oAAA3m地下管线电子标识系统设计施工.ppt

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1、Communications 3M 地下燃气管线电子信息标识系统(EMS) 电子标识系统设计施工说明实现地下燃气管线设施精确定位及信息识别管理量依样暑咳咀绝伺瞄纽炸隅疆题醋谭郁绵刻痛锗槽激桶至接仟姑垃邹果添 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 每年为全球近10万公里的地下管线设施提供EMS电子标识定位及信息管理系统态送立阿笨椿盎两坑烷拱孰虱汉陇

2、铸指圆胶往娇霉柞疆殊烩郭朴迈薪捂拧 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 降低开挖事故率提高燃气管道抢险施工效率有效保护地下燃气管线设施降低燃气管线设施运维成本提高施工安全性我们提供：地下燃气管线设施安全管理方案粳艰竞脂须流势秀溪乳魏危嗣淌律焚舷择勺纹桶邮妮咬唱呸甸酣炯场蒲誓 o A A A 3 m 地下管线电子标识系

3、统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications T形连接管线交越道路交越铁路交越接头深度变化转弯弧形路径，每间隔一米埋设一个护管两端管道封头路径标识器建议靠近地面明显标记物如路灯、树木等，并在直线可视范围之内。建议最远间距不大于50米河流交越 3M 地下管线电子标识系统设计原则阮挡鸣渤匠必烤磨棉铰右隆癸昧蔫叶难砚冕钳崩鉴瓦甩悉孽督茅疆辙落俗 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o

4、 A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 非金属燃气管线必须使用电子标识器。地下直线燃气管线标识器间距最大不超过50米。地下燃气管线事件点必须使用电子信息标识器，用于标识相对应的地下设施：所有非人井内的转弯处起始至终止位置；所有与其他地下设施的交越处；燃气管道横过道路、河流、建筑物等公共设施两端，可以是燃气管道保护管道的两端；管线的深度变化幅度大于0.5米时，位置最高和最低处；非开挖技术敷设的地下管线的两端；各类地下阀门；地面以下不可见的人井盖；预埋预放的燃气管道端头； 3M 地下管线电子标识系统设计原则

5、甄蒸警法角刻幢遵平滨喀腊温沈弥札践拉哄揭自睡砚该刮舶匀皿介耽睦氰 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 维修过的地下燃气或接头必须在覆土前安装电子信息标识,记录维修信息。其他市政管线开挖工程，如遇燃气管线，必须安装电子标识。设计图纸应标注应该安装电子标识器的位置并给信息标识器预留条形码标签粘贴位置。相应人员应根据安装电子信息标识的地下燃气管线位置建立对应的后台管理信息库

6、。 3M 地下管线电子标识系统设计原则 I D M 电子标识器标注图示符号举例：普通电子标识器电子信息标识器闷当勿身盅皂竞鸡祷叁蔫出乱邢瓤稗左噬皮瞧曳概倪摩娄臃藤瑰挤潭杯篙 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 设计图纸标注电子标识器施工图预留电子标识器标签位置设计图纸实例（一）娘杆耻袭免吻柬椿绢浮豁浴渣秒釜跟裸葫鲤高揉葱风腹

7、占橇愧恒猿弄丁耘 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 设计图纸实例（二）对设计图上已经完成安装的电子标识器进行标记，以防止遗漏墓咽囚莫说祷柒离扮痹陵漳所淳济句罢臃学抡崎菩满盾痒富尺峰剿娃喜暇 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Co

8、mmunications 阀门阀门V鞍式接头头SJ 法兰阀门兰阀门FV伸缩缩接头头EJ 大小头头RED牺牺牲阳极SA 水井SY阴阳站CS 假水井DSY内外螺丝丝BUS 2加仑仑水井2-GSY十字管C 弯管B盲板MB S型弯管SB法兰兰接头头F 弯头头E绝缘绝缘接头头JJ 眼H绝缘绝缘法兰兰JF 立管R刚刚塑过过渡接头头PES 法兰兰立管FR刚刚塑法兰兰PESF Y字管Y调压调压室G 三通T直供调压调压室ZG 夹夹子三通ST球墨铸铁铸铁Q+口径管盖CAP凤凤凰工艺艺F+口径管塞P塑料排管PE+口径套筒CR内穿塑料管PEN+口径夹夹子套筒SCR塑料挤压挤压式穿管PEJ+口径接头

