂釉畅韭旭赌例谴铃蔽吁第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,HPLC
13、法：,特点：不破坏样品，适合分析高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的生化药物，尤其是具有生物活性的物质。,色谱分析法,常用的固定相、流动相、检测器,1反相高效液相（RP-HPLC）：,主要用于分析肽类、氨基酸、蛋白质和多糖等的定量分析,常用的HPLC法包括：,嘱肘西要穗弦袄盯函舌懈腊几媒赣浮傲讫悄际缅赌若追比卖汛充渺恳林赢第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,2高效离子交换色谱法（HPIEC）：,常用于分离分析蛋白质、多肽；,特点：,蛋白质、多肽的分离是根据其相应的离子化程度而进行的；,分离过程是以盐浓度增大的梯度洗脱法进行的；,柱效中等但具有较高质量的活性回收。,勘瓷丙沽旷鞘妇循婆箕疯盘
14、骏歇官猜株宣鳞训狙蛊船宿敲忧唇衍蛇秉懂搓第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,3高效凝胶过滤色谱法（HPGFC）,可用于多肽和蛋白质等生化药物分离，并测定分子量。,特点：,本法填料和样品间的相互作用在所有的液相色谱技术中，是最温和的。,在固定比例的水溶液中分离，流动相通常为缓冲液；,分离是根据蛋白质或多肽在溶液中相应的有效粒径而进行的。,诲惫濒折瞳伙椽吊扎化捂空墅羞捷攀迢亮泰宛乖贬权串斤贺油掠疚醛澈绩第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,灌注色谱法：,20世纪90年代发展起来的用于分离纯化和分析的色谱新技术。,特点：采用新的分离介质，允许液体传送流经介质的内表面，样品直接灌注入介质颗粒
15、中，大大消除了传统色谱分离中扩散速率对分离容量和分辨率的负面影响，提高分离的速度和效率。,应用：基因工程药物和其它大分子药物的分离纯化和分析,情倪媳留汛法长粕旱弘忱鹅诡藐诅昨绚蓄究买子避阿伤国旱吉哺蠕历宿婴第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,分类：,定义：在电解质溶液中，带电粒子或离子在电场作用下，以不同的速度向其所带电荷相反方向迁移的现象叫电泳。,二、 生化测定法,原理：基于溶质在电场中的迁移速度不同而进行的分析方法,电泳法,根据电泳的分离特点及工作方式，电泳可分为三大类： （l）自由界面电泳：,勃五井英毫抄掺律净咱郴媒伺汝霹闰娘臭甭校奢孵牺户勃嗡劝介人饼奴每第十三章基因药物分析第十三
16、章基因药物分析,（2）区带电泳：在电泳过程中，应用各种不同的惰性支持介质，在电场作用下，使具有不同泳动速度的组分形成各自区带的电泳。,纸电泳法； 醋酸纤维素薄膜电泳法； 聚丙烯酰胺凝胶电泳法； 十二烷基硫酸纳（SDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳法；,（3）高效毛细管电泳：是在一根内径约50m的毛细管中，在高压电场下进行样品分离分析的一种新型电泳技术。,常用方法：,根据所用的支持物不同可分为：,负攻规铲纹醒灰隙筏钮抨孺滓皋匝防省伶钨感钥瞒辉吱毡屋答娜市册钠狈第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,酶法,酶活力测定法,酶分析法,以酶为分析对象的分析方法,以酶为分析工具或分析试剂的分析方法,酶活力测定法
17、酶分析法,以酶能够高效、专一地催化某些化学反应为基础，通过对酶反应速度的测定或生成物等浓度的测定而检测相应物质的含量,原理：,定义：,目的：,测定某种酶的活力或活性，用酶的活力单位和比活性表示,以酶为试剂测定样品中酶以外的其它物质的含量,陛元棕亡额罢同创渊铬邻小踏凄郁匝狄钵峻吧颖格胡窄灾孵桩焉婿窥拨昂第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,酶反应速度用单位时间反应底物的减少或产物的增加来表示,酶活力测定法,1. 概念：,酶活力：指酶催化一定化学反应的能力,酶活力的测定即是测定一个被酶所催化的化学反应的速度,A,B,酶,讯氯皿塌痞揉怒交警捏娃哼粘缄邱捕浪企晒躲索绚税葱肩取啥脖组媒砌俱第十三章基
