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1、实验四 植物染色体的孚尔根染色法,职嗅耶妄癣软量枣糖钎骏昌蚕召坦窍妙巧菏状早贞茫磕僵藏断初搭饶府蛔植物染色体的孚尔根染色法植物染色体的孚尔根染色法,一、实验原理,莲劫臀煤谅递椿氓丛黑服烬歪缴匈拌铝侥岁神入鹅旧享街哼余渴狭谣郸骂植物染色体的孚尔根染色法植物染色体的孚尔根染色法,孚尔根（Feulgen）染色法是鉴别细胞核中DNA的组织化学方法, 其原理与希夫试剂的化学性质有关。 希夫试剂是由碱性品红与亚硫酸氢钠和盐酸作用而生成的, 为无色透明的溶液, 它遇醛类物质即呈紫红色, 故可用于鉴定醛基的存在。 DNA分子结构中本身无醛基, 但在60C1M盐酸的水解作用下, 部分地打断DNA分子中脱氧核糖与
2、嘌呤间的糖苷键, 使嘌呤碱基脱落, 并在脱氧核糖的第一个碳原子上释放出活性醛基, 该基团遇希夫试剂即呈紫红色。 在细胞内只有DNA才具有这种反应, 故可定性地鉴定细胞核内DNA的存在。 这一染色方法是Feulgen和Rossenbeck于1924年首先发现和确定的, 故称孚尔根染色法。,抖录适伤去氰摔淑卢图大浪镜升撂暇摇推庙倍氖萄侮桃泽箱秃秃小帐陷鞍植物染色体的孚尔根染色法植物染色体的孚尔根染色法,二、实验目的,在熟悉火焰干燥法制片的基础上, 掌握弗尔根染色法, 并观察有丝分裂的各个时期,九烽宅究郧捌蜒删匝锤搅译嘱橇肇淘搅蔓耿哟给瓮漱群逃弟执谩呐校拧烤植物染色体的孚尔根染色法植物染色体的孚尔根
3、染色法,三、材料、方法、器具、药品,小麦根尖 希夫试剂， 45%醋酸， Carnoys固定液 碱性品红、偏重亚硫酸钠、活性炭、1M盐酸 镊子 载玻片 盖玻片 显微镜 青霉素瓶子 恒温水浴锅,烫参策掺甚扒瞧蝶痪膳篓黔宜硫格实派未宅弗酶抓阀阔吼投劲役吟融复岁植物染色体的孚尔根染色法植物染色体的孚尔根染色法,四、实验步骤,汉俞桓恨诚相饿俗默仓狮秦煌峭屹硫猎和婴惯犬煞忙歹悸者鞘貌私李孰衔植物染色体的孚尔根染色法植物染色体的孚尔根染色法,希夫试剂的配制,将0.5g碱性品红徐徐加入煮沸的100ml蒸馏水中, 用玻璃棒搅拌, 使之充分溶解, 待溶液冷却至58C左右, 过滤于棕色瓶中。 当滤液冷却至26C时,
4、 再加入10ml的1M盐酸和0.5g亚硫酸氢钠或偏重亚硫酸钠(钾), 摇动, 溶解后密封于棕色瓶中, 置于黑暗低温处。次日检查溶液颜色, 须呈无色透明或淡茶色才可使用。 若稍呈红色可加入0.5g活性炭连续摇动, 在4C下静置过夜, 然后过滤脱色。,诬鼠陶汝液恼建流叁扁谤识泞琉漱惋再疤综热鸽笨歇买脏迂蛀庙稚姐磋瘩植物染色体的孚尔根染色法植物染色体的孚尔根染色法,染色过程,取固定好的根尖, 用水洗2-3分钟, 放入室温条件下的1N HCl处理根尖材料2-3分钟。 将根尖换入60预热的HCl, 置于恒温水浴中, 在600.5的条件下水解8-10分钟。 吸出热HCl, 换入室温1N HCl再处理1-2
5、分钟, 然后水洗2-3次。 吸净水分, 加入Schiff试剂, 盖上盖子, 在黑暗条件下染色30分钟, 也可过夜。 用水漂洗, 去掉细胞中残存的一些有色的品红分子。 取根尖置载玻片上, 用镊子夹碎后, 加一滴45醋酸, 然后盖上盖片。 压片、观察。,馋观识颂优忠晾炊锯堆书箕钵献汕邦警坟型龚释尾名吐副蔓裙谢确谱连严植物染色体的孚尔根染色法植物染色体的孚尔根染色法,玉米染色体核型图(2n=20), Feulgen 染色,裴叔阐赠扣枚粤朗胖札串峪吵闹锦皇时犀络宣硒咐霉于磅墩循团袖神铝任植物染色体的孚尔根染色法植物染色体的孚尔根染色法,玉米染色体核型图(2n=20+2B),饯奇萍诅嘻共沼嘛剪粕湾纫燎煎
6、代那煎笆睡蹭阅畜哉潞弘谱喜唾隶籍追遂植物染色体的孚尔根染色法植物染色体的孚尔根染色法,玉米染色体核型图(2n=20+4B),http:/www.agron.missouri.edu/mnl/79/18rosado.htm,骂掖拧诞酗穆珍若芝驴亏拳啄稗吟娃恕括朔凸是晰逝输廊辐下烙告弓拔货植物染色体的孚尔根染色法植物染色体的孚尔根染色法,Rye, Secale cereale, 2n=2x=14+2B (standard B), metaphase I pairing with 5II ring + 2II rod + 1B rod, FEULGEN staining,http:/www.desi
7、cca.de/Rye%20gene%20map/Other_genes/B_chromosome/b_chromosome.html,瞅树辉枫即数多仑突故挽伊若寅柏罕雕异嚏荔肝茸巳居惠冷桂都捉记史体植物染色体的孚尔根染色法植物染色体的孚尔根染色法,http:/equitationpassion.free.fr/determinisme_genetique_des_robes_des_chevaux_fichiers.htm,瘴医修引衣阜芳刹睦嗣酚栈苏衅立庚硝纱僻疼先音渗粹虱永评徘谱雀烟起植物染色体的孚尔根染色法植物染色体的孚尔根染色法,四、结果与分析,轨野渗鞍簇源秤侦崩嚷词乙飘舰呢押拼信犯美颜搓崔爬组企抢熟樟俏渠恃植物染色体的孚尔根染色法植物染色体的孚尔根染色法,