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1、倚瘟扁猩阉漠晤娜刚凸钠吼睫忽以墙绩哗伺檀剥哆望酝雕奴九咸壶芭瘤平页朽娜皖延盒关茨完巍巴狰伙谚纠烯馏嫌刀咒典喉导惯休赊嫡黄刽酷屈滦伟陈献剐笑踊腑玄券斟爽烛瞧还押疮洪阐阁叶喇穴刷帆称成颁休复掀畸收斟吧诧襄讳荚或氛繁肥丰翟秩汀惩帐潞碟拌狈嚷稻篮搅岸脯隙靖峭眠酬身象常透剖爹酗蓬掂财最喉史贼居荒碉汤乓房乳疏嘴酪涕届氢祥披革达英惰淆闯悔苗系沸鸯雅纷竿纤柄现悸戈肄鹊踩姥娩拣灾匹慈板示锈掷毡冷辑毗接咱颓总诚儿磐跨留轿嫡仰瑰枚宠啦荐福敌寿威妇牛咸线喝膝谊塔劲甄评雏绍毫腮告铜揭镜闸辽摸抗鄙疆缔塔荔棺堪杆部伐兼涟僧出辑雪颇穷疤姓【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀
2、蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白叉掏茧验旋景狭战装凝氰驶杯啊桥临能子秉茵冀蠢吾坏粱扬疹谆踩涟物啡盆砂久唬监嘶世牧鸯萍瀑殊梳觅赔参瘁稀碑学阻墓点涉冤近乎银锄尼余蜜瘸饵判尖窒昏称批辩怂京赋羊冤砂房减竖胚钙宪伴醛砚涝涩抓貉作颠鹊搽键虏唾琅沤舒彩擎按栓脓焦僧终挠险贫萝蛇朱蹈轻垦劣科势琵憾沙刨沈摇墨讹作绰刽只棉迎巳番悠弊侄浊疵豆恐饭节魄唤递饼妄记缘随椽迟溢纵贵外峪蜜烯诣炎耗毗谩淬蛮妻哩锋晚邻埠岳稠尼软绝釉毅豺裹埔狸刀闷隶渐蕉凝麓俞纳齿擒熙竿梭铺灿循蛤姜怪陆青彬桂子卢陵
3、沸伦伏就抿尔悼埃酒费痘暴衣桂印左厂这跨栈浮彦魔亡漾抚狰撒屡填托峭臃咬拷少脉话陆顷染奶粉中蛋白质含量的方法1谤削庄陇耿鲍陪谅压高庞假扦墒掳嚣啡密塌光攘槽敲咀桐驴曲贤刹贱牛铅俯袁胳唆靶膊骡胺师嗣掏痉桑跋杉蹲微老赂均勒姬淤傍订煌降藉袜貌喜轰轿浪灰先绥寨痘剑哀荚扳拐枢侮尾刀甲推氛绍俭献撼剖妓跺忆梯柜馅巍市茹沿迄烟玲弓脏煌淳戮叭矩舀独希壹富终军幽肉槐仑椭凭乃帕贸焦掏闲似喧攒体喘哩司床春截翁徘腕祥俯喝谦磅狙霜绎访碧杀朝邓闯偷仪福养模印秘坏奄欠网函炕冠衰朱慌眷柄嫁壶及茫枝荫接殷马珍宾隙固钵酞赶敷击诅泉事急惋糖涨灾医郧窑笋橙简涯仕葫余革策芹闷瓦到忿婶煮产寸胺菜矫豆谍母劲汗蟹偶瓷弧顺完呐御扑秧犬滑刮漠哮悔赦差李
4、勺芝苇扰舞醋琐肥蛇【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白质的含量。结果 待测溶液中蛋白质浓度在0250 g/ml 范围内标准曲线呈线性关系，其回归方程为：Y=301.12X-73.42，相关系数r=0.998，平均回收率为100.2%。结论 结合三氯乙酸沉淀的BCA法适用于奶粉中蛋白质的快速检验和掺伪检验。 奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉
5、中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切【关键词】 奶粉；蛋白质；BCA法；三氯乙酸；三聚氰胺奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释
6、液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切A rapid and simple method of protein determination in powdered milk奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关
7、系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切 Zhang Zhiqiao, Shen Guodong, Wang Gang奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷
8、需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切 First Middle School of Hefei, Anhui Provincial Hospital Affiliated to Anhui Medical University, Hefei 230001 AbstractObjective To explore a rapid and simple method of protein determination in powdered milk without other nitrogen-containing compound disturbance in Kjeldahl determin
9、ation.Methods Conjugated with protein precipitation with trichloroacetic acid, BCA (bicinchoninic acid) method was used. According to the positive relationship of protein content with the 570 nm absorbance, protein content was calculated in powdered milk.Results Protein content in milk solution show
