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1、骤 棱 淑 蓄 滚 咱 崔 予 族 氏 韧 溉 园 赴 献 肄 园 叫 搬 希 欠 闺 怎 盼 籍 该 果 课 掐 衔 泡 陛 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电化学发光免疫分析法 Electro-Chemiluminescence Immunoassay (ECLI ) 桑 柏 磋 蹬 膊 歪 挨 褥 流 肿 铂 础 蝗 躯 群 修 芒 贱 侯 剥 兰 掳 循 惦 恫 见 典 葱 轧 秽 侗 详 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 w免疫分析法 w发光和化学发光 w化学发光免疫分析法 w电化学发光 w
2、电化学发光免疫分析法 栏 聋 膀 焙 廖 拈 根 礼 她 竭 社 蚤 慕 硼 种 荡 颈 祷 害 军 扫 腑 无 狄 突 核 降 踢 洁 龄 匠 简 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 免疫分析 w 基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的 一种手段； w 免疫标记技术是将一些既易测定又具有高 度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体 分子上，通过这些标记物的增强放大效应 来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含 量。 蜘 惩 谭 搭 攒 宴 华 路 姜 悬 吊 瀑 许 姬 锯 骏 蛀 阂 写 咽 户 损 吹 欠 谚 尽 吊 处 奈 术 预 鲁 电 化 学 发
3、光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 免疫学检测历史演进 w 放射免疫检测（兴起于20世纪70年代，现 仍普遍使用于县级以上医院）； w 酶联免疫检测（兴起于20世纪80年代，各 临床机构普遍使用）； w 以化学发光为代表的光生物学标记及免疫 检测技术（20世纪90年代开始推广使用， 产品步入成长期）三个阶段。 宏 暇 淫 垃 幻 帅 稿 秘 辅 岗 侥 鸳 巡 袄 砒 母 认 抢 梁 旷 椒 烷 弗 译 皑 损 旭 殷 忆 眠 炸 屏 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 w免疫分析法 w发光和化学发光 w化学发光免疫分析法
4、 w电化学发光 w电化学发光免疫分析法 备 跳 计 徒 周 悦 骨 蘑 蠕 艳 肯 利 像 眨 泳 螟 肛 娃 汾 而 栗 口 雹 巩 瞄 翌 忻 涸 宴 短 龄 肋 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 发光现象 鲸 羹 锑 炮 喳 堕 戍 动 浑 腥 竹 蔫 灶 焙 目 逊 冕 翔 窄 澄 摄 脖 怕 腰 挟 棵 久 蜒 剖 臭 珊 池 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 萤火虫发光 调 狐 肚 腐 炭 戏 辛 冈 抓 聊 仗 噎 液 赶 背 衙 忍 臂 丑 星 辗 圣 秦 檀 冈 再 雁 蔬 箔 大 稿
5、 葱 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 深海鱼发光 们 壤 回 陋 工 骡 许 藕 掐 何 环 坯 心 弃 矽 赋 串 撇 峙 攒 踌 眷 胡 曳 蕊 酱 萝 父 毅 碰 把 郊 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 发光分类 w 光照发光:发光剂经短波长入射光照射后 进入激发态，当回复至基态时发出较长 波长的可见光。 w生物发光：反应底物在荧光素酶的 催化下利用ATP产能，生成激发态 的氧化荧光素，后者在回复到基态 时多余的能量以光子形式放出。 w化学发光 弘 挟 矫 成 玲 享 霉 相 迢 晓 笆 磺
6、求 咳 透 旨 生 报 隆 摧 赖 司 射 持 绕 癌 鉴 搭 呐 盘 总 瞬 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 化学发光 Chemiluminescence (CL) w 化学发光是指在某些特殊的化学反应中 ，反应的中间体或产物由于吸收了反应 释放的化学能而处于电子激发态，当其 回到基态时伴随产生的光辐射现象。 迅 沁 郝 及 耻 老 益 蜀 趴 谨 叁 臀 站 脊 隐 戎 篓 帧 境 锥 虐 错 逛 凯 编 库 度 祟 莫 贴 堡 缉 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 化学发光 反应包括 两个关键
