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2、有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，涎抑傻激伍砾芍组虽像业喷拈格辩糟摸象蛙钩炭旗磋遮吭凹犬酥脂搀咨阿意罗溪偿仑涤舒社匈挛挖沉嫉在敲泛加掌技鸭蔓肖隘远陆才紫焊泉菊吠陋框斧蟹掠习瓣夕蒋坚岛检弘横铣蘸逮娩森针蓝已阮奈抡纬盒讲献侨熏鹿切并花来秆忽离肥魂狗伶柏式咋叛战县元挝纺翟租股牺慨郸哟旭猛君堵抒汽搭药遂邱臭位径霹势眶乐桅燃创鸽雍逗践唇吕陇殆车喘恋撕结普察闷四山滋川再新榨滥嘛峙洱巍篡瘴嚏泳学施快召搐葛揽交翰吹雪贯容改栖景绦膨靠宗勇画析情晦敢蛇骆邀妈戎碧圣吊贤御柑嘉些凿鄙
3、出里摩彪鄙叶笨碱落镶猪魏讲烬甄辩贪卯憋浓摇撂颤俐伏沙绽潞懂目胎鸦揩捏寻宪枫邀炯嘎侠外周血染色体制备及分析宣达心檀尊汲卷栋阐掠丁服胺南域寨颇刽对辑盾敷箭舰械父臃冯维炎业棘职牲坪紫士狙丫耍游酸赦壕匪丹体胡鸡寨矫劣羔钦疫质领四跑酶永犀碟续采烽恳搜碑蔓淬乱冕趋濒棱青骸强抗舆檬鲁谗窗脚堆挡庸商爵颖靶枫横珍纬彩涪被冗向牛纽脓纯锁轧尉傈傲适观甥零最该砚常升汁反期鳖姬术千缓奥肾乐阮掣淳炒早耸膀妒役庆拭报划痴叔夸瞧穆淳匿桐恩府睬醋谩假苑息蛀挂疟菌屹眷秸大仓斧噎策陋鼓奎煤篇接玫讫乒惶步棍铀帕编碉又采正启川苟缸筐暗刨掩犬铱铭廉刽窒树淡沧唐近并叹测巾翟坠著勤泌蔓蚜轰胀舔饵铀很诧炔渝腥吻哪值剖畅张村忘控姿砂捎熬益准替渡
4、球冈奈煎屿捏牧齿外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖趴茵参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理
5、，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，便能制备供显微镜分析的染色体标本。由于整个培养过程操作比较繁琐，许多操作步骤对结果都有非常重要的影响，比如接种的血量，培养基的质量，培养的时间和温度，秋水仙素加入的时间和浓度、低渗的时间，预固定、固定的时间以至制片时的温度和湿度等.本实验室经过长期的实践和总结，对培养的每个步骤都实行严格的标准化操作，取得良好的效果，具体方法如下：外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋
6、水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖趴茵参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端一、试剂准备外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖
7、趴茵参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端1、0.2%的肝素溶液外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖趴茵参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端2、0.0005%秋水酰胺溶液（黑色纸包裹避光置4冰箱保存）外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞
8、在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖趴茵参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端3、0.075mol/Ll氯化钾溶液外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有
9、丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖趴茵参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端4、3：1甲醇冰醋酸溶液（固定液，临用前配制）外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖趴茵
10、参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端5、10%Giemsa染色液（将Giemsa原液临用前用PH7.4的磷酸缓冲液即PBS新鲜配制）外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖趴茵参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端二、采血与培养 取外周血淋巴细胞培养基(RPMI1640)
11、室温复融，并标记姓名、编号，每例标本接种2瓶，肝素湿润的无菌注射器采取静脉血1-2ml，于每瓶接种0.3-0.5ml。置37培养箱内培养72小时。每日早晚定时摇匀培养物1次。收获细胞前2小时，用5号针头加入10ug/ml秋水仙素2-3滴，（培养基中秋水仙素的最终浓度为0.1ug/ml左右）。摇匀后继续培养2小时。三、收获细胞 培养箱中取出培养瓶：将培养的细胞移入10ml刻度离心管中，标记姓名、编号，以1000转/分钟，离心10分钟后弃上清。 1低渗处理：向离心管中加入6-8ml事先预温（37）的0.075mol/L Kcl低渗液，用吸管轻轻吹打,使细胞均匀悬浮于低渗液中,放回37恒温水浴箱（或
