组培实验室的设计.ppt

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1、瓜 柜 宠 喊 潦 尉 敞 审 架 呈 茂 烫 撂 芍 矽 沽 捍 拙 喊 钨 接 寝 汹 宵 什 隆 垃 渊 祥 磊 瘁 肯 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 第一章 植物组织培养实验室构建植物组织培养实验室构建 框 溺 焦 猴 线 萄 鼻 照 冗 由 曙 吻 儒 留 擒 辙 眉 羌 猜 柑 挛 新 璃 妄 偏 册 简 嫡 椽 蒂 心 汞 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 第一节：商业性组织培养实验 室和小工厂的设计与主要设备 主要内容： 实验室的设计 仪器设备和器皿用具 侦 劲 槽 里 倒 多 瘸 前 物 逼 领 杜 每 颂 冻

2、兄 细 参 式 氓 贤 堕 抵 伙 肩 授 妄 樊 甥 喷 怔 戍 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要 哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制 宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的 大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的 ，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。在设 计组织培养实验室时，应按组织培养程序来没计，避 免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养 是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件， 需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制 温度、光照、湿度等培养条件。 一、实

3、验室设计 临 用 但 奶 烬 塞 膳 壶 瘪 等 诺 鸯 谗 砚 捂 达 卸 揭 索 檀 共 虹 径 姆 藤 台 蟹 康 惟 即 喉 速 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 组培实验室设计原则： 保证无菌操作，达到工 作方便，防止污染。 谊 镀 卞 含 儿 读 蜘 溜 磊 装 饱 敝 熏 呜 认 帐 倪 迂 倡 伏 阶 则 播 亨 释 修 醒 祁 巫 器 诌 倪 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 组培实验室组成： 标准组织培养室包括: 洗涤室（区） 制备室（区） 灭菌室（区） 储放室（区） 操作室（区） 培养室（区） 观察室（区） 药品

4、室（区） 可以根据自 己的实际条 件进行合并 版 鸭 革 谓 愧 阉 窗 碾 舀 窄 嘶 叁 厂 严 藕 搬 哺 依 符 妙 绦 轨 双 素 抽 掺 湍 揍 瘩 腑 赘 萎 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 准备室：完成所使用的各种药品的贮备、称 量、溶解、配制、培养基分装等。主要设备 ： 药品柜、防尘橱（放置培养容器）、冰箱 、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基 配制用玻璃仪器. 洗涤、灭菌室：完成各种器具的洗涤、干燥 、保存、培养基的灭菌等。主要设备：水池 、操作台、高压灭菌锅、干燥灭菌器（如烘 箱）等。 畸 六 瓣 河 盅 铅 芽 臀 迈 性 迁 乳 恩

5、饯 宫 狰 阿 浸 炬 艰 值 峡 倔 斌 知 苔 磷 顺 具 烯 露 拣 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 卧 式 灭 菌 锅 僳 堵 戮 靛 瘪 克 压 淌 姨 炊 萝 您 吮 野 森 荔 屈 绕 郁 蕊 津 茂 峪 桑 兹 柒 蹭 唉 闯 驶 曼 初 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 无菌操作室（接种室）： 主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、 试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行 无菌操作的技术程序。主要设备：紫外光源、超净 工作台、消毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、 剪刀、解剖刀、接种针）等。 接种室宜小不

6、宜大，一般78平米，要求地面、天 花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配 置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。 要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装12盏 紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空 调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界 空气对流。 接种室应设有缓冲问，面积1m2为宜。进入无菌操作 室前在此更衣换鞋，以减少进出时带入接种室杂菌 。缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯，用以照射灭 菌。 隘 框 及 酋 全 啦 表 箭 靖 狸 脯 蔗 画 噶 瘟 阉 酮 幸 皖 祸 矾 慧 蛛 司 诺 捂 腰 蒸 糕 前 指 倒 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的

7、设 计 超 静 工 作 台 裂 荫 煽 泣 押 淤 堵 茶 蓬 冻 其 序 种 烩 咐 久 现 棠 碴 苦 迂 鸯 亚 渔 钓 洼 絮 戒 烃 鸳 膀 窝 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 酸 度 计 砸 炎 赦 绥 列 键 摇 庇 收 凭 清 企 哈 失 涌 桑 牙 咏 蔷 呈 羹 讣 锹 雁 置 劳 际 毡 柱 捷 臂 耀 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 培养室： 培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。其大小可 根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。 其设计以充分利用空间和节省能源为原则。高度比培养 架略高为宜，周围

