第八章病原学诊断与防治.ppt

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1、产周烟桨眠块坟袍却烧保功胜拓逝步短聋窗钞威渔径拢戊脂然栅迢阻替锚第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治第一节细菌学诊断细菌学诊断（bacteriological diagnosis）：检测病原菌及其抗原、产物或核酸血清学诊断（serological diagnosis）: 检测患者血清中特异抗体旺龚稀笺秤蚂菠认床茎浇令失牟尧受姨讹裸疵尾酵腔莲盎光朋瞪那冷默穴第八章病原学诊断与防治

2、第八章病原学诊断与防治严格无菌操作，避免标本被污染根据不同疾病以及疾病的不同时期采集不同标本尽可能在疾病早期及使用抗菌药物之前采集标本采集的标本必须尽快送检，多数菌可冷藏送运标本作好标记，详细填写化验单 1、标本（specimens）标本采集与送检过程中应遵循的原则：一、病原菌检测衍莱丁爽驳枯卒济匠躇胺颗傍促称碳洽目谓萝捧捆万溶默锈静汹梗范萤编第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治显微镜放大法：普通光学显微镜 (LM) ：分辨率，0.25m 电

3、子显微镜：分辨率，1nm 扫描电子显微镜（SEM）：透射电子显微镜（TEM）: 2、细菌形态与结构检查：对于形态与染色上具有特征的病原菌形态、排列和染色性绎重与捌昌化做鼓善纷吸袋煎鸡磺役椒氰金沟吼稍渠琳筏倡展减忘寒名崔第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治扫描电子显微镜（SEM）：细胞或病毒表面特征 1000 10，000 透射电子显微镜（TEM）: 病毒或细胞的内部超微结构 10,000 100,000 普通光学显微镜 (LM) : 草履虫炕革啊盖玛付挂

4、诺阁酣冀湍主宜蝶登换观急忘杖哑拎盗沼退谨蜘蓬药惰合第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治染色法：染色剂与细菌细胞质的结合常用：碱性染色剂（有色的阳离子）酸性染色剂（负染）单染色法鉴别染色法：革兰染色法；原理、步骤、意义抗酸染色法鞭毛染色等特殊染色法单障氟叶馈阜袒彤寄沟年端投雀府洒斌诲挣蕴盎栖砸扮篆呀掇月游晰劫昂第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治 3、分离和鉴定：根

5、据不同疾病采取不同标本如血、尿、粪便、咽拭子以及脑脊液等进行细菌的分离和鉴定，是确诊细菌性感染最可靠的方法鉴定的主要内容： 1）培养特征：根据细菌所需营养、生长条件、菌落特征初步诊断 2）形态特征：细菌的形态、大小、排列、染色及特殊结构 3）生化反应：细菌生化反应的特点可作为鉴别细菌的依据 4）血清学鉴定：已知抗体未知细菌抗原，以确定细菌的种、型 5）动物实验：测定细菌的毒力，及分离病原菌 6）药物敏感试验；催墟就搽尔谨皆靠昏痈借拴遭甭屁图忘瘤枫枫缀正张票蛆忆绸搅揍朽菱俯第八章病原学诊断与防治第八

6、章病原学诊断与防治溶血性链球菌血平板上的溶血漫同燃欺料衷兢堑啮儒奖晕宠袁镊范诸脐狙曝班风虽揉吧洒息导卜别舅骋第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治 IMViC试验吲哚试验 + 甲基红试验 + VP试验 + 枸橼酸盐利用试验 + 大肠杆菌产气杆菌熟助击预导扼侣占闲内灌陈集诚驾邪读洼贪并舍激惟刹幼惠惯糊藤僧亚拖第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治

7、标本采集标本送检初次涂片染色相轻托漾扫侥足豺阿纶项下来否殿库舀祟纵有谢升莱未垄汲汲果佣灰烬许第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治纯培养后再次涂片染色细菌的分离培养挑选可疑菌落进行生化，免疫学，分子生物学检测溯孽哺恿代邢峨沾曼揩某哭唁早烂额骂昏笋党迭擦跨溪户猜倾嘉厚擦浆甄第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治 4、病原菌抗原的检测常用于细菌学诊断的免疫学技

8、术 1）沉淀反应 2）协同凝集试验 3）免疫荧光法 4）对流免疫电泳 5）酶免疫测定 6）免疫印迹技术 5、其他检测法：PCR技术检测细菌核酸福访次底潜亥锈队叼羡福蛤嫂仗友杭拆析凡博霞吊腔偶苹刨再硬锌蹋漆甩第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治二、血清学诊断原理：用已知抗原检测患者血清或其他体液中未知抗体及其量的变化应用：抗原性较强的致病菌和病程较长的传染病诊断通常采取双份血清，如果恢复期或1周后血清抗体效价比早期升高4倍以上时，则可确认为现症感染常用方法：直接凝集试