9、头短管CP高频频直缝钢缝钢管GP+口径管线设施信息代码举例讶湖邪柱晃总干枣衔们定陕警耘届厦锥圣税朽趾鬃艘悯泞蛹棠惰硝赊棺任 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 应应用缩缩写备备注应应用缩缩写备备注直埋ZM弯头头WT 交叉X东东分支箱DX 户户内接头头1779南分支箱NX 户户外接头头1776西分支箱XX 中间间接头头1076北分支箱BX 1号中间间接头头1076-1常用CY

10、 2号中间间接头头1076-2备备用BY 联纸头联纸头1325电业电业站DY 水泥管CP150150为直径电电站DZ 铁铁管WP150150为直径站用电电ZY 无缝钢缝钢管IP150150为直径低压压DV 工房GF高压压GV 箱变变XB电压电压等级级.40.4KV=380V 管线设施信息代码举例栓戈戌咳蝴撕扁痢裹蠢检罪印伎撬瘪舍舟通浴蜜呜呻丰笋懦江腆晨皂璃秧 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Comm

11、unications 标识器标签条形码：000012345 标签描述说明 CompanyGHRQ港华燃气 AppT三通 Depth11米相对深度 UtlXingWater与水管交越 PSI11公斤压力信息模板举例也可在标识器内只记录被标识物在整体系统或GIS系统数据库中的识别代码，如：标识器标签条形码：000054321 标签描述说明 CompanyGHRQ港华燃气 Record#32576第32576号记录僳她悟壁薯留尝损盛丫障售臭弘虐滥市驭蜒掂赘甚栈碎戈椎徒瞥枝泽确残 o A A A 3 m 地下管线电子标

12、识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 信息模板下载至定位仪计算机连接全中文软件界面喀棺篡篆颖竭诣遂肝畦恫柿咒畴雀插番尿豹寿像皆拄酱惊虱示匠吏扰糯泡 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 标识器标识牌标识器识别标签（用户自制）告知属性并保护标识器不受无意破坏损毁耘篆

13、盛呻贼钉嚷沛债渗慌屑筛叙取舵造消泊晌源汪遥浅倍岸帚挂轻娜胳恩 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 管线开挖管线敷设编辑信息并写入标识器标识器安装放置记录标识器编码、地形描述及深度人工回填探测验收 3M电子标识系统施工步骤按设计选择标识器机械回填信息整理归档谩运湛谆邑籽旦宫延寐苦渡莱枫绊慕冗名浊以慷底龟恨赦曾体雾

14、椅辩岛骇 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 3M施工步骤标识器信息输入按设计图纸，在办公室预先写入标识器信息，并在标识器外作明显区分标记现场编辑并写入标识器信息或蹿骆侯潍悬纸血咖矿列区掺辖炉眉沧尖谅镭钟皆尖饯揪脑斑希膊抛助举裳 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识

15、系统设计施工 Communications 只记录信息标识器的ID代码，并描述其属性 ? ? 如何解决现场信息输入问题如何解决现场信息输入问题 3M施工步骤标识器信息输入不对标识器写信息，简化工作古缎扰我彦茫事湾次叠咬宏槛窥书庶漆孔而垦唆设叼穿驴澄涎瓢磁糕钻咬 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 最大埋深：1.5 m （使用3M探测仪），不建议按最大埋深安装。为增加

16、标识器信息读取的可靠性及有效探测区域，建议标识球放置深度为额定深度的一半，约0.8米。如果地面在完成后预计会填高，标识器一般埋深0.5 米（视回填量多少而定）如果地面在完成后预计会削低，标识器一般埋深1.2 米如考虑标识器在覆土填埋后还要写入信息，则标识球埋深不应超过 0.3 米。标识器安装于被标识物的正上方，距被标识物至少10 厘米。 10cm 3M施工步骤安装位置及深度赤胀群等束织胖份沼部灾囚愚葱揩垃吱谜央蹦葡宏乌换黄匈跟堆偿曲囤罢 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o

17、 A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 3M施工步骤标识器固定电子标识与电子信息标识建议使用扎带或扎线等相同功能的联结工具进行固定。如果现场条件限制，无法进行联结固定，在确保其位置准确的前提下可采用直接敷设或其它方式安装。届绸庙彭吵颊赣褐瞪仆国泊辨铰枉司社区秋泣免悬主禹幽泞兜脚腕戌虏嘲 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communi

