《血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳.ppt（24页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、迸 幅 拷 筒 哟 违 豢 仙 效 依 贩 送 述 波 膛 态 着 弟 刻 搬 抢 撬 反 就 苯 乞 掷 渺 蒜 禾 灌 孟 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血清蛋白质聚丙 烯酰胺凝胶圆盘 电泳 第六组 沥 乾 舶 擞 丈 虾 寐 容 蓖 现 窒 渴 涨 氦 履 较 负 戊 寺 膝 猫 制 拆 朝 癣 煎 喘 苞 僧 遁 虞 苍 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 蛋白质的分离 v蛋白质是生物大分子化合物，
2、具有胶 体性质、沉淀、变性和凝固等特点 蛋白质分离纯化的方法主要有：盐析 、透析、超离心、电泳、离子交换层 析、分子筛层析等方法。 醇 驳 穷 轴 随 丑 毗 开 棘 匪 操 卡 红 狄 樊 娥 捌 荤 象 疲 槽 泵 杯 擂 唯 介 纶 醚 札 蛛 适 脑 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 透析 嘘 鸡 苟 椰 妻 谨 藩 敷 喧 要 颈 皱 乌 朱 雹 焦 厩 率 条 输 蘸 娶 岔 版 涣 答 扇 淋 胸 慧 骇 秤 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白
3、 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 超速离心 建 砰 社 恩 划 定 迄 所 鹊 裴 游 鳃 诛 拳 去 麦 珐 它 悍 匆 烦 菩 郝 丑 粤 哎 牌 绅 沦 想 担 级 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 凝胶过滤层析 撕 油 恒 拭 逮 免 袁 粟 捂 腹 逼 疥 溜 泥 辆 堪 永 玄 纶 却 兽 赵 扎 绽 圆 逼 啸 芳 斋 比 贰 造 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 离子交换层析
4、瓤 凶 坚 懂 储 悄 蚂 酉 员 胃 骸 攫 笛 擦 浅 班 彤 罩 盗 倍 濒 浑 骂 循 挂 蘑 灌 刨 助 码 褥 器 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 电泳技术的原理 v电泳蛋白质在一定的pH溶液中可带有电荷，成为带电颗粒 ，在电场中向相反的电极方向泳动。由于蛋白质的分子量 和电荷量不同，其在电场中的泳动速率也不同，从而将蛋 白质分离成泳动速率快慢不等的条带。 v电荷的来源 蛋白质带有可解离的氨基（-NH2）和羧基(-COOH),是典型 的两性电解质，在一定PH条件下会解离带上电荷 COO-
5、 COO- COOH + H+ + H+ Pr Pr Pr + OH- + OH- NH2 NH3+ NH3+ PHPI PH=PI PH蛋白质阴离子甘氨酸阴离子 毛 陇 旬 毋 付 奄 枪 锰 弦 字 烟 尼 磺 豪 梧 查 氨 测 敲 腋 弛 卡 姓 妆 豌 夹 貉 荆 情 褪 尤 赵 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 垂直板电泳的优点： v表面积大而薄，便于通冷却水以降低热效应，条 带更清晰。 v可多个样品的电泳 v胶板制作方便，易剥离，样品用量少，分辨率高 。 v胶版薄而透明，可制成干板，便于
6、长期保存与扫 描。 v可进行双向电泳。血清蛋白在醋酸纤维素薄膜电 泳中，只可以分离出56条区带，而在聚丙烯酰胺 凝胶电泳中可分离出数十条区带。 鼎 乔 鸽 尤 舒 牡 彩 义 璃 圈 局 奈 校 挫 缮 具 损 砧 肿 佐 絮 蜒 桩 织 寓 邦 畜 坟 篇 潜 拴 隙 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 v实验器材与试剂 v器材 圆盘电泳槽、电泳仪、脱色摇床、染缸、微量加样器、注射器、小烧杯 v试剂（缓冲液PH值准确配置后用PH计调试） 试剂编 号试剂名称配置 14*分离胶缓冲液1mol/L盐酸24.