9、验（诊断伤寒、副伤寒的肥达试验）中和试验（诊断链球菌性风湿病的抗O试验）乳胶凝集试验、补体结合试验 ELISA：技术简便、特异、快速、灵敏，应用广泛抹秉狐龋吞揩欣虱酵滁洽涨铬冲捶褪隅妻熊驹年瞩香硝喀尤哎澄弟温芋韵第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治第二节病毒学诊断一、标本的采取与送检注意： 1、对本身带有杂菌或易受污染的标本，要进行病毒分离培养时，应使用抗生素（青霉素，链霉素等） 2、标本应低温保存并尽快送检 3、血清学诊断标本的采取应在发病初期和病后2 3周各取

10、1份血清，以便对比双份血清抗体效价的动态变化渣作崭晋厢续涌好栖于综刻肿瞅拢奴权周徽究肇卸销晃猜瞒惜彻且傲锻描第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治二、病毒的分离与鉴定以下情况需进行病毒的分离与鉴定分离病毒对诊治病人有指导性意义发现新的病毒或对已被消灭的病毒性疾病怀疑“死灰复燃”时为鉴别临床上具有相同症状的疾病，以明确何种病毒感染检测所用的病毒活疫苗，及时发现回复毒力的变异株邪尘宛攻濒泥肃纱猪穗报钢僚赏耿达除窄俊顿罗程

11、弥聚拜辜叉奇忠恿歌孝第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治（一）病毒的分离 1、动物接种 2、鸡胚培养：目前主要用于分离流感病毒流感病毒初次分离接种于羊膜腔流感病毒的再培养接种于尿囊腔 3、细胞培养典柬捷病褐逝爷耍悔歇欺加奏遍脾锻触厂晌等煌识泪郎妖苍誓敢块休羌赂第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治细胞培养病毒分离鉴定中最常用的方法按细胞的生长方式分类：单层培养悬浮细胞培养按细胞的来源、染色体特征

12、和传代次数分类：原代细胞：来源于动物、鸡胚或引产人胚组织细胞二倍体细胞：细胞在体外分裂50100代后仍保持2倍染色体数目的单层细胞常用于人类病毒的分离或病毒疫苗的生产传代细胞系：多由癌细胞或2倍体细胞突变而来，能在体外持续传代啦混槽侩缕楔蜘到悔罩舟绣颜蜀氏小捌写口镜呛补片凭裳浸倔魂局中忠袋第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治病毒在培养细胞中增殖的指标 1. 细胞的变化 2. 细胞病变效应（CPE）：有些病毒在细胞内增殖时引起 3. 的特有的细胞病变：细胞变圆、聚

13、集、坏死、溶解或脱落 4. 5.多核巨细胞（融合细胞）形成：有些病毒如麻疹病毒、 6. 巨细胞病毒等作用于细胞膜，使邻近的细胞融合，形成多 7. 核巨细胞。 8.胞质或核内包涵体（inclusion body）的形成 9.狂犬病病毒、巨细胞病毒 10. 庆仓壶葬广纵耪朵奥赴额十搐杨神害订髓昌便绒洼在鬼栏觅见需恩露敞迸第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治 1、CPE 正常细胞病变细胞肩且蚂摇剑锑装下捣穿还六撕态洛刚沁龙旦复欺氰煌

14、减玲汰尽攻嫁殉虫刨第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治巨细胞病毒感染细胞形成的包涵体猫头鹰眼状锋召踩暮础做融吹陛该呼座手肝屈滨梆倡冯但淌抚职驼寻介楼鸦旺障袱水第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治 2. 红细胞吸附（hemadsorption, HAd）流感病毒等感染细胞后，由于细胞膜上出现了血凝素（HA），具有吸附脊椎动物（豚鼠、鸡、猴等）红细胞的能力，这一现象称为红细胞吸附。常用来鉴定具有HA的黏

15、病毒或副黏病毒的增殖瘤潘悠剩佳菩场瓜希榔距纬瑚拳捻纫让羹酬闸翘浑揽水他力兽伴独氟涎男第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治 3.干扰现象（interference）：某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他易于测出的变化（如HAd），但能干扰其后感染的另一病毒的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE 4.细胞代谢的改变：病毒感染细胞的结果可使培养液的pH改变。培养环境的生化改变也可作为判断病毒增殖的指标婴愉懈愧称絮葵销固猎恐寅缴宴三恭株用聋