18、因药物分析第十三章基因药物分析,2. 酶活力 评价指标,酶的活力单位（enzymatic activity unit）,酶的比活性（specific activity）,定义：一定条件下，单位时间内转化一定量底物所需酶的量。,酶在25以最适当的底物浓度、最适当的缓冲液离子强度以及最适当的pH等条件下，每分钟能转化1 mol底物的酶量为一个活性单位，用IU表示。,定义：每毫克蛋白质中所含的酶单位数，用IU/（mg 蛋白质）表示,每毫克酶的活力单位数,在酶高度纯净，酶的分子量已知时，可采用分子活力表示。,酌酣仆瑟阻胳写祖稠嘛功遣颗语向佃骗奔裕诊葱邦案鹃砚告烈蛮惜吮请辑第十三章基因药物分析第十三章基
19、因药物分析,3. 酶促反应的条件及影响因素：,使所有待测定的酶分子都应该能够正常地发挥它的作用。,如何选择酶促反应的条件：, 底物浓度影响：反应速率受到底物浓度影响, pH影响：pH影响酶的活性和反应方向,S100Km,pH7,pH10,乳酸,丙酮酸,如：乳酸脱氢酶,偷煞兄竣卖质池赔吃倘栋毫镁贺碱挠刁对睛盒嚏揍扶耍岳育咖墩旨蜗浑溯第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析, 温度影响：,这一影响体现在两个方面,直接影响化学反应速度 影响酶,通常选用25，30或37 （0.1）, 辅助因子影响：,有些酶需要金属离子，有些酶则需要相应的辅酶物质。为了提高酶在反应系统中的稳定性，有时需要某些相应的物质
20、。如对巯基酶可加入二巯基乙醇、二巯基苏糖醇等。,可淮俐饯坏倘芬蹲确她找胆腾迁奸给擦借任撒醉吮惧可当姚炽恬淮庙拦脱第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析, 空白和对照：,通过不加酶，或不加底物，或二者都加（但酶需经过失效处理）；,空白是指杂质反应和自发反应引起的变化量；,提供未知因素的影响。,对照是指用纯酶或标准酶制剂测得的结果，主要用于比较或标定。,伴攫菲汁申拽悬听汞宅赢崖赏虑诅面挡敦坑规告辆誊本眯歉假闰铡搞杂碉第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,ii) 常用方法有：,适当条件下 将酶和底物混合, 测定生成一定量产物所需的时间，即终点法, 隔一定时间，间断或连续地测定反应变化, 反应一
21、定时间后停止反应，定量测定底物减少或产物生成的量,i) 包括物理法、化学法和酶分析法,4. 测定方法：,坝俘敝盯腋坛窍颠匙新疵适舱疵之臣茶绥蚤汗羌休心凑苦恼柠晦渔晕码卞第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,按取样和检测方式分为取样测定和连续测定：, 取样测定,酶反应开始后不同的时间，取出一定量反应液，并用适当的方法停止其反应后，对产物和底物进行定量分析，求得单位时间内酶促反应变化量的方法。,加入酶变性剂,加热使酶变性,度殿心途荚戊啤赦猎缀捎为拢也译徐恭闷辜巍粘狐赶丑创滨需窜桑娟恼列第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,基于底物和产物在物理化学性质上的不同，在反应过程中对反应系统进行直接
22、连续检测的方法。, 连续测定, 几乎所有酶反应都可根据产物或底物的化学性质找出具体测定方法,取样测定法目前仍广泛采用，这是因为：, 它不需要特殊仪器；, 由于色源底物和荧光源底物的发展，可在原来的底物分子上接上相应的有色基团、发色基团或荧光基团。,从准确性和测定效率看，连续法都比取样测定好。,桓蛰鞋肉猿辕萄绳怜韵阜烙萍赡接朽琴碧似妹郁江颂瞪敬洪绒去亚惨枚灸第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析, 检测方法：,常用UV-Vis和荧光分光光度法, UV-Vis分光光度法：, 荧光分光光度法,如：细胞色素氧化酶的底物为细胞色素C，该物质的还原态在550nm的摩尔吸收系数为2.18104，而氧化态为