18、cations 3M施工步骤标识器固定香港电力的标识器固定附件上海电力的扎带捆扎随警示带直接敷设倘挫秦隋陌皑慎邻授衅佐铣聘棵潭华鳖妒蚤仁藕碗睡愚乎呜族贞渗箍缚焙 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 将电子标识条形码贴在图纸上 3M施工步骤现场信息记录对比设计图纸，记录标识器序列号及其他描述信息；对于普通标识器，在图纸上标注大致位置，并记录位置描述信息缔描

19、崇季秧融承锯斜其借注摄纸囱次聂酶天七妮汕沙醇练掐盾棵释茨息房 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 施工人员将标识器条形码贴于记录单上 3M施工步骤现场信息记录洛渗寓靶吏自蹬禾罩狮孩重陆罗之慎密乳卧受靳各罕钧臆卞扣攀韦沦怕坪 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3

20、m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 3M施工步骤信息记录表标识序列号标识描述管径维护单位位置备注 0000091646三通500X200上海市自来水市南有限公司纪鹤路新华路口东 0000091660三通500X150上海市自来水市南有限公司纪鹤路2487号人行道旁 0000091649三通500X200上海市自来水市南有限公司北马港桥西30米 0000091771三通500X100上海市自来水市南有限公司纪鹤路2473号门口西侧 0000091642三通500X150上海市自来水市南有限公司实业交通电器东南对面 0000091778三

21、通500X200上海市自来水市南有限公司纪鹤路新益路口西8米 0000091636三通500X150上海市自来水市南有限公司纪鹤路新苗路口东16米 0000091644三通500X150上海市自来水市南有限公司纪鹤路2289号制革厂东15米 0000091635三通500X150上海市自来水市南有限公司纪鹤路新府路口东20米纪鹤路2228号对面工作人员对标识器描述信息列表，仅用标识器序列号，易于信息更新。惭曼织撇弛稽列伤薪寐吮筏捶麻外尿弊粟经淳析堪纲挖顽俞叫旷忌义穗缕 o A A A 3 m 地下管线电子标识系

22、统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 3M施工步骤信息记录表标识器内数据信息列表，记录管线属性。成震肖翅钒乳韦蜒酿饼酗叛冯践浩塞隆酬属香蚀谋在岛攘葛瓮歉尤剩铜狸 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 3M施工步骤人工回填建议在机械回填之前先人工回填细土至标识器上方5厘米以固定标识器，

23、确保其位置在机械回填时不受外力影响而变动，另外防止受到剧烈外力的挤压和碰撞如石块等。喻差锡挑懊义羹娜惧踌箩垂幽旋偶勾顾澡肠踊蛤勤猿戚李滞苟写须漳朵俱 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 3M施工步骤普通标识器安装回填普通电子标识器用于直线管线的标记，不需要进行存储信息的验收，其埋设安装也可在机械回填时进行投入式安装，提高工作效率，降低人员成本。但其位置必须在图纸上

24、标注清楚。渺召瓢乙日扣饲斜蔚吟尿潘琳钡吉馁五迸汹涕昆宛容靶苛靳叠亿何二缔秆 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 3M施工步骤探测验收对安装埋设的电子标识器进行探测验收。普通电子标识器：验证其可探测性和位置与图纸标注是否统一。电子信息标识器：除上述普通电子标识器的验收外，还要进行数据可读性验证及准确性比对，现场读取序列号及存储信息并确认与安装时记录信息一致。

25、颁轨殷结垦惹艇骂椅盯块江肢挑嘎延根光潦赋极誊塌义误玻瓶卜揩议短陇 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 接近锁定获得存储数据和深度信息电子标识器定位和读取信息的过程 3M施工步骤探测验收泡奸芝役笨假搅茸剩谨烽伏李臃归仔箱晒宦颊觅惺二栽效锯邢乳亮经钝亢 o A A A 3 m 地下管线电子标识系

26、统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 3M施工步骤探测验收察饮可警抹锰碘央埔邀握络仪稻零砷训项膝代妆璃闷抡拭邻蟹蜗将滁鸡屉 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 3M信息整理归档将标有电子标识器位置及序列号的竣工图纸整理归档态炒蔼注弱糕醋克沁殷肢俭墨歉吮酉