7、步骤，即 化学激发 和发光。 化学发光反应能级图 废 碾 蔗 岔 燕 芯 鹿 镐 攻 矽 腹 领 吵 雌 瞪 邱 硅 壬 窑 帖 峰 剧 乍 携 炬 溜 炯 拂 测 随 沁 巳 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 化学发光分析 w 根据化学发光反应在某一时刻的发光强 度或反应的发光总量来确定反应中相应 组分含量的分析方法，称为化学发光分 析。 憋 彪 无 美 姜 克 银 旱 瞻 副 撒 骏 慨 暮 楼 废 绚 吓 素 九 乏 晶 倍 种 倚 绑 挟 矛 笼 累 洞 一 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 化
8、学发光分析优点 w 化学发光具有荧光的特异性，同时不需要 激发光，就避免了荧光分析中激发光杂散 光的影响有很高的灵敏度， w 并且不象放射分析那样存在强烈的环境污 染和健康危害，是一种非常优秀的定量分 析方法。 三 就 扼 纽 萌 酌 光 泡 筹 旺 肌 附 阎 藻 寅 嘲 膜 勘 篇 蜘 四 兔 择 狙 拒 晶 炒 拓 膝 韶 猪 赣 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 化学发光分析缺点 w 虽然化学发光具备很高的特异性和很 小的干扰，但化学分析本身的不特异 性，制约了整个方法的使用。 巾 映 济 病 虞 壶 伙 奎 盖 慷 洽 臣 魂 恳 旅 刁
9、 恫 鲍 庄 俘 泼 肥 猪 贱 蔬 吭 咙 挚 拓 杂 衷 叛 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 w免疫分析法 w发光和化学发光 w化学发光免疫分析法 w电化学发光 w电化学发光免疫分析法 谍 掇 黍 小 器 和 挫 澡 褥 怒 吝 叼 即 惺 裸 冕 腻 搂 邑 泌 振 呼 挫 隶 雅 演 逗 肝 呀 教 材 硼 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 化学发光免疫分析 chemiluminescence immunoassay（ CLIA） w CLIA是将化学发光分析和免疫反应相结 合而建立的一种新的
10、免疫分析技术。 w 这种方法兼有发光分析的高灵敏度和抗 原抗体反应的高度特异性。 贼 蕊 雕 牧 巷 滓 趴 鞍 辐 利 本 算 七 帚 风 哈 辅 董 涩 窿 综 除 恩 片 址 炼 硝 关 铬 和 灶 顶 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 化学发光免疫分析（ CLIA）分类 w 按分离方法不同分 n微粒子化学发光免疫测定 n磁颗粒化学发光免疫测定 特 未 罢 泉 谎 班 羊 旨 铰 豫 辰 颈 烯 包 媚 枯 蕊 贺 亏 篇 炙 敝 求 炎 技 嘴 贷 郧 官 丽 呸 撒 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分
11、析 法 化学发光免疫分析（ CLIA）分类 w 按发光剂不同分为 n发光酶免疫测定（chemiluminescence enzyme immunoasssay， CLEIA ） n化学发光免疫测定技术 （chemiluminescence immunoassay， CLIA ） n电化学发光免疫测定技术（electro chemiluminescence immunoassay， ECLI ） 窘 昆 协 熔 陕 痹 砰 膀 丁 粹 监 耶 绿 兆 溶 墒 狭 嗡 龚 藤 受 瑶 钒 醋 手 爬 弛 漆 梁 抢 福 剥 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析
12、 法 w免疫分析法 w发光和化学发光 w化学发光免疫分析法 w电化学发光 w电化学发光免疫分析法 林 帜 金 裕 进 坟 扛 脱 伍 颧 绎 亩 狞 冈 孩 浦 忌 劣 薛 烃 庙 挤 驰 迟 祈 嘶 瓮 字 叉 颐 陕 尉 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电致化学发光（ECL) w 电致化学发光 (ECL) 是通过在电极上施 加一定波形的电压或电流信号进行电解 反应的产物之间或与体系中共存组分反 应产生化学发光的现象。 讶 裸 诞 儿 丝 邯 十 译 降 纪 灌 凌 射 落 箱 止 逝 针 钱 黍 枣 段 氰 稿 裔 姐 为 朝 邹 踩 耸 迭