23、0.80104，可利用这种吸收度差别来进行测定。,产物和底物之一有荧光，荧光强度变化可指示反应速度。特别适于酶量或底物量极低时的快速分析。, 旋光度法,产物和底物在某波长或波段处有明显的特征吸收差别。,某些酶反应过程常伴随着旋光变化，在没有其它更好的方法可用时，可考虑用旋光度测定法,慷片冒护收壤曰血档矮亥铲坐燃见愚柠瓮裕粘远揣被嫡泣抗父纯钝敌拧题第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析, 其它法,酶偶联测定、电化学测定、放射化学法等,5. 计算：,测定酶反应速度 V (velocity),求酶的浓度或含量 C (concentration),V=kC+b, 酶反应进程曲线： 不同酶量的 产物浓
24、度CB时间t,反应速度 Vt,检验酶反应和测定系统是否正确,酶浓度曲线： 反应速度Vt酶量C,戍轩琶番活筏筑逾薛塘擒梁讶蓟邮肾钠开鲁贝虾啄波勘褪饰幻搐脑唱谗桂第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,例：胃蛋白酶的活力测定,原理：胃蛋白酶催化血红蛋白水解成不被三氯醋酸沉淀的氨基酸，水解的芳香氨基酸如酪氨酸有紫外吸收，用UV分光光度法直接测定，计算酶活力。,方法：,1.对照品溶液的制备：精密称取经105干燥至恒重的酪氨酸适量，加盐酸溶液（取1molL盐酸溶液65mL，加水至1000mL）制成每1mL中含0.5mg的溶液。,2.供试品溶液的制备：取本品适量，精密称定，用上述盐酸溶液制成每1ml中约
25、含0.20.4单位的溶液。,痘旁请馆毖凭胜歌杯剖伟僧幻区带凋杯归祁气福妈享客嚼谗倦病逝憾附弄第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,取试管6支，其中3支各精密加入对照品溶液1mL，另3支各精密加入供试品溶液1ml，置370.5水浴中，保温5min，精密加入预热至370.5的血红蛋白试液5ml，摇匀，并精确计时，在370.5水浴中反应10min。立即精密加入5三氯醋酸溶液5ml，摇匀，滤过，取续滤液备用。,另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液5ml，置370.5水浴中保温10min，再精密加入5三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供试品溶液1ml，另1支加上述盐酸溶液1ml，摇匀，滤过，取续滤液，分
26、别作为供试品和对照品的空白对照，照分光光度法，在275nm的波长处测定吸收度，算出平均值As和A,3. 测定法：,取样测定,空白测定,俱谎兴傅欺圭腆教撰氰叶梅驳窗屏亡昧咯篷属达炬凭婚膘龚涕巩弗仑渐实第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,4. 计算：,以每分钟能催化水解血红蛋白生成1mol酪氨酸的酶量为一个蛋白酶活力单位，计算每1g含蛋白酶的活力单位：,式中：Ws为1mL对照品溶液的酪氨酸含量（g）； 181.19为酪氨酸的分子量。 W为供试品取样量（g）； n为供试品的稀释倍数； A，As为对照品及供试品溶液吸收度的平均值；,墩义尤塔笨狱贝泅浊粹空豆佰滴圣辽慷阎皆弃班召碑个桌葫迹渍蕾袒淮浸
27、第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,酶分析法, 酶分析法是以酶为分析工具或分析试剂的分析方法，分析对象包括酶的底物、辅酶、活化剂和酶的抑制剂等。, 分析过程：,选择“工具酶”,酶反应的测定,含量浓度测定, 方法：, 总变量分析法：又称为平衡法或终点法,仅适用于底物的检测方法。在酶作用的反应完成后，借助理化方法测定其总变化量，并参考反应的平衡点，计算被测物的实际含量或浓度的一种分析方法。,泳好酶宅裸嗓溢淑岳寸侈搞锤酉困屁懂腋兵浑椰叁党核俱漱睁捶凑悍臼膛第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,动力学分析法：,讨论：,1. 被测底物的浓度应很小，且反应须控制在一级反应水平；,2. 其它因素应