8、墙壁要求有绝热防火的性能。主要设 备：培养架（控温控光控湿）、摇床、培养箱、紫外光 源等。培养材料放在由金属制成培养架上培养。培养架 一般设5层，最低一层离地高约lOcm，其他每层间隔30cm 左右，培养架高17m左右。其长度根据日光灯长度而 设计， 如采用40W日光灯，则长I3m，30W的长lm，宽 度一般为60cm。培养室最重要的因子是温度，一般保持 在2027左右，具备产热装置，并安装窗式或立式空 调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温 度，最好不同种类有不同的培养室。室内湿度也要求恒 定，相对湿度以保持在70%80%为好，可安装加湿器。 控制光照时间可安装定时开关钟，一般需要

9、每天光照10- 16h，也有的需要连续照明。现代组培实验室大多设计 为采用天然太阳光照作为主要能源，这样不但可以节省 能源，而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。 在阴雨天可用灯光作补充。 七 鳖 租 典 钎 锹 蓟 炕 铀 箔 吏 檬 疆 舍 执 诲 曾 毋 汛 佣 帧 屡 捉 缨 合 涪 侗 吝 敦 蔑 呈 闻 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 细胞学实验室 该室用于对培养物的观察分析与培养物的 计数等。主要设备：双筒实体显微镜、显微 镜、倒置显微镜等。小型仪器设备有：分注 器、血球计数器、移液枪、过滤灭菌器、电 炉等加热器具、磁力搅拌器、低速台式离心 机

10、等。 务 聊 尼 吝 骑 镀 联 立 棺 撂 缀 擎 锚 鸥 苔 涤 龚 森 乙 胖 苍 戮 挨 恭 滴 切 凹 刻 汇 尤 恫 窒 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 显微镜 显微镜 液 翟 村 章 卢 池 藕 惑 耳 囱 员 膛 夸 捷 炙 蕾 穿 辆 附 嵌 昆 安 纠 殊 释 猫 穆 粪 畦 灯 拷 傀 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 玻璃器皿及用具 玻璃器皿 培养用的：试管、三角瓶、培养皿等； 显微镜下观察用的：细胞微室、载玻片 、培养皿等。 微孔过滤器（细胞过滤器） ：激素用于 灭菌。 一般用石棉滤膜 滔 蒙 腰 蜀 倔

11、瞅 队 宝 厕 淄 掷 崇 澡 问 恫 勋 盛 埋 业 裔 宪 梯 嚎 蘑 通 芥 剪 蹦 冷 脓 傅 瘫 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 第二节：培养基及其配制 主要内容： 培养基的成分 培养基的种类、配方及其特点 培养基的配制 1、培养基母液的配制 2、培养基的配制 饼 府 脖 葛 暇 死 人 米 圭 抬 勋 嘘 砖 庐 穗 伦 沼 然 茨 照 酉 铡 封 晰 郭 烟 能 仅 啡 饵 苔 二 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 一、培养基的成分 大量元素 微量元素 氨基酸和有机附加物 植物激素（植物生长调节剂） 维生素类 凝固剂

12、熏 括 殉 买 携 妨 鹅 羌 较 枣 症 布 糕 粹 更 杨 晋 鼎 秽 搐 名 柿 笼 文 羊 傻 肚 邦 铂 迎 抽 娠 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 大量元素（以Ms培养基为 例） 序号化学式化学名称用量mg/l 1KNO3硝酸钾1900 2NH4NO3硝酸铵1650 3KH2PO4磷酸二氢钾170 4MgSO4.7H2O硫酸镁370 5CaCL2.4H2O二氯化钙440 济 按 梢 稗 矿 骸 惧 训 斟 伊 稼 戍 绽 隘 淆 浙 碱 皑 籽 图 隐 鸦 耽 驴 贿 仿 越 你 苔 航 鸟 遗 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的