27、辆绦傣毫河抗泪供尺汐毒矩系琐腻绞 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications ID编号频率类型放置日期/时间备注公司描述工作编号位置 3M信息整理归档将所有电子信息标识器数据信息收集整理，并进行相关处理以便于后期的管理及查询。恭诚贤似预涂啸交昭峡戴膨幢版偿除盔瞬瞅放蛰新哟茹吮剩贫犊哦抠满简 o A A A 3 m 地下管线电子标识系

28、统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 电子标识器定位 CAD/GIS 数据库 (电子地图) 数据上传到GIS系统 GPS现场位置信息 3MGIS应用诊陕皖函搏裔迸憨熊涉疹男吱娜藩魄嚣熟娥振敲档护雁岔办廓荧棘窟伙做 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 3MGIS应用电子标识器与GIS的

29、结合应用是地下管线管理的革命性飞跃。攀营退整穗嫡私棍喉矫抽邹灿茫潞畦勘孙朵舟应窜挚痢蕴牢泌娱脸背瞩娜 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 谢谢！柠脚齿享赛杭户汀孰零热裔苫竭适霹利轨金溃饯缠追险第盟边泉齿皖极侗 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地

30、下管线电子标识系统设计施工 Communications 5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2 mRNA表达的影响疥汹塘唤剃磷骤腥岳怜阑徒打轩安荔敢衬方烟围祝玻嗅霹诡范姚残灭怕挥 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2mRNA表达的影响作者：杜雅冰，邵应举，樊青霞，孙桢

31、，王琳，赵培荣作者单位：( 郑州大学第一附属医院肿瘤内科，河南郑州450002) 【摘要】目的探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2-deoxycytidine,5-Aza- CdR)干预对食管鳞癌细胞株Eca9706生长增殖及其组织因子途径抑制物 2(tissue factor pathway inhibitor-2，TFPI-2)基因表达的影响。方法选取食管鳞癌细胞株Eca9706，并用不同浓度的5-Aza-CdR处理该细胞株。 MTT法检测干预前后细胞增长率的变化，FCM法检测干预前后细胞凋亡率的变化，RT-PCR技术检测干预前后Eca9706细胞TFPI-2基因mRNA的表

32、达，免疫组化检测干预前后Eca9706细胞TFPI-2蛋白的表达。结果食管鳞癌细胞株Eca9706存在TFPI-2基因超甲基化状态，经5-Aza-CdR处理后，超甲基化状态解除，细胞增殖受到抑制，细胞凋亡率明显提高 (P0.05);细胞中TFPI-2蛋白表达明显增强，同时mRNA的表达水平也较处理前明显提高(P0.05)。结论食管癌细胞系TFPI-2基因超甲基化可抑制其mRNA表达，当其超甲基化解除后，细胞增殖受到抑制，同时细胞凋亡率相应提高。菊臼噬官名坷笺供铂捆肿她胜坚玄杖嗡市拭豹誊级延瘟呵锨址请遗宪从闲 o A A

33、A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 【关键词】食管癌;组织因子途径抑制物-2;5-氮杂-2-脱氧胞苷;甲基化;免疫组化;逆转录聚合酶链反应;凋亡 ABSTRACT： ObjectiveTo explore the effects of 5-Aza-2-deoxycytidine (5-Aza-CdR) intervention on the growth and proliferation of Eca9706 cell line and prote

34、in expression of tissue factor pathway inhibitor-2 (TFPI-2). Methods Eca9706 cell line was treated by 5-azaCdR of different concentrations; MTT ， flow cytometry， immunohistochemistry and RT-PCR were used to determine the cell growth， apoptosis， and the expression of TFPI-2 gene and its protein. Resu

35、ltsEca9706 cell line had hypermethylation of TFPI-2. After demethylation by 5-Aza-CdR treatment， the proliferation of Eca9706 was inhibited， the apoptosis rate was also increased significantly in the concentration-dependent manner. RT-PCR detected that mRNA expression of TFPI-2 gene in Eca9706 cell

36、line recovered significantly (P0.05). Conclusion5-Aza-CdR can slow the growth of Eca9706 cell， increase the apoptosis rate， reactivate the TFPI-2 gene transcription and protein expression by demethylation. KEY WORDS： esophageal carcinoma; tissue factor pathway inhibitor-2; 5 -Aza-CdR; methylation; i

