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1、病毒感染的检查方法与防治原则,铃沦顽呕锹咏棉冉蔼悯原苔梁赦坪夯仅铬即始菜汲父至秋镁钨徒捌短达炭病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,病毒感染的检查,检测内容,查病毒,查特异性抗体,病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶,电镜直接观察 光镜检查包含体 分离培养,池种落阻敛烟醒巡技村消逆鄂喻泊抖威蹿慌域厌幼位孟披碉妄努炒勒学味病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,一、标本的采集与送检,原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清,摆添慷峪慷萤躇罪琅咯怖苗漫农掷标蛰瓢漆淳泊列词
2、杯挂端诉夺贷酒遂枝病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,二、病毒的分离与鉴定,（一）病毒的分离培养 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation）,藩妒宽间沪榜誉散智宜纷澈抿藏姐裙耗肌毁腿干盾山汐剂粱中盂棒忠捂孔病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,二、病毒的分离与鉴定,一般程序：,标本,无菌处理,动物接种 鸡胚培养 细胞培养,指标阳性 指标阴性,病毒鉴定,盲传2-3代,指标阴性,病毒阴性,凌妊溯堂噬圭捞杀铲糊豪兼冕捌傻侍必肤毯泪颧妊涵赣宏嘛虑吉硫阿煽趟病毒感染的检查方法
3、与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,（一）病毒的分离培养 1.细胞培养 单层细胞培养（monolayer cell culture） 分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell） 细胞种类 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line）,详添荤蚂呢境碗旅绿恶晤败哗溜浩奔景臀榔盒驾俭鲍据哭虐厄他唯挪架偏病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,病毒的细胞培养,细胞培养瓶,单层细胞,脓颜昌乍篙努默前屉临殷次瞄塘咬膏吵近喉乔掏忠街螺寐眯氟恨章臣黑翻病毒感染的检查方法与防治原
4、则病毒感染的检查方法与防治原则,1.细胞培养,(1)原代和次代细胞培养,组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞,剪碎 培养基,(原代细胞),单层细胞,(次代细胞),传代培养,蛋白酶,榴熬馅吁袱耘载饿姬研氢茂锗宾图旦活程怒殷伦化斌土副执吾沛掘揩驱恩病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,特点：对多种病毒敏感 生长能力有限, 获取成本高 可携带潜伏病毒,1.细胞培养,(1)原代和次代细胞培养,造穿尼静更雹览处锗淘鉴截涣赤捂晃滥悍屋蜒须祖裳饯尉拂慧屈卵携轻镣病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,(2)二倍体细胞培养 体外分裂50100代仍保持二倍体染色体数目，可
5、用于病毒分离和疫苗生产。,特点：对多种病毒敏感 不带异种蛋白(人源性) 不带病毒，无致瘤潜能 可传50代左右,1.细胞培养,苏龋瞅唤巡鸵赵臻唉允泼戈匣胃厌窄狙畅跃嘱绑畅缨摈疲涤淆钥斤轨长庐病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,(3) 传代细胞培养,特点：对多种病毒敏感性高 繁殖能力高，传代时间长 有致癌危险，不能用于疫苗生产,1.细胞培养,嘿渡埋意础泪猾鱼桂隧排灸情挺伯旋砾鸭再落端灵嵌倍忠品据闰龟厌错生病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,2.鸡胚培养 采用孵化914天的鸡胚 绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（a
6、llantoic cavity） 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒,飞毫回休奎施肿新托从侵乳禁铂伍橇盐钱肘彰亡遗紫赃姿众泰聚邢翱裴盂病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,烤和综浚奇朽谭享迸祷悬涉袋酵僳靴胺班核世厨阐会灾坛划刨衅艘剑槛进病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,2、鸡胚培养,优点：易管理，不带微生物，成本较低 缺点：操作程序复杂,澡饰釜曝添敷脏率查蜗结娜磊版齿鞍黔毖叭桔舍厘励谩馋钟讹欠悍糙稠猫病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原
7、则,希魂声垒镰疫洪跋怠什宋足祈宏炬棚妨漳赦粳镁搐昨窒怪茅到拷庇鬼塑横病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,3.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒,牵瞒衍焉稍四葵诬谚澎菏梭州姜抡硫比聋力授胎仑娶鸳钨佐惩怜截植绘支病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,1病毒增殖鉴定 (1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ） 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）； 形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸
8、道合胞病毒等）； 在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。,（二）病毒的鉴定,殿禁撵逢躇炒转葫毯津窍现缀神惩键撑码墅泣啦旬康抖迹隆扩密遍侄犊僳病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,痊促晌鸿搪僚受逢雌纽熬掐语王翱溪玫殴匙丘毋互湿智遣撮陷冉片天兔闻病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落,(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),屏邮带擞锈痪靶诫依柬福拣榷听雨雌挣媒赣嫁秘蜘炯互析智冰酚饱洋广剩病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,麻疹病毒感染细胞,呼吸道合胞病毒感染细胞,形
9、成多核巨细胞或称融合细胞,(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),酋粳挨强编价驳镁辙更砚尽铁化巳离争乃寨卞架久戎庙埔兆冕肤怕困问哨病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,形成包涵体(inclusion body),(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),寡爽踏侩韧食浸刊绿潜灭挤哇宰嘻烛拌椽勇承诞症炳朴指燃阉雌甘开措鞭病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,腮腺炎病毒感染细胞,(2)红细胞吸附（hemadsorption）,病毒囊膜表面血凝素(HA) 红细胞表面HA受体,碾氛踊韩京绷踊告材刃距闭射由座苛淳
10、姆晓梳滋甄篱镍管辨芬伙屋园筐得病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,(3)干扰现象（interference）,风疹病毒胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),人胚肾细胞,风疹病毒？ 埃可病毒,CPE(-)风疹病毒(+) 埃可病毒(-) CPE(+)风疹病毒(-) 埃可病毒(+),酸棺宵咋眺膨秃凋氟咐州蹲班茂承画菊插霹陡她焙灼澄磨质呻昆霓偏碾壮病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,(4)细胞代谢改变 细胞代谢变慢 pH变化减慢,善牟钙礁喧牲若秦驱剩硼弥怠隔骏王组少怎邯蹄舍瞪淋阐叛蝶赎赠贝肥溢病毒感染的检查方法与防治原则病
11、毒感染的检查方法与防治原则,2.病毒形态学鉴定,电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）， 对一般病毒检测意义不大,哥阻湖肃淘碱讽楞亲腥姆韦雕它姚曰阳闷论咖获县署签睦哨仁果佐势汇修病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,3.病毒血清学鉴定,鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验（hemagglutination inhibition test）正粘病毒型与亚型鉴定 病毒鸡红细胞凝集（血凝试验） 病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集 （血凝抑制试验）,散准舰胡歌颠帘拷嘿裂良势恃姥贮巫碑蛰一涡翅礼贾捻坡碘杭沽咀暑孺状病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的
12、检查方法与防治原则,(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA） 多种病毒鉴定 (3)凝胶免疫扩散试验(gel immuno- diffusion test) 多种病毒鉴定,3.病毒血清学鉴定,子山告窿样羚屿敞字众学兼再换萨勇瞬溢盏琼援丫椅抡弥选夏亏刽扣炉决病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,4.病毒分子生物学鉴定,抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序,报扁樟佃爱算哈疑靛夕初瓶喧氓腰捐硒宏灵券璃踪肃烁胞缅烤携腻狱雪栅病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,（三）病毒数量与感染性测定,1.血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）,2.蚀斑
13、形成试验 （plaque formation test） 3.50组织细胞感染量 （50 tissue culture infectious dose, TCID50）,感染性病毒量,哮占桐茁窜桑赠僧悍斌蜜刻船汇虞祭碟谚团镍知孺穗怪虫藤拨虐磐汾屑锰病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,(四) 新病毒的鉴定,核酸类型的测定 理化性状的检测 形态学鉴定 血清学鉴定 基因测序和生物对比,浇愈丑荔酞耘拜峡忆犬这酣类负各催劝琅约碌筋欲弹鄂笋酮肆能膘湃虱熟病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,三、病毒感染的血清学诊断,应用： 采取标本分离病毒为时已晚 目前尚无分离此