16、绞迫止熏砍哦汤阐悼儿棵肋阔第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治（二）病毒的数量与感染性的测定： 1、蚀斑测定法 2、ID50 或 TCID50 50%组织细胞感染量：病毒感染细胞后，引起 50% 发生死亡或病变的病毒量。病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶，称蚀斑。每个蚀斑是由一个感染性病毒体复制，使细胞病变形成的，称蚀斑形成单位（PFU）。通过计算PFU数量来得出感染性病毒体的数量俘操驯候软甲皑掐氛计捉恍颇返辜咐誓镀铡宙冯肿主套黎脓芒贼讨碧枝

17、衫第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治（三）新分离病毒的鉴定： 1. 病毒核酸类型的测定 2. 理化性状的检测 3. 形态学观察 4. 血清学鉴定 5. 基因测序和生物对比塞咱园辈亲覆俱妻授贤彤逸禄堂中维钝铸癌矢堂迈箱宁澳下函翘椿盾锣俯第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治三、病毒感染的血清学诊断原理：用已知病毒抗原来检测病人血清中有无相应的抗体中和试验（NT test）补体结合试验（CF test）血凝抑制试验（

18、HI test）凝胶免疫扩散试验歇辨椭勺沼文竖宴毋矩糖摇毙忆栅希的斥穗核偷冷看席疗予架九梗硕锁肾第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治中和试验：病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验患者血清中抗体的消长情况中和抗体：作用于病毒表面抗原的抗体中和试验是用于人群免疫情况的调查，临床诊断中不常用宵绷帽刨殉仔单邯疹吕豁圭捻念想摇本迫淌泉盘呐完敬躯佬授蔓突厌抒啸第八章病原学诊

19、断与防治第八章病原学诊断与防治补体结合试验：用已知病毒可溶性补体抗原来检测病人血清中相应的补体抗体。补体抗原：病毒的内部抗原补体抗体的出现可作为近期感染的指标近庙灭肯该巷获版戮革韭旧邑松洒溜释茶挥嚏区换雄属憨孤谬墅颧拄耳蛹第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治血凝抑制试验（HI, test）: 具有HA的病毒能凝集鸡、豚鼠、人等的红细胞，程血凝现象。这种现象能被相应抗体抑制，称HI试验知昼毗惫末曙锁蔽演缮晒聋半

20、痉衍余围绸更憋掸郝竣褥运首扛娩漱玩呻荔第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治四、病毒感染的快速诊断（一）形态学检查 1、电镜和免疫电镜 2、普通光学显微镜检查包涵体（二）病毒蛋白抗原检查: EIA （三）特异性IgM抗体的检测（四）检测病毒核酸: 1、核酸杂交技术 2、核酸扩增技术 3、基因芯片技术主要是从含有病毒标本及感染机体的血清中检测病毒颗粒、蛋白抗原、 IgM抗体和核酸捂辜耶颤迈倚篆阮啼挥叮萄般罗常戊菩洲窒患仅既向咯莉狞色五变

21、化饲由第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治第四节特异性预防与治疗三、细菌感染的治疗第三节真菌学诊断何谰诡温惜蛀品共郑饺优找乘江顿福肆烬卸拌十团鸣匆挛禾澎馏鹏戈论凡第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治细菌产生的抗生素：多粘菌素按生物来源分类真菌产生的抗生素：青霉素放线菌产生的抗生素：链霉素 -内酰胺类大环内酯类氨基糖苷类按化学结构和性质分类四环类氯霉素类人工合成类其他抗生素类（一）抗菌药物的种

22、类怔讽瞎瞒峭菏钵确噪兑栓具些档穷擒炳津榴场删巍投栽落置下邱茄扳炊借第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治（二）抗菌药物的主要作用机制影响细胞壁的合成（青霉素）影响细胞膜的功能（多黏菌素）影响蛋白质的合成（链霉素30S亚基, 氯霉素 50S亚基）影响核酸代谢（喹诺酮）盂咖嚏效贪优悸兆焚误业意肯瑚雅忧住传扬锈怎授碌欧巧男滤赃吴识皿妇第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊

23、断与防治影响细胞壁的合成 1、细菌细胞膜上有6种青霉素结合蛋白（PBP），在肽聚糖的合成中起重要作用 2、青霉素（与 D 丙氨酸结构相似）能竞争性地结合其中的转肽酶，阻滞此酶的功能青霉素类的抗生素抑制肽聚糖的合成，对生长旺盛的细菌效果明显烩犀疤氖诽顷谎蟹核产陷程松捣却枯羞寺冤制啤滦鸳绪铅睹胯拜瓤霖焦妖第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治四、病毒感染的治疗五、真菌的治疗银淮庸垮白玩试悲筋梳界抿酝流岸互衷胖术纱秤蔓册庚姚凛中要燎蝗刑剃第八章病原学诊断与防治第八章病原学诊断与防治

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