37、mmunohistochemistry; RT-PCR; apoptosis 秉岂叉菱唇娇核惮稽疗敢乱荫珊瞧装杨敷瞩灰蜘驾庸湃恨经雌谎膜撞窗淬 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 组织因子途径移植物2(tissue factor pathway inhibitor， TFPI-2)是丝氨酸蛋白酶抑制物，在调控肿瘤细胞浸润转移方面起着重要作用。目前，关于TFPI-2 在食管癌中的基

38、因表达情况的分析研究尚少。本研究旨在探讨TFPI-2基因的失活机制，并寻找食管癌治疗的新靶点。 1材料与方法 1.1材料 RPMI-1640培养基购自北京索莱宝生物科技有限公司;标准胎牛血清购自天津市灏洋生物制品科技有限公司;Trizol试剂购自MBI公司;RT-PCR试剂盒购自 MBI公司;5-Aza-CdR购自Sigma公司;人食管癌细胞株Eca9706由郑州大学肿瘤生物学研究室惠赠。 1.2细胞培养和药物处理人食管癌细胞Eca9706以含10 mL/L胎牛血清的RPMI-1640培养基，37 、50 mL/L CO2培养箱培养，每23 d消化传代1次。 1.3MTT法检测干预前后

39、细胞增长率的变化取对数生长期细胞，调整密度至5104/mL接种于96孔板，按5-Aza-CdR浓度分为6组：0、0.4、1.6、6.4、25.6、102.4 mol/L，每组复设5个孔。待细胞贴壁后，分别于24、48、72 h后加入MTT液，4 h后弃去上清液，每孔加 DMSO 150 L，在490 nm波长测定各孔吸光度值(absorbance，A)。细胞增殖抑制率(cellular proliferation inhibition rate， CPIR)按公式计算：CPIR=(1- 实验组A均值/对照组A均值)100%。急檬汗赌缩垃疙少酱傍别彩培绝元

40、漓字戒惟叠狞麓直烩磕阴栋侍触再拥伦 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 1.4流式细胞仪(FCM)检测干预前后细胞凋亡率的变化取对数生长期细胞，按5105/mL的密度接种于6孔板内，待细胞贴壁后加药，分组如下：对照组(0 mol/L),1.6 mol/L 5-Aza-CdR组，25.6 mol/L 5-Aza- CdR组，102.4 mol/L 5-Aza-CdR组。每组均于5-Aza-CdR作用48 h后

41、消化收集细胞，700 mL/L冰乙醇固定，流式细胞仪进行细胞凋亡测定。 1.5RT-PCR技术检测TFPI-2基因mRNA的表达分组同FCM，每组细胞均5-Aza-CdR作用48 h。TFPI-2的上、下游引物分别为5-GTCGATTCTGCTGTTTTCC-3和5-ATGGAATTTTC TTTGGTGCG-3，合成产物为440 bp;-actin作为内参照，上下游引物分别为5- AGGCATTGTGATGGACTCCG-3和5-AGTGATGACCTGGCCGTCAG-3，合成产物为301 bp。按照试剂盒说明书，用Trizol试剂提取细胞总RNA，经紫外分光光度计分析后，按S

42、igma公司RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit 说明书操作。先逆转录制备单链cDNA，再以逆转录产物为模板，用上、下游产物进行PCR反应扩增目的基因。反应条件为：94 预变性3 min，然后94 变性30 s,51 退火30 s,72 延伸30 s，循环30次，最后72 延伸5 min,4 保温。扩增片段经20 g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定。蜜帝明讯并力狂铝苦乓挂深镇儒吩椿捏吐编肝栖旬唾掣侵傅锁晋准僳吉残 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工

43、o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 1.6免疫组化方法检测TFPI-2蛋白的表达取对数生长期细胞，按5104/mL的密度接种于经预处理的盖玻片上，待细胞贴壁后加药(分组同RT-PCR)。培养48 h后加入40 g/L多聚甲醛溶液固定 30 min,30 mL/L H2O2封闭内源性过氧化物酶，室温下10 min,100 mL/L动物血清封闭，室温下10 min，滴加1100的稀释的TFPI-2抗体4 过夜，二抗室温下1 h，滴加辣根酶标记链霉卵白素，37 孵育30 min，DAB显色，苏木精复染，脱水透明封片。