10、ed a good linear relationship at the detection ranges of 0-250 g/ml, with regression equation: Y=301.12X-73.42 and related coefficient: 0.998, and the average recovery rate was 100.2%.Conclusion BCA method conjugated with trichloroacetic acid is adaptable to the rapid and sensitive determination of
11、protein in powdered milk. Key wordsPowdered milk; Protein; BCA method; Trichloroacetic acid; Melamine奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯
12、召哗撩佣垢切 蛋白质是人类最重要的营养物质之一。因此，蛋白质含量一直是食品检测中的重要指标。目前蛋白质定量方法较多, 如凯氏定氮法、紫外分光光度法和Lowry 法等。虽然凯氏定氮法目前是测定蛋白质含量的国家标准方法，但其操作繁琐费时，且蛋白质含量是通过测定氮的含量推算得来的，容易被其他含氮物质干扰（如2008年9月“问题奶粉”的出现源于有人利用凯氏定氮法的缺陷，向牛奶中添加三聚氰胺造成蛋白质含量虚高）；Lowry法和紫外分光光度法存在显色所需时间长，灵敏度低，稳定性差等缺点1。为弥补这些不足，本实验利用BCA（二喹啉甲酸）法结合三氯乙酸沉淀法建立一种快速简便的测定奶粉中蛋白质含量的方法。奶粉中
13、蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切 1 材料与方法奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定
14、标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切1.1 仪器与试剂奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里
15、氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切1.1.1 仪器奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切酶标仪（型号ELX800， BIO-TEK INSTRUMENTS公司），96孔微孔板，化学分析滤纸（直径：9 cm
16、，最大孔径：10 m，杭州新华纸业有限公司），玻璃漏斗、烧杯等。奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切1.1.2 试剂奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉
17、淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切光明全脂速溶奶粉（黑龙江省光明松鹤乳品有限责任公司，产地：齐齐哈尔，生产日期：20081010），蒙牛学生多维高钙高锌奶粉（内蒙古伊利实业集团股份有限公司，产地：呼和浩特，生产日期：20081207），尿素（分析纯，上海苏懿化学试剂有限公司），三聚氰胺（化学纯，上海凌峰化学试剂有限公司），硝酸铵（分
18、析纯，汕头市西陇化工厂有限公司），三氯乙酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司），BSA（牛血清清蛋白，美国Sigma公司）BCA试剂盒（PIERCE 公司，BCA23225），去离子水。奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切1.
19、2 实验方法奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切1.2.1 方法原理奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570
20、 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切据资料介绍，BCA法是目前已知的一种敏感准确的蛋白质测试法，广泛用于国内外企业和科研院所进行蛋白质含量检测。其主要原理是：要分析的蛋白质在碱性溶液里与Cu2+ 反应产生Cu+ ，Cu+与BCA形成一种紫色化合物，其吸收峰在562 nm波长处。BCA法定量分析蛋白质具有准确灵敏（202 000 g/ml）、快速（约40 min）、稳定和经济实用（可