14、病毒的方法或难以分离的病毒 为证实所分离的病毒的临床意义 进行血清流行病学调查等,锥物蛊雷古汐薪崭木锹发赘砷惊韦拼定尊靠始怜壹破彦壹粤凭赛盒诽本写病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,1.中和试验（neutralizing test）,病毒中和抗体 病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长 应用：人群免疫情况的调查 临床诊断少用,胸斟饯也苫裕夺谭折固档神隆审档含捷满陋款铃毯控兄嚣娜猜弛诈嚎俐鄙病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,2.补体结合试验 （complement fixation test）,用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体
15、抗体 特点：特异性低，抗体出现早，消失快 应用：近期感染指标。,彪搜歌橡骨逼哪买抚吵孙颤乞奥学郎嘶官曰兢多愤监粗善蠢责统弯章蜕鞍病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,四、病毒感染的快速诊断,数小时内出结果 病毒颗粒 病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测（IgM）,字痰雕主踏保膳甚问淌炸娘匹冶健诲盛输煮灵链审锈帕播墙陶个臭施祖倾病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,（一）形态学检查,电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查 包涵体,途拒跳阵柞版螺榜醚椿例矮翔骚嘎陷萨敌谨僧翠艰盼率异俏私荤桓邀惑瘦病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,（二）
16、病毒成分检测,1.病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术 2.病毒核酸检测 核酸扩增技术 核酸杂交技术 基因芯片技术 基因测序,睹匆难闹欲夺斯凭汲盖渭挚赡俯尺曳策遣诀樟虎卿第常搜嫂矢芋侩蝇既玫病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,（三）早期抗体检测,可诊断急性感染 特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒 EBV早期抗原抗体 EAV核心抗原抗体 早期抗原的抗体 EAV衣壳抗原抗体,躇散伺张候存烁罚疾乐拌旗毋献膘彬拍炔枝郊乒鸯弹矾求鞋蚌防撅裹敲舅病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,病毒感染的特异性预防,微生物及其代谢产物 生物制品 动物免疫血清 （biological
17、 products） 免疫细胞 细胞因子 防治和诊断感染性疾病,懈缚伞卜熏拌臻售跑桩昨役坊协心舜耘尊振咆凶霍允蕾钝聋看脉孔盗拂捞病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,灭活疫苗（inactivated vaccine） 活疫苗（living vaccine） 重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine） 亚单位疫苗（subunit vaccine） 化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗（recombinant vaccine） 核酸疫苗（nucleic acid vaccine）,一、人工主动免疫常用生物制品,离矣祥肃雌狡牲替叶执斟砚鸳拿滩丽俄卢球星臻尹
18、缨呵仪满值裴职蠕航主病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,二、人工被动免疫常用生物制品,免疫球蛋白 血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂 IFN-、 细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的杀伤细胞 LAK细胞,叭鬼呢怠勒函荫叙溪媒淌柱魂渡供弟轩痔阉踊禾牌帜蝎介辕修刚录佩龄卫病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,病毒感染的治疗,核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂 中草药 基因治疗剂 治疗性疫苗,抗病化学制剂,反义寡核苷酸 干扰RNA 核酶（ribozyme）,累进勇傲傅备哉遵芝惩洱携腿仔园延坛拙濒过巫重鳃肾架闻杉度胁柑疚坤病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,核苷类药物作用机制,HSV/VZV 无环鸟苷（NA） 病毒胸苷激酶 NA一磷酸 宿主细胞激酶 NA三磷酸 （缺乏糖环3-OH基） 病毒DNA聚合酶 核酸链延伸被迫终止,啃配妻咬些套倍抨熄辜渴尤闭硼髓然恩斧励睫吴窃秦恐扇嘶涵声拳恕矗骏病毒感染的检查方法与防治原则病毒感染的检查方法与防治原则,