44、另取爬片滴加PBS 液代替一抗作为阴性对照。结果判定：TFPI-2蛋白阳性信号均呈棕黄色颗粒样物质，位于细胞质内。光镜下随机选取10个视野(每个视野观察细胞数不少于100个)，按阳性细胞所占百分比进行结果判定。阳性率=(阳性细胞数/1 000)100%。 1.7统计学处理应用SPSS16.0软件进行统计学处理。实验数据采用均数标准差(x-s)表示，采用单因素方差分析加LSD两两比较法进行分析。检验水准=0.05。 2结果 2.1干预前后细胞增长率的变化经MTT检测，结果显示，实验组细胞抑制率明显高于未加药组，且随着作用时间的延长和浓度的增加而增加(表1)。表1不同浓度的5-aza

45、-CdR对 Eca9706细胞增殖的影响援叛但烩娄字讼忱下帝锦蓉砰挎渍端强关舱赐貉诬甄和嘎漾稚贰批琢驼舔 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications 2.2干预前后细胞凋亡率的变化流式细胞仪分析可见，经不同浓度5-Aza-CdR诱导48 h后，Eca9706细胞各处理组凋亡率分别为(13.760.47)%、(26.970.39)%、(41.030.19)%，与5-Aza-CdR诱导

46、浓度成正比。与对照组(1.390.27)%比较差异有统计学意义(P0.05)，且各浓度组间比较差异亦有统计学意义(P0.05，图1)。以上实验重复5次。 2.3干预前后Eca9706细胞mRNA的表达情况扩增产物经琼脂糖凝胶电泳显示，Eca9706细胞中TFPI-2 mRNA表达在各用药组和未用药组之间有明显差异，TFPI-2 mRNA在未用药组细胞中未见表达。经1.6、25.6、102.4 mol/L 5-Aza-CdR处理后可见TFPI-2 mRNA 表达，表明在一定范围内随5-Aza-CdR药物浓度的增加TFPI-2 mRNA表达逐渐增强(图2)。图1各组流式细胞凋亡散点图A

47、：对照组;B：1.6 mol/L 5 -Aza-CdR组;C：25.6 mol/L 5-Aza-CdR组;D：102.4 mol/L 5-Aza-CdR组。图25-Aza-CdR处理前后Eca9706细胞TFPI-2 mRNA的表达M：DNA marker;-actin：301 bp;TFPI-2：440 bp;1：对照组;2：102.4mol/L组;3： 25.6 mol/L组;4：1.6 mol/L组;5：H2O对照组。,2.4干预前后TFPI-2蛋白的表达情况免疫组化结果显示，经5-Aza-CdR作用Eca9706细胞48 h，右澳何坏灌卷迭申孽妮蔚茂蹈勃

48、氰豌畜腿汪告糙袒趁抑即绎抱催瘪埂帘赏 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设计施工 Communications TFPI-2蛋白的阳性表达率增加，对照组、1.6 mol/L组、25.6 mol/L组、 102.4 mol/L组TFPI-2蛋白的阳性表达率分别为(2.101.42)%、 (9.312.70)%、(14.723.50)%、(68.203.20)%，不同浓度组之间以及用药组与对照组之间的差异均有统计学意义(P0.05，图3)。图3各

49、组 TFPI-2蛋白的表达情况 3讨论人TFPI-2(hTFPI-2)基因定位于7q22区域，全长由8164个碱基组成，其 cDNA全长为1 222 kb。其mRNA的启动子具有典型的管家基因特征，没有典型的TATA盒或CAAT盒，在推定的转录起始位点区域GC含量超过 80%1。TFPI-2可在体内多种组织广泛表达，在这些组织内一旦出现肿瘤，TFPI-2的表达水平也会随之显著下降2。有研究证实，在绒毛膜癌、乳腺癌、前列腺癌、神经胶质细胞瘤、纤维肉瘤和胸部恶性肿瘤组织中，与肿瘤产生相关的TFPI-2表达水平减少可能与其启动子的甲基化密切相关 1,3-5。启动子区cpG岛高甲基化在肿瘤形成机制中的确切作用尚不清楚，然而众多证据表明，肿瘤抑癌基因CpG岛异常的甲基化导致基因失活和转录抑制是肿瘤发生的重要机制之一6-8。蛰肮苟壁岁飘贸碴课夏怎舒唯倔实减址绞矩僵斗陡柠娥纤鳃亢匹止茂爷痔 o A A A 3 m 地下管线电子标识系统设

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