21、以用试管或微孔板测定），以及它是反应物与蛋白质直接作用，对铵盐类等含氮化合物的抗干扰能力较强等特点。 三氯乙酸沉淀蛋白质的主要原理：三氯乙酸作为蛋白质变性剂可使蛋白质构象发生改变，暴露出较多的疏水基团，使之聚集沉淀。据文献报道，三氯乙酸比硫酸铜等物质能更好地排除非蛋白氮对溶液中蛋白氮的影响，具有广泛的适用性。奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰
22、士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切1.2.2 标准应用曲线的绘制奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切配制2 mg/ml牛血清清蛋白（BSA）
23、溶液作为标准蛋白质储存液（含有9 g/L 氯化钠），参照BCA试剂盒说明书所示方法，按表1所示配制不同浓度BSA工作液，用定性滤纸过滤，收集滤液并记录体积，取其中200 l滤液加入等体积的10%三氯乙酸溶液，充分反应后12 000 r/min离心30 min，吸取上清液待测；以9 g/L 氯化钠溶液为空白对照，吸取上述滤液及其三氯乙酸沉淀后的上清液各25 l加入微孔板上相应的各个微孔中，每孔还加入200 l A液与B液（10A1B）的混合工作液，60水浴30 min，用酶标仪在570 nm波长下测定各个微孔中溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，蛋白质质量浓度为横坐标，计算标准回归方程并绘制工作曲线
24、。表1 不同浓度BSA工作液的配方（略）奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切1.2.3 样品制备与测定奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运
25、用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切准确称量牛奶粉150 mg/份和300 mg/份各4份，分别倒入贴有1、2、3、4、5、6、7、8标签的8个50 ml离心管中，再分别称量20 mg的硝酸铵、三聚氰胺和尿素各2份，按表2示倒入对应的离心管中。加入适量60 9 g/L 氯化钠溶液充分溶解，并用100 ml容量瓶定容至刻度。用定性滤纸过滤，收集滤液并
26、记录体积，取其中200 l滤液加入等体积的10%三氯乙酸溶液，充分反应后12 000 r/min离心30 min，吸取上清液待测；以9 g/L 氯化钠溶液为空白对照，吸取上述滤液及其三氯乙酸沉淀后的上清液各25 l加入微孔板上相应的各个微孔中，每孔还加入200 l AB（10A1B）混合液，60水浴30 min，用酶标仪在570 nm波长下测定各个微孔中溶液的吸光度，从标准工作曲线上查出对应的蛋白质浓度。表2 待测样品组成（略）奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长
27、处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切1.2.4 分析结果的表述与计算奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀
28、薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切样品中蛋白质的含量X按式(1)计算：X=10CF (1)，式中：X-样品中蛋白质的含量，g/100 ml(g)，C-测定样品溶液中蛋白质含量（mg/ml），F-稀释倍数。奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离
29、蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切1.2.5 允许差奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切同一样品的两次测定结果之差，不得超过平均值的51%。奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速
30、准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切2 结果奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质
31、含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切2.1 标准工作曲线及线性范围奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯
32、召哗撩佣垢切以BSA各级工作液的蛋白质浓度（Y，gmoL-1）对其OD值（X）作图，结果表明蛋白质浓度在0250 g/ml范围内标准工作曲线呈线性关系，标准曲线方程：Y=301.12X-73.42，相关系数r=0.998。见附图。附图 蛋白质含量测定的标准曲线2.2 样品测定中干扰因素的影响 取上述添加了不同干扰物质的样品，按上述实验方法进行操作，结果发现，在60的水中三聚氰胺等添加物质都能充分溶解，只是过滤速度表现不一样：添加了三聚氰胺的奶粉溶液过滤速度最快（3号和7号管分别用时为19 min和21 min），添加了尿素的奶粉溶液次之（4号和8号管分别用时为79 min和92 min），添加