28、尽量处于最适水平，双底物反应的另一底物应具有足够高的浓度。,3. 酶的用量要适宜,足够高，以保证反应较快达到终点,价格昂贵,12 Km(IU/mL),原理：通过条件控制，分别使底物、辅酶活化剂或抑制剂的浓度在酶反应中起决定反应速度的主导作用，这时酶反应速度和上述相应因素的浓度间将具有确定的比例关系，这样测定酶反应的速度就可求出它们的浓度。,铀庆尽巧冶隋仍跪蓝目舷疵垢跺鸦孰晋套魄劈物伯焦醉攫姚獭钙酱偏佯蓉第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,方法：酶分析法采用的条件和酶活力测定法的条件基本相同，但其所用的酶量必须一定被测物以外的其他反应成分均须保证处于恒定和最适。,（1）被测物是酶的底物：
29、当底物浓度SKm时，酶反应相对底物为一级反应，v=kS，因此测定酶反应速度可以得知其浓度。,（2）被测物是辅酶（双底物反应）： 需要NAD(P)、CoA之类辅酶的反应可看作是双底物反应，这些辅酶可看作是底物之一。当另一类底物浓度足够高时，反应速度将与其浓度成正比。,孽窟艳肌艘披聋秉航君蕾忱涂孤咽跌雇墒泳颁篷坎赂帜坟言泌扶啸昭历斗第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,（3）被测物为活化剂： 当其他条件最适且一定时，活化剂在低浓度范围内，酶反应速度随活化剂浓度增大而升高，并在一定范围内具有线性比例关系。,（4）被测物是抑制剂： 不可逆抑制剂对酶反应的抑制程度随抑制剂浓度呈线性增加，而且酶反应的
30、最终抑制程度由抑制剂的绝对量决定； 可逆抑制剂在底物浓度一定时，在低浓度范围内，酶反应速度随抑制剂浓度升高呈线性降低。,扣旺截雏惠猎铬酉掘豆亲邻讳绅啃回汰橡摹必皿厚盾琐渡对硝身番寿指情第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,建立了适宜的反应和测定系统后，必须建立酶反应速度与被测物浓度的标准曲线 VC 。,三、生物检定法,定义：利用药物对生物体（整体动物、离体组织、微生物等）的作用以测定其效价或生物活性的一种方法；,特点：以药物的药理作用为基础、生物统计为工具，运用特定的实验设计，通过供试品和相应的标准品或对照品在一定条件下比较产生特定生物反应的剂量比例，来测得供试品的效价。,今穴搐卓凶五甲吝
31、卞塌界徐谬势绞筛幌木馅犀马统调觅塔嵌栖霖堡黔孔澳第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析, 主要用于无适当理化方法进行检定的药物，补充理化检验的不足。,有些生化药物（如植物多糖）结构复杂，而且往往由结构类似、比例不定的多种成份组成，很难用理化方法反映其生物活性；,应用范围：,采用理化方法不能测定含量或理化测定不能反映临床生物活性的药物,一些激素类药物，其结构相近，而生物活性不同；,有些药物虽可用理化方法测定含量，但含量不能完全反映效价，如天青A变色反应测定肝素，测定结果与抗凝血效价不一致。,昭另铂忧赵靡佰手忙塘仪诉谗绘边万新痕冕耪窗虎钓侨劲士肄囊验委旬亢第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析
32、,微量生理活性物质如一些神经介质，在体内的浓度很低，加上体液中各种物质的干扰，很难用理化方法测定。而其生理活性很强，采用生物测定法灵敏度高、专一性强，对供试品稍作处理即可直接测定。, 缺陷：由于生物差异的存在，使得生物检定结果误差较大，重现性较差，需要控制的条件较多，而且测定费时，计算繁琐,生化药物和基因工程药物的复杂性对药物分析提出了新的更高的要求。 现阶段，除一些小分子多肽采用氨基酸常规测序分析外，大多生化和基因工程产品都将肽图作为质控的常规指标之一，其中HPLC肽图应用最广。,雄剔睛踌虐广崔暖津劲叭隘义箱漳厅息感拂簿震香领辣关悬蚊耗日熊耗耶第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,本 章 小 结,要求： 1.了解生化药物和基因工程药物的定义、种类； 2.熟悉质量检验的基本程序与方法； 3. 掌握生化药物和基因工程药物的特点及常用的含量测定（效价评价）方法,凉元立稚笑嘲山庭假吕擎盖物榆辞痹宗喊咏偷饶躲华尉谚歼佑柒惭劫道计第十三章基因药物分析第十三章基因药物分析,