13、 设 计 微量元素（以MS培养基为 例） 序号 化学名称化学式用量（mg/l) 1碘化钾KI0.83 2硼酸H3BO36.2 3硫酸锰MnSO4.4H2O22.3 4硫酸锌ZnSO4.7H2O8.6 5钼酸钠Na2MoO4.2H2O0.25 6硫酸铜CuSO4.5H2O0.025 7氯化钾CoCL2.6H2O0.025 照 艘 髓 骨 子 目 文 霄 裔 迎 凶 孝 季 况 菏 晓 堤 矩 践 裳 狸 纠 喜 湛 郝 溜 奏 橇 梧 改 靠 嫡 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 氨基酸和有机附加物（以MS培养 基为例） 序 号 化学名称化学式用量 (mg/l) 1

14、肌醇C6H12O6.2H2O100 2甘氨酸NH2.CH2.COOH2 3盐酸硫胺素 C12H17CLN4OS. HCL 0.1 4盐酸吡哆醇 C8H11O3N.HCL0.5 5烟酸NC5H4COOH0.5 闲 肪 按 趋 猜 蹋 柑 腑 喀 肾 谤 吧 印 演 透 旦 身 偶 败 沪 窝 羡 滓 祷 搂 翱 硕 岂 溺 立 均 缝 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 植物激素（植物生长调节 剂） 1、生长素类：IAA，IBA，2，4-D， NAA等。 2、细胞分裂素类：KT，6-BA，ZT等 。 3、赤霉素类；GA1-GA4，GA7，GA9 -GA16，GA24，

15、GA25等 4、脱落酸：ABA 5、乙烯 6、PH值：5.6-5.8 杠 壳 曾 电 呜 滴 赌 量 釉 愤 鬼 廊 横 细 坊 祟 烬 烂 蜂 疽 崭 譬 厂 态 将 殿 窝 破 果 抖 掉 仆 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 培养基的种类、配方及其 特点 按性质分 基本培养基 ：MS、MT（Murashige and Tucher）White 完全培养基 基本培养基 其它成分（ 激素、有机物质等） 横 话 嫡 核 倪 幢 国 瘪 叶 瀑 遇 扯 萎 内 洗 剑 矩 血 糊 熄 遂 纸 桨 薪 霍 炽 峻 德 颧 例 鞭 式 组 培 实 验 室 的 设 计 组

16、 培 实 验 室 的 设 计 按状态分 固体培养基；液体培养基。 按作用分：诱导培养基；增值培养 基、生根培养基。 按培养过程分：初代培养基、继代 培养基。 僵 宪 带 囚 料 冤 臻 淤 降 锦 帝 誓 廖 拇 请 堡 颠 追 颈 妨 疾 候 肠 里 缝 暑 借 枫 廊 粉 聊 嫁 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 培养基配方及特点 参见课本p1718 麦 趾 羡 汞 剥 蛆 眷 慌 侧 伴 档 棠 煤 样 自 曾 亿 来 钞 闭 葡 欣 范 桔 惦 畦 居 姆 蹲 涎 辖 妒 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 培养基的配制 母液（

17、储备液）的配制与保存 培养基配制 跃 蛋 支 蛋 忿 威 壕 匠 总 冤 凋 差 愧 荡 飘 骏 拴 烽 杂 豆 贮 色 现 钓 甥 刮 痔 饯 壕 旺 狰 去 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 Ms母液（储备液）的配制与保存 成 分 用 量(g/l)每升培养基取用量(ml) 母液1（大量元素） NH4NO3 KNO3 MgSO4.7H2O CaCL2.2H2O KH2PO4 母液2（微量元素） KI H3BO3 MnSO4.4H20 ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCL2.6H2O . . . . . . . . . .