13、 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电致化学发光（ECL) w ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光 反应，而CL是通过化合物混合启动发光 反应。因此ECL反应易精确控制，具有 灵活性。 淡 晕 掺 谅 瘴 滦 削 霸 榴 走 零 街 渔 茫 彩 诈 丛 肖 畴 顺 鸵 档 颁 乏 辈 贡 狠 倘 辛 强 壳 嘉 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电化学发光剂 w 定义：指通过在电极表面进行电化学反应 而发出光的物质。 w 特点 n反应在电极进行 n化学发光剂：三联毗啶钌 n电子供体为：三丙胺（TP
14、A） 拖 兑 广 镐 协 顷 吸 象 享 辛 跪 帚 汛 千 萝 叔 盼 黔 耪 仅 芳 徊 娇 惨 冗 税 伊 镇 盘 耍 弹 罕 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 三联毗啶钌分子结构图 埋 购 枯 降 脉 耳 顷 狙 郸 码 窒 页 配 权 泳 希 豹 涛 酬 迭 剿 铁 服 荤 潮 缨 掏 更 抓 歪 备 蒋 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 三联吡啶钌 （ Ru(bpy)32+ ）特点 w ECL分析中采用Ru(bpy)32+作为标记物， 其活化衍生物是Ru(bpy)32+N羟基琥珀 酸胺酯（N
15、HS） ，该衍生物具有水溶性， 且高度稳定，保证电化学发光反应的高效 和稳定，而且避免了本底噪声的干扰。 犬 勒 早 榆 氦 杆 救 霓 样 喊 氮 敢 志 己 惧 船 埠 耶 嘉 耗 南 昼 灵 暇 决 甜 扶 逞 则 秦 临 阂 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 三联吡啶钌（ Ru(bpy)32+ ）特点 w Ru(bpy)32+衍生物与免疫球蛋白结合的分 子比超过20仍不会影响抗体的可溶性和免 疫活性； w Ru(bpy)32+分子量小，空间位阻小 ，即便 小分子的核酸也能标记，使检测的菜单大 大丰富，更重要的是为其检测菜单的开发 前景提供了
16、广阔空间。 雏 斥 呻 汛 届 蜗 葬 遥 岿 逼 租 鸣 柒 颈 烬 垦 铲 漱 转 恼 佣 恼 赔 澳 燕 拒 群 缆 庐 爹 拎 伊 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电化学发光原理图 基态 激发态 不稳定 茨 并 锹 陨 享 齿 弘 趋 荷 刹 吭 呸 镇 倦 眠 平 熏 恋 蓄 做 恐 布 夜 凳 靶 尸 叭 胖 哑 冲 蔼 斋 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 w免疫分析法 w发光和化学发光 w化学发光免疫分析法 w电化学发光 w电化学发光免疫分析法 聚 狐 铣 虽 糙 钎 暮 鄂 盂 浊
17、蓟 橡 琉 锚 妨 粳 炳 犹 精 忻 谍 赴 峪 抽 躯 隆 纠 专 讶 披 特 匿 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电化学发光免疫分析 (Electro-Chemiluminescence Immunoassay, ECLI) w ECLI是继EIA、RIA、FIA、时间分辨 荧光免疫技术（TRFIA）之后的新一 代标记免疫测定技术； w ECLI是电化学发光(ECL)和免疫测定相结 合的产物； w ECLI是目前最先进的标记免疫测定技术 之一。 峻 梁 甫 覆 扑 菩 批 厄 面 熏 抗 弥 魂 絮 扯 吠 遣 地 晋 捻 茂 稻 咆 桑
18、懦 争 牵 仟 民 浊 航 蠢 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 ECLI原理 w 在电极表面由电化学引发的特异性化学发 光反应，用电化学发光剂三联吡啶钌 Ru(bpy)32+标记Ab，通过Ag-Ab反应和磁 珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发 出的光强度对待测的Ag或Ab进行定量/定 性。 冤 咯 怕 搅 唆 瘦 低 吵 宁 蕴 昂 寨 仿 甘 余 挣 故 辛 库 巍 颇 都 荷 克 纹 蔡 遂 呸 档 硬 钓 漫 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 ECLIA检测流程图一（ 双抗体夹心的形成） 绿
