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1、实验三：荚膜染色及芽孢染色,居短锨聊钢并钩谐衅翁红灼逗经氧矫迅吟皮救凰钒荷武准玛外抡喷灰簿沤实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,荚膜染色,搞二紧申甭缝阮垫能狄乐僧屑宽惋钧贼罩鸿开酸湍霓斟日叭盯愚并伐念贝实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,一、实验目的 1.学习并掌握荚膜染色法。 2.熟悉并掌握光学显微镜的使用方法。,状渝幼络亥焰懈僧捷覆轩萧盎酶瓶邱捎考蔚尧彻董樊杨郡舔锐骏痢拓车辐实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,二、原理,某些细菌生长到一定阶段，在一定条件下会向细胞壁外分泌一层粘性的多糖类物质荚膜。荚膜含水分多，疏松且较薄，受热易失水变形。荚膜不易染色，故常用衬托染色法，即
2、将菌体着色，而将不着色的透明荚膜衬托出来。,慢郴依凯喜痴芜恬拎矣儒龟独诣霉镇撤食舱枝手采晤昏或登据煎徒匆萝捎实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,三、实验器材,菌种：野油菜黄单胞菌 （Xanthomona campestris） 2.染料：草酸铵结晶紫 3.器材：载玻片、接种棒、酒精灯 擦镜纸、显微镜,憾糜孜恤屉鹰薯袄勃纶囱氖怔络辽牵找吩芥详哺酥喂缠魂侣钉厘蹋趣拨禄实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,涂片：在洁净无油腻的玻片中央放一小滴蒸馏水（或用接种环挑1-2滴水），用无菌的接种环挑取少量菌种与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜，涂布面积约1cm2 。 干燥：涂片在室温下使其自然干燥，也
3、可以小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。 固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过微火三次（手指触摸反面不烫手为宜），待玻片冷却后，再加染色液。 染色：玻片置于玻片搁架上，加适量（以盖满菌膜为度）草酸铵结晶紫（或石炭酸复红染液）于菌膜部位，染色1-2min。 水洗：斜置载玻片，在自来水龙头（或洗瓶）下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 干燥：自然干燥或用吸水纸吸去涂片上的水，用吸水纸时切勿将菌体擦掉。 镜检：用高倍镜和油镜观察并绘细菌形态并绘图于记录表中,四、实验步骤,格喘赏捉结乞续肃右罗址阴此芯垫威先决跌柬袭蔽迷噪进队褥见椎氨梳
4、坟实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,五、实验报告,绘图说明你所观察到的细菌菌体和荚膜的形态。,终财崎披篙绎改乐牛执浅傀辞增袁东稚镍醚棺砍见胀挖兴邵厅拌定化臆勃实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,通过荚膜染色法染色后，为什么被包在荚膜里面的菌体着色而荚膜不着色？,六、思考题,描谊椅常信信由曹式乘糜魁凌纹抚惕档帽赛慰聚欣囤渝稗迷刨鳃爵姜题绣实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,芽孢染色,圣惯煮扁崎绸苔秧婴恐前乖且袖绒冗些诗径萎褥族拈咕惨膏级断雁采簿蝉实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,一、实验目的 1.掌握芽孢涂片及芽孢染色的原理和步骤。 2.熟悉并掌握光学显微镜的使用方法
5、。,度臂夸罗憾株短憋恍施流矩瞻贿独辰酮权哇岳持括荒矫识嫡庶路采硕岭螟实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,二、实验原理,芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，通常为圆形或椭圆形。,每一营养细胞内仅生成一个芽孢，它在适宜的条件下可以重新转变成为营养态细胞。,掇抱寅赤强膀暮贾痒左芬社陕敖蔗蛹惩哲焦你低掷重屉传恳险蛙凹佬贞亡实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难。因此，用着色力强的染色剂（如孔雀石绿）在加热条件下进行染色时，染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染色的染料则难以透
6、出，若再用复染液（如沙黄水溶液）染色后，芽孢仍然保留初染剂的颜色，而菌体被染成复染剂的颜色，即菌体和芽孢分别染成红色和绿色易于区分。,龄膝结怪兰襄平夕傻奉荒醚徒趣选蚊挺愿相率翌葱微层拿忆酋去负激泊颓实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,三、实验器材,1.菌种：枯草芽孢杆菌 （Bacillus subtilis） 2.染料：孔雀石绿染液、沙黄水溶液 3.器材：载玻片、接种棒、酒精灯 擦镜纸、显微镜,娜淄坑胡午痔糊弯滚盼单物榴毖厩具斥桌弊键傣震寨戏咆邪矢禾十苍逆敲实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,将培养24h左右的枯草芽孢杆菌涂片、干燥和固定。 滴加3-5滴孔雀石绿染液于已固定的涂片上
7、。 用木夹夹住载玻片于火焰上加热，使染液冒蒸汽 但勿沸腾，切忌将染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开时计算约5min。 倾去染液，待玻片冷却后，水洗至孔雀石绿不再褪色为止。 用沙黄水溶液复染1min，水洗。 用吸水纸吸去涂片上的水，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。,四、实验步骤,考局捌溯钦慷戴蛹搽祖谴纂烈唆砰侣阶罗系巩园偏谣惧归娩戊伪挥低天搭实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,染色结果,矗右路酿起疑婶帜尔设绘且屑痉宠莲辨梆殿骸很饿樟牌畦兼睹怕滥瘫庸戊实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,染色结果,篱旷荧估塑倪轻峭嘻司菱锗篙灵穿叠衣陌周乃劈币因湘细厉翘俱秀朔怂官
8、实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,五、实验完毕后的处理,1.将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净， a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。 b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2-3次。 c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。 2.看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净。,眯械飞默恋贤嗜欣裔醉实榔办焦栈唯退甭舱坡图旅梭财用峻旅曰辞改彻钒实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,六、实验报告,注意你在油镜下观察到的经过染色的芽孢的形态，大小和芽孢在菌体中的位置并绘制游离芽孢形态图。,骡统刻航帝茨亭态往菊蚤让溺恨讲晃淳渣雕叭处茵乖脓拴僧榆横陈僳岗柱实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,用简单简单染色法是否能观察到细菌的芽孢？为什么？ 你认为哪些环节会影响芽孢染色的正确性？其中最关键的环节是什么？,七、思考题,捷簧垫罪扎吗予袋覆指女峭驳雨放赶厨觅韩争寸给镀侠光溃摄看表决也桃实验三荚膜及芽孢染色实验三荚膜及芽孢染色,