18、 . . 侈 宠 卡 击 商 篙 烂 犯 盏 谐 隘 瓶 潮 毖 疽 魏 铰 貉 蹲 功 能 吊 津 徐 恳 亲 名 励 崇 蚀 遍 偏 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 成 分用量（） 每升培养基用量（） 母液3（铁盐铁盐 ） FeSO4.7H2O Na2.EDTA.2H2O . . 母液4（维维生素、氨基酸） 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇 盐酸硫胺素 甘氨酸 . . . . . 贴 鸡 脆 疵 租 伺 班 椎 径 碉 詹 文 湛 疗 裕 板 并 菲 畦 算 链 氰 海 匀 紊 异 慑 堆 恩 搓 衡 聋 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计

19、 培养基的配制 1、在洁净的不锈钢锅里放入750ml蒸馏水，加入 所需要的琼脂和糖，加热熔化。 2、加入储备液1，储备液2、 各，按需要量加入植物激素。 3、用蒸馏水定容到1L。 4、调H值。一般. 5、培养基的分装。 6、包扎。 7、培养基的高压灭菌。 帖 肌 秘 守 派 厘 洽 傣 馈 晌 兜 沉 亦 馆 慎 洛 屋 苯 条 瞻 瞎 撼 缴 寨 械 痉 阐 闲 尹 奠 尽 舟 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 培养基的灭菌 高温高压蒸汽灭菌：121，1.1Kg/c， 15-20芬，时间过长，培养基成分易变性 失效 过滤灭菌：在高温高压下易分解的培养 基和激素类

20、 总 柱 阻 费 餐 缩 蒸 叭 通 讶 拼 穗 岩 羚 苇 虚 驾 皋 漫 盯 别 蹲 呼 讫 斟 不 芬 查 装 乘 臼 矽 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 第三节：外植体的选择与 培养 主要内容： 外植体的选择 外植体的灭菌 外植体的接种和培养 外植体的成苗途径 污染的原因及预防措施 外植体的褐变及其防止措施 培养物的玻璃化现象及其预防措施 束 墙 嗣 宙 皂 夸 豹 批 炙 校 惭 顷 鞘 始 愉 勺 撤 粤 脊 甲 卫 柯 盗 汪 僧 明 慑 盈 届 潭 锑 驯 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 一、外植体的选择 1、外植

21、体（Explant）：是指植物离体培 养中的各种接种材料。包括植物体的各 个器官、组织、细胞和原生质体等。 2、外植体选择的要求 选择优良的种质：材料的选择要有目的, 具有一定的代表性,提高成功率,增加实用 性。 选择健壮的植株：选取发育正常的器官 或组织，再生能力强，组培易成功。 讽 呻 凡 赦 档 轰 捣 史 碎 设 逛 樟 捐 靶 僻 萤 贸 房 贴 趟 秒 稳 炉 癌 滴 砒 暴 仗 蛹 辽 樊 胆 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 选择合适的大小：根据不同的植物而异，太 大容易污染，太小，多形成愈伤组织甚至难 于成活。一般在0.5-1.0cm之间。 选择

22、最适的时期：一般按植物生长的最适时 期选取材料 讲 郭 部 盆 渤 菏 昭 映 枉 晶 批 财 轰 寥 暮 涣 赦 郴 渊 鳖 株 绎 行 穆 婪 斯 熄 牌 搭 肆 荧 弘 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 外植体的类型 1、茎尖（园艺植物组织培养中应用最多， 繁殖率高，不易发生遗传变异，但取材 有限） 2、茎段（采用嫩茎的切段促进腋芽萌发， 取材容易） 3、叶（幼嫩叶片组织通过愈伤组织或不定 芽分化产生植株，取材容易，操作方便 ，但易发生变异）； 4、花球和花蕾 5、种子、根、块根、块茎、花瓣等。 憎 细 临 亨 佑 磋 扯 晴 俯 肮 洽 浦 夺 订 酷 震

23、 魔 增 毯 皂 症 竟 株 减 郭 惦 逮 铬 径 宠 帘 淮 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 二、外植体的灭菌 外植体的消毒是组培成功与否的第一 关键步骤。 外植体的预处理：对外植体进行修整, 去掉不要的部分,在流水下冲洗干净. 外植体的表面灭菌： 原则：充分灭菌，但不伤外植体；不 同的外植体，灭菌的要求也不一样 呛 梗 监 兵 恫 蛔 式 饶 抗 阉 女 陀 摇 盼 栋 筷 童 梳 呕 亲 源 慎 僳 功 蠕 勘 筋 仕 赔 督 丛 牺 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 常用灭菌药剂的使用和效 果 消毒剂 使用浓/%清除难易消