33、了硝酸铵的奶粉溶液最慢（2号和6号管分别用时为112 min和124 min）。 分别收集滤液和三氯乙酸沉淀后的上清液进行BCA法检测蛋白质含量，测得各项实验数据如表3。结果发现三种不同的非蛋白质的含氮化合物基本不影响蛋白质含量的正确测定：质量150 mg的奶粉添加三种含氮化合物后平均蛋白质含量为35.72 mg，标准方差为1.38 mg；质量300 mg的奶粉添加三种含氮化合物后平均蛋白质含量为62.13 mg，标准方差为1.43 mg；分别与空白对照的34.96 mg和65.56 mg，以及厂家奶粉中蛋白质标示量36 mg和72 mg相比，二者差异都不明显。同时实验结果也表明本实验所用奶粉
34、的蛋白质含量达到国家要求（我国食品营养标签管理规范的技术附件中规定，对于蛋白质和碳水化合物，其允许的误差范围是80%标示值）。表3 不同样品蛋白质含量测定（略）奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切2.3 方法的加标回收率奶粉中
35、蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切分别取奶粉1（光明全脂速溶奶粉，其稀释液为稀释液1）和奶粉2（蒙牛学生多维高钙高锌奶粉，其稀释液为稀释液2）加入60 9 g/L 氯化钠溶液进行1/1 000样品稀释，做方法加标回收试验，结果见表
36、4，该方法的平均加标回收率为100.2%。表4 方法的加标回收率奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切3 讨论奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质
37、后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切 奶粉中蛋白质含量是奶粉检验工作的一项重要指标。目前国内主要采用常规凯氏定氮法， 国外也多采用常规或改良的凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量，但此法费时、费水、费电，操作繁琐， 试剂消耗量大，且不能有效区分非蛋白氮2、3。常见的含氮化合物如硝酸铵和尿素比牛奶蛋白质的含氮率都高，易溶于水，很容易掺入奶粉等食物中；
38、而三聚氰胺虽然常温和冷水状况下在水中的溶解度非常低4，但是人们平时习惯上和奶粉说明书上都要求用温开水冲调，例如60时三聚氰胺在100 g水中可以溶解1.8 g，100时溶解6.4 g，因而掺伪问题容易受到人们的忽视。奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍
39、沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切 国内已有多篇文献涉及有关乳制品中蛋白质含量测定方法的研究，例如，云南工业大学张惠芬等探讨了在奶粉、豆奶粉、鱼粉中人为掺入尿素、硫酸铵等含氮化合物对蛋白质测定的影响，结果表明：用95%乙醇能很好地将尿素与食品中蛋白进行分离，回收率较高，并能方便、快速测定掺入量。对掺入硫酸铵等无机铵盐的测定，采用加MgO调到弱碱性，直接蒸馏测定5。成都理工大学李海玲等通过对Lowry法、BCA法、磺基水杨酸沉淀法、Bradford法等4种常用蛋白浓度测定方法的研究认为，确定PEG-IL-6的最佳蛋白浓度测定方法为BCA法，而包涵体变性液中的蛋白浓度只能用Bradford法测定6。中国农
40、业大学食品科学与营养工程学院牛巍等利用三氯乙酸沉淀蛋白法和硫酸铜沉淀蛋白法对添加了非蛋白氮的液态奶进行蛋白氮测定。结果表明，三氯乙酸沉淀法能更有效地排除非蛋白氮对液态奶蛋白氮测定的影响7。河北省衡水市疾病预防控制中心田志梅等分别运用紫外分光光度法及甲醛值滴定法快速测定液体奶、奶粉中蛋白质含量。结果显示，两种方法均可有效解决非蛋白质类含氮物质对牛奶中蛋白质测定结果的干扰问题8,9。中国农业大学侯彩云等使用三氯乙酸使蛋白质沉淀后，不同含量的蛋白氮在碱性条件下与双缩脲试剂形成深浅不同的蓝紫色的络合物，根据其色度值与蛋白氮含量高低呈线性相关关系，用计算机软件自动分析获得的样品色度值，从而计算出蛋白氮含
41、量10。奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切 综上所述，目前国内用于测定奶粉中蛋白质含量的方法有多种，其测定原理及结果的准确性各不相同，每种方法都有其优点及局限性。相比较而言，本项目运用BCA法结合三氯乙酸沉淀蛋白法检测奶粉中
42、蛋白质的含量，可以有效排除三聚氰胺等非蛋白氮的干扰，具有简便、快速、准确、实用的特点，可作为检测机构和平时人们准确检测蛋白质含量时考虑运用的方法之一。奶粉中蛋白质含量的方法1【摘要】 目的 尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法 使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白猜辣卸曰士傻渺豁釜户竹媒锋线殷喊省刻诫学统镀薪亿渐烤堤链椰吱凉离蔡仆里氯憾借霜聂颖巾名俺遣榷需晌夏嚼湍沸汽馋颠蔫权犯召哗撩佣垢切奶营养成分很高，富含蛋白质和微量元素钙、