7、0mL/100mL, Tris 18.2g/100mL (pH 8.9) 230%单体交联剂丙烯酰胺30.0g与甲叉双丙烯酰胺0.8g 100mL 3催化剂10%过硫酸铵 （临用前配置） 4加速剂TEMED 1mL加蒸馏水到10mL 54*浓缩胶缓冲剂mol/L 盐酸48mL/100mL, Tris 5.98g/100mL (pH6.7) 610*电极缓冲剂甘氨酸28.8g与Tris 6.0g 加蒸馏水至100mL 稀释(pH 8.3)临用 前十倍稀释 72*上样缓冲剂溴酚蓝0.05g 20mL甘油，加5号试剂25mL，定溶至100mL 8固定液三氯乙酸12.50g 加蒸馏水至100mL 9考
8、马斯亮蓝R250染色液1.25g考马斯亮蓝R250,溶于227mL甲醇中加蒸馏水227mL冰 醋酸46mL 10脱色液甲醇:冰醋酸:水按3:1:6比例配合 狂 诺 莫 勿 赤 固 听 眠 阐 于 烙 译 世 蛤 阻 烘 蹿 淡 孺 身 拱 铜 慑 抑 萨 翠 繁 酗 足 票 吁 一 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 v实验操作 v凝胶柱的准备 （凝胶溶液配制表见教材表4-4） 取玻璃管， 一段封口 加入分离胶 溶液(7cm) 加入蒸馏 水 制备分离胶 应迅速 为了使表面平 整，与空气隔 绝 静置待凝胶
9、 聚合 浓缩胶制备 (1cm) 吸取上表面蒸 馏水 待凝胶与水面的 界面重新可辨 切勿触 动胶面 参见分离 胶 加入分离胶 溶液(7cm) 制备分离胶 应迅速 加入分离胶 溶液(7cm) 制备分离胶 应迅速 加入分离胶 溶液(7cm) 制备分离胶 应迅速 加入分离胶 溶液(7cm) 制备分离胶 应迅速 加入蒸馏 水 为了使表面平 整，与空气隔 绝 取玻璃管， 一段封口 加入分离胶 溶液(7cm) 制备分离胶 应迅速 取玻璃管， 一段封口 加入分离胶 溶液(7cm) 制备分离胶 应迅速 取玻璃管， 一段封口 加入蒸馏 水 为了使表面平 整，与空气隔 绝 加入分离胶 溶液(7cm) 制备分离胶 应
10、迅速 取玻璃管， 一段封口 列 惊 崖 崩 姬 痉 绣 跌 螺 亥 艘 坯 辖 凋 诽 月 妓 坍 鹃 坦 娱 楷 凶 焙 擒 谈 身 酋 质 加 副 恶 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 v装柱 将凝胶管插入电泳槽槽底橡胶塞孔中，加入电极缓冲液与下电泳槽 ，随后放入凝胶管及上槽，除气泡(上电极槽以电极和凝胶管完全浸入 为宜，下电极槽以凝胶管浸入3/5为宜) 炙 钾 两 期 揉 骆 溅 殉 臂 橇 蔗 息 列 贸 叮 问 呜 坛 景 担 泡 头 得 蹈 燃 冻 滨 泄 始 恩 忻 霖 血 清 蛋 白
11、质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 v加样 取血清12L ，7号试剂12L混匀，品均加入4管，每管6L.（加样 枪不可插入过深，以免刺破凝胶，同时要缓慢、均匀，以免搅动缓冲液 引起样品扩散。） v电泳 接通电源，上负下正，先调节电流1mA/管，待示踪染料进入分离胶后 调节为23 mA/管，待示踪染料离管下口0.5cm时切断电源。 v剥胶 注入蒸馏水做润滑剂，针头螺旋式前进，缓缓剥离。 v固定、染色及漂洗 将凝胶柱浸入8号剂中泡10min，进行固定，用9号剂染色10min，用清 水冲洗，放入10号剂中漂洗脱色。 婴 昼
12、据 洋 谜 谢 终 缨 糠 求 抑 矿 鲜 脓 按 赴 腑 姜 磕 扎 录 掏 骋 华 廓 胖 沃 涂 瑟 嘱 撮 壹 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 v结果示意图 2 1 捷 愁 戈 省 杰 勒 吟 瞎 凳 述 瘦 枯 馈 陆 俐 厌 廊 凳 峦 盂 猎 弓 当 落 间 梧 贷 摄 荷 来 济 橇 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 注意事项： v丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是神经毒性试剂，对皮肤有刺激作用，
13、注意避免直接接触 v丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺溶液应装在棕色瓶中，用前检测pH值 是否失效。失效液不能聚合。 v加速剂（TEMED）要密封保存，过硫酸溶液现配现用，防止氧化 失效。 v配好胶后应尽快灌胶（不要形成气泡） v切记装柱后应用蒸馏水密封 v灌胶和电泳时要注意排气泡 v加样时不能损伤凝胶表面 v电泳时凝胶管不能漏水，并且与电泳池垂直 v固体胶切忌倒入水池 襄 邓 下 羞 皮 毛 拦 枚 喷 邹 副 翘 仙 发 策 鸡 拄 饺 雹 扎 垣 处 靡 箕 詹 手 况 第 滇 拭 峨 若 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 迸 幅 拷 筒 哟 违 豢 仙 效 依 贩 送 述 波 膛 态 着 弟 刻 搬 抢 撬 反 就 苯 乞 掷 渺 蒜 禾 灌 孟 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 The end! 谢谢！ 蜕 堆 鸳 酚 绚 汐 惨 追 党 瞅 版 衰 五 涣 秸 犀 玫 鸡 鹃 瞅 赚 屠 耽 期 倘 裹 替 印 瞳 伪 橡 泛 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳 血 清 蛋 白 质 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 圆 盘 电 泳