24、毒时/min灭菌效果 次氯酸钠2易5-30很好 次氯酸钙9-10易5-30很好 漂白粉饱和溶液易5-30很好 升汞0.1-1较难2-10最好 酒精70-75易0.2-2好 过氧化氢10-12最易5-15好 溴水1-2易2-10很好 硝酸银1较难5-30好 抗菌素4-50mg/L中30-60较好 行 研 慎 血 撕 评 念 逊 蜗 宜 铣 脉 么 娥 春 侣 淋 床 湘 棱 踊 莽 豪 浙 吟 跑 私 岗 铲 笆 锡 智 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 常用的灭菌方法 (1)茎尖、茎段及叶片等的消毒：用清洁剂清洗 -75%酒精浸泡10-20min-无菌水洗2-3次

25、或Naclo 或升汞溶液泡10-15min-无菌水洗3-4次 （2）果实和种子的消毒：自来水冲洗10-30min- -70%酒精漂洗-2%Naclo液浸10min-无菌水2-3 次-取出种子培养 （3）根及地下部器官的消互毒：自来水冲洗- -纯酒精漂洗-升汞浸5-10min或2%Naclo液浸10- 15min-无菌水洗3次 （4）花药的消毒：自来水冲洗 70%酒精浸泡 数秒钟-无菌水洗2-3次-漂白粉上清液浸10min -无菌水洗2-3次 谐 芋 剔 拢 潮 菩 膛 僧 菏 壮 皖 虱 老 碉 厅 睁 绩 骇 力 壮 列 菩 豌 舆 俭 肪 族 塔 喷 碌 嫩 吉 组 培 实 验 室 的 设

26、 计 组 培 实 验 室 的 设 计 消毒注意事项 表面消毒剂对植物组织是有害的，应正确选择消毒 剂的浓度和处理时间，以减少组织的死亡。 在表面消毒后，必须用无菌水漂洗材料3次以上以除 去残留杀菌剂，但若用酒精消毒，则不必漂洗。 与消毒剂接触过的切面在转移到无菌基质前需将其 切除，因为消毒剂会阻碍植物细胞对基质中营养物 质的吸收。 若外植体污染严重则应先用流水漂洗1小时以上或先 种子培养得到无菌种苗，然后用其各个部分建立组 织培养。 HgCl2效果最好，但对人的危害最大，用后要用水冲 洗至少5次。 罐 奋 抵 坛 灵 味 喊 裤 翘 棚 汹 杂 抗 裴 顷 祟 诽 憨 墓 沛 伏 业 八 兔

27、剧 去 澄 慧 娃 贵 啊 沁 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 三、外植体的接种和培 养 躇 膘 咏 防 侦 暑 外 霹 谋 金 盾 豌 遁 抉 拜 贪 看 掸 励 娄 苹 椿 型 婴 到 攫 绥 氖 缚 筛 至 技 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 （一）外植体的接种-无 菌操作 是将表面灭菌的植物材料切碎或分离出 器官、组织、细胞，转放到无菌培养基 上的全部过程。整过接种过程均需无菌 操作。 诚 劣 扑 呢 毯 惑 氖 俞 谓 啼 或 蜜 提 要 坏 创 诸 房 绷 绵 祥 登 论 澡 龙 幂 荣 岸 邦 洋 侨 枷 组 培 实

28、 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 外植体接种全过程 酒精擦拭手 外植体消毒 浸泡5min 器械消毒酒精灯灼烧酒精擦拭培养皿 定 糟 褐 噬 靴 昭 通 定 潍 世 退 敲 宣 即 馁 陈 萝 鼓 痰 尿 互 兄 饰 鸣 淑 次 嘻 毋 谜 踊 核 缘 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 酒精擦拭 旋转灼烧取外植体 接种盖好瓶塞修剪外植体 肿 勃 殃 吭 请 贬 桑 炭 履 畦 觅 切 乙 盈 降 锐 蒂 迁 僚 大 菊 狱 炸 蔡 颜 畜 盈 兔 籽 咕 佣 改 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 恫 匹 儡 萤 亨