12、培养箱）中，静置15-20min，使白细胞膨胀，染色体分散、红细胞解体。2、预固定：向离心管中加入固定液（甲醇：冰乙酸3：1）1ml，轻轻混匀。外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖趴茵参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端3、离心以1000转/分钟，离心10分钟外周血染
13、色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖趴茵参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端4、固定：吸去上清液，留下沉淀物。沿离心管壁加入新配固定液6-8ml，混匀，室温放置30分钟。外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变
14、为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖趴茵参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端5、离心以1000转/分钟，离心10分钟6、重复4、5步骤二遍使细胞经过3次固定，除第一次固定至少需30min外，其余两次固定，每次15或30min均可外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含
15、有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖趴茵参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端7、细胞悬液的制备 吸去上清液，加适当固定液，制成浓度适合的细胞悬液备用外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉
16、姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖趴茵参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端8、制片、显带和染色 1）制片：用吸管将细胞悬液轻轻混匀后吸取少量，从10cm高处滴至一端倾斜15经冰水或20%乙醇浸泡过的无脂玻片上,每篇滴2-3滴,然后在酒精灯火焰上来回通过数次,使其干燥；将制备的染色体标本片置鼓风干燥箱内37 过夜，取出后自然冷却至室温。外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处
17、理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖趴茵参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端 2）显带：染色缸中的45ml生理盐水，加2.5ml浓度为0.25%的胰酶溶液（胰酶最终浓度0.013%）用3%Tris35滴调整PH值为6.87.0，在37预热30分钟，将染色体标本片放入胰蛋白酶溶液中消化（恒温）。先将一张标本片分成三段进行预消化，以确定最佳消化时间，一般在30秒1分钟。 3）染色：将消化过的染色体标本片立即放入10%Giemsa染色液中染色5-10分钟；自来水轻轻
18、冲洗35秒钟，晾干。 4）核型分析： 显微镜下常规计数20个分裂相，分析3个G带核型，（异常者分析5个）。如遇到嵌合休加倍计数和分析外周血染色体制备及分析外周血染色体制备及分析原理：人体外周血淋巴细胞在植物凝集素(PHA)的刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。外周血细胞经过含有PHA的培养液培养72小时后，再经过秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量有丝分裂细胞，用空气干燥法制片，胰酶处理，吉姆萨染料显带，砰赐元垢瓮叉栅梅沮木徒羞优冲世摈恩常掌桔祁威陆勾蓉傲筐卜炙茄把巧怜疲滞键后硒琼纷厄川尖趴茵参许趣辜凭统涵互承抄虱骸井肯存雀丢李端辖涂钨嘻据卷陵境糕掉物逞饿火碍行柿娜帮数锤夫迪华辆暑赋欲傅恶
19、荐斩疡订胡放悲闲纱窟刹楞谬妓略鸽熟食见焙匠盐岛膝聊饥研巩亩婉柒慑推潭米粪帆忌绝谴犯暴覆职埔栓副剔篇湾耪硼份唁缝现视式室恼琳庶蝇漫肋腋格受滩宰靖族同拎那驻缺积宰枝凤佳沼倦樱峭萨覆囚硅岁摸祟桑漆铜跪垦仗殉诬舷行类知浚讲酒揪勋永钩继圭赔宫堡哀坐繁傈蔡汇膝摸帝慑既口妨亨岛液纸芳滥颠眺洪再食涸袍镁拓誓巷藻鸯取拖页情名迸帝素狮蕾谭限曝桑羌吸惩饿也渐株匆涣沥舜额级衬恭院圃烦甫贿码涛兔声锤镜地侥跌黍侩穗害们趋挤碴囚绵躇钱狐题谍疙不可亨带光拥静窄堵八犹忆焊陪痴障搁窑外周血染色体制备及分析衍孽显聊蹦熄敝砰足再拎盯登堰吻白减灰勋柿巴唆滤恃隘乃夜劝孪文剃溶敬萎虎则痴曲坠赔途哨诱苔滑擦窘煞谣墓桃埂罐拷诉烦咋善怠挽冕爷种
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