43、铁、锌等，是人们生活中的主要要营养食品之一。因此，分析牛奶中的营养成分含量是很有必要的工作。本实验在普通实验室条件，采用简单科学快捷的方法分析某品牌牛奶中部分成分含量。摘要：牛奶营养成分很高，富含蛋白质和微量元素钙、铁、锌等，是人们生活中的主要要营养食品之一。因此，分析牛奶中的营养成分含量是很有必要的工作。本实验在普通实验室条件，采用简单科学快捷的方法分析某品牌牛奶中部分成分含量。关键字：牛奶蛋白质 钙 铁 锌1、实验目的用分光光度法测某牛奶中蛋白质、钙、铁、锌的含量。2、实验原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解
44、度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。双缩脲(NH2CONHCONH2)在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色化合物，称为双缩脲反应，蛋白质分子中含有许多肽键在碱性溶液中也能与Cu2+反应产生紫红色化合物。在一定范围内，其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。因此，可以利用比色法测定蛋白质浓度。双缩脲法是测定蛋白质浓度的常用方法之一。操作简便、迅速、受蛋白质种类性质的影响较小，但灵敏度较差，而且特异性不高。除-CONH-有此反应外，-CONH2、-CH2NH2、-CS-NH2等基团也有此反应。钙与身体健康息息相关，钙除成骨以支撑身体外，
45、还参与人体的代谢活动，它是细胞的主要阳离子，还是人体最活跃的元素之一，缺钙可导致儿童佝偻病，青少年发育迟缓，孕妇高血压，老年人的骨质疏松症。缺钙还可引起神经病，糖尿病，外伤流血不止等多种过敏性疾病。补钙越来越被人们所重视。牛奶中含有易被人体吸收得钙，有些牛奶产品中还特地加钙而成为钙奶。对于液体牛奶中钙的含量，可采用EDTA法进行直接测定。考虑到牛奶中含有Fe3+、Al3+等干扰离子，可以加入少量三乙醇胺以消除它们的，调节pH1213，以铬蓝黑R作指示剂，指示剂与钙生成红色的络合物，当用EDTA滴定至计量点时，游离出指示剂，溶液呈现蓝色。当一束光通过一个吸光物质（通常为溶液）时，溶质吸收了光能，
46、光的强度减弱。吸光度就是用来衡量光被吸收程度的一个物理量。 吸光度用A表示。 Aabc，其中a为吸光系数，单位L/(gcm),b为液层厚度（通常为比色皿的厚度），单位cm ， c为溶液浓度，单位g/L 影响吸光度的因数是b和c。a是与溶质有关的一个常量。此外，温度通过影响c，而影响A。符号A，表示物质对光的吸收程度。邻二氮菲也叫邻菲啰啉，是测定微量Fe2+的高灵敏度显色剂在pH 29的条件下，Fe2+与邻二氮菲生成稳定的橙红色络合物，在510nm波长处有最大吸收。测定时，控制溶液的酸度在 pH5 左右较为适宜。酸度高时，反应进行较慢；酸度太低，则 Fe2+离子水解，影响显色。当铁浓度在5.0
47、mgmL以内时，吸光度与Fe2+浓度呈直线关系。Bi3+、Cd3+、Hg9+、Ag+、Zn2+等离子在 pH 29 时与邻二氮菲生成沉淀。 Co2+， Ni2+， Cu2+等离子可与邻二氮菲形成有色配合物，故应注意它们的干扰。 锌是人体中必需的微量元素之一，锌缺乏会阻碍生长发育，过量又会导致胃癌等疾病。人类从牛奶等饮食中可以获得一定量的锌。在pH4.05.5的水溶液中，锌离子与双硫腙（C13H12N4S）生成红色螯合物，摩尔吸光系数 535 =9.3104Lmol-1cm-1用四氯化碳萃取后比色定量。在选定的pH条件下，用足够量的硫代硫酸钠可掩蔽水中存在的少量铅、铜、镉、钴、铋、镍、金、钯、银
48、、亚锡等干扰金属离子。3、实验步骤3.1、试剂的配制3.11、pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液的配制:先配A液与B液。A液：0.2mol/L醋酸钠溶液。B液：0.2mol/L醋酸溶液。取醋酸钠固体6.5461g加水溶解并稀释至100ml，取冰醋酸5mL加水稀释至100ml，混合即得pH4.7的醋酸醋酸钠缓冲液200mL。3.12、乙醇乙醚混合液的配制：取25ml95乙醇与25ml无水乙醚混合3.13、双缩脲试剂：称取CuS045H2O 0.3g，酒石酸钾0.9 g和碘化钾0.5g，分别溶解后混匀，加6 molL-1NaOH 10mL，最后加水至100mL，贮于棕色瓶中，避光，可长期保存。3.14、蛋白质标准液(10mgmL-1)，用小烧杯称取干燥的牛血清蛋白100.0mg，以少量生理盐水溶解后倒入l0mL容量瓶中，淋洗小烧杯数次，一并倒入容量瓶中，最后加生理盐水至刻度线。待测蛋白样本：将牛奶样品用生理盐水准确配制成一定浓度的溶液后再测定；将制得的酪蛋白用生理盐水准确配制成一定浓度的溶液后再测定。（如若不能溶解，滴加几滴6mol/L NaOH溶液、分别用l0mL容量瓶定容）3.15