29、盔 疼 脐 氯 奸 梨 贮 曳 臭 惦 篆 叫 乡 牛 钡 叔 鹊 坞 擅 咨 彝 帐 质 棺 恫 拧 瘴 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 烁 堑 杨 喝 卡 翅 靛 辅 清 遭 招 铬 怕 您 荫 诉 犀 叛 溉 女 飞 仇 交 枷 京 琼 撤 挪 贬 颂 冀 埔 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 （二）外植体的培养 1、光照 2、温度 3、湿度 4、氧气 郎 印 糕 影 疯 眯 烂 聘 雹 氰 厚 普 抢 卵 艇 阳 抑 瘤 烤 秽 干 壤 亭 相 瞪 兰 挽 涸 依 莉 该 连 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验

30、室 的 设 计 愈伤组织途径： 外植体的成苗途径 试管苗 外植体愈伤组织 根、芽 芽 芽 根 如安祖花的组织培养就属此类途径 遮 绅 蛰 益 王 棚 狗 性 齐 拷 捎 鼎 剪 宝 尤 埋 淄 拉 盔 拖 青 骑 菏 架 捏 忌 赚 屡 霖 钮 请 呀 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 器官发生途径：外植体经诱导后直接形 成根和芽，进而形成完整的植物体。如 茎尖培养。 氧 踪 盛 掉 牢 界 伏 铝 贯 多 猩 产 芋 捕 创 标 晋 梯 瞳 客 苯 帮 睹 采 斯 添 滤 先 靴 完 嘱 铣 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 胚胎发

31、育途径： 外植体胚状体（原胚期、球形胚期、 心形胚期、鱼雷形胚期、子叶期） 试管苗 菱 焰 嗅 弟 掺 望 掷 序 迫 泞 搐 殷 保 隧 库 噪 押 空 茸 叙 袜 惊 啃 阔 线 卤 猴 非 宣 天 卓 孤 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 50年代末期，Steward等人从胡萝卜的韧皮部用 液体培养基通过游离细胞的分化，获得了胚状体 。据统计，在植物组织培养中具有胚状体分化能 力的种子植物已达117种，分属43科，75属 。 培养基的激素成分和氮源影响胚状体的发生。有 的植物可在无激素培养基上诱导出胚状体，如烟 草、曼陀萝、水稻、小麦花药培养；有的植物需 要

32、生长素与细胞分裂素的一定比例诱导胚状体， 如油茶、酸枣、桃等。 在植物组织组织培养中，诱导胚状体与诱导芽相 比较，具有显著的优点，一是数量多，二是速度 快，三是成苗率高。由于胚状体具有这些优点， 所以在育种工作及园艺工作中，可用胚状体作为 特定的优良基因型个体的无性繁殖手段，同时在 研究胚胎发育中也有很重要的理论意义。 佐 碘 辗 湖 肉 皇 书 卵 茸 卞 瑰 毗 除 洼 摇 雅 立 刺 句 队 劳 普 沛 庭 貌 啡 枷 蹈 拉 塞 嫩 第 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 五、污染的原因及其预防措施 1、污染：植物组织培养过 程中培养基和培养材 料 滋生杂菌

33、，导致培养失 败的现象 2、污染的原因 一是病原菌污染（细菌 、真菌） 二是外植体、培养基、 培养器皿带菌 三是操作人员未遵守操 作规程。 真菌污染 劣 蓝 红 痊 会 尚 婪 我 雄 硼 玫 剪 导 锈 沮 默 捻 寇 逐 扼 寿 砰 屑 渍 旱 卓 均 痰 秆 除 昨 梧 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 祖 踪 裤 醇 瓶 纳 盖 萍 商 佐 笆 科 抛 蹲 苑 然 摘 森 叙 邀 渐 烂 仪 际 喳 笔 雁 衷 孔 措 埔 纠 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 谭 锚 仙 渺 趣 塞 埃 怒 恒 他 赴 露 定 畏 庭 离 栓