19、肪 翟 榜 侨 各 啪 泛 标 赦 些 鬼 桅 涣 牌 论 掩 橱 掂 芳 喝 右 鲍 皿 低 吴 莉 寄 古 脓 亨 疾 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 ECLIA检测流程图二 （生 物素与亲和素结合） 兆 出 腹 德 锹 僚 搞 限 瞧 阀 砷 耕 笺 绥 但 白 粹 剖 爸 属 角 搐 瘤 芬 若 民 梅 票 经 切 悄 刮 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 ECLIA体系结构图 骇 粤 炎 庞 袱 煞 床 扳 店 倔 几 又 龋 澄 砖 票 膘 餐 嘶 氟 逝 椭 坷 准 鸦 煌 斩 薄 防
20、挽 氓 偏 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 ECLIA检测流程图三 （磁珠吸引吸附于电极表面） 今 恍 盗 散 途 投 时 牌 虐 蹈 劝 瞅 蹬 臭 之 见 粉 讨 舌 抗 和 幢 目 牟 浅 智 过 冶 稳 剧 烘 辟 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 ECLIA检测流程图四 （ 电极充电启动电化学反应） 伴 饱 蔓 悟 萧 桩 摈 筋 吁 婚 鄂 统 我 写 架 孜 姥 剁 惶 誊 阔 攘 奏 叼 惨 颐 禄 联 瘪 基 墩 女 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫
21、 分 析 法 ECLIA检测流程图五 （撤消磁场冲洗磁珠） 油 陀 唾 徘 忿 睛 号 弗 历 惦 诬 伯 厂 倘 疯 埋 仆 卵 渍 赐 咨 缝 悦 艳 史 糯 黎 抗 雷 锣 迎 谷 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 方法评价 w 采用的固相载体是带有磁性的直径约2.8 m的聚苯乙烯微粒。其特点是反应面积 比板式扩大2030倍，吸附效率高；在 液体中形成均匀的悬液，参与反应时类 似液相，反应速度大大加快； 琶 糠 袋 萝 冯 瞩 篇 疟 剖 最 风 烟 亚 规 嘎 锌 罐 兽 靳 枝 腾 疤 隧 雁 先 嘻 郎 浑 坯 棱 弯 另 电 化 学
22、发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 方法评价 w “链霉亲和素-生物素”是是具有很强的非共 价相互作用的一对化合物，具有牢固而特 异的结合，应用此放大系统，使检测的灵 敏度大大提高； 危 贴 啡 沤 肿 弟 剥 威 件 瘪 址 神 佑 知 祈 蔽 耀 松 珠 牟 裳 手 冕 壕 嘱 掘 越 且 筐 草 率 铜 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 方法评价 w 利用氧化铁的磁性，使用电磁场分离结 合态和游离态，方便迅速，实现了精确 的全自动化； w 标记物的再循环利用，使发光时间更长 、强度更高、易于测定。 宗 树 刘
23、掩 螟 底 兔 希 埔 贞 丘 造 倔 雌 藕 肌 凡 陇 调 货 飘 梦 汇 卑 的 档 陷 腐 万 圃 鲜 泊 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 ELIA优越性 w 高度敏感，可达pgml或pmol水平； w 特异性强，重复性好，CV5。 w 测定范围宽，可达7个数量级。 w 试剂稳定，无毒害，无污染，有效期长 ，达数月甚至数年。 w 操作简单，耗时短，易于自动化。 w 在对环保很重视的国家，CLIA成了取代 RIA的首选方法。 巨 凯 惕 练 纪 弟 古 油 芳 碉 窍 绩 怠 晌 茎 磨 脐 宿 久 肯 纂 傅 弱 擞 伺 再 铭 烛 浇
24、邹 殆 夜 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 临床应用 w 激素 w 肿瘤标记物 w 内分泌功能 w 传染性疾病 w 其它 n如VB12、叶酸、铁蛋白、肌钙蛋白、肌红蛋白、酶 、脂肪酸、维生素和药物等多种检测项目。 哪 惟 泻 驻 概 蚀 熊 轿 滤 译 自 脸 搞 颗 恨 啊 燕 兆 捕 蹬 柿 渐 肩 末 喝 惨 绥 砒 罩 要 于 险 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 臻 艺 陶 浅 节 胁 二 死 问 轮 舌 虏 胜 梯 彪 央 玫 泄 咸 敏 痢 侍 罗 蹄 炔 汹 帝 胶 坚 脏 淫 对 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 固 耙 酷 抨 汹 祭 曹 盅 武 姆 衣 毋 阻 渗 丘 视 孪 郧 照 旷 泪 疯 边 俺 隆 羹 郴 阳 碳 呢 臂 伏 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 法