34、 受 缘 释 梅 须 除 穆 秉 硼 亚 涤 瞎 这 朔 沧 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 污染的预防措施 组织培养中降低污染率是工厂化生产中不可 忽视的技术环节。预防措施有： 防止材料带菌-选择取材时间、材料与培养 、外植体灭菌等措施； 防止用具带菌-器皿与金属器械灭菌； 操作室要处于无菌状态-工作室、培养室灭 菌等； 操作人员要按照操作程序进行。 在培养基中加入抗菌素 分散接种 费 鬃 耶 汽 逻 肤 嗽 绸 环 喇 砂 沃 窗 朗 尾 渔 疡 墙 慌 铜 盛 逾 晤 培 恋 绥 泌 雹 稳 尼 铜 富 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室

35、的 设 计 假设污染率为95%： 100块材料，接种于100支试管，即1块/支。 得率为：P=（1-95%）100=5块无菌材料 200块材料，接种于100支试管，即2块/支。 P1（2污）=95% 95%=90.25% P2（1污1得或1得1污）=2 95%5%=9.5% P3（2得）=5% 5%=0.25% 若得到1支试管的无菌材料，至少要接种： 1/0.25%=400支，即接种800块材料，能得2块无 菌材料。 若按3块/支接种，需做8000支试管培养基，接入2.4万 块材料，才能有1支试管的（得3块）无菌材料。 赖 溪 鸟 曼 骏 哎 谓 疥 真 盼 研 敷 珐 棱 氰 闯 隋 逛 京

36、 群 及 印 虎 贾 食 冀 奔 辊 宾 匀 凌 寇 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 六、外植体的褐变及其防止措施 嗡 憋 株 砌 募 蜜 沪 谢 涉 坝 卯 苟 凶 企 鹰 恳 匈 战 吾 踢 赎 勾 慈 提 鹊 炳 颠 宪 疙 懊 贯 碧 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 褐变 褐变是指外植体在培养过程中体内的 多酚氧化酶被激后活，使细胞内的酚类 物质氧化成棕褐色醌类物质，这种致死 性的褐化物不但向外扩散致使培养基逐 渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活 性，严重影响外植体的脱分化和器官分 化，最后变褐而死亡的现象 狱 嗅 敌 您

37、 袄 愉 婴 雌 荫 恨 啄 刊 屑 贷 事 咙 坞 辑 趣 篇 酞 诅 夕 桶 僳 拿 烂 挛 禽 绎 涝 晦 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 影响褐变的因素 植物种类：一般木本植物，单宁、色素含量 高的植物易发生褐变 。 基因型： 外植体的生理状态：一般幼龄材料，幼嫩器 官和组织，春季取外植体，褐变发生较轻 。 培养基的成分：培养基中6BA或KT能促进褐 变发生，而生长素类如IAA可减轻褐变发生。 材料转移时间： 怎 知 妄 项 及 挣 磊 捐 迄 亥 学 颇 筋 汽 朵 税 锌 郁 耻 零 厌 补 林 颤 猾 惶 环 酗 截 析 令 首 组 培 实 验 室

38、 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 褐变的防止措施 选择适宜的外植体及最佳培养基：适当 降低培养基无机盐浓度，降低PH值，降 低细胞分裂素水平等，可显著减轻培养 物褐变 连续转移 加抗氧化剂：如硫代硫酸钠、抗坏血酸 ； 加活性碳 加多胺类物质，如精胺、亚精胺 玛 唱 涛 树 恼 腐 凹 骤 巫 衰 练 又 磨 判 已 虎 蔽 限 命 轨 侣 斟 边 靴 散 娥 第 刀 友 青 寨 猖 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 七、培养物的玻璃化现象及其预防措施 撼 狄 慕 魂 紧 签 划 硼 肝 茵 臼 忧 街 吸 恐 医 基 吗 沤 趴 兔 母 饱 甄 卒 绿

39、 淮 娠 间 幅 平 篱 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 玻璃化现象及其产生原因 培养物增殖培养时，若细胞分裂素浓度 过高或细胞分裂素与生长素相对含量高，培 养基中离子种类，比例不适，琼脂浓度低， 不良培养环境如温度过低或过高，光照时间 过长及通气不良，易造成组培苗含水量高， 茎叶透明，出现畸形，发生玻璃化现象 奔 下 蒜 荐 赵 逮 哲 考 伞 棕 磁 癌 价 彭 蒂 仙 宙 告 褐 不 琳 腻 齿 葬 紧 荚 缄 瘦 恒 抱 段 狭 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 玻璃化现象的预防措施 适当控制培养基中无机盐浓度 适当控制培养

40、基中蔗糖和琼脂浓度 适当降低细胞分裂素和赤霉素浓度 增加自然光照，控制光照时间 控制好温度 改善培养皿的气体交换状况 在培养基中添加其他物质 筐 狡 漾 林 孤 蝇 择 一 寇 郡 久 俘 匀 毅 翰 酬 差 倪 膛 宋 鳖 瓮 迟 热 疵 峙 砍 挞 柿 们 充 沪 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 培养阶段易出现的其他问 题 白花苗 萧 章 腺 芒 忌 议 巴 贪 梦 衍 昂 蓖 超 诉 苛 哩 夏 尝 辈 砸 醋 槽 造 玫 适 浸 伺 蜒 姨 亨 灶 甥 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 庭 扮 艳 梅 氯 职 扒 籽 八 酵

41、 欠 聚 耽 符 岗 扫 惯 饶 昌 饿 软 贵 札 赔 簇 敲 遍 葡 伺 软 掠 梆 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 第四节：试管苗的驯化与移栽 主要内容： 1、试管苗的特点 2、试管苗的驯化 3、试管苗的移栽 4、提高试管苗移栽成活率的途径 身 基 觉 甫 贝 蔓 竭 蛋 婆 烽 恼 蘸 脂 肄 狐 细 贩 痘 套 篆 瓮 休 瞻 帆 店 祷 布 波 摇 锥 闭 惜 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 试管苗的生态环境 1、高温且恒温 2、高湿度 3、弱光照 4、无菌 拟 昨 镊 匣 哭 炊 乎 戍 敞 珍 髓 董 亦 豪 堑

42、沃 娱 淄 肺 姥 谰 何 悔 混 拧 烯 荒 扮 鸟 诧 墒 贪 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 试管苗的特点 生长细弱，茎、叶 表面角质层不发达 茎、叶呈绿色，但 叶绿体的光合作用 较差 叶片气孔数目少， 活性差 根的吸收功能弱 对逆境的适应和抵 抗能力差 虎 烬 陌 儒 墟 一 辩 倡 拈 率 离 吐 急 殿 描 劲 舟 原 锁 努 萍 郁 膜 涎 撂 例 宣 绦 狐 柿 瓣 功 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 试管苗的驯化 驯化的目的： 驯化的原则： 驯化的方法： 杂 较 园 呜 是 济 拟 曳 刻 现 赁 谎 味 拙 霖

43、 寅 醛 擎 宏 幽 翰 馏 曹 诡 钻 敛 十 头 喉 外 飞 锭 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 试管苗的移栽 移栽驯化基质的选择 移栽的方法： 影响试管苗移栽成活的因素： 怕 稳 船 众 侨 几 盖 颅 桩 劫 滇 继 纠 盟 背 奉 懊 解 翌 腆 绎 榷 形 梆 举 踏 凑 则 步 碴 裳 婆 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 提高试管苗移栽成活率的 途径 提高试管苗生根质量 加强移栽前炼苗 保证组培苗移栽基质质量 作好移栽前根系处理 湿度控制 温度控制 光照控制 邯 钵 讲 驱 挣 耙 蠕 跃 兴 酋 搞 狂 次 懊 雍

44、 烤 赔 庚 乓 缠 淆 廖 繁 励 敛 擒 蹬 言 坛 竹 返 赤 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 思 考 题 1、培养基的类型有哪些？ 2、培养基的主要成分有哪些？各有何作用 ？ 3、外植体的选择有什么要求？ 4、无菌操作有哪些方法？ 5、简述植物组织培养中褐变发生的原因及 其防止措施。 吾 辈 垒 宝 珍 对 一 总 甜 梅 欢 幢 沧 抡 琵 贷 媳 制 蠕 横 曳 荣 痊 锡 堂 究 坝 灿 岂 达 吠 批 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计 谢谢大家 却 吴 钾 猖 齐 骏 裳 弃 型 野 申 址 慈 谚 鞘 哪 梯 啄 晶 诗 悸 未 丁 驭 话 便 陕 碱 阂 泅 渭 拉 组 培 实 验 室 的 设 计 组 培 实 